腺病毒介导的HSV-tk基因治疗人脑胶质瘤SHG44的研究

目的　探讨带有ＨＳＶｔｋ 基因的重组腺病毒（Ａｄ．ｔｋ） 结合ＧＣＶ 对国人脑胶质瘤ＳＨＧ４４ 的治疗作用。方法　Ｘｇａｌ 染色比较带有报告基因ＬａｃＺ的重组腺病毒（Ａｄ．ＬａｃＺ） 转染ＳＨＧ４４ 细胞和大鼠脑胶质瘤Ｃ６ 细胞的效率,ＭＴＴ法比较Ａｄ．ｔｋ／ＧＣＶ 系统对ＳＨＧ４４ 和Ｃ６ 细胞的敏感性,ＤＮＡ片段分析细胞杀伤机制;在活体用Ａｄ．ｔｋ／ＧＣＶ 治疗ＳＨＧ４４ 移植瘤。结果　ＭＯＩ为５０ 时,Ａｄ．ＬａｃＺ感染ＳＨＧ４４ 细胞的效率近１００％ ,较Ｃ６ 细胞高;ＭＯＩ为１００ 时,Ａｄ．ｔｋ 感染的ＳＨＧ４４ 细胞对ＧＣＶ 的敏感性较Ｃ６ 细胞高,其半致死剂量（ＩＣ５０） 分别为０ ．１２ μｍｏｌ／Ｌ 和０ ．２６ μｍｏｌ／Ｌ,有凋亡机制参与其细胞杀伤;５ ×１０８ＰＦＵ 的Ａｄ．ｔｋ 肿瘤原位注射结合ＧＣＶ治疗,有效抑制ＳＨＧ４４ 移植瘤生长,肿瘤组织坏死,出血伴有纤维组织增生;与Ａｄ ．ｔｋ／ＰＢＳ组、Ａｄ．ＬａｃＺ／ＧＣＶ 组、ＰＢＳ组相比,肿瘤抑制效率分别为９２．５ ％ 、９２．６％ 、８９ ．５％ （ Ｐ＜０ ．０１） 。结论　Ａｄ．ｔｋ／ＧＣＶ系统对人脑胶质瘤细胞的感染效率和敏感性较高,治疗国人脑胶质瘤效果显著。     

p16基因突变在人脑胶质瘤癌变中的作用

评估ｐ１６基因在胶质瘤发病机制中的作用。方法 用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ，差别ＰＣＲ等方法检测了２７例胶质瘤标本及对照正常脑组织，瘤旁组织及其它病变标本ｐ１６基因。结果 胶质瘤组中有４例存在ＳＳＣＰ泳动变位，提示存在点突变或微小突变．差别ＰＣＲ显示１例纯合缺失，１８例杂合缺失，正常组无任何形式的突变，胶质瘤组与正常组的总突变差异有显著意义。     

腺病毒介导胞嘧啶脱氨酶基因对直肠癌细胞的杀伤作用

目的 探讨腺病毒载体介导的胞嘧啶脱氨酶（CD）基因转染和CD/5-FC对直肠癌细胞的杀伤作用。方法 用重组腺病毒介导外源CD基因转移到人直肠癌细胞株HR-8348,通过检测腺病毒的转导效率,CD基因表达,以及集落形成实验,细胞存活率测定,裸鼠移植癌治疗实验,观察分析CD/5-FC对癌细胞的杀伤作用,结果 重组腺病毒介导CD基因转染,在癌细胞中得到高效表达。CD/5-FC系统对转染含CD重组腺病毒HR-8348细胞的集落形成,细胞生长均有明显的抑制作用,而对无CD基因转染癌细胞无影响,在转染和未转染CD基因的HR-8348混合体系中,CD/5-FC除了杀伤转染CD基因的癌细胞外,对周围的无CD转染癌细胞也有明显的杀伤作用。表现出很强的“旁观者效应”。裸鼠皮下移植癌治疗实验结果表明,CD/5-FC对HR-8348实体癌生长抑制率为71.5%。结论 CD/5-FC对腺病毒介导CD基因转染的直肠癌细胞有很强的杀伤作用和显著的“旁观者效应”。     

腺病毒介导的HSV-tk/GCV自杀基因系统体内外旁观者效应的观察

目的　观察腺病毒介导的HSV tk/GCV自杀基因系统的体外、体内接触及体内远端旁观者效应。　方法　采用向体外培养的tk阴性人肝癌BEL 74 0 2细胞中加入不同比例tk阳性同种细胞 ;向荷tk阴性BEL 74 0 2瘤小鼠瘤体内注射不同数量tk阳性同种细胞 ;向双侧荷瘤小鼠一侧瘤体内注射重组腺病毒 ,GCV作用后用不同方法来观察不同情况下的旁观者效应。　结果　体外组中观察到明显旁观者效应 ,当tk阳性细胞占 10 %时 ,混合细胞存活率为 36 6 % ;体内接触组中也观察到旁观者效应 ,实验组瘤体生长明显受到抑制 (P <0 0 5 ) ;体内远端组中 ,未观察到旁观者效应 (P >0 0 5 )。结论　腺病毒介导的HSV tk/GCV自杀基因系统在体外及体内接触时均存在旁观者效应     

体外腺病毒介导的HSV-tk/GCV对产生AFP的人肝癌细胞的影响

目的 观察腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（HSV-tk）/丙氧鸟苷（GCV）自杀基因系统在体外对人肝癌细胞的选择性杀伤效应。方法 采用含有甲胎蛋白基因启动子、增强子和HSV-tk基因的嵌合基因,插入腺病毒中形成重组腺病毒（AdrAFPTK）,将该重组腺病毒分别感染体外培养的甲胎蛋白阳性人肝癌细胞BEL-7402和甲胎蛋白阴性人肝癌细胞SMMC-7721,逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测HSV-tk基因的转录表达,观察GCV对人肝癌细胞的选择性杀伤作用。结果GCV在体外对重组腺病毒转染的甲胎蛋白阳性的人肝癌细胞BEL-7402有明显的杀伤作用和“旁观者效应”,而对重组腺病毒转染的甲胎蛋白阴性的人肝癌细胞SMMC-7721无明显作用。结论 在体外,表达HSV-tk基因的甲胎蛋白的人肝癌细胞可被受甲胎蛋白基因表达调控序列控制的自杀基因HSV-tk特异性杀伤,表现出极高的细胞专一性。重组腺病毒AdrAFPTK可望用于肝癌的特异性基因治疗。     

腺病毒驱动KDR启动子介导CD/TK融合基因系统对血管内皮细胞的靶向杀伤作用

目的　探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的融合基因体系,对人脐血管内皮细胞ECV30 4的选择性杀伤作用。方法　将质粒pAdEasy -KDR- CDglyTK在2 93细胞内包装、扩增后,体外感染表达KDR的ECV30 4细胞株和不表达KDR的LS174T细胞株,并给予不同浓度的前药5 - 氟胞嘧啶(5 -fuorocytosine ,5 -FC)和/或丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV) ,观察该体系对不同细胞株的杀伤效应及其旁观者效应;并以流式细胞仪检测细胞周期的变化,电镜观察细胞的病变。结果　所得病毒对两种细胞细胞的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的递增而增加;表达KDR的ECV30 4细胞对前药的具有较高的敏感性,不表达KDR的LS174T细胞对前药不敏感(P均<0 . 0 1) ;融合基因的疗效优于任一单自杀基因(P均<0 . 0 1) ;且观察到该体系明显的旁观者效应。流式细胞术检测治疗后ECV30 4细胞G1期比率增多及S期细胞减少(P均<0 . 0 1) ,同时,电镜下可见ECV30 4有凋亡和坏死改变。结论　KDR基因启动子可调控融合基因体系选择性杀伤人血管内皮细胞。     

腺病毒介导自杀基因对消化系统肿瘤的杀伤作用

目的观察腺病毒介导的自杀基因对消化系肿瘤的杀伤作用。方法腺病毒介导的自杀基因HSV-TK分别转染结肠癌LOVO细胞、胃癌MGL-803细胞和肝癌BEL-7402细胞,比较腺病毒载体对不同肿瘤细胞的转染效率。加入前药丙氧鸟苷(GCV),通过MTT法检测细胞存活率,观察单纯疱疹病毒1型胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)系统对不同肿瘤细胞的杀伤作用和旁观者效应。结果在GCV浓度100mg/L以上时,3种转基因肿瘤细胞均可被HSV-TK/GCV系统完全杀伤;旁观者效应以MGL-803细胞最为明显,与LOVO细胞和BEL-7402细胞相比,差异有显著性意义(P<0.05);腺病毒对肿瘤细胞的转染效率强弱依次为BEL-7402细胞、MGL-803细胞和LOVO细胞。结论重组腺病毒可以作为消化系肿瘤基因治疗的高效载体。HSV-TK/GCV系统对胃癌MGL-803细胞的作用最佳。     

腺病毒载体介导反义Src基因治疗胶质瘤

目的 探讨腺病毒载体介导的反义Src基因对胶质瘤生长的作用及其机制.方法 应用携带反义Src基因的重组腺病毒体外感染C6胶质瘤细胞,观察其对细胞形态、生长曲线和克隆形成率的影响.建立大鼠胶质瘤动物模型,原位注射重组腺病毒.观察其治疗作用,Western blot检测肿瘤组织Src、Ras、MAPK蛋白的表达,实时逆转录-聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)检测肿瘤组织Caspase-3、Caspase-8 mRNA的表达.结果 体外研究表明感染反义Src基因的C6胶质瘤细胞生长受到显著抑制.体内研究表明应用携带反义Src基因的腺病毒原位注射治疗大鼠胶质瘤能够抑制肿瘤生长,减少Src、Ras、MAPK蛋白的表达,增加Caspase-3、Caspase-8 mRNA的表达.结论 腺病毒载体介导的反义Src基因能够抑制大鼠胶质瘤细胞的生长.Src-Ras-MAPK信号通路参与胶质瘤的生长,抑制该信号通路可以增加凋亡通路关键蛋白Caspase-3、Caspase-8的表达.     

hTERT启动子调控腺病毒介导的HSV-tk/GCV基因系统治疗前列腺癌的实验研究

目的探讨人端粒酶逆转录酶启动子(hTERT)驱动的重组腺病毒Ad-hTERT-HSV-tk结合环氧鸟苷(GCV)对人前列腺癌的治疗作用。方法①体外实验:用携带启动子hTERT的重组腺病毒Ad-hTERT-EGFP以及携带小鼠巨细胞病毒(CMV)启动子的重组腺病毒Ad-CMV-EGFP分别感染人前列腺癌细胞LNCaP及人正常成纤维细胞MRC-5,根据报告基因EGFP表达的不同计算病毒的细胞转染率。MTT法评估GCV对分别感染Ad-hTERT-EGFP、Ad-CMV-EGFP、Ad-hTERT- HSV-tk和Ad-CMV-HSV-tk的MRC-5细胞及LNCaP细胞的杀伤作用。②体内实验:建立人前列腺癌BALB/C裸鼠移植瘤模型,将成瘤裸鼠按随机表法分为4组,每组10只。A组为治疗组,肿瘤局部注射1.0×109 PFU/ml的Ad-hTERT-HSV-tk病毒上清0.1 ml,第1、5、10天各1次,第2～15天腹腔注射GCV 100 mg·kg-1·d-1;B组为Ad-hTERT-HSV-tk对照组,注射Ad-hTERT-HSV-tk同A组,第2～15天腹腔注射PBS;C组为GCV对照组,肿瘤局部仅注射PBS 0.1 ml。第1、5、10天各1次,注射GCV同A组;D组为阴性对照组。比较各组肿瘤体积、瘤重及肿瘤抑制率。结果①体外实验:当感染复数(MOI)=10时,Ad-CMV-EGFP在MRC-5及LNCaP中的转染率分别为88.41%及90.23%,二者比较差异无统计学意义(P>0.05),而Ad-hTERT-EGFP在MRC-5及LNCaP中的转染率分别为0及66.67%,二者比较差异有统计学意义(P<0.01)。MOI=100,GCV=1000μg/ml时,Ad-hTERT-EGFP、Ad-CMV-EGFP、Ad-hTERT-HSV-tk和Ad-CMV-HSV-tk对MRC-5细胞的抑制率分别为0、0、1.1%和98.4%,对LNCaP细胞的抑制率分别为0、0、97.4%和99.4%。②体内实验:荷瘤裸鼠治疗后第14天,A、B、C和D组肿瘤体积分别为82.56、132.85、135.03和174.07 mm3;各组移植瘤重量分别为(0.49±0.22)、(1.17±0.18)、(1.35±0.19)和(1.46±0.13)g;A组的肿瘤体积和重量明显小于其它组(P<0.01)。第21天时,各组的移植瘤抑制率分别为72.55%、2.49%、12.28%和0,A组的移植瘤抑制率明显大于其它组(P<0.01)。结论Ad-hTERT-HSV-tk对LNCaP细胞具有靶向杀伤作用,对MRC-5无明显杀伤作用;Ad-hTERT-HSV-tk/GCV系统对人前列腺癌裸鼠移植瘤模型具有明确的治疗作用。     

腺病毒介导的双自杀基因对直肠癌细胞的杀伤作用

目的 探讨直肠癌的基因治疗方法。方法 用重组腺病毒介导外源胞嘧啶脱氨酶（CD）基因、单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV－tk）基因转移到人直肠癌细胞系HR－8348,通过细胞集落形成实验、细胞存活率测定（MTT法）,检测、分析CD和HSV－tk双自杀基因系统对肿瘤细胞的作用。结果 重组腺病毒介导的CD和HSV－tk自杀基因可在HR－8348细胞高效表达。用腺病毒穿梭质粒pAdCMV-Linkl(CD tk)、Linkl(-)、pAdCMV-Linkl(CD)、pAdCMV-Kinkl(tk）重组腺病毒感染HR－8348细胞,不加5－氟胞嘧啶（5－FC）、环氧鸟苷（GCV）,各组肿瘤细胞的集落形成和存活率的差异无显著性意义（P＞0．05）。应用5－FC、GCV后,pAdCMV-Linkl(CD tk)转染组细胞集落形成和存活率显著低于对照组pAdCMV-Link（－）转染组（P＜0．01）,也低于pAdCMV-Linkl(CD)、pAdCMV-Linkl(tk）转染组（P＜0．05）。CD和5－FC、HSV－tk和GCV系统联合使用较单一自杀基因系统对HR－8348直肠癌细胞的集落形成、细胞生长有更显著的抑制作用,对肿瘤细胞有更强的杀伤能力和“旁观者效应”。结论 CD和HSV－tk双自杀基因联合作为肿瘤基因治疗的一种手段和方法,较单一自杀基因具有更强的抗肿瘤作用。     

腺病毒介导HSV-TK/CD基因对胆管癌体内体外的杀伤作用

目的　研究HSV TK /CD融合基因对胆管癌的杀伤作用。方法　腺病毒介导HSV TK /CD融合基因体外转染胆管癌细胞QBC93 9,与单自杀基因对照 ,四甲基偶氮唑蓝 (MTT )比色法测定肿瘤细胞生长抑制率 ,旁观者效应 ;构建胆管癌裸鼠模型 ,瘤内注射重组腺病毒 ,观察肿瘤生长情况。结果　与单一自杀基因转染组对照 ,双基因组表现出更强的抗肿瘤作用。当给予相同浓度的前体药物时 ,融合基因组 ,CD组和TK组的肿瘤细胞存活率分别为 3 .1%、3 2 .1%、5 5 .2 %。体内实验显示 ,融合基因组的肿瘤生长受到明显抑制 ,抑制率达 70 .7%。单自杀基因TK、CD组则分别为 41.2 %和 5 5 .7% ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。组织学检查可见实验组肿瘤发生明显坏死 ,这种现象在融合基因治疗组尤为明显。结论　与单自杀基因相比 ,HSV TK/CD融合基因在体内和体外都具有更强的抗肿瘤活性。     

腺病毒载体介导的Polo样激酶1短发夹环RNA对胶质瘤体内外增殖的抑制作用

目的探讨重组腺病毒载体介导的Polo样激酶1（PLK1）短发夹环RNA（shRNA）对人胶质瘤细胞株U251在体内外增殖的抑制作用。方法设计并合成针对PLK1的shRNA,并克隆至真核表达载体pEGFP—H1上,再将H1启动子和shRNA亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack上,通过在携带有pAdeasy-1质粒的BJ5183细菌内同源重组,生成针对PLK1的shRNA重组腺病毒载体pAD-H1／PLK1,经293细胞包装产生重组腺病毒AD-H1／PLK1,感染U251细胞。应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）的方法检测U251细胞PLK1mRNA表达,流式细胞仪检测细胞凋亡以及细胞G2／M期转变情况,以噻唑蓝（MTT）比色法检测各组细胞的增殖活性。同时制备裸鼠U251细胞移植瘤模型并注射重组腺病毒,观察肿瘤生长情况。结果成功构建针对PLK1基因的RNA干扰腺病毒表达载体,与AD-H1组比较AD-H1／PLK1组在转染24h和48hU251细胞PLK1mRNA表达水平分别降低50．4％（P〈0．01）和71．9％（P〈0．01）。且感染AD-H1／PLK1病毒48h后的U251细胞凋亡率从8．3％升至65．6％（P〈0．01）,而G2／M期的细胞从21．5％增至51．4％（P〈0．01）,细胞的增殖能力则下降50％（P〈0．01）。体内实验表明重组腺病毒载体介导的PLK1shRNA也明显抑制肿瘤生长（P〈0．01）。结论腺病毒介导的RNA干扰技术可有效降低PLK1在胶质瘤细胞中的表达水平,抑制肿瘤细胞在体内外的增殖活性。     

HSV-TK/GCV系统对前列腺癌细胞的杀伤作用和旁观者效应

目的 :研究胸苷激酶 (TK)自杀基因疗法对人前列腺癌细胞的杀伤作用和旁观者效应 ,探讨其治疗前列腺癌的可行性。方法 :采用形态学观察、活细胞拒染法及MTT法检测单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV TK) /羟基无环鸟苷 (GCV)系统对前列腺癌细胞的杀伤作用及旁观者效应。结果 :GCV对转染TK基因前列腺癌细胞的杀伤作用呈剂量及时间依赖关系 (P <0 .0 5～ 0 .0 1) ;但其旁观者效应较弱 ,TK基因阳性细胞比例约为 10 %的混合细胞 ,经 10 μmol/L和 10 0 μmol/L的GCV处理 72h后 ,仅有16.15 %± 1.64 %和 2 3 .46%± 3 .2 1%的细胞被杀灭。结论 :HSV TK/GCV系统对前列腺癌有杀伤作用 ,但由于其旁观者效应不够强大 ,不能期望通过单纯的TK基因治疗达到前列腺癌良好的治疗效果     

腺病毒介导双自杀基因选择性杀伤血管内皮细胞

目的研究腺病毒介导的双自杀基因在KDR启动子调控下对血管内皮细胞的选择性杀伤作用。方法应用PCR扩增出KDR启动子序列,分别构建携带KDR启动子和巨细胞病毒(CMV)启动子调控下的CD与TK的融合基因的重组腺病毒AdKDR-CDglyTK、AdCMV-CDglyTK,体外感染脐静脉血管内皮细胞系HUVEC和结直肠癌细胞系LOVO细胞,利用重组病毒携带的GFP基因,在荧光显微镜下观测重组病毒的感染效率,并给予不同浓度的GCV和5-氟胞嘧啶(5-FC),观测杀伤作用,比较两种启动子的转录调控特性。结果成功构建了两种重组病毒,并高效地转染了HUVEC和LOVO细胞。两种重组病毒对两种细胞的转染效率相似,并随重组病毒的感染复数MOI(multiplicityofinfection)增加而升高;以MOI=100的两种病毒分别转染的两种细胞表现出对前药的不同敏感特性:转染了AdCMV-CDglyTK的HUVEC和LOVO细胞以及转染了AdKDR-CDglyTK的HUVEC细胞,对前药的敏感性差异无显著性意义(P>0.05);转染了AdKDR-CDglyTK的LOVO细胞,对前药敏感性低,与其他3组比较,差异存在显著性意义(与其他3组两两间比较,P均<0.001)。结论KDR基因启动子可调控双自杀基因在血管内皮细胞中的特异性表达,有利于实现双自杀基因靶向恶性肿瘤血管内皮细胞的抑癌疗法。     

重组腺病毒介导CD自杀基因联合野生型p53基因对直肠癌细胞的杀伤作用

目的 观察重组腺病毒介导胞嘧啶氨酶（ＣＤ）基因和人野生型ｐ５３基因共转染对直肠癌细胞的杀伤作用。方法 用携带ＣＤ／ｐ５３、ＣＤ、ｐ５３基因腺病毒感染直肠癌细胞ＳＷ８３７,计数瘤细胞集落数,采用四唑蓝比色（ＭＴＴ法）检测瘤细胞存活率。于６０只裸鼠移植瘤内注射重组腺病毒、磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）,测定肿瘤生长抑制率。结果 用ＣＤ／ｐ５３、ＣＤ、ｐ５３重组腺病毒感染ＳＷ８３７细胞,加５－ＦＣ后细胞集落形成分别为：６、３８、６９。裸鼠移植肿瘤生长抑制率分别为７８．６％、５６．５％、２２．３％。ＣＤ／ｐ５３重组腺病毒感染组肿瘤细胞集落形成和存活率下降最显著（Ｐ〈０．０１）,对肿瘤的抑制作用明显。结论 ＣＤ自杀基因与野生型ｐ５３基因共转染对肿瘤细胞有更强的杀伤作用。     

腺病毒介导的hCTLA4-Ig和FasL基因转移诱导大鼠同种异体肾移植长期存活的作用

目的 探讨腺病毒介导hCTLA4-Ig和FasL基因转移延长异基因大鼠肾移植物存活时间及其相关机制.方法 供、受者分别为SD系大鼠和Wistar系大鼠,建立大鼠肾移植模型.实验分为4组:对照组、空载病毒Ad-EGFP处理组、Ad-CTLA4-Ig处理组、Ad-CTLA4-Ig+Ad-FasL处理组.对照组不予处理,其他各组在供肾冷保存时,经供肾动脉灌注(1×10~9-5 ×10~9)PFU/ml Ad-EGFP、Ad-CTLA4-Ig、Ad-CTLA4-Ig+Ad-FasL.术后比较各组的存活时间、移植肾组织学、肾功能和免疫组织化学等的改变.结果 肾移植受者平均存活时间Ad-CTLA4-Ig+Ad-FasL处理组(64.67±6.41)d、Ad-CTLA4-Ig处理组(31.33 ±6.77)d与对照组(8.17±1.17)d,空载病毒Ad-EGFP处理组(8.00±1.55)d比较明显延长(P均＜0.01),并且Ad-CTLA4-Ig+Ad-FasL处理组优于Ad-CTLA4-Ig处理组(P＜0.01);对照组和空载病毒Ad-EGFP处理组术后血清肌酐浓度迅速上升,其余两组移植肾功能保持稳定.结论 Ad-CTLA4一Ig和Ad-FasL介导的基因转移能够诱导异基因肾移植物长期存活;该效应为供体特异性,与调节性T细胞和同种反应性T细胞的删除有关.     

腺病毒驱动KDR启动子介导CD/TK融合基因系统对肝癌细胞的靶向杀伤作用

目的 研究腺病毒介导的KDR启动子驱动CD/TK双自杀基因系统（AdKDR- CDglyTK）对肝癌细胞选择性杀伤作用。方法 将质粒pAdEasy-KDR-CDglyTK在293细胞内包装、扩增后，体外感染表达KDR的BEL-7402细胞株和对照组不表达KDR的LS174T细胞株，并给予不同浓度的前药5-FC和/或GCV，观察该体系对不同细胞株的杀伤效应及其旁观者效应。结果 所得病毒滴度为2.5×10^12pfu/ml。两种细胞的感染率相似，其感染率随腺病毒滴度的递增而增加。RT-PCR方法 检测发现：感染AdKDR-CDglyTK的BEL-7402有目的 基因CDglyTK的表达，感染AdKDR- CDglyTK的LS174T细胞无目的 基因表达。表达KDR的BEL-7402细胞对前药具有较高的敏感性，不表达KDR的LS174T细胞对前药不敏感（F=750.03，P〈0.001）。融合基因的疗效优于任一单自杀基因（F=275.89，P〈0.05）。将感染腺病毒的细胞与未感染细胞以不同比例混合培养，观察到该体系明显的旁观者效应。结论 KDR基因启动子可调控双自杀基因系统选择性杀伤表达KDR的肝癌细胞。     

hTERT启动子调控腺病毒介导的HSV-tk/GCV基因系统治疗人膀胱癌

我们在体外实验已证实,hTERT启动子调控腺病毒介导的HSV-tk/GCV基因对膀胱癌细胞有选择性的杀伤作用,而对正常细胞不产生明显影响[1].我们采用BALB/C裸鼠建立荷人膀胱癌动物模型,给予重组腺病毒静脉内注射治疗,观察其在体内的治疗效果及安全性.     

腺病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶基因对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的杀伤作用

目的 观察腺病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因对雄激素非依赖前列腺癌细胞的杀伤作用,探讨雄激素非依赖性前列腺癌( AIPC)基因治疗的可行性.方法 制备携带HSV-TK的重组腺病毒载体(AdTK),AIPC细胞PC-3细胞加入AdLacZ,滴度(MOI)分别为50、100、150、200、250.48 h后计算各滴度AdLacZ转染PC-3细胞的细胞感染率(％).转染后使用更昔洛韦(GCV)处理,浓度为10 mg/L,噻唑蓝(MTT)比色法观察AdTK/GCV对PC-3细胞的体外杀伤效应.结合电镜技术、流式细胞仪检测探讨AdTK/GCV对PC-3细胞的杀伤机制.结果 对体外培养的PC-3细胞杀伤实验表明,随着AdTK MOI增加及GCV剂量增加,细胞存活率逐渐降低.AdTKMOI为150和250时,GCV的半数致死最(IC50)分别为7.75 mg/L和5.00 mg/L.电镜和流式细胞仪检测证实细胞死亡有细胞凋亡机制参与.AdTK/GCV处理后非转染PC-3细胞出现死亡,存在旁观者效应,效应强弱与AdTK转染、未转染细胞混合比例相关.结论 AdTK/GCV能有效杀伤雄激素非依赖前列腺癌PC-3细胞.