核因子κB p65在肌肉萎缩中的表达与被动运动对其影响

目的 研究核因子κB(nuclearfactor kappa B,NF-κB)p65在失神经骨骼肌中的表达及被动运动对其影响作用,探讨失神经骨骼肌萎缩的分子机制及防治方法.方法 选Wistar大鼠42只,随机分成健康对照组(6只)、失神经对照组(18只)和被动运动组(18只).失神经对照组和被动运动组建立右下肢失神经腓肠肌动物模型.被动运动组大鼠采用右下肢被动运动300次/d.分别在术后2 d、14 d及28d取其双侧腓肠肌称重,计算肌湿重比,采用RT-PCR和Western Blot检测大鼠右侧失神经腓肠肌NF-κB p65的mRNA和蛋白表达水平,根据实验结果做统计处理数据得出结论.结果 大鼠腓肠肌失神经支配后肌肉湿重比持续下降,NF-κB p65的mRNA和蛋白表达在2 d、14 d、28d持续增加(P＜0.05),术后14 d、28d被动运动组腓肠肌湿重比高于同期失神经对照组(P＜0.05),被动运动组mRNA和蛋白的表达在各个时间点低于失神经对照组(P＜0.05),差异有统计学意义.结论 在失神经骨骼肌萎缩中,NF-κB p65的表达持续增高.被动运动可以通过干扰NF-κB p65的mRNA和蛋白质的表达来延缓失神经骨骼肌萎缩.     

骨骼肌卫星细胞移植对延缓失神经肌肉萎缩的作用

目的探讨骨骼肌卫星细胞移植对延缓失神经骨骼肌萎缩的作用,为提高治疗失神经骨骼肌萎缩的疗效提供依据。方法取成年SD大鼠32只,雌雄不限。随机分为2组,对照组与实验组各16只。两组均切断大鼠右后肢坐骨神经,并造成1cm神经缺损,形成失神经支配腓肠肌动物模型。无菌条件下切取SD大鼠双后肢及背部的肌肉,采用两步酶消化法分离肌卫星细胞,不连续密度梯度离心法纯化后体外培养,传代培养14～20d,细胞扩增至1×107/ml以上后准备移植。移植前1d以质量分数为0.02%的DAPI(4′-6-二脒基-2-苯吲哚)荧光标记肌卫星细胞过夜,实验组与对照组分别取肌卫星细胞悬液和生理盐水各0.2ml,注入腓肠肌内。术后第2、8周时取双侧腓肠肌测定肌湿重,然后行肌动蛋白免疫组织化学染色及HE染色,并作图像分析,测定肌纤维横截面积及肌动蛋白的含量,数据经SPSS10.0软件处理,行两组样本均数t检验。结果肌卫星细胞移植处可观察到带荧光的细胞核及肌纤维。实验组第2、8周时,失神经支配腓肠肌湿重残存率、腓肠肌纤维横截面积残存率、腓肠肌肌动蛋白含量与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论肌卫星细胞移植到失神经骨骼肌内可明显延缓骨骼肌的萎缩。     

心脏营养素-1对失神经骨骼肌的营养和保护作用

目的探讨心脏营养素-1（Cardiotrophin-1，CT-1）及其受体在失神经骨骼肌中的表达规律，观察外源性CT-1对失神经骨骼肌的营养和保护作用。方法选用11组Swiss小鼠，每组10只，切断其右侧胫神经，分别于术后不同时间点完整切取失神经腓肠肌，用Northern blot法测定肌肉中CT-1及其受体亚基LIFR-β，gp130的mRNA含量，探讨三者的表达规律。另取Swiss小鼠30只，同样方法切断其胫神经后，连续腹腔注射CT-1（100μg／kg／d），于7、14和28d后检测失神经腓肠肌的湿重、肌纤维横截面积和肌肉总蛋白含量，观察超微结构的变化，分别与对照组比较。结果CT-1及其受体在正常骨骼肌中均有表达。胫神经切断后，腓肠肌中CT-1的表达进行性下降；而LIFR-β和gp130在早期均有一个表达增高的过程，前者的表达高峰出现在失神经支配后24h，后者在神经切断后1周表达最高。连续应用外源性CT-12周，有效地维持了失神经腓肠肌的湿重、肌纤维横截面积和总蛋白含量，减轻了肌浆网的扩张程度。用药4周后，这种效果更加明显。结论内源性CT-1表达不足，是失神经骨骼肌早期萎缩的一个重要因素。受体gp130／LIFR-β的表达上调，提高了肌肉对其配体CT-1的敏感性，及时应用外源性CT-1，可对失神经骨骼肌产生营养和保护作用，能有效地延缓失神经骨骼肌的萎缩。     

失神经支配骨骼肌退变形态学及酶组织化学研究

神经损伤后，骨骼肌萎缩的防治一直是周围神经外科的一大难题，为进一步明确失神经支配不同时期肌肉的形态结构、生理生化以及它们之间的内在规律，我们对大鼠失神经支配腓肠肌的组织形态学及酶组织化学变化进行研究，现报道如下。 材料与方法 一、实验动物与模型：ＳＤ大鼠４２只，随机分成７组，每组６只。硫喷妥钠溶液腹腔内注射麻醉后，在放大１０倍手术显微镜下，结扎切断肢神经后，两断端返转１８０°固定。分别于术后２、４、６、８、１２、１６及２０周取右小腿腓肠肌作实验观察，另取６只大鼠腓肠肌测定正常值作为对照。 二、实验…     

细胞外三磷腺苷对失神经大鼠腓肠肌细胞中FoxO3a通路的影响

目的 探讨细胞外三磷腺苷(ATP)对失神经大鼠腓肠肌细胞中FoxO3a/MAFbx通路的影响.方法 雌性成年Wistar大鼠54只随机分为3组:失神经对照组,ATP治疗组,健康对照组.其中失神经对照组和ATP治疗组在右侧梨状肌下缘切断坐骨神经,制作失神经动物模型.术后ATP治疗组于右侧腓肠肌内注射ATP0.1mg/d,左侧腓肠肌内注射等量生理盐水;失神经对照组双下肢注射等量的生理盐水;健康对照组不做任何处理.在术后0、2、7、14、28d分别处死一组大鼠,取其两侧腓肠肌,称肌湿重,计算肌失重比(右侧/左侧),采用实时荧光定量PCR和Western Blot检测大鼠腓肠肌FoxO3a和MAFbx的mRNA和蛋白表达水平以及253位磷酸化的FoxO3a(p-FoxO3a)蛋白表达.结果 ATP治疗组肌湿重比高于失神经对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);ATP治疗组FoxO3a的mRNA和蛋白表达略低于失神经对照组,差异无统计学意义(P＞0.05);MAFbx的mRNA和蛋白表达低于失神经对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);p-FoxO3a的蛋白表达量较对照组明显增加,不同时段差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 细胞外ATP可能通过磷酸化FoxO3a进而抑制MAFbx蛋白的表达来延缓大鼠骨骼肌失神经萎缩.     

血管内皮生长因子及其受体胎肝激酶-1在大鼠失神经骨骼肌血管壁中的表达

目的观察血管内皮生长因子（VEGF）及其受体胎肝激酶-1（flk-1）在大鼠失神经骨骼肌血管壁中的表达变化规律。方法取成年雄性SD大鼠27只，其中健康对照组3只，实验组切断双侧坐骨神经后，在术后4h、8h、12h、24h、3d、5d、7d、14d取双侧腓肠肌组织，采用免疫组织化学方法和图像分析技术，对VEGF在肌肉中血管壁及flk-1在血管内皮的表达进行检测和分析。结果在正常大鼠腓肠肌，VEGF在血管壁有表达，flk-1只在血管内皮有表达。坐骨神经切断8h内VEGF在血管壁中的表达呈一过性的降低，随后至术后3d保持在低于健康对照组的低水平表达。术后3d至14d表达逐渐增强，但14d时VEGF的表达量仍明显低于健康对照组。坐骨神经切断后flk-1在血管内皮的表达于术后0～12h呈现先升高而后降低的明显波动，术后24h～14d表达逐渐升高。结论本实验揭示了早期失神经支配骨骼肌血管壁内VEGF及其受体胎肝激酶-1（flk-1）的表达变化规律，为进一步研究它们在失神经骨骼肌内表达的调节机制、血管退化在失神经肌萎缩中的作用及临床应用VEGF治疗失神经肌萎缩奠定了基础。     

川芎嗪对失神经骨骼肌萎缩大鼠FoXO3a、MAFbx以及MuRF1表达的影响

目的研究川芎嗪对失神经骨骼肌萎缩中FoXO3a、MAFbx及MuRF1表达的影响。方法 8周龄雌性SD大鼠54只,体重(200±10)g。随机分为3组,即正常对照组(A组,n=6)、失神经对照组(B组,n=24)、干预组(C组,n=24)。B、C组实验动物制备右下肢失神经腓肠肌动物模型,C组于模型制备后每日腹腔注射川芎嗪注射液80 mg/(kg.d),B组每日腹腔注射等剂量生理盐水;A组实验动物不作任何处理。取A组实验动物以及造模后2、7、14、28 d B、C组实验动物各6只,处死取其双侧腓肠肌称湿重,计算腓肠肌肌湿重比;另取右侧肌组织采用RT-PCR及Western blot检测各时间点FoXO3a、MAFbx、MuRF1 mRNA和蛋白表达水平。结果与A组比较,随着大鼠失神经时间延长,B、C组腓肠肌肌湿重比逐渐下降,差异均有统计学意义(P<0.05);造模后7、14、28 d,C组腓肠肌肌湿重比高于B组,且差异有统计学意义(P<0.05)。B、C组造模后7、14、28 d,FoXO3a、MAFbx、MuRF1 mRNA和蛋白表达水平均较A组高,C组各时间点均较B组降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论川芎嗪可能通过降低FoXO3a、MAFbx以及MuRF1 mRNA和蛋白表达水平进而延缓失神经骨骼肌萎缩。     

胚胎运动神经元移植对失神经肌肉影响的实验研究

目的探讨胚胎运动神经元移植至入肌点前支配神经内对失神经肌肉萎缩的影响.方法取20只健康SD大鼠建立失神经腓肠肌动物模型,随机分移植组和对照组(每组10只);将胚胎14～18d的SD鼠胚脊髓前角运动神经元的活细胞悬液注入移植组切断的胫神经远端,对照组注射等量的生理盐水.手术后第3个月,进行腓肠肌肌力、肌湿重测定,组织和免疫化学检查以及胫神经纤维计数,并作图像分析.结果种植入胫神经内的鼠胚胎运动神经元能够存活.移植组腓肠肌肌力和肌湿重恢复率高于对照组,差异有显著性(P＜0.01);肌纤维横截面积恢复率高于对照组,差异有显著性(P＜0.05),且I型、Ⅱ型纤维面积均优于对照组(P＜0.05);肌动蛋白的相对含量移植组高于对照组,差异有显著性(P＜0.05);移植组运动终板结构清晰,而对照组大部分运动终板崩解,两组运动终板恢复率比较,差异有显著性(P＜0.05);移植组神经纤维再生率为0.661±0.149,高于对照组的0.463±0.109,差异有显著性(P＜0.01).结论胚胎运动神经元移植至外周神经内,便于靶组织获得神经营养,能延缓失神经肌肉的萎缩,并可提高其功能的恢复.     

核转录因子-κB与肌环状指蛋白1在失神经肌萎缩中的表达及意义

失神经骨骼肌萎缩的防治是周围神经外科领域亟待解决的难题.我们通过检测不同时段大鼠失神经支配的腓肠肌中核转录因子(NF)-κB亚基p65和肌环状指蛋白1(MuRF1)表达的变化,探讨失神经骨骼肌萎缩的分子机制.     

失神经萎缩肌组织中卫星细胞池的耗竭与Pax7的相关性研究

目的 探讨长期失神经骨骼肌在反复增殖分化过程中,肌卫星细胞池耗竭可能的信号通路.方法 选用2月龄SD雄性大鼠9只,体重180～200 g.以大鼠右侧为实验侧,制备腓肠肌失神经支配模型;左侧为对照侧,分离显示坐骨神经后缝合肌肉皮肤.观察大鼠一般情况,于术后3、7、21 d各取3只大鼠,切取两侧腓肠肌进行大体观察后,行Pax7和MyoD免疫荧光染色观察及mRNA表达检测.结果 9只大鼠术后均存活.实验侧后肢僵直,活动受限;对照侧肢体活动自如.术后各时间点实验侧腓肠肌均出现不同程度萎缩;对照侧腓肠肌较饱满有光泽.荧光染色观察显示,随失神经时间延长,实验侧MyoD阳性细胞数逐渐增多,21 d达高峰,与对照侧比较,差异均有统计学意义(P<0.05).实验侧Pax7阳性细胞逐渐降低,3、7 d与对照侧比较,差异均有统计学意义(P<0.05).实验侧MyoDmRNA表达逐渐升高,21 d达高峰,各时间点实验侧均显著高于对照侧(P<0.05);实验侧Pax7 mRNA表达逐渐降低,仅出现于3、7 d,与对照侧比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 长期失神经肌萎缩引发的Pax7短暂上调提示卫星细胞池耗竭的原因之一在于细胞难以返回静止状态.     

大鼠失神经腓肠肌细胞内FoxO3a及MuRF-1的表达规律

目的 探讨失神经大鼠腓肠肌细胞中叉头蛋白转录因子3a(fork-head protein,FoxO3a)及MuRF-1的表达规律.方法 72只Wistar大鼠随机分为12组,每组6只,切断大鼠右侧坐骨神经,左侧行假手术,分别于术后0、1、2、3、4、5、6、7、10、14、21、28d各处死一组大鼠,取右侧腓肠肌,于-70℃冰箱保存.分别使用实时荧光定量PCR法和Western Blot法对其中的FoxO3a和MuRF-1的基因和蛋白进行检测.结果 MuRF-1的基因表达在失神经第4天达到峰值(18.12倍),失神经14d后下降至正常.FoxO3a的基因表达在失神经第6天达到峰值(7.06倍),而后虽缓慢下降,但仍高表达.FoxO3a和MuRF-1的蛋白含量随失神经时间的延长逐渐升高.结论 FoxO3a和MuRF-1的表达和蛋白改变与失神经骨骼肌萎缩关系密切,可以作为药物治疗和基因治疗的靶点之一.     

大鼠失神经支配后外源性NGF对骨质疏松的影响

目的 观察失神经支配后外源性NGF(神经生长因子)对大鼠体重、血钙及骨结构的影响，进而说明NGF在神经源性骨质疏松康复中的意义。方法 雄性SD大鼠随机分为对照组和失神经组，失神经组大鼠切断股骨神经造成失神经支配模型，然后分为失神经支配组和失神经支配注射NGF组，30d后称重、取血、处死动物取股骨进行骨组织计量学检查。结果 失神经支配大鼠注射NGF后，体重、骨小梁量与未注射组相比具有明显增加，提示局部予以NGF治疗可明显减轻失神经支配后大鼠骨质疏松的程度，并可增加因失神经导致的体重减轻，而各组的血钙磷浓度无明显改变。结论 说明神经性骨质疏松的发生并非源自钙磷流失，而是由骨小梁的结构改变所致，同时外源性NGF在神经性瘫痪后骨质疏松的康复中具有积极意义。     

应用胚胎脊髓前角细胞移植修复大鼠神经损伤的实验研究

目的　观察鼠胚胎脊髓前角细胞移植入胫神经远断端后的变化及作用。方法　将 2 4只SD大鼠随机分为移植组和对照组 ,每组 12只。切断大鼠右侧胫神经形成失神经腓肠肌实验模型。分离并制备孕 14～ 18d大鼠胚胎脊髓前角运动神经元 ,植入已切断的胫神经远断端。对照组在相同部位注射等量的培养液。术后 3个月 ,对移植细胞进行组织学观察、Nissl染色和辣根过氧化物酶 (horseradishperoxidase ;HRP)逆行示踪检测。行胫神经再生纤维计数 ,并检测腓肠肌电生理变化、肌湿重和肌动蛋白表达。结果　植入细胞能在胫神经远端存活 ,呈现Nissl阳性染色并被HRP逆行示踪所标记。移植组胫神经的再生率、腓肠肌肌湿重和肌动蛋白含量均明显高与对照组 (P <0 .0 5 )。电刺激移植组胫神经可记录到腓肠肌的诱发动作电位 ,能引起肌肉收缩和踝关节运动。结论　同种异体胚胎脊髓前角细胞移植到外周神经内可使靶肌肉获得神经支配并延缓其失神经萎缩的变化。     

大鼠失神经支配骨骼肌萎缩后肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的变化

目的 研究失神经支配骨骼肌萎缩后肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的变化规律.方法 实验以失神经支配腓肠肌为动物模型.选用体质量为200～250 g的雌性SD大鼠42只,随机分成2组,实验组36只,健康对照组6只.按术后取材时间的不同再将实验组分为6组,每组6只大鼠.分别运用Tunel法及免疫组织化学方法检测失神经后不同时间萎缩腓肠肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax的表达变化,同时测量肌湿重比和肌纤维横截面积,透射电镜观察肌细胞的超微结构变化.结果 萎缩的腓肠肌湿重比在失神经4周内和第10周到第12周下降最快,而在第4周到10周和第12周到16周下降较慢,且变化差异无统计学意义(P＞0.05).Bcl-2仅在失神经早期表达增高,于第4周达高峰;而Bax分别于失神经第2周与第12周达高峰,增高幅度大于Bcl-2.Bcl-2/Bax的比值除对照组(1.522±0.215)和失神经第8周时(1.065±0.165)大于1外,其余各时间点均小于1.肌细胞凋亡率分别于失神经第4周和第12周达到高峰,其变化趋势与Bax相仿.结论 失神经腓肠肌萎缩过程呈现4个阶段;凋亡和凋亡相关基因Bax过量表达在失神经不可逆肌萎缩过程中发挥着重要的作用;靶向作用Bax基因,抑制Bax表达可能延缓失神经骨骼肌萎缩.     

单纯运动神经或感觉神经损伤对大鼠腓肠肌显微形态学和超微结构的影响

失神经支配骨骼肌的萎缩逆转涉及到神经修复的许多方面，我们通过建立大鼠高选择性神经损伤模型，观察单纯运动神经或感觉神经损伤对腓肠肌形态学及超微结构的影响。[第一段]     

神经营养因子-3转基因治疗失神经肌萎缩的实验研究

目的探讨神经营养因子3（NT-3）基因转导治疗外周神经损伤后萎缩的效果：为解决失神经性肌萎缩这一难题探索新方法。方法将自制的NT-3腺病毒重组体注入失神经腓肠肌内进行转染，术后第2、7、14、28天经ABC免疫组化染色检测腓肠肌NT-3蛋白密度，术后第14、28天观察腓肠肌大体变化、肌肉湿重、肌纤维直径和横截面面积、运动终板密度。结果实验组动物在术后各个取材时段腓肠肌内NT-3蛋白灰度值均低于对照组，差异具有统计学意义。术后14d和28d，实验组腓肠肌较饱满，有弹性，色鲜红，出血活跃，与正常腓肠肌相比几乎无差别；腓肠肌湿重大于对照组，差异具有统计学意义；肌纤维直径和肌纤维截面积均大于对照组，差异均有统计学意义；运动终板密度高于对照组，差异分别有统计学意义。结论以腺病毒为载体将外源性的NT-3基因导入失神经肌细胞内后，能成功地复制和表达，持续产生NT-3发挥其营养作用，从而预防或减轻外周神经损伤后肌肉萎缩、变性和运动终板的消失。     

骨骼肌乙酰胆碱受体的上下调节——神经肌肉阻滞药的效应(续)

四、乙酰胆碱上调节的特异性损害(一)失神经支配综合征1.下运动神经元和直接肌肉损伤:运动神经完全横断可引起神经华勒氏变性(Walleriandegeneration)。当坐骨神经有75～80％损害后,失神经支配侧的dTC有效剂量是对侧的两倍以上。失神经支配下肢在肌颤张力恢复时,其血浆内dTC浓度明显高于对侧。此外,在受损下肢Ach R数量明显增加。     

黄芪通过核转录因子/肌肉环状指蛋白1通路延缓失神经骨骼肌萎缩

目的 研究黄芪对核转录因子kappaB(nuclear factor of kappaB,NF-kappaB)p65和肌肉环状指蛋白1(muscle RING finger protein 1,MuRF1)活性的影响,探讨黄芪防治肌萎缩的作用及其机制.方法 54只Wistar大鼠,建立右下肢腓肠肌失神经支配模型,随机分为黄芪治疗组和对照组.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western bloting检测术后2 d、7 d、14 d和28 d时大鼠腓肠肌NF-kappB p65和MuRF1的mRNA和蛋白表达水平,并结合肌肉湿重比分析其相关性.结果 大鼠腓肠肌失神经支配后NF-lcappaB p65和MuRF1的mRNA和蛋白表达在各时间点持续增加(P<0.05).术后7 d、14 d和28 d黄芪治疗组腓肠肌湿重比高于同期失神经对照组(P<0.05),而其NF-kappaB p65和MuRF1的表达则低于相应失神经对照组(P<0.05).结论 黄芪可以有效延缓去神经骨骼肌的萎缩,其作用机制与拮抗NF-kappaB p65、下调MuRF1的表达有关.     

经皮电刺激对失神经骨骼肌中NF-κB表达变化的影响

目的 研究电刺激对失神经骨骼肌萎缩中NF-κB表达变化的影响,探讨电刺激防治失神经骨骼肌萎缩的作用机理.方法 选用wista大鼠54只,制作成标准的右侧坐骨神经离断、腓肠肌失神经支配模型,随机分为对照组和电刺激组,检测肌湿重,RT-PCR和Westem Bloting,检测不同时段的NF-κB,mRNA和蛋白质表达水平变化.结果 失神经支配后,腓肠肌湿重持续降低,NF-κB,mRNA和蛋白质表达持续增加（P＜0.05）.电刺激组肌湿重比对照组同时间点明显增加（P＜0.05）,NF-κB,mRNA和蛋白质表达则明显降低（P＜0.05）.结论 电刺激可以通过干预NF-κB表达而有效防治失神经骨骼肌萎缩.     

早期应用神经营养因子对周围神经损伤修复的研究观察

[目的]研究探索神经生长因子(nervegrowth factor NGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor bFGF)联用对大鼠坐骨神经钳夹损伤后神经纤维再生修复的促进作用和对失神经支配的小腿三头肌的保护作用。[方法]手术钳夹损伤坐骨神经后，损伤处神经内注射NGF和bFGF，对照组注射等量生理盐水，术后每日在术侧腓肠肌内注射药物，术后4、8、12周，进行足印分析及坐骨神经功能指数测定，取小腿三头肌称湿重，取脊髓及神经肌肉行组织病理观察。[结果]联用NGF bFGF，能显著改善神经损伤后引起的神经功能指数，有效地减轻由于失神经支配后肌肉的萎缩，促进神经纤维的修复与再生。[结论]联用NGF、bFGF对大鼠坐骨神经钳夹损伤后神经纤维再生修复具有显著的促进作用，可减轻失神经支配的小腿三头肌的萎缩。