三种Feulgen染色方法的比较

目的探索一种快速的Feulgen染色方法,并尝试其在细胞核DNA含量分析中的应用。方法选取十只健康小白鼠的肝细胞涂片,每只小白鼠的肝细胞涂片分成三组,采用快速Feulgen染色法、改良Feulgen染色法、传统Feulgen染色法对这三组分别染色,用TIGER细胞图像分析仪测量肝细胞涂片内单个完整肝细胞核的DNA含量,比较各组染色效果和肝细胞核DNA含量的测量结果。结果应用快速Feulgen染色法,获得了满意的效果,细胞核染色深,结构清晰,背景着色淡,而所需染色时间仅为15分钟;同一种方法染色的不同小鼠肝细胞涂片,相同DNA含量倍体肝细胞核的DNA含量均值的变异系数(CV)<10%,CV(快速)IOD(改良)>IOD(传统);各组2、4、8倍体肝细胞核DNA含量间的比值均接近2或4;结论此种快速Feulgen染色方法优于其他两种方法,可应用于图像分析系统对细胞核DNA含量与倍体的测量和分析。     

光衍射现象对细胞核DNA含量检测的影响

利用图像分析仪测量小鼠肝细胞涂片内单个肝细胞核的DNA含量,探讨图像分析仪在测量显微图像的光度时光衍射现象所导致的测量误差.本文选取10只成年健康雄性小鼠的肝组织涂片,Feulgen染色,TIGER细胞图像分析仪测量单个肝细胞核的DNA含量并分析其DNA含量倍体;结果显示,(1)涂片内肝细胞核分布均匀,轮廓清晰,呈紫红色;(2)不同小鼠同一DNA含量倍体的肝细胞核的DNA含量大致相同;(3)二、四、八倍体肝细胞核的DNA含量比值均大于/[Dept.1]等于2或4,二、四、八倍体肝细胞单个核DNA含量的CV值均小于10%;(4)同一小鼠不同DNA含量倍体肝细胞核的平均光密度值差异较小.结论光衍射现象可导致DNA含量的测量结果偏低,其偏低的程度随待测细胞核的面积增加而减小.     

组织原位测算单个肝细胞核的DNA总量

目的再次探讨利用图像分析系统在组织切片原位测算以单个完整细胞（核）体积为单位的化学物质总量方法的可靠性。方法选取10只成年健康雄性昆明小鼠,每只小鼠按常规制片方法制作4μm和11μm两种厚度的肝组织切片各一张,改良Feulgen染色,应用细胞图像分析仪在组织原位测量和计算以单个完整二倍体、四倍体和八倍体肝细胞核体积为单位的DNA总量。结果组织原位测算的以单个完整二倍体、四倍体、八倍体肝细胞核体积为单位的DNA总量间的比值基本上呈2或4的倍数关系。结论应用细胞图像分析仪在组织切片原位通过合适的抽样和测量计算,可较准确地获得以单个完整细胞（核）体积为单位的化学物质总量。     

睾丸生精细胞涂片:在评估图像分析仪光度测量线性中的应用

目的评估TIGER细胞图像分析仪测量细胞图像光度的线性。方法选取十只健康成年小白鼠的睾丸组织,制成细胞悬液,涂片,快速Feulgen染色,TIGER细胞图像分析仪测量涂片内三种单个完整生精细胞核的DNA含量并比较它们的比值关系,分析其平均吸光度(AOD)的最大、最小值范围。结果三种生精细胞核的DNA含量呈1、2、4的比例,其AOD值范围为0.73~1.64。结论TIGER细胞图像分析仪在其平均吸光度值为0.73~1.64的范围内测得的组织、细胞图像光度呈线性。     

滤光片对细胞核DNA含量检测的影响

目的探讨滤光片对图像分析仪测量DNA含量的影响。方法选取10只成年健康雄性小鼠,制备肝细胞涂片,Feulgen染色和天青B染色,显微镜与摄像机之间分别插入400 nm、560 nm、590 nm、600 nm、626 nm、670 nm带通滤光片和中灰滤光片,利用TIGER细胞图像分析仪测量肝细胞核的积分光密度（IOD）与平均光密度（AOD）和面积。结果肝细胞核在Feulgen染色法中呈紫红色,天青B染色法呈蓝色。Feulgen染色和天青B染色分别采用560 nm和600 nm的带通滤光片时,能够测得最大的IOD值,不同倍体肝细胞核间的比值接近2、4,CV值最低。与天青B染色方法相比,Feulgen染色法中不同倍体间的比值更接近2、4,CV值更低。结论适宜的滤光片可提高细胞核DNA含量测量结果的精确性和准确性。Feulgen染色测量结果精确性和准确性明显高于天青B染色,应作为首选的染色方法。     

乳腺癌细胞核DNA含量不同分析方法的比较

目的:比较组织原位分析乳腺癌细胞核DNA含量的不同方法。方法:收集30例乳腺癌标本的归档蜡块,4m和相邻8m切片各一张,Feulgen染色,采用TIGER细胞图像分析仪测量每个癌巢的以单个完整细胞核体积为单位计算的DNA指数和以细胞核切面面积为单位计算的DNA指数,它们均以同一病例正常上皮细胞核作内参照。结果:(1)同一病例的VIOD分布直方图比IOD更集中;(2)30例标本的90个样本中,以VIOD为单位所测得的DI值比以IOD为单位测得的DI值高。结论:使用细胞图像分析仪对组织切片内细胞核DNA含量进行定量分析时,应以单个完整细胞核体积的DNA含量为单位,计算DI值。     

肝肿瘤细胞DNA倍体分析中选择参照细胞核的依据

目的　利用细胞图像分析仪测量小鼠肝细胞涂片的 DNA含量 ,探讨细胞图像光度术 (ICM)和流式细胞光度术 (FCM)分析肝肿瘤细胞核 DNA倍体时 ,选取参照细胞核的原则。方法　本文选取 10只成年健康雄性小白鼠的肝组织涂片 ,Feulgen染色 ,TIGER细胞图像分析仪测量单个完整肝细胞核的 DNA含量与倍体。结果　 (1)不同小鼠同一倍体的肝细胞核 DNA含量大致相同 ;(2 )二、四、八和十六倍体肝细胞单个核 DNA含量间的比值接近 2、4、8,它们的 CV<8.0 %;(3)当仅出现二倍体和四倍体时 ,以二倍体的细胞核为主 (80 .4%) ,伴随八倍体和十六倍体的出现 ,四倍体肝细胞核所占百分率大于二倍体。结论　由于肝细胞具有多核和多 DNA倍体的特点 ,分析和计算肝脏肿瘤细胞核 DNA倍体和其它指标时 ,不能简单地遵循以同种属、同个体、同源的正常二倍体肝细胞核作为参照细胞核 ,正常四倍体和八倍体甚至十六倍体肝细胞核作为参照细胞核也应该加以考虑。     

应用肝细胞涂片评估DNA染色方法的可靠性

目的探讨应用肝细胞涂片评估DNA染色方法的可靠性。方法选取10只成年健康雄性小鼠，制备肝细胞涂片，Feulgen染色和天青蓝染色，TIGER细胞图像分析仪测量肝细胞核的DNA含量与倍体。结果涂片内肝细胞核分布均匀，轮廓清晰；Feulgen染色法中肝细胞核呈紫红色，天青蓝染色法呈蓝色；作为参比的Feulgen染色涂片中不同倍体间IOD的比值比天青蓝染色标本更接近倍体数的比值，其CV值也低于天青蓝染色法。结论小鼠肝细胞涂片可应用于评估显示DNA染色方法的可靠性。     

组织切片对细胞核DNA含量检测的影响

目的探讨组织切片对图像分析仪测量细胞核DNA含量的影响。方法选取10只成年健康雄性小鼠,制备肝细胞涂片和肝组织切片,肝组织切片分成两部分,分别用于Feulgen染色和石蜡包埋,包埋后的组织采用垂直切片,图像分析仪测量切片实际厚度,依据切片机标识厚度和测量厚度分别分组,TIGER细胞图像分析仪分别测量肝细胞涂片和组织切片内肝细胞核的积分光密度(IOD)。结果肝细胞涂片内各DNA含量倍体肝细胞核IOD间的比值接近2和4,IOD之变异系数(CV值)<3.5,肝组织切片IOD间比值明显偏离2和4,IOD之CV值均>6;切片机标识厚度为4、6、8和10μm组织切片平均测量厚度分别为6.75、7.18、6.96和7.59μm,测量厚度最大值为9.25μm,最小值为4.62μm;依据切片机标识厚度分组中不同切片厚度相同DNA含量倍体肝细胞核的IOD值差异均无统计学意义;依据测量厚度重新分组后5、6微米组与7、8、9微米组IOD值间的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论组织切片的实际厚度与切片机标识厚度间存在明显差异,本实验方法可较准确地判断组织切片厚度;厚组织切片测量结果优于薄组织切片,但与细胞涂片相比,厚组织切片仍难...     

染色质浓缩对细胞核DNA含量检测的影响

目的利用三种不同方法制备小鼠肝细胞涂片，探讨染色质浓缩对图像分析仪测量DNA含量的影响。方法本文选取10只成年健康雄性小鼠，采用传统涂片、液基制片法和甲醛固定后液基制片法制备小鼠肝细胞涂片。Feulgen染色。TIGER细胞图像分析仪分别测量三种涂片内肝细胞核的积分光密度、平均光密度和面积。结果三种涂片内肝细胞核分布均匀，轮廓清晰，呈紫红色。与传统涂片法相比。液基法内肝细胞核面积明显减小。类色质高度浓缩；相同倍体的肝细胞核在传统涂片中面积最大，平均光密度最低，各倍体间的比值最接近2和4，积分光密度CV值最低（〈3．5）。固定法和液基法平均光密度明显升高，各倍体间比值明显偏离2和4。积分光密度CV值〉6。结论不同制片方法可导致同一类型、处于相同功能状态的细胞核染色质浓缩程度产生明显差异，染色质浓缩可导致平均光密度值升高，积分光密度值降低，测量结果的精确性和准确性降低。     

不同水解温度、时间对细胞核产物与DNA含量检测的影响

目的探讨水解产物变化趋势与染色效果的相关性以及两种不同染色方法达到最佳染色效果的水解时间,为科研和临床的应用提供有价值的参考。方法选取5只成年健康雄性SD大鼠的肝组织,一部分制成恒定细胞数的肝细胞滴片,5N HCL水解后,紫外分光光度计扫描产物的最大吸收峰波长,并检测该产物OD值的变化; 另一部分肝组织制成肝细胞涂片,分别在室温和60℃温度下水解不同时间,应用改良和快速两种Feulgen法染色,图像分析仪检测和分析单个细胞核的DNA含量与倍体。结果（1）肝细胞滴片水解产物扫描在260 nm处有最大吸收波峰; （2）紫外分光光度计在室温和60℃水解温度下测得水解产物的量随着时间的延长逐渐增加; （3）同一大鼠在相同水解温度下,经过不同时间水解,同一倍体的肝细胞核DNA含量存在差异：60℃水解温度下,IOD（5-7 min）〉IOD（9-15 min）〉IOD（1 min,20 min）,室温水解温度下,IOD（50 min）〉IOD（20-30 min,70-90 min）〉IOD（5-10min,100 min）。结论HCL对细胞核的水解作用使DNA双链中糖苷键断裂,醛基暴露,碱基脱至HCL中,且量逐渐增加; HCL水解时间与染色的效果不成正比,两种Feulgen染色法存在各自较佳染色效果的时间段,分别为：快速法5-7 min,改良法20-90 min。     

DNA定量在乳腺导管非典型增生与原位癌诊断中的应用

目的DNA定量鉴别乳腺导管非典型增生与原位癌、原位癌及浸润癌。方法对乳腺导管非典型增生（7例）、原位癌（15例）及浸润癌（18例）共计40例进行细胞涂片,Feulgen染色,全自动图像分析仪进行细胞核定量检测。结果乳腺导管非典型增生及原位癌均未见DNA异倍体,未出现五倍体（5c）细胞,两组间DNA指数及S期细胞比率有统计学差别（P〈0.05）。浸润癌检测到大量DNA异倍体,出现五倍体（5c）细胞,DNA指数及S期细胞比率高于原位癌,但不具有统计学差别（P〉0.05）。结论利用图像分析仪检测DNA含量、S期细胞比率对乳腺导管非典型增生与原位癌的鉴别、原位癌与浸润癌的鉴别具有一定的临床意义。     

两种染色方法在细胞核DNA含量检测中的应用及比较

目的 探讨改良、快速两种Feulgen染色方法达到最佳染色效果的水解时间段，为科研和临床的应用提供方法学指导。方法 选取5只成年健康雄性SD大鼠的肝组织，制成肝细胞涂片，分别在室温和60℃温度下水解不同时间，应用改良和快速两种方法染色，TIGER图像分析仪检测和分析单个肝细胞核的DNA含量。结果 （1）不同大鼠肝细胞涂片在同一水解温度、时间作用下，相同DNA倍体含量肝细胞的DNA含量大致相同，CV值均小于10％；（2）二、四、八倍体肝细胞核的DNA含量比值均接近2或4；（3）同一大鼠相同水解温度不同水解时间，同一倍体的肝细胞核DNA含量存在差异：60℃水解温度下，IOD（5-7min）〉IOD（9-15min）〉IOD（1min,20min），室温水解温度下，IOD（50min）〉IOD（20-30min,70-90min）〉IOD（5-1min,100min）。结论 HCL水解肝细胞涂片时间过长或过短均不能理想的染色，快速法和改良法Feulgen染色达较佳染色效果的时间段分别为：快速法5—7min，改良法20-90min。     

乳腺导管增生及原位癌的形态学定量分析

目的对比分析乳腺导管增生及导管原位癌的形态学定量参数。方法细胞涂片经常规巴氏染色,组织学切片经HE染色; 带有数码摄像机的彩色病理图像采集系统及半自动图像定量分析系统; 定量指标包括：细胞核直径、周长、面积、圆形度及核质比例; 结果乳腺导管增生及导管原位癌所分析的各项参数均有差异,具有统计学意义（P〈0.001,P〈0.05）; 乳腺导管增生及导管原位癌各组内部,细胞涂片和组织切片对比所分析的各项参数均无差异。结论细胞核直径、周长、面积、核质比及圆形度可作为形态学特征性定量参数,区分乳腺导管增生及导管原位癌。     

Proliferation and DNA Aneuploidy in Mild Dysplasia Imply Early Steps of Cervical Carcinogenesis

This project was focused on cellular proliferation relative to the onset of endoreplication and effects of DNA aneuploidy during carcinogenesis in cervical mucosa. Proliferation was monitored with MIB1 antibody, whereas nuclear DNA content was quantified using an image processing microphotometer. For the later procedure, 8 μm sections were of adequate depth with interphases, and lymphocyte nuclei provided an internal standard of the diploid (2c) DNA content. Results from 95 cervical biopsies displaying different types of dysplasia and carcinoma were supplemented with those of cervical smears from 319 cases. The later specimens had been selected from about 30 000 consecutive cases in 1993/94. MIB1-traced proliferation was found in the second cell layer, whereas the bulk of basal cells remained quiescent in normal mucosa. However, predominant MIB1 immunoreactivity was observed with endoreplicated nuclei. A critical 30% of the cases exhibited DNA aneuploidy already in mild dysplasia, which was found in cytological smears and histological sections. The nuclear DNA content of basal cells increased progressively by endoreplication corresponding to the degree of dysplasia. Cases of carcinoma in situ displayed some 18% of non-proliferating diploid cells despite overwhelming endoreplication and DNA aneuploidy. High MIB1 levels combined with DNA aneuploidy unambiguously indicate the beginning of cervical carcinogenesis. The limits of the Bethesda system were discussed.     

应用运动体模对SPEOT／CT图像不同配准方法的研究

目的：比较目测法与外标记法对SPECT／CT图像进行配准的准确性;优化外标记法配准时标记点的个数及分布。方法：利用二维运动平台系统模拟人的呼吸运动,用配准后N个外标记点在两种图像间位置平均偏差（f）作为评价指标来衡量两图像配准的精度。结果：体模静止时,不同配准方法的,值间差别不大。而在不同运动状态下对7种方法配准得出的f值进行多组间的单因素方差分析,结果表明,用≥5个标记点配准的方法均与目测法、3点配准法间差异有统计学意义,P〈0．05,且前者优于后者,而用≥5个标记点配准方法差异无统计学意义,P〉0．05;不同研究者间目测法得到的f值差别较大;对5点配准法进行优化表明,标记点非共面分布优于标记点共面分布。结论：目测法配准受研究者主观因素的影响较大,准确性无法保证;用非共面5个外标记点对SPECT／CT图像进行融合配准是一种准确且简单易行的方法。     

弥漫大B细胞淋巴瘤分子亚型的细胞核形态参数的差异

目的通过图像分析观察中心母细胞型弥漫大B细胞淋巴瘤（CB—DLBCL）分子亚型之间的细胞核的形态是否存在差异。方法先采用免疫组化方法将CB,DLBCL分为生发中心B细胞样组（GCB）和非生发中心B细胞样组（non-GCB）两组,然后通过图像分析对两组细胞核的形态参数进行对比分析。结果GCB与non—GCB的11项细胞核形态参数之间均存在差异,差异有非常显著的统计学意义（P值〈0．01）。其中截面积以GCB高于non-GCB,截面周长、截面长径、截面短径和截面平均直径以non．GCB高于GCB。描述细胞核的形状不规则程度的异型指数allotype index、圆偏度circular skewness、圆球度sphericity、圆形因子spherical factor、规化形状因子normalized shapefactor和形状因子ARshape factor AR均显示,non—GCB细胞核的不规则程度显著大于GCB。结论本文证实non—GCB与GCB的细胞核形态参数存在显著差异,前者细胞核的不规则程度明显大于后者。这与non-GCB临床预后较差相符合。