新生鼠缺氧缺血脑损伤的组织学和MR影像变化

目的调查新生大鼠缺氧缺血脑白质和灰质损伤的组织学和磁共振(MR)影像的变化.方法7日龄Wistar鼠(n=24)随机分为假手术组和实验组(右颈动脉结扎+吸入8%氧1.5 h).在缺氧前、缺氧最后5～10分钟、缺氧后1 h和24h行头部MR扫描获得T2和表面弥散系数(ADC).结果1.5 h缺氧将结束时,在缺氧缺血半球皮质下白质和顶部灰质可见ADC明显降低和T2增高;缺氧缺血后1h,皮质下白质和顶部灰质ADC部分恢复,T2持续增高,而缺氧缺血后24 h,T2进一步增高.与灰白质类似的MRI改变相反,组织学检查显示缺血半球白质不可逆细胞损伤发生早于灰质.在缺氧缺血后1 h,缺血半球皮质下白质可见神经纤维稀疏或紊乱,并可见TUNEL阳性细胞增加,而在缺血半球顶部灰质区未见明显细胞损伤或TUNEL阳性细胞增加,到缺氧缺血后24 h,灰白质均可见明显的损伤.结论在目前的新生鼠脑缺氧缺血模型,T2和ADC均能发现急性缺氧缺血脑白质和灰质水肿或损伤,但它们不能区分白质和灰质不同的病理变化,组织学上新生鼠脑白质比灰质更易遭受缺氧缺血损害.     

实验性新生儿缺氧缺血脑损伤模型鼠脑细胞凋亡动态变化

目的 探讨新生儿缺氧缺血脑损伤（ＨＩＥ）后皮质、海马细胞凋亡现象和动态过程。方法 制作标准化ＨＩＥ实验模型,应用ＤＮＡ原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）、ＨＥ染色、电镜方法,对凋亡出现时间和强度进行观察和比较。结果 缺氧缺血后新生鼠脑细胞死亡具有典型凋亡特征,光镜、电镜观察到核膜皱缩、染色质凝聚,阳性ＴＵＮＥＬ着色细胞核。随着缺血时间的增加,细胞凋亡数逐渐增加,皮质约在１８小时点、海马４０小时点达高峰。结     

己酮可可碱对新生大鼠缺血缺氧脑损伤时脑组织细胞凋亡的影响

缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）是严重威胁新生儿健康的常见病因，发病机制复杂。存活患儿中部分留有脑性瘫痪、癫痫、智力低下等不同程度中枢神经系统后遗症。由于高危妊娠及新生儿抢救存活率的提高，该病发病率仍很高，这也激发人们在不断探索治疗该病的新方法和新的有效药物。我们以往的研究表明，己酮可可碱（pentoxifylline，PTX）对新生大鼠脑缺血缺氧损伤有一定治疗作用，现就其对该损伤时脑组织细胞凋亡的影响报道如下。     

缺氧缺血与线粒体DNA损伤

线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA)是唯一的核外遗传物质，为编码线粒体呼吸链复合物的重要组成部分，在细胞能量代谢中起重要作用。缺氧缺血情况下mtDNA易发生损伤，自由基，一氧化氮产生增多是mtDNA损伤的主要因素，缺氧缺血时mtDNA损伤可致细胞凋亡，线粒体呼吸链复合物活性下降，并且不同的组织mtDNA损伤有不同的表现形式。     

外周应用神经生长因子对新生鼠缺氧脑损伤的保护作用

目的探讨外周应用神经生长因子（NGF）能否透过缺氧脑损伤新生鼠血脑脊液屏障及其对脑的保护作用。方法制备缺氧脑损伤新生大鼠模型后,静脉注射^125Ⅰ标记NGF,5μg/kg。给药30min后取脑组织,12h内测定^125Ⅰ放射度,计算NGF水平。同时取血检测其NGF水平。dUTP缺口末端标记法（TUNEL法）观察NGF治疗后新生缺氧大鼠额叶、海马区细胞凋亡情况。结果外周应用125I-NGF后,各组大鼠脑内均可检测出^125Ⅰ-NGF,新生鼠脑组织^125Ⅰ-NGF水平及其与血液中水平的比值显著高于成年鼠（Pa〈0.05）,新生缺氧鼠脑组织^125Ⅰ-NGF及其与血液中水平比值显著高于正常新生鼠（Pa〈0.05）。应用NGF治疗后,NGF治疗组额皮质和海马CA1区凋亡阳性细胞比值低于非NGF治疗组（Pa〈0.05）。结论外周应用NGF可通过新生大鼠HIBD血脑脊液屏障,具有一定脑保护作用。     

缺血后处理对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的影响

目的探讨缺血后处理(IPostc)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)可能的神经保护作用及其机制。方法以7日龄SD大鼠为研究对象,随机分为假手术组、HIBD组、IPostcⅠ组(15 s再灌注/15 s夹闭×3个循环)及IPostcⅡ组(30 s再灌注/10 s夹闭×3个循环),每组根据缺氧缺血后时间分为0、6、12、24 h及48 h 5个亚组,每个亚组15只。应用右侧颈总动脉夹闭联合低氧(8%O2+92%N2)建立HIBD模型,监测脑组织形态学变化,比较超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、脑组织含水量及水通道蛋白4(AQP4)mRNA相对表达量随时间的变化规律。结果经缺氧缺血处理的大鼠均出现典型的神经行为学异常、形态学和生化指标的变化。IPostcⅠ组SOD活性显著改善,MDA含量降低,脑组织含水量及AQP4 mRNA相对表达量降低,在6 h以后作用显著,差异有统计学意义(P<0.05)。而IPostcⅡ组无明显改善作用。结论缺血后处理对新生大鼠HIBD具有一定的神经保护作用,其机制与减轻氧化应激损伤及脑水肿有关。     

促红细胞生成素对缺氧缺血新生鼠脑损伤学习记忆能力的影响

目的研究促红细胞生成素(EPO)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠海马的近期病理改变和远期学习记忆功能的影响。方法新生7d大鼠随机分3组:假手术组、HIBD模型组和HIBD EPO组。HIBD术后72h观察脑组织病理改变、海马CA1区凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,术后28d评估海马学习记忆功能。结果EPO治疗能显著减轻缺氧缺血侧大脑半球水肿、梗死和出血等病理学改变。免疫组化结果显示HIBD后72h缺血侧海马CA1区Bcl-2蛋白表达量均为HIBD EPO组>HIBD组>假手术组,3者间比较差异有统计学意义。Morris水迷宫定位航行实验结果显示,5d总平均逃逸潜伏期HIBD组(67.93±7.29)s,HIBD EPO组(42.95±7.29)s,假手术组(29.67±6.95)s,平均逃逸潜伏期在不同时段和不同实验组之间的差异有统计学意义;空间探索实验示:HIBD组站台周边区域I搜索时间和搜索路程与HIBD EPO组、假手术组间差异均有统计学意义,而HIBD EPO组和假手术组间差异无统计学意义,提示HIBD鼠学习记忆能力下降,EPO干预能减轻HIBD对海马学习记忆功能的损害。结论EPO对新生鼠缺氧缺血性脑损伤具有近期病理和远期功能保护作用,其机制与抑制细胞凋亡的发生有关。     

促红细胞生成素对缺氧缺血新生鼠脑损伤学习记忆能力的影响

目的 研究促红细胞生成素(EPO)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD) 新生大鼠海马的近期病理改变和远期学习记忆功能的影响.方法 新生7 d大鼠随机分3组假手术组、HIBD模型组和HIBD+EPO组.HIBD术后72 h观察脑组织病理改变、海马CA1区凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,术后28 d评估海马学习记忆功能.结果 EPO治疗能显著减轻缺氧缺血侧大脑半球水肿、梗死和出血等病理学改变.免疫组化结果显示HIBD后72 h缺血侧海马CA1区Bcl-2蛋白表达量均为HIBD+EPO组＞HIBD组＞假手术组,3者间比较差异有统计学意义.Morris水迷宫定位航行实验结果显示,5 d总平均逃逸潜伏期HIBD组(67.93±7.29) s, HIBD+EPO组(42.95±7.29) s, 假手术组(29.67±6.95) s,平均逃逸潜伏期在不同时段和不同实验组之间的差异有统计学意义;空间探索实验示HIBD组站台周边区域I搜索时间和搜索路程与HIBD+EPO组、假手术组间差异均有统计学意义,而HIBD+EPO组和假手术组间差异无统计学意义,提示HIBD鼠学习记忆能力下降, EPO干预能减轻HIBD对海马学习记忆功能的损害.结论 EPO对新生鼠缺氧缺血性脑损伤具有近期病理和远期功能保护作用,其机制与抑制细胞凋亡的发生有关.     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤后内源性神经干细胞的增殖及迁移

目的观察新生鼠缺氧缺血损伤后内源性神经干细胞的增殖及迁移。方法制成新生鼠缺氧缺血脑损伤模型，采用单、双标免疫组织化学方法检测5-溴脱氧尿苷(BrdU)和巢蛋白(Nestin)的表达。BrdU标记增殖的新生细胞，Nestin标记神经干细胞。结果正常新生鼠生后保持较短一段时间的增殖活跃，生后3d达高峰，7d后逐渐减弱，生后21d后形成与成年动物相似的发生模式。缺氧缺血损伤后，细胞增殖恢复活跃，BrdU阳性细胞数于伤后4d达高峰，皮层、纹状体、海马可见散在阳性细胞，大多数BrdU阳性细胞集中位于室管膜下区的背外侧角及外侧壁处，伤后7d后逐渐减少，21d更多的BrdU阳性细胞迁移至损伤区；损伤后Nestin阳性细胞数增加，同时一定数量的Nestin阳性细胞由G期进入增殖周期。结论缺氧缺血脑损伤可刺激新生鼠内源性神经干细胞的增殖及迁移。     

缺氧缺血新生鼠脑内乙酰胆碱水平的变化

目的 探讨缺氧缺血对新生鼠中枢胆碱能系统的远期影响及治疗措施。方法 采用碱性羟胺比色法对缺氧缺血新生鼠（7日龄）损伤后即刻及其14d后左、右脑乙酰胆碱（Ach）含量进行测定,并观察了损伤后即刻及3d后腹腔内连续7d注射4µg碱性成纤维生长因子（bFGF）对脑内Ach含量的影响。结果 缺氧缺血损伤后即刻,在脑Ach含量显著降低,（P﹤0.05）,于14d后仍未恢复;bFGF治疗对损伤后脑内Ach含量无显著影响。结论 缺氧缺血可损伤新生鼠中枢胆碱系统功能,此影响可持续至21日龄。bFGF对胆碱能损伤无明显保护作用。     

新生期缺氧缺血性脑白质损伤大鼠模型比较研究

目的 探讨3种不同方式建立的新生期缺氧缺血性脑白质损伤大鼠模型的异同,为深入研究早产儿脑白质损伤选择理想的动物模型提供理论基础.方法 对3日龄Wistar大鼠采用3种不同的缺氧缺血方法建立脑白质损伤模型,分别为:左侧颈总动脉结扎伴低氧(6％O2) 30 min、左侧颈总动脉结扎伴低氧(6％O2)4 h和双侧颈总动脉结扎伴低氧(8％O2)30min.比较各组大鼠脑病理形态学变化、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)免疫组织化学染色以及眼部变化.结果 左侧颈总动脉结扎伴低氧(6％O2)30min侧脑室周围白质组织结构稀疏模糊但无坏死灶;左侧脑室周围白质区GFAP免疫染色强度[(5 021.63 ±358.92) OD]增加程度最低(P ＜0.000 1),MBP免疫染色强度[(18488.63 ±1 822.62) OD]降低程度最低(P＜0.000 1);左侧睁眼时间延迟.左侧颈总动脉结扎伴低氧(6％O2)4 h侧脑室周围白质区可见坏死灶;GFAP免疫染色强度为[(6 069.13 ±458.61) OD],MBP免疫染色强度为[(15003.38 ±1 559.11) OD];左侧睁眼时间延迟.双侧颈总动脉结扎伴低氧(8％O2)30 min双侧脑室周围白质区见囊性坏死灶;左侧GFAP 免疫染色强度[(6 194.50 ±432.69) OD]增加程度最高(P ＜0.000 1),MBP免疫染色强度[(10119.35±735.16) OD]降低程度最显著(P＜0.000 1);双侧睁眼时间延迟且双眼出现白内障改变.结论 左侧颈总动脉结扎伴低氧30 min方法更适宜轻型脑白质损伤研究;左侧颈总动脉结扎伴低氧(6％O2)4 h及 双侧颈总动脉结扎伴低氧(8％O2) 30 min更适于严重的脑室周围白质软化病例研究.     

新生大鼠脑白质损伤时神经胶质细胞凋亡与iNOS的表达

目的：诱导型一氧化氮合酶(iNOS) 是缺氧缺血（HI）后引起一氧化氮过量产生的主要限速酶,该研究通过观察HI后神经胶质细胞凋亡及iNOS表达的变化,探讨新生大鼠脑白质损伤(WMD)的发病机制。方法：将112只2日龄未成熟大鼠随机分为WMD组和假手术 (对照) 组,建立新生大鼠WMD模型,分别于HI后1 h、3 h、6 h、12 h、1 d、3 d及7 d处死,采用免疫组织化学法检测脑组织iNOS的表达,TUNEL法测定胶质细胞凋亡。结果：与对照组比较,WMD组iNOS于HI后1 h表达开始上升,1 d达到高峰;神经胶质细胞凋亡于HI后1 h显著增多,在HI后1 d达到高峰。结论：WMD新生大鼠中iNOS的表达显著增高可能导致神经胶质细胞的凋亡,参与HI后WMD的病理生理过程。     

晚期早产儿脑白质损伤临床特点及磁共振影像学发现

目的：探讨晚期早产儿脑白质损伤的临床特点及常规磁共振成像（MRI）和弥散加权成像（DWI）影像学特征。方法：总结2005年1月至2008年5月中国医科大学盛京医院收治的519例早产儿资料（277例晚期早产儿,242例早期早产儿）,对其头部常规MRI和DWI特征进行分析。结果：晚期早产儿中,脑白质损伤118例,占脑损伤的71.9%（118/164）,占全部晚期早产儿的42.6%（118/277）。早期早产儿脑白质损伤占脑损伤的69.2%（92/133）,占全部早期早产儿的38.0%（92/242）,晚期早产儿脑白质损伤发生率与早期早产儿相比无明显差异。晚期早产儿脑白质损伤中无明显临床症状者占61.9%（73/118）,重症脑损伤（广泛性及弥漫性脑损伤）早期有明显临床症状者占75%（15/20）。损伤1周内,DWI表现为高信号,T1WI信号正常或稍高信号,伴或不伴T2WI高信号;弥漫性损伤者呈DWI高信号,常规MRI无明显信号改变。结论：脑白质损伤在晚期早产儿亦较常见。重症脑白质损伤患儿早期多有明显的临床表现。DWI在损伤早期的敏感度高于常规MRI。［中国当代儿科杂志,2010,12（5）：321-326］     

Development of acute edema following cerebral hypoxia-ischemia in neonatal compared with juvenile rats using magnetic resonance imaging

We hypothesized that the evolution of cerebral edema accompanying cerebral hypoxia-ischemia is dependent on age and that such differences would be detectable using magnetic resonance imaging methods. Thus we examined in immature and juvenile rats the relationship between hypoxic-ischemic changes in T1 and T2 and the alterations in brain water content, as assessed by differences in tissue wet-dry weights. One- and 4-wk-old rats were anesthetized and subjected to unilateral carotid artery occlusion and subsequent exposure to hypoxia (8% oxygen). T1 and T2 maps were acquired at 9.4 T, and then brain water content was measured in sham controls or in hypoxic-ischemic animals before, during, and 1 or 24 h after hypoxia-ischemia. In sham controls, T1, T2, and proton density decreased with increasing age, corresponding to an ontogenic decrease in water content. In 1-wk-old rats, increases in T1 and T2 were observed during and at 1 and 24 h after hypoxia-ischemia, corresponding to elevations in water content. In 4-wk-old rats, T1 and water content increased during and at 1 and 24 h after hypoxia-ischemia whereas T2 was not increased until 24 h after hypoxia-ischemia. Regression analysis showed that T1 correlated better with total water content than T2. In both immature and older brain, an increase in total brain water develops acutely and persists after an episode of cerebral hypoxia-ischemia, and T1 imaging detects this change better than T2. Hypoxic-ischemic changes in T2 are age dependent, reflecting other physicochemical changes of water in the tissue than water content alone.     

不同时间窗高压氧治疗对 HIBD 新生大鼠脑白质损伤的影响

目的：研究发现早期高压氧（HBO）治疗可以减轻缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠的脑白质损伤。但延迟开始治疗的时间是否也有同样的作用尚不清楚。该文探讨不同时间窗 HBO 治疗对 HIBD 新生大鼠脑白质损伤的影响，从而探讨 HBO 治疗 HIBD 的时间窗。方法：采用 Rice 法制成 HIBD 模型，分别于HIBD 后 3，6，12，24，72 h 开始给予 HBO 治疗，每日1次，连续 7 d。HIBD 后 14 天（生后21天）开始采用盲法进行T迷宫试验、放射性迷宫测试、足错误测试行为学测试；测试完毕，用髓鞘碱性蛋白 （MBP）免疫组化法检测胼胝体与纹状体区髓鞘蛋白。结果：HIBD 后 3，6，12 h HBO 治疗各组T 迷宫测试、放射性迷宫试验和足错误测试的测试结果均优于HIBD模型组（P<0.05）。HIBD 后24，72 h HBO 治疗组行为学测试结果与HIBD模型组比较，差异无显著性意义。HIBD 后 3，6，12 h HBO 治疗各组大脑皮层胼胝体与纹状体区域 MBP 吸光度显著高于 HIBD模型组，差异有显著性意义（P<0.05），而HIBD 后24，72 h HBO 治疗组与 HIBD模型组相比差异无显著性。结论：HIBD 后 12 h 内HBO 治疗可以显著改善脑白质损伤， HIBD 后 24 h 治疗则疗效不显著。［中国当代儿科杂志，2007，9（4）：308-312］     

瘦素对早产儿脑白质损伤模型大鼠远期空间记忆能力的影响

目的通过观察瘦素对早产儿脑白质损伤模型大鼠空间记忆的影响,探索其神经保护作用。方法将80只新生大鼠随机分为假手术组(n=27)、模型组(n=27)和瘦素干预组(n=26),模型组和瘦素干预组大鼠制备早产儿脑白质损伤模型,瘦素干预组于造模后立即给予生理盐水稀释的瘦素(100 μg/kg),连续4 d。观察各组大鼠存活情况并监测体重变化,21日龄后通过Morris水迷宫实验观察各组大鼠空间记忆能力。结果各组新生大鼠存活率比较差异无统计学意义(P0.05)。至生后10 d内,瘦素干预组大鼠体重接近假手术组,但低于模型组(P0.05);10 d后瘦素干预组生长速度加快,体重超过模型组和假手术组,但差异无统计学意义(P0.05)。定位航行训练结果显示:实验第2天开始,各组平台潜伏期比较差异有统计学意义(P0.05);从第4天开始,瘦素干预组平台潜伏期接近假手术组,短于模型组(P0.05)。空间搜索实验结果显示:与假手术组比较,模型组穿越平台次数减少,平台潜伏期延长(P0.05);与模型组比较,瘦素干预组穿越平台次数增加,平台潜伏期缩短(P0.05),且与假手术组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论瘦素干预可以减轻早产儿脑白质损伤的空间记忆障碍,对早产儿脑损伤具有神经保护作用,值得进一步研究。     

不同褪黑素治疗方案对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑白质损伤的影响

目的 探讨不同褪黑素治疗方案对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠远期行为学及脑白质损伤的影响,以寻求较优的褪黑素治疗方案.方法 健康7日龄Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、HIBD组、单次即刻注射褪黑素治疗(SDIT)组及7日连续注射褪黑素治疗(7DCT)组(n=8).采用经典Rice法建立新生大鼠H...     

磁共振弥散张量成像评价新生儿脑损伤

磁共振弥散张量成像技术（diffusion tensor imaging,DTI）是一种无创性的磁共振成像方法,通过计算表观弥散系数、各向异性系数、相对各向异性系数、纵向弥散系数等参数能够定量评价脑组织正常结构、脑发育状况与脑损害,是目前唯一可在活体上观察脑白质纤维走行及微结构变化的成像技术.本文对其在评价新生儿脑损伤与脑发育中的应用进展予以介绍.     

丹参对缺氧缺血新生大鼠脑皮质氧化还原因子-1蛋白和凋亡细胞的影响

目的 研究丹参对缺氧缺血性新生大鼠脑皮质氧化还原因子-1 (redoxfactor-1,Ref-1)蛋白和凋亡细胞的影响。方法 将新生7日龄SD大鼠制成缺 氧缺血性脑损伤(HIBD)动物模型,采用免疫组织化学方法及原位缺口末端标记 (TUNEL)法分别观察假手术组、缺氧缺血组及丹参治疗组脑皮质Ref-1蛋白及神经 细胞凋亡变化。结果 与缺氧缺血组比较,丹参治疗组Ref-1蛋白表达Ref-1阳性细 胞数增加(由36．1±6．3上升至76．3±5．4,t=2．43,P<0．05);而凋亡细胞显著减 少(由68±2降至12±5,t=7．02,P<0．01)。结论 丹参作为自由基清除剂可能通 过促进缺氧缺血后脑神经细胞Ref-1蛋白的表达,从而抑制了细胞凋亡,为治疗新生 儿缺氧缺血性脑病提供新的理论依据。