大鼠心肌缺血/再灌注损伤基因表达谱特征的初步观察

目的:观察心肌缺血/再灌注损伤前后基因差异表达,探讨缺血/再灌注后心肌细胞损伤的分子生物学机制。方法:提取大鼠缺血/再灌注前后心肌组织mRNA并纯化,用Affymetrix RAT 230A基因表达谱芯片,对表达差异基因进行检测。结果:按差异显著阳性标准,从14000个基因中筛选出缺血/再灌注后差异表达基因179条,其中123条表达上调,56条表达下调,包括原癌基因、细胞周期、信号转导、细胞外基质、细胞骨架蛋白、转录因子、DNA损伤修复基因、凋亡相关蛋白及核糖体蛋白等相关编码基因。结论:用cDNA表达谱芯片分析心肌缺血/再灌注后基因表达,能快速筛选出再灌注损伤相关基因,为临床上更有效地预防缺血/再灌注损伤提供根据。     

大鼠心肌缺血/再灌注损伤及预处理apelin的表达

目的观察大鼠心肌缺血/再灌注损伤及预处理中apelin表达变化,探讨其可能的作用。方法SD大鼠60只随机分成4组:缺血/再灌注组(IR),预处理组(IP),假手术组(SH)和正常对照组(NC)。放免法测定血浆及心肌apelin-36蛋白含量,免疫组化法观察心肌apelin的表达,RT-PCR方法探讨大鼠心肌apelin mRNA表达。结果(1)血浆、心肌组织apelin-36浓度:IR的含量分别比NC低36.1%、45.6%(P<0.01),IP分别比NC低23.8%、24.7%(P<0.01)。SH与NC、IR与IP比无差异(P>0.05)。(2)apelin免疫组化染色吸光度值:IR与IP比NC分别低65.3%和36.8%(P<0.01,P<0.05),IR比IP低45.1%(P<0.05)。SH与NC无差别(P>0.05)。(3)心肌apelin mRNA的水平:IR是NC的40.2%(P<0.01),IP为NC的65.2%(P<0.05),IR是IP组的38.3%(P<0.05),SH与NC无差别(P>0.05)。结论在心肌缺血/再灌注损伤及预处理过程中,大鼠血浆及心肌组织apelin-36蛋白及基因表达下调,提示apelin在该病理生理过程中可能有重要作用。     

多巴胺受体2减轻离体大鼠心肌缺血/再灌注损伤

目的 观察多巴胺受体2(DR2)对离体大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的影响及其可能机制.方法 将大鼠40只,每组n=10,随机分成对照组(control)、I/R组、10 pmol/L Bromocriptine(DR2激动剂)组(Bro),10 μmol/L Haloper-idol(DR2抑制剂)组(Hal).用Langendorff离体灌流装置,复制大鼠心肌I/R损伤模型.Powerlab生理记录仪记录心功能;比色法测定冠脉流出液LDH、CK活性和心肌组织匀浆SOD活性以及MDA含量;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡;Western blot检测DR2、Bcl-2、caspase-3和caspase-9蛋白的表达.结果 与对照组比较,I/R组DR2、Bcl-2、caspase-3和cmpase-9蛋白表达、LDH和CK活性、MDA含量和细胞凋亡率均增加(P＜0.01),唯有SOD活性降低,心功能减弱(P＜0.01).与I/R组比较,Bro降低LDH和CK活性、MDA含量、细胞凋亡率、caspase-3和caspase-9的表达,升高SOD活性,改善心功能和进一步增加Bcl-2的表达(P ＜0.01);Hal对上述指标影响不显著.结论 DR2可减轻心肌I/R损伤,其机制与抗氧化、清除自由基、上调Bcl-2表达以及下调caspase-3和caspase-9的表达有关.     

大鼠急性心肌缺血再灌注的心肌细胞凋亡研究

目的　为证实急性心肌缺血再灌注过程中存在着不同程度的心肌细胞凋亡现象 ,初步研究心肌细胞凋亡与Bcl 2 /Bax蛋白表达的关系。　方法　透射电镜观察心肌细胞的超微结构变化 ,抽提心肌组织DNA琼脂糖凝胶电泳 ,TUNEL法原位标记凋亡的心肌细胞 ,免疫组织化学技术和图像分析技术检测心肌细胞内Bcl 2 /Bax蛋白表达。　结果　缺血及再灌注组电镜观察心肌细胞出现典型凋亡超微结构特征 ,TUNEL染色可见不同程度的心肌细胞凋亡阳性反应 ,DNA电泳显示在缺血再灌注 2h出现明显的DNA条纹图像 ,再灌注组较缺血组心肌细胞中Bcl 2表达明显降低 (P <0 0 5 ) ,而Bax表达显著增高 (P <0 0 1)。　结论　急性心肌缺血及再灌注能诱导不同程度的心肌细胞凋亡 ,Bcl 2 /Bax基因对心肌细胞凋亡的发生有着重要的调控作用     

缺血后处置缓解离体大鼠心肌缺血/再灌注损伤

目的观察缺血后处置对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响,并初步探讨其作用机制。方法复制离体大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型及缺血后处置模型。记录±dp/dtmax和LVEDP。用比色法检测灌流液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western blot方法检测心脏eNOS及ERK1/2的表达,RT-PCR方法测定心脏细胞色素P4502J3(CYP2J3)mRNA表达。结果与缺血/再灌注组(IR)相比,缺血后处置组(IPo)±dp/dtmax均增高(P<0.01),而LVEDP、LDH降低(P<0.05);IR组MDA水平高于对照组(CON)及IPo组(P<0.01),SOD活性低于IPo组(P<0.01);IR组大鼠心肌eNOS及磷酸化ERK1/2的表达均高于CON组和IPo组;IPo组大鼠心脏CYP2J3 mRNA的表达明显高于CON组和IR组。结论缺血后处置可能通过提高再灌注心肌SOD活性,增加氧自由基清除,而改善缺血/再灌注引起的心功能障碍及细胞损伤;CYP2J3/EET系统有可能参与其保护作用。     

心脉隆注射液改善大鼠离体心脏心肌缺血/再灌注损伤

目的 探讨心脉隆注射液对大鼠离体心脏心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用.方法 SPF级SD大鼠60只,随机分为6组,包括假手术(sham)组、I/R处理组以及心脉隆注射液处理组(50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L),每组10只;运用Langendorff灌流系统制作大鼠离体心脏I...     

前列地尔预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的心脏超微结构的保护作用

目的　观察比较前列地尔预处理及经典缺血预处理对在体大鼠缺血 /再灌注心肌损伤的保护效应。方法　动物分为假手术对照组、缺血再灌注组、经典缺血预处理组、前列地尔预处理早期保护组及延迟保护组 ,透射电镜观察心肌超微结构的变化 ,同时用黄嘌呤氧化酶法测定心肌组织的超氧化物歧化酶 (SOD)活性和用硫代巴妥酸法测定丙二醛 (MDA)含量。结果　前列地尔预处理及经典缺血预处理均有保护心肌超微结构和抗氧化效应 ,与模型组相比 ,经典缺血预处理组、前列地尔预处理早期保护组及延迟保护组明显降低缺血再灌注后的心肌MDA含量 (P<0 .0 5 和升高T SOD (P<0 .0 5 水平。结论　前列地尔预处理对在体大鼠缺血 /再灌注心肌损伤具有保护效应 ,能模拟经典缺血预处理心肌保护效应。     

低浓度11,12-EET预干预对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响

目的 :观察外源性低浓度 11,12 -EET预干预对大鼠在体心肌缺血 /再灌注损伤的影响。方法 :雄性Wistar大鼠 ,开胸 ,结扎和松开冠状动脉左前降支 ,复制心肌缺血 /再灌注模型 ;采用缺血 5min/再灌注 5min两次造成缺血预处置。实验分 3组 :对照组 ;缺血预处置组 ;外源性 11,12 -EET预干预组。每组再分为A、B 2小组 :A组动物心肌缺血 10min/再灌注 10min ,主要观察缺血 /再灌注各时程之心律失常 ;B组动物缺血 6 0min/再灌注 30min ,主要观察缺血期心律失常、心功能的变化及再灌注后心肌梗死范围。结果 :缺血预处置和 11,12 -EET(6 2 4× 10 -8mol/L)预干预均可减轻缺血 /再灌注心律失常及心功能的变化 ,降低心肌梗死范围。结论 :11,12 -EET预干预具有类缺血预处置样的心肌保护作用     

心肌缺血再灌注损伤大鼠冠状微循环改变的实验研究

目的研究心肌缺血再灌注损伤大鼠冠状微循环变化的特点及与影响因素的关系.方法对心肌缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠模型、心肌缺血(MCI)大鼠模型和假手术后大鼠3组的心肌毛细血管墨汁灌流数、大鼠冠状微循环荧光变化时间及心肌组织丙二醛(MDA)、心肌组织一氧化氮(NO)含量、心肌组织钠-钾-ATP酶(Na -K -ATPase)、心肌组织钙-ATP酶(Ca2 -ATPase)、血清肌酸激酶(CK)活性、血浆血栓素B2(TXB2)和血浆6-酮-前列环素F1α(6-K-PGF1α)含量进行检测和相关分析.结果较之MCI模型组和假手术后组,①CIRI模型组大鼠右室前壁外层、左室前壁中内层、室间隔前2/3部位毛细血管灌流数均明显减少;心脏表面荧光出现时间(AT)、密布时间(FT)和饱和时间(ST)均延长(均P＜0.05或＜0.01).②CIRI模型组大鼠心肌组织MDA含量明显增高,而NO含量减少;血浆6-K-PGF1α含量下降,而TXB2含量显著升高;Na -K -ATPase和Ca2 -ATPase活性均降低,而血清CK水平升高(均P＜0.05或＜0.01).③CIRI模型组大鼠心脏左室前壁中内层毛细血管墨汁灌流数与MDA、NO、TXB2、6-K-PGF1α、Ca2 -ATPase、CK等6项指标的变化都有相关关系(均P＜0.05或＜0.01),与这6项指标的阳性率亦相同(均P＞0.05).结论冠状微循环障碍是CIRI形成的一个重要病理生理环节,其形成与氧自由基生成增多、钙超载、血管内皮细胞功能明显受损等多种机制有关.     

依达拉奉对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨依达拉奉(ED)预先给药对大鼠离体心肌缺血再灌注(I/R)损伤的作用及其机制。方法:制作Langendorff主动脉逆行灌注心脏I/R模型。24只雄性大鼠随机分为三组(n均=8):对照组(C组)、I/R组、ED组。观察各组大鼠I/R后心功能指标:左室收缩峰压(LVSP)、左室压上升最大速率(+dp/dtmax)、左室压下降最大速率(-dp/dtmax)、冠脉流量(CF)、心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)及肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性、心肌组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:与基础值和C组比较,I/R组再灌注时各时点的CF、LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax降低(P<0.05);与I/R组比较,ED组再灌各时点的CF、LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax增高(P<0.05);ED组心肌SOD活性明显高于I/R组(P<0.05),LDH及CK-MB活性、MDA含量低于I/R组(P<0.05)。结论:ED对I/R心肌有保护作用,能促进心功能恢复。其机制与清除自由基和减轻氧化应激有关。     

天麻对大鼠肾缺血再灌注损伤中SOD、MDA作用的研究

目的　探讨天麻在大鼠肾缺血再灌注损伤中的抗氧化作用 .方法　通过建立大鼠急性肾缺血再灌注损伤模型 ,测定天麻对肾缺血再灌注后肾组织SOD活力与MDA含量的变化 .结果　与对照组相比 ,使用天麻后 ,在再灌注 6h、12h和 2 4h后肾组织SOD活力明显升高 (p值分别 <0 .0 1,0 .0 5 ,0 .0 1) ,MDA含量明显降低 (p值分别 <0 .0 5 ,0 .0 1,0 .0 5 ) .结论　天麻在大鼠肾缺血再灌注损伤模型中 ,有抗自由基损伤和减轻脂质过氧化的作用 .     

降纤酶对离体大鼠工作心脏缺血再灌注损伤的作用

目的 :探讨降纤酶 ( Df)对心脏缺血再灌注损伤的作用。方法 :采用离体大鼠工作心脏缺血再灌注损伤模型 ,通过检测缺血再灌注损伤前后对照组、Df低剂量组及 Df高剂量组的心功能参数 ,观察Df的作用。结果 :Df可降低实验动物的室颤发生率 ,增强心肌收缩力 ( P<0 .0 5 ) ,防止冠脉流量下降 ( P<0 .0 5 )及左室内压下降 ( P<0 .0 1) ,促进压力最大上升速度的恢复 ( P<0 .0 5 )。结论 :Df对心脏缺血再灌注损伤具有显著的保护作用。     

改良的短暂局灶性大鼠脑缺血模型

SD成年雄性大鼠34只，用多聚-L-赖氨酸处理的尼龙线从大鼠颈总动插入，送至大脑中动脉以阻断大脑中动脉（MCA）的血液，造成MCA供血区缺血，2小时后将尼龙线头端退出到颈内动脉的颈段，制成短暂局灶性脑缺血模型。再灌流0．5-48小时后，观察了缺血的神经症状、脑组织TTC染色以及HE染色所显示的缺血灶和缺血的组织学特征。所有实验组均出现程度相同的各种神经症状，正常对照组、假性手术对照组和缺血组对照侧TTC染色为红色，缺血区为白色．并且位于同侧视前区、纹状体及大脑皮质，随再灌流时间的延长缺血区逐渐扩大．到24小时组，缺血区扩散为整个MCA供血区。3小时内神经元主要为急性期改变，HE染色神经元肿胀或收缩，6小时出现不可逆的神经元改变，48小时内视前区和纹状体现出凝固性坏死。这一模型操作简单，重复性好、敏感性高、反应一致，且易再灌流，因此是比较理想的短暂性局灶性脑缺血模型，可为临床中风的药物研究提供基本条件。     

大鼠冠状动脉微栓塞模型的建立

目的建立大鼠冠状动脉微栓塞（Coronary Microembolization，CME）模型。方法S-D雄性大鼠随机分为假手术组（S0组），微栓塞组（CME组）；CME组再按微球数目不同分为1000、2000、3000、4000个微球亚组（分别计为CME1、CME2、CME3、CME4组，各组存活大鼠均n=10）；大鼠麻醉后开胸，夹闭升主动脉10s，从左心室注射微栓塞球到达冠状动脉记为CME组，以注射生理盐水为假手术组；分别于术后6h心脏超声检测左室射血分数（LVEF）、HBFP检测心肌微梗死面积和TUNEL检测心肌细胞凋亡卒。结果①与s。组比较，CME，组LVEF下降，但没有统计学意义；与S0组比较，CME2、CME3、CME4组LVEF均显著下降（均P〈0．05）；CME组均出现心肌微梗死灶与心肌细胞凋亡。②不同微栓塞亚组之间比较，LVEF与微栓塞球数目成负相关（γ=0．78，P〈0．05）、心肌微梗死面积和心肌细胞凋亡率均与微栓塞数目成正相关（γ分别为0．85、0．80，均P〈0．05）。③3000个微球是较理想的建立大鼠CME模型所需的微球数日。结论开胸大鼠，从左室注入微栓塞球3000个，可成功建立大鼠CME模型。     

缺血后处理对急性心肌缺血／再灌注家猪心脏的作用

目的研究缺血后处理对实验家猪心肌梗死范围及血压心率的影响,探讨在体条件下,缺血后处理是否具有缩小家猪缺血心脏的心肌梗死范围。方法采用标准家猪缺血／再灌注模型,在缺血后再灌前,分别给予4个周期和8个周期的短暂再灌注／再缺血作缺血后处理,TTC法确定心肌梗死范围。结果缺血后处理组8-30PostC心肌梗死范围（10．5±0．5）％,缺血后处理组4-30PostC心肌梗死范围及对照组分别为（36．7±3．7）％和（33．5±7．6）％（P〈0．01）,8个周期的缺血后处理组家猪心肌梗死面积明显小于对照组以及4个周期组,各组家猪的心率和平均动脉压无明显差异。结论缺血后处理可明显缩小家猪缺血心脏的心肌梗死范围。     

大鼠心肌梗死后心力衰竭模型的建立及评价

目的 探讨大鼠心肌梗死后慢性心力衰竭模型建立方法及指标评价体系.方法 SD大鼠麻醉后开胸,手术组结扎左侧冠状动脉前降支,制备心梗后心衰模型,假手术组采取仅在相同结扎位置穿针,不结扎的方法.术后8周处死.术前、术后5分钟、处死前分别记录标准肢体导联心电图、心脏超声,评价电生理、心功能指标;处死后采用苏木素-伊红(HE)染色、Masson染色评价病理改变;使用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中B型尿钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)浓度.结果 该研究中手术组及假手术组手术存活率分别为72.5％、75.0％;手术组术后5分钟心电图Ⅰ、Ⅱ、aVL导联出现ST段抬高,T波高耸的典型心肌梗死心电图改变,术后8周ST段、T波回落;此外,术后8周的手术组左室射血分数和左室短轴缩短率均低于假手术组(均为P＜0.01),HE染色可见残存心肌细胞、成纤维细胞、毛细血管增生等慢性纤维化表现,Masson染色显示梗死区残存心肌纤维之间纤维瘢痕组织形成;血清BNP水平也明显高于假手术组(均为P＜0.01).结论 冠脉结扎法建立心梗后心衰模型存活率高、简单易行,采取的心电、心功能、病理、检验评价指标获取简单、重复性强,便于对模型进行筛选.     

大鼠脑局灶性缺血再灌注后的细胞凋亡及bcl-2、bax蛋白表达的改变和银杏叶提取物干预的研究

目的探讨大鼠大脑中动脉重度栓塞再灌注动物的脑细胞凋亡及其相关调控基因bcl鄄2、bax阳性蛋白质表达的变化和银杏叶提取物(EGB)的治疗作用。方法采用插线法制作大鼠大脑中动脉栓塞后再灌注模型。将大鼠随机分为对照组、栓塞3h组、栓塞3h再灌注24h组、栓塞3h再灌注48h组、栓塞3hEGB干预、再灌注24hEGB干预组、再灌注48hEGB干预组。观察脑缺血/再灌注不同时点大鼠脑细胞凋亡(TUNEL法)、凋亡相关基因bcl鄄2、bax(S鄄P免疫组化法)的阳性表达和EGB对其治疗作用。EGB干预方法:术后2min腹腔注射,8h/次。结果大鼠大脑中动脉栓塞3h、栓塞3h/再灌注24、48h时,bcl鄄2、bax表达增强,细胞凋亡逐步加重,损伤加重。EGB干预后,bcl鄄2表达增强、bax表达减弱,细胞凋亡明显减少。结论细胞凋亡与bcl鄄2/bax有关,银杏叶提取物(EGB761)可以明显抑制大鼠脑组织缺血/再灌注后细胞凋亡的发生。     

缺血后处理对肺缺血再灌注损伤模型大鼠的保护作用

背景：肺切除、体外循环、肺移植、肺动脉栓塞等病都会造成肺组织缺血再灌注损伤,肺缺血再灌注损伤也是肺移植后肺功能失调的重要因素。 目的：分析缺血后处理对肺缺血再灌注损伤模型大鼠的影响。 方法：将24只雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和缺血后处理组,每组8只。建立肺缺血再灌注损伤模型,假手术组只分离左肺门和肺动静脉,未阻断;缺血再灌注组肺缺血1 h后再灌注2 h;缺血后处理组于再灌注前给予3次缺血30 s再灌注30 s,然后恢复再灌注2 h。实验后取肺组织标本,检测肺组织湿/干质量比、超氧化物歧化酶、丙二醛和髓过氧化物酶活性,炎症细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6的含量,观察肺组织病理学变化。 结果与结论：缺血再灌注组和缺血后处理组肺组织湿/干质量比、丙二醛、髓过氧化物酶活性、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6水平与假手术组比较有显著增高(P < 0.05),而缺血后处理组增高不明显,与缺血再灌注组比较,含量和活性均降低(P < 0.05)。缺血再灌注组和缺血后处理组超氧化物歧化酶活性明显低于假手术组,缺血后处理组明显高于缺血再灌注组。缺血再灌注组肺组织病理检查见肺泡壁增厚,有水肿和大量炎性细胞浸润。缺血后处理组肺泡壁增厚和水肿程度较缺血再灌注组减轻,有部分炎性细胞浸润。肺组织病理学评分,缺血后处理组较缺血再灌注组有所降低。结果提示,缺血后处理可以通过抑制肺缺血再灌注后炎症细胞聚集、氧自由基产生和促炎细胞因子释放,对肺缺血再灌注损伤模型大鼠起到保护作用。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程     

缺血预处理诱导脑缺血再灌注损伤后Bcl-2及Bcl-xl表达

目的 探讨调亡抑制基因Bcl-2及Bcl-xl在缺血预处理（IPC）对海马CA1区神经元细胞保护中的作用。方法 利用大鼠四血管阻断及再通建立前脑缺再缺血灌注损伤模型,采用尼氏染色光镜观察、流式细胞术、免疫组织化学等技术,观察缺血预处理海马CA1区神经元病理组织学改变、细胞凋亡面分率有Bcl-2及Bcl-xl蛋白表达的情况。结果 1、大鼠前脑缺血再灌注引起海马CA1区部分神经元发生调亡。2、IPC可明显地减少缺血再灌注损伤后调亡的神经元数目,产生细胞保护作用。3、IPC可诱导缺血再灌注损伤早期缺血敏感神经元中Bcl-2和Bcl-xl蛋白表达。结论 抑制神经元调亡发生可能IPC对缺血再灌注损伤起保护作用的机制之一。