CB法微核图像中粘连淋巴细胞的自动分离

CB法微核图像中淋巴细胞的粘连情况可分为串联、并联、串并联三类。首先利用面积阈值、圆度阈值、延展度阈值提取串联的淋巴细胞区域;然后采用改进的基于凹点搜寻的分离方法对串联淋巴细胞区域进行分离,同时克服了崎岖边界的干扰问题;对于分离后的细胞,再判断其是否为双核淋巴细胞。这为CB法微核图像自动分析中串联淋巴细胞的判别和分离提供了一种切实可行的解决方法,有助于提高CB法微核图像分析的准确度和可靠性,而不影响自动分析的速度。     

叶酸缺乏对BRCA1突变淋巴细胞株染色体损伤效应的影响

背景与目的:评价叶酸缺乏在BRCA1突变乳腺癌患者淋巴细胞株(GM13705)微核诱发效应,探询能将遗传物质损伤减少到最低程度的叶酸浓度.材料与方法:在叶酸缺乏(6～240 nmol/L)条件下离体培养GM13705细胞株,利用细胞质分裂阻断微核技术(CBMN),分析双核细胞中的微核率.结果:叶酸浓度在6 nmol/L、60nmol/L和120 nmol/L时,双核细胞微核率高于240nmol/L及常规RPMI1640组,这3个测试组间未出现双核细胞微核率的显著差异;240 nmol/L和常规RPMI1640组之间双核细胞微核率差异无统计学意义.结论:在本试验条件下,240 nmol/L的叶酸是该细胞株防范遗传损伤的最低浓度,具有BRCA1突变的基因组对叶酸缺乏的胁迫作用敏感性似乎高于正常细胞.     

一氧化氮供体药物硝普钠的遗传毒性的研究

本文以硝普钠为ＮＯ供体药物，研究慢性升高的ＮＯ对哺乳动物细胞的诱变作用和微核形成的影响。结果ＳＮＰ处理，均以剂量－反应方式诱发ｇ１２细胞ｇｐｔ位点突变，在最高受试剂量，诱变率分别超过本底１３和２５倍，在处理组还观察到含微核的双核细胞数显著增多。在０．５－４ｍＭ或２－８ｍＭ（－Ｓ９）ＳＮＰ剂量范围内，双核微核细胞率、微核率及含多微核的双核细胞比率均以剂量－依存方式增加，结果表明ＳＮＰ释放的ＮＯ过量积     

健康成人自发染色体畸变率与微核率的本底状况再分析

目的： 了解环境因素对人类遗传物质的影响，以便正确评估放射从业人员以及低剂量辐射的健康效应。方法：选自北京市87名接受健康体检的成年人，每人用肝素钠抗凝管抽取外周静脉血2mL。采用提前加秋水仙素和松胞素B法分别制备染色体与微核标本，Metafer自动分析系统结合人工分析染色体畸变与双核淋巴细胞微核，按不同年龄段与不同性别分组进行统计比较。结果：87名受检者的染色单体型畸变率平均为0.70%，染色体型畸变率为0.20%，其中双着丝粒体+环为0.13%，单纯无着丝粒体为0.06%。微核与微核细胞率分别为25.30‰和21.56‰。除单体型畸变外，染色体型畸变率与微核率均随年龄的增加而增加(P<0.05)，不同性别之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论：健康成人染色体型畸变(双着丝粒体+环)率与双核淋巴细胞微核率未超过国内外报道的本底范围，但较国内以往报道的本底值有增高趋势。     

中国仓鼠肺细胞细胞周期阻滞微核试验与常规微核试验的对照研究

本研究测试了细胞松弛素B诱发中国仓鼠肺细胞(CHL)双核细胞的最佳时间的浓度；比较研究了丝裂霉素C，甲基磺酸甲酯，水合氯醛和秋水仙碱4种诱变剂在细胞周期阻滞法中诱发双核细胞微核率及常规微核试验中诱发单核细胞微核率的大小，结果表明：细胞松弛素B诱发CHL双核细胞的最佳时间为16h，     

肿瘤患者放、化疗后外周血淋巴细胞损伤和免疫功能改变的研究

目的观察肿瘤患者放、化疗后外周血淋巴细胞损伤和免疫功能改变,并分析两者之间的关系.方法30例肿瘤患者分成放射治疗组(放疗组)和化学药物治疗组(化疗组),分别在放疗前后,化疗前后测定外周血双核淋巴细胞微核率(‰)、T淋巴细胞转化率(%)及血清免疫球蛋白(IgG,IgA,IgM),并进行对比分析.双核淋巴细胞微核率(MNR)用细胞松驰素B(CB)法测定,T淋巴细胞转化率(TLTR)及免疫球蛋白(IgG,IgA,IgM),均用常规方法测定.结果放疗组和化疗组在放、化疗后外周血双核淋巴细胞微核率显著性升高,而T淋巴细胞转化率和血清免疫球蛋白(IgG,IgA,IgM)均显著性降低.结论放、化疗后,两组患者的外周血双核淋巴细胞微核率(‰)与T淋巴细胞转化率(%)呈负相关关系.     

双核淋巴细胞微核细胞率检测的方法学初探

双核淋巴细胞微核细胞率检测的方法学初探高广花，徐厚恩，郝卫东北京医科大学卫生毒理教研室１０００８３胞质分裂阻断法计数双核细胞中的微核细胞率，这是一种较新的微核分析方法，本文对其检测的敏感性及表达遗传损伤的可恢复性进行了初步的研究。材料和方法１．现场及...     

皮肤细胞微核试验

本研究采用体内给药体外培养的方法建立了皮肤细胞微核试验技术。实验使用雄性HRA/Skh裸鼠,背部涂抹三乙烯嘧胺(Triethylemelamine,TEM),在72小时内将动物处死;剥离背部皮肤;分离单个细胞进行体外培养,在培养12-72小时引入细胞松弛素B,阻止胞浆分裂,继续培养48小时后,收获细胞,用Feulgan/Fastgreen染色,计数1000个双核细胞,记录含微核的双核细胞数,实验结果表明,给药0.5mg后,头1小时即可诱发微核,在12,24,48小时取     

组织切片图像的Disector计算机自动计数及三维显示

本文介绍了自行开发的解决Disector应用问题的计算机图像处理软件系统及关键技术、算法。本系统能依照Disector原理对多层组织细胞的电镜及光镜图像中的目标进行正确的分割 ,各层之间图像的人工交互及自动配准。针对每个目标的上下层关系实现目标的Disector自动计数及参数计算 ,并对每个目标进行体数据的提取和三维重建显示。利用该系统可在三维空间对粒子进行无偏差计数 ,同时极大地减少复杂的手工操作。文中同时还给出了用该系统对小白鼠神经细胞个数的Disector分析 ,肾小球个数统计分析和三维重建显示实例。     

体外双核细胞微核试验的应用研究

本实验用双核细胞微核试验(简称CB徽核试验)检测不同类型诱变剂对体外培养细胞微核率的影响。实验筛选了9株体外培养细胞,发现其中以BALB/c-3T3和CHL细胞的实验效果较好。丝裂霉素、硫酸镍、苯并[a]芘和香烟烟雾凝聚物等不同类型的诱变剂能直接或间接诱使细胞微核的形成。实验显示BALB/c—3T3细胞有部分代谢活化苯并[a]芘能力,CHL细胞则可能缺乏这种活性。实验还表明CB微核试验的稳定性和灵敏度都高于普通微核法,适用于检测多种类型的环境诱变剂的遗传损伤作用。     

The increment of micronucleus frequency in cervical carcinoma during irradiation in vivo and its prognostic value for tumour radiocurability.

A potential usefulness of micronucleus assay for prediction of tumour radiosensitivity has been tested in 64 patients with advanced stage (II B-IV B) cervical carcinoma treated by radiotherapy. The study of cellular radiosensitivity in vitro was conducted in parallel with the study of cellular damage after tumour irradiation in vivo. Radiosensitivity of in vitro cultured primary cells isolated from tumour biopsies taken before radiotherapy was evaluated using cytokinesis-block micronucleus assay. Frequency of micronuclei per binucleated cell (MN/BNC) at 2 Gy was used as a measure of radiosensitivity. Radiation sensitivity in vivo was expressed as per cent increment of micronucleus frequency in cells isolated from biopsy taken after 20 Gy (external irradiation, 10 x 2 Gy) over the pre-treatment spontaneous micronucleus level and was called MN20. Very low correlation (r = 0.324) was observed between micronucleus frequency in vitro and in vivo. Although micronucleus frequency at 2 Gy differed widely between tumours evaluated (mean MN/BNC was 0.224; range 0.08-0.416), no significant correlation was observed between this parameter and clinical outcome. The average increment of micronucleus frequency after 20 Gy amounted to 193% of spontaneous level (range 60-610%) and was independent of spontaneous micronucleation before radiotherapy. In contrast to in vitro results, these from in vivo assay seem to have a predictive value for radiotherapy of cervix cancer. The micronucleus increment in vivo that reached at least 117.5% of pretreatment value (first quartile for MN20 data set) correlated significantly with better tumour local control (P < 0.008) and overall survival (P < 0.045). Our results suggest that evaluation of increment of micronucleus frequency during radiotherapy (after fixed tested dose of 20 Gy) offers a potentially valuable approach to predicting individual radioresponsiveness and may be helpful for individualization of treatment strategy in advanced stage cervical cancer.     

骨计量学方法在骨质疏松模型中的定量观察

目的观察骨结构与骨质疏松关系即骨构筑学的定量测量"骨质量"的价值,探讨骨组织形态计量学与μCT三维重建计量方法的价值意义。方法采用30只SD雌性大鼠,分成假手术组、切除卵巢去势组和去势后服用阿伦膦酸钠组,每组10只。在服药100 d后处死,进行全股骨骨密度测量及股骨下端不脱钙切片的骨计量学观察。三维重建采用美国GE公司eXplore Locus SP型μCT,用Micview V2.1.2重建软件选取股骨下端骨骺板下2 mm3兴趣窗进行结构计量测量。结果去势后骨体积密度显著性下降,由假手术组的(53.00±3.20)%降至(19.16±2.97)%(P<0.001);经二膦酸盐治疗后得到显著性改善(升至(40.40±3.07)%,与去势组比较P<0.001)。同时假手术组与去势组和去势组与二膦酸盐组之间,骨计量学指标中四环素标记率,类骨质的表面密度、平均类骨质表面厚度及动态指标,骨矿化沉积率与骨矿化延迟时间等均有显著性差异(P<0.05)。μCT结果显示骨小梁体积比与骨表面积体积比显示结果同骨计量学结果相似,数值均同比例减少。另外在三维结构计量上,除骨小梁厚度外,骨小梁数目、骨小梁间隙等均出现显著性变化。结论骨组织形态计量学与显微CT三维重建定量分析对骨结构与骨质量指标均能进行定性、定量的客观评价;骨计量学方法能从静态和动态两个方面反映骨新陈代谢过程,可以精确地反映出骨重建过程的变化规律和特点。     

Rapid induction of apoptosis in chronic lymphocytic leukemia cells by the microtubule disrupting agent BNC105

Microtubule targeting agents, such as vinblastine, are usually thought to arrest cells in mitosis and subsequently induce apoptosis. However, they can also cause rapid induction of apoptosis in a cell-cycle phase independent manner. BNC105 is a novel vascular and microtubule disrupting drug that also induces apoptosis rapidly but with markedly increased potency compared to vinca alkaloids and combretastatin A4. BNC105 binds to the colchicine-binding site on tubulin resulting in activation of c-Jun N-terminal kinase (JNK), phosphorylation of ATF2, and induction of ATF3 and Noxa leading to acute apoptosis in chronic lymphocytic leukemia (CLL) cells. Apoptosis induced by BNC105 is dependent upon both JNK activation and Noxa induction. Normal leukocytes and one CLL sample also exhibited JNK activation but not Noxa induction and were resistant to BNC105. This study emphasizes the importance of Noxa and JNK for induction of apoptosis in CLL cells by microtubule targeting drugs, and highlights the potential of BNC105 as a potent therapeutic to treat haematopoietic malignancies.     

螺旋断层放疗与常规调强放疗在乳腺癌保乳术后同步推量中的剂量学比较

目的 比较乳腺癌保乳术后同步推量放疗中应用常规调强放疗（IMRT）及螺旋断层放疗（HT）剂量分布的差异,为HT在乳腺癌保乳术后的临床应用提供依据。方法 随机选择10例乳腺癌保乳术后患者,统一勾画计划靶区（PTV）与原发灶靶区（PGTV）并导入HT计划系统及瓦里安Eclipse计划系统,分别设计IMRT和HT计划,处方剂量均为PTV 50Gy／25f、PGTV 60Gy／25f,通过比较靶区剂量适形度、均匀性以及心肺受照剂量来评估IMRT与HT的优劣。结果 HT计划中靶区剂量的均匀性、适形度明显优于IMRT（P＜0.05）,患侧肺V5、V10、V20、V30及肺平均剂量均明显低于IMRT（P＜0.05）,但健侧肺V5增加;心脏剂量明显降低（P＜0.05）。结论 对于乳腺癌保乳术后同步推量放疗,HT与IMRT计划都可以满足临床剂量的要求,但HT计划在剂量学方面相对于IMRT计划具有优势,可以显著降低对正常器官的毒副作用。     

Anti-Genotoxicity Evaluation of Cratoxylum Formosum Dyer Leaves by Comet Assay and Micronucleus Test

Cratoxylum formosum Dyer is the Thai vegetable which commonly consumed a fresh leaves. In this study, we extracted Cratoxylum formosum with water and tested the extract for genotoxicity and anti-genotoxicity effects. We carried out the experiment using micronucleus test and comet assay in TK6 cells. In micronucleus experiment, we used cytokinesis-block proliferation technique to stop cell division which produced a cell at binucleated (BNC) stage. The comet assay was carried out after pre-treatment the cell with C. formosum for 18 h. The results revealed not increased the micronucleus frequency of C. formosum at concentration ranging from 50-150 μg/ml. In contract, it showed that the combination between C. formosum at various concentrations (25, 50, 75, 100, 150 and 200 μg/ml) and mitomycin C could decrease significantly in frequency of micronuclei. The mean of micronucleus frequency in the sample were 23.17 ±3.33, 23.33 ±4.72, 21.00 ±3.61, 11.33 ±3.21, 16.67 ±2.08, and 23.33±1.53 MN/ 1,000 BNC, respectively whereas the MMC-treated group was 33.67 ± 8.96 MN/ 1,000 BNC. The comet assay result showed that pre-treatment with Cratoxylum formosum (25, 50, 100, 200 μg/ml) could inhibit the hydrogen peroxide induced DNA damage by 6.95, 12.99, 17.61, and 26.39 respectively.     

成人症状性外侧盘状半月板损伤对前交叉韧带形态及信号影响的MRI影像学研究

目的报告成人症状性外侧盘状半月板损伤患者前交叉韧带fanterior cruciate ligment,ACL）形态、走形及信号变化特征。方法2009年5月至2012年5月,经关节镜及MRI证实的成人外侧盘状半月板合并症状性损伤的36膝（外侧盘状半月板损伤组）和经MRI证实的成人外侧盘状半月板无损伤的36膝（对照组）被纳入本研究。应用GE Healthcare Centricity RIS／PACKS系统在MRI冠状面和矢状面上分别测量两组病例ACL长度、下止点宽度及体部宽度,所得数据进行对比研究。以ACL单束或双束纤维走行方向改变、连续性中断、轮廓不清、变细或增粗等MRI影像特征作为ACL形态异常评判标准,以T1WI系列图像ACL异常高信号作为信号异常评判标准,统计两组病例ACL异常形态及异常信号的发生率并进行比较。结果外侧盘状半月板损伤组冠状面ACL体部宽度（4．89±1．02）mm明显小于无损伤组（5．77±1．13）mm（P=0．004）;冠状面ACL长度（19．33±1．49）mm、下止点（7．11±1．19）mm及矢状面ACL长度（33．55±2．76）mm、下止点宽度（15．68±1．40）mm、体部宽度（9．78±1．07）mm与无损伤组比较,差异均无统计学意义（P〉0．05o外侧盘状半月板损伤组ACL正常走行及形态所占比例30．6％明显低于无损伤组77．8％（P=0．000）;外侧盘状半月板损伤组在冠状面及矢状面的ACL异常走行及形态发生率分别为52．8％和41．7％,分别与无损伤组冠状面13．9％和矢状面11．1％比较,均明显增高fP〈0．05o外侧盘状半月板损伤组ACL异常信号发生率33．3％也高于对照组11．1％（P=0．023）。结论与无症状、无损伤的成人外侧盘状半月板相比,成人症状性外侧盘状半月板损伤可以导致ACL形态、走行异常和信号改变,其发生可能与外侧盘状半月板损伤、移位并挤压前交叉韧带有关。     

食管癌结合锥形束CT图像引导自适应放射治疗的可行性研究

目的探索利用食管癌患者首周放射治疗时的锥形束CT(cone beam computed tomography,CBCT)图像,建立个体化计划靶区以减少正常组织受照剂量的可行性。方法选取行根治三维放射治疗的食管癌患者10例,获取每位患者治疗首周前5次及后续每周治疗前CBCT验证图像,将其导入治疗计划系统中,与治疗前的定位CT图像配准融合。然后在每个CBCT图像上按患者治疗前靶区勾画原则,再次勾画临床靶区(clinic tumor volume,CTV),并根据首周治疗的摆位误差平均值外扩生成计划靶区(planning tumor volume,PTV)。将首周5个CBCT上勾画的PTV轮廓映射到定位CT上合并生成PTV1,以此法生成后续2～6周的PTV2。按照初始计划(Plan A)的参数设置,保持靶区处方剂量及各危及器官的限量要求不变,以PTV1为靶区,制定一个新的放射治疗计划,即患者个体化的自适应放射治疗计划(Plan B)。用新计划(Plan B)的95%等剂量线评估PTV2覆盖度,通过剂量-体积直方图(DVH)来比较Plan A与Plan B中肺、心脏和脊髓的受照射剂量。结果 PTV1体积比PTV体积小(P<0.05);Plan B中处方剂量95%等剂量线的覆盖率分别为:PTV1=(98.9±2.0)%和PTV2=(99.1±2.0)%,差异无统计学意义(P>0.05)。Plan B的危及器官所受剂量均小于Plan A:肺V20(25.1%vs26.9%)、平均剂量(14.0Gy vs15.1Gy),心脏的平均剂量(16.7Gy vs19.7Gy)和脊髓最大剂量(42Gy vs43Gy),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论利用患者治疗首周CBCT图像资料反馈的信息,可以有效减少计划靶区体积。修改后的计划可在后续治疗中开展,并能进一步减少靶区周围危及器官的照射剂量和潜在提高靶区剂量。     

鼻咽癌调强放疗中腮腺体积变化的临床动态研究

目的研究鼻咽癌病人调强放射治疗过程中腮腺变化规律及影响因素。方法24例初程治疗的鼻咽癌病人接受全程调强放射治疗。所有病人疗前接受1次螺旋CT定位扫描进行治疗计划设计,然后放疗过程中每周1次螺旋CT扫描,直至放疗结束。24例病人共计CT扫描192次。将每次获得的螺旋CT图像与疗前CT图像进行融合,在每层图像上勾画出腮腺外轮廓,进行统计分析,观察放疗过程中腮腺体积的变化,并分析其影响因素,为调强放射治疗计划的二次实施提供依据。结果放疗过程中腮腺体积存在着明显的变化,随着放疗的进行腮腺体积逐渐缩小,放疗结束时腮腺体积缩小17%～59%（中位值38%）;腮腺体积的变化在放疗的第5周达到最大值,其与疗前腮腺体积的大小、放疗剂量直接相关,而与治疗过程中体重变化因素无关。结论放疗过程中腮腺体积存在着明显变化,与疗前腮腺体积、放疗剂量直接相关,在放疗第5周时变化达到最大值,此刻进行二次调强计划的实施有临床应用价值。     

MMP-9、uPA及CD34与胃癌侵袭和转移及其相关性

目的：对基质金属蛋白酶-9（Metrix metalloproteinase-9,MMP-9）、尿激酶型纤溶酶原激活物（uro-kinase-type plasminogen activator,uPA）及血管标志物CD34与胃癌侵袭和转移的关系及其相关性进行研究。方法：选择临床病理资料完整的胃癌蜡块标本54例,正常胃黏膜标本15例作对照。采用SP免疫组化方法检测MMP-9、uPA、CD34的表达。结果：MMP-9、uPA在胃癌组织中高表达,并随分级的降低、淋巴转移的发生、临床分期的提高而明显增高（P均〈0.05）。CD34在胃癌组织中高表达,并随分级的降低、远隔转移的发生、临床分期的提高而明显增高（P均〈0.05）。胃癌中MMP-9与CD34的表达呈正相关（P〈0.01）;uPA与CD34的表达呈正相关（P〈0.01）。结论：MMP-9、uPA、CD34对胃癌的发生、发展、侵袭和转移起重要的促进作用。MMP-9、uPA、CD34在胃癌的发生、发展、侵袭和转移中相互促进,相互协调,关系密切。MMP-9、CD34、uPA各自都可以成为胃癌诊断和预后估计的指标。CD34可以作为胃癌中微血管密度（microvesseldensity,MVD）的有效标记物,同时为胃癌的分子生物学治疗提供新靶点。