重组人生长激素对体外培养的QGY-7701肝癌细胞生长的影响

目的了解重组人生长激素（rhGH）对体外培养的QGY-7701肝癌细胞生长的影响。方法采用肿瘤细胞计数、噻唑蓝比色法了解7701肝癌细胞株在不同浓度rhGH（0、1、10、100、1000、10000ng/ml）作用下的药物敏感性,计算细胞生长率;用流式细胞计了解肝癌细胞在上述浓度rhGH作用下细胞周期各时相细胞比率、细胞增殖指数（PI）以及凋亡率的变化;采用放射配体法了解两种肝癌细胞生长激素受体（GHR）的表达情况。结果rhGH对QGY-7701肝癌细胞的生长无促进作用,各实验组在肿瘤细胞计数、MTT比色法、肝癌细胞DNA含量,细胞增殖指数的变化以及凋亡率等指标方面,与对照组同期比较,差异均无显著性;放射配体法未发现7701肝癌细胞表达GHR。结论rhGH对QGY-7701肝癌细胞的增殖无促进作用,原因可能与QGY-7701肝癌细胞不表达GHR有关。     

重组人生长激素对体外培养的SMMC-7721肝癌细胞生长的影响

目的 探讨重组人生长激素(rhGH)对体外培养的Bel-7721肝癌细胞生长的影响及机制.方法 采用放射配体法检测SMMC-7721肝癌细胞生长激素受体(GHR)的表达.采用噻唑蓝(MTT)比色法检测Bel-7721肝癌细胞株在不同浓度rhGH(0、1.33、13.33、133.30、1333.00μg/L)作用下的药物敏感性,计算细胞生长率;用流式细胞仪检测肝癌细胞在上述浓度rh-GH作用下细胞周期各时相细胞比率、增殖指数(PI)以及凋亡率.结果 rhGH对体外培养的SMMC-7721肝癌细胞的生长具有一定程度刺激作用,表现为rhGH在133.30μg/L浓度促进肝癌细胞增殖较显著,而rhGH在其他浓度(1.33、13.33、1333.00μg/L)对肝癌细胞增殖虽也表现出一定程度的促进作用,但总体效果较rhGH在133.30 μg/L浓度为弱.rhGH作用48 h后流式细胞检测各实验组S期所占比率、PI均较对照组升高(P<0.05);G_2-M细胞所占比率,13.33、133.30与1333.00μg/L组较对照组显著增高(P<0.05),1.33μg/L与对照组比较差异无统计学意义;各实验组凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).放射配体法发现SMMC-7721肝癌细胞株表达GHR.结论 一定浓度范围的rhGH对7721肝癌细胞生长有促进作用,原因可能与7721肝痛细胞表达GHR,rhGH可促进肝癌细胞DNA合成,提高细胞分裂增殖能力有关.     

原发性肝癌及其癌旁组织、Bel-7402人肝癌细胞株生长激素受体的定量研究

目的定量测定原发性肝癌(HCC)及其癌旁组织、国内常用Bel-7402人肝癌细胞株生长激素受体(GHR)的表达水平,探讨重组人生长激素(rhGH)在原发性肝癌患者中的适用性。方法采用放射配体分析法对45例原发性肝癌组织及其癌旁组织、8例正常肝组织、Bel-7402人肝癌细胞株进行GHR的检测,肝组织及肝癌细胞的GHR受体最大结合量(RT)采用Scatchard法计算;并分析肝癌组织GHR的表达量与肝癌患者各临床病理参数的关系。结果在38例HCC组织与45例癌旁组织,以及7402肝癌细胞株均检测到GHR的存在,GHR受体结合容量(RT)在有GHR表达的肝癌组织为(19.673 00±3.876 6)fmol/mg蛋白,癌旁组织GHR的RT值为(33.628 3±3.621 8)fmol/mg蛋白,GHR在7402肝癌细胞位点数量(Site,103/cell)为7.348±0.891;同正常肝组织相比,肝癌与癌旁组织GHR的表达量均降低(P<0.05),肝癌组织GHR的表达量又低于癌旁组织;肝癌组织GHR的表达量与肿瘤大小、患者临床分期的延迟呈负相关,而与肿瘤分化程度、患者年龄、是否合并肝硬化无关;有7例肝癌组织未检测到GHR存在。结论大多数原发性肝癌组织及全部癌旁组织均表达一定水平的GHR,在它们受体功能未明的情况下,rhGH在肝癌患者中的应用可能需慎重。     

肝细胞性肝癌生长激素受体的基因分析

目的 对肝细胞性肝癌生长激素受体(GHR)的表达进行基因分析.方法 分别采用放射配体法、半定量的逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)对40例肝细胞性肝癌(HCC)组织进行GHR的检测,以8例正常肝组织作为对照,并随机选择15例RT-PCR阳性扩增产物直接进行DNA序列测定.结果 在蛋白表达水平,应用放射性配体法于正常肝组织与34例HCC组织中检测到GHR,对照组肝组织GHR的RT值为(40.2932±3.5667)fmol/mg·蛋白,K_d为(0.6167±0.1007)nmol/L;HCC组织GHR的RT为(19.8870±3.7549)fmol/mg·蛋白,K_d值为(0.6247±0.2011)nmol/L,与正常肝组织比较,HCC组织GHR的RT降低(P<0.05),而K_d无显著性改变(P>0.05),有6例肝癌组织在蛋白水平未检测到GHR;半定量的RT-PCR法发现GHRmRNA在正常肝组织的表达率为100%,在HCC组织的表达率为90%(36/40),GHR mRNA在正常肝组织与HCC组织的表达量两者之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 大部分肝细胞性肝癌组织在蛋白与mRNA水平均表达GHR,肝癌与正常肝组织GHR在蛋白表达水平上差异的原因可能并非由于两者在mRNA水平表达量的不同所造成.在肝癌受体功能未明的情况下,目前rhGH在肝癌患者中的使用应慎重,以免促进肿瘤的增殖与复发.     

原发性肝癌癌旁组织生长激素受体的表达

目的了解原发性肝癌癌旁组织生长激素受体(GHR)的表达情况.方法采用放射配体法对32例原发性肝癌(HCC)的癌旁组织进行了GHR的检测,并以6例正常肝组织作为对照.结果在32例肝癌癌旁组织均检测到GHR的存在,癌旁组织GHR的受体最大结合容量(RT)值为32.7441±3.5106fmol/mg.protein,Kd为0.6109±0.1105nmol/L;与对照组肝组织相比,肝癌癌旁组织GRH的RT降低(P＜0.05),而Kd无显著性改变(P＞0.05).结论全部癌旁组织均表达GHR,在这些受体功能未明的情况下,rhGH在肝癌患者中的使用应慎重.     

基因重组人生长激素对体外培养的肝癌细胞增殖的影响及配体调控

目的 了解基因重组人生长激素(rhGH)对体外培养的Bel-7402细胞增殖的影响,并探讨rhGH对肝癌细胞生长激素受体(GHR)的调控作用.方法 分别采用肿瘤细胞计数、MTT比色法和集落形成实验等方法 了解Bel-7402细胞株在不同浓度rhGH(0、1、10、100、1000、10 000 ng/ml)作用下的药物敏感性,计算细胞生长率;用3H-TdR掺入法研究肿瘤细胞DNA代谢情况;应用放射配体法了解Bel-7402细胞GHR的表达,以及rhGH在上述浓度下对肝癌细胞GHR的影响.结果 rhGH对体外培养的Bel-7402细胞的生长有一定程度促进作用,表现为rhGH在100 ng/ml浓度下促进肝癌细胞增殖较为显著,rhGH在其他浓度(1、10、1000、10000 ng/ml)的部分时段,对肝癌细胞的增殖虽亦有一定程度的促进作用,但总体效果较rhGH在100 ng/ml浓度时弱;放射配体法发现Bel-7402细胞表达GHR,在rhGH作用后24 h,Bel-7402细胞GHR的位点数量(103个/细胞)在10、100 ng/ml组较对照组显著增加,在10000ng/ml组较对照组显著减少.结论 一定浓度范围rhGH对Bel-7402细胞的增殖有促进作用,原因可能与Bel-7402细胞表达GHR有关;同时rhGH对Bel-7402细胞的GHR有一定调控作用.     

原发性肝癌癌旁组织生长激素受体的基因研究

目的探讨原发性肝癌癌旁组织生长激素受体（GHR）的基因表达情况或变化。方法采用放射配体法、半定量的逆转录-多聚酶链式反应（RT—PCR）对45例原发性肝癌（HCC）的癌旁组织进行了生长激素受体（GHR）的检测,以8例正常肝组织作为对照,并随机选择12例RT—PCR阳性扩增产物直接进行DNA序列测定。结果在蛋白表达水平,应用放射性配体法于正常肝组织与45例HCC癌旁组织中检测到单一的GH特异性结合位点（即GHR）。对照组肝组织GHR的RT值为40．2932±3。5667．fmol／mg;protein,Kd为0．6167±0．1007nmol／L。HCC癌旁组织GHR的RT为33．6283±3．6218fmol／mg。protein,Kd值为0．6319±0．1978nmol／L,与正常肝组织相比,HCC癌旁GHR的RT降低（P〈0．05）．而Kd无显著性改变（P〉0．05）。半定量的RT—PCR法发现GHRmRNA在正常肝组织与HCC癌旁组织的表达率均为100％。GHRmRNA在正常肝组织与原发性肝癌癌旁组织的表达两者之间差异无显著性（P〉0．05）。结论全部肝癌癌旁组织在蛋白与mRNA水平均表达GHR,在其受体功能未明的情况下,目前rhGH在肝癌患者中的使用应慎重,以免造成肿瘤的增殖与复发。     

重组生长激素对实验性肝硬化肝细胞生长激素受体表达的调控作用

目的探讨重组生长激素对肝硬化肝细胞表达生长激素受体的调控作用。方法检测不同浓度的重组生长激素 (0、13 3、133 3、1333ng/ml)干预后大鼠肝硬化肝细胞生长激素受体的数量变化。结果培养后肝硬化肝细胞生长激素受体的数量 (10 4 /cell)分别为 0 73± 0 13、1 14± 0 17、1 2 3± 0 2 1、0 6 8± 0 10 (P <0 0 5 )。结论在一定浓度范围内重组生长激素对肝硬化肝细胞的生长激素受体具有正性调控作用     

生长激素受体在Bel-7402与QGY-7701人肝癌细胞株中的表达

目的了解Bel-7402与QGY-7701人肝癌细胞株生长激素受体(GHR)的表达情况,以获得肝癌GHR在细胞水平上的定量表达。方法分别采用放射性配体分析与RT鄄PCR法检测GHR在Bel鄄7402与QGY-7701肝癌细胞株的表达。结果7402肝癌细胞可表达GHRmRNA,在蛋白表达水平放射性配体法发现GHR在此肝癌细胞位点数量(Site,103/cell)为7.348±0.891,平衡解离常数为0.63±0.04583nmol/L;未发现7701肝癌细胞株表达GHR。结论7402肝癌细胞株表达GHR,可为将来研究rhGH与原发性肝癌的增殖关系奠定一些实验基础。     

SMMC-7721与Bel-7402人肝癌细胞株生长激素受体的表达及意义

目的了解生长激素受体（GHR）在SMMC-7721与Bel-7402人肝癌细胞株的表达情况,以获得肝癌GHR在细胞水平上的定量表达。方法分别采用放射性配体分析与逆转录-多聚酶链式反应（RT-PCR法）检测GHR在SMMC-7721与Bel-7402肝癌细胞株的表达情况,使用双脱氧末端终止法进行基因测序。结果SMMC-7721与Bel-7402肝癌细胞均可表达GHRmRNA;在蛋白质表达水平发现GHR在7721肝癌细胞的位点数量（Site,103/cell）为3.462±0.632,平衡解离常数（Kd）为0.52±0.05942nmol/L;7402肝癌细胞位点数量为7.348±0.891,Kd为0.63±0.04583nmol/L。结论由于上述两种肝癌细胞株均可表达GHR,因此可为研究rhGH与肝细胞肝癌的生长关系奠定一定的实验基础。     

糖皮质激素对人肝癌细胞系增殖的抑制作用

目的 探讨糖皮质激素在体外环境下对肝癌细胞增殖的影响及可能机制.方法 以不同浓度(0.1、0.01、1×10-3、1×10-4、1×10-5、1×10～mmol/L,均为终浓度)的地塞米松(Dex)在体外作用于人肝癌细胞系Bel7402、H7402和Hep G2细胞,计算细胞生长抑制率.再以Bel7402细胞为对象,分别加入1×10-4 mmol/L的Dex(Dex组)、1×10-4mmol/L的Ru486(Ru486组)、Dex和Ru486(浓度均为1×10-4mmol/L,Dex+Ru486组),并设加人培养液的阴性对照组,计算各组细胞生长抑制率,流式细胞仪测定各组的细胞周期分布,Western免疫印迹法检测Bel7402细胞的P21蛋白的表达;报告基因法检测Dex和Ru486对Bel7402细胞的核因子κB(NF-κB)启动子的影响.结果 各浓度Dex对3种肝癌细胞的增殖均有抑制作用,且呈浓度依赖性.Dex组Bel7402细胞的增殖受到抑制,其G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,其细胞内的P21蛋白表达上调,NF-κB启动子的激活受到抑制,而加入Ru486后(Dex+Ru486组),Dex的这些作用被逆转.结论 Dex可以抑制Bel7402细胞的增殖,并使细胞周期停滞在G上/G1,期,其机制可能包括上调P21蛋白的表达和抑制NF-κB的表达,这种作用由糖皮质激素胞内受体介导.     

马钱子碱抗肝细胞癌作用的实验研究

目的 探讨马钱子碱抗肝细胞癌的作用及其机制.方法 体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,加入不同浓度的马钱子碱(2.5～400μg/ml),细胞培养72 h,MTT法测定细胞生长抑制率.Western blotting和荧光定量RT-PCR技术分别测定培养24、48、72 h肝癌细胞PCNA、Cyclin D1、FAS基因mRNA和蛋白表达.结果 随着马钱子碱用量逐渐增加,对人肝癌细胞SMMC-7721生长抑制作用增强,马钱子碱用量为320 μg/ml时对肝癌细胞生长抑制率接近100%.马钱子碱作用肝癌细胞24 h与作用48 h相比,Fas蛋白和mRNA表达差异无统计学意义(分别F=2.547,1.582,均P＞0.05),作用72 h时差异有统计学意义(分别F=1.036,1.137,均P＜0.05);PCNA和Cyclin D1的mRNA和蛋白表达各时间点差异无统计学意义(PCNA分别F=3.612,2.174,3.029;Cyclin D1分别F=2.361,2.915,1.976,均P＞0.05).结论 马钱子碱抑制肝癌细胞生长,可能通过肝癌细胞FAS基因和蛋白表达增加,诱导肝癌细胞凋亡发挥抑制作用,而与PCNA和Cyclin D1作用无关.

Abstract：

Objective To study the effect of brucine on the growth of a hepatocellular carcinoma cell line in vitro. Methods Brucine was added into a liver cancer cell line of SMMC-7721 in vitro, at drug concentration of brucine from 2. 5 μg/ml to 400 μg/ml. The inhibition rate of cell growth was measured by MTT technique after the cells were cultured for 72 hours. The protein and mRNA expression of PCNA,cyclin D1 and FAS were respectively assayed with Western blotting and fluorescent quantitation RT-PCR techniques at 24, 48, 72 h. Results The inhibition rate of liver cancer cell was near 100% when the brucine concentration was at 320 μg/ml. The protein and mRNA expression of FAS were of no significant difference at 24 h vs 48 h ( seperately F = 2. 547,1. 582, all P ＞ 0. 05 ), and significant difference existed at 24 h vs 72 h( seperately F = 1. 036, 1. 137, all P ＜ 0. 05 ). The protein and mRNA expression of PCNA,Cyclin D1 were of no significant difference between various time period( seperately PCNA F = 3.612,2. 174,3.029;Cyclin D1 F=2.361,2.915,1.976,all P＞0.05). Conclusions Brucine inhibits the growth of liver cancer cells, by inducing increased apoptosis of the cells probably through FAS overexpression.     

人肝癌细胞系HCCLM3中生长抑素受体亚型的表达研究

目的检测人肝癌高转移细胞系生长抑素受体mRNA和蛋白的表达,探讨生长抑素对肝癌细胞株增殖的影响及其作用机制.方法应用免疫组化和RT-PCR的方法检测人肝癌细胞系中五种生长抑素受体亚型的表达,并进行半定量分析;应用MTT法检测8肽生长抑素对肿瘤细胞增殖的影响.结果肝癌细胞HCCLM3中存在SSTR1-5表达.生长抑素抑制肝癌细胞株HCCLM3的增殖并呈浓度依赖性,其作用可以被PTP抑制剂正钒酸钠所抑制;HCCLM3细胞表达5种生长抑素受体的mRNA和蛋白,表达强度由强到弱依次为SSTR2、SSTR1、SSTR4、SSTR3、SSTR5.SSTR2和SSTR1的表达强度明显强于SSTR3、SSTR4、SSTR5（P＜0.05）,应用生长抑素后受体亚型SSTR2、SSTR3、SSTR5 mRNA表达强度明显高于SSTR1、4 mRNA（P＜0.05）.结论五种生长抑素受体亚型均存在于HCCLM3肝癌细胞系中,生长抑素可以明显抑制肝癌细胞的增殖.SSTR2 SSTR3、SSTR5和生长抑素结合后通过激活PTP抑制肿瘤细胞的生长和增殖.     

脱氧氟尿苷增强顺铂对人肝癌BEL-7402细胞株的增殖抑制作用

目的 探讨脱氧氟尿苷（5-DFUR）和顺铂（CDDP）联合应用对人肝癌细胞系BEL-7402的增殖抑制作用。方法 采用克隆形成法检测细胞的增殖抑制率、流式细胞术检测细胞周期的改变及凋亡率。结果 5-DFUR（7.815～250mg/L）和CDDP（0.63～20mg/L）单独应用均对人肝癌BEL- 7402细胞有抑制作用，呈现剂量效应关系。5-DFUR与CDDP联合应用对人肝癌细胞BEL-7402产生显著的协同杀伤作用，5-DFUR与CDDP浓度接近IC50时即5-DFUR 62.5mg/L与CDDP 2.5mg/L联合用药时可使CDDP的抑制率从单独用药的45.12%提高到联合用药的89%（P〈0.01）。CDDP、5-DFUR单独应用48h后可诱导人肝癌BEL-7402细胞发生凋亡，凋亡比率分别为15.37%和21.25%，联合用药组在48h细胞凋亡的比率则为19.37%，72h后CDDP、5-DFUR单独应用诱导人肝癌BEL-7402细胞发生凋亡的比率分别为19.3%和28.37%，而联合应用组诱导凋亡细胞的比例达到55.7%（P〈0.01），CDDP与5-DFUR单用72h时，细胞周期G1期阻滞较为明显，而当5-DFUR与CDDP合用后，G1期、S、G2期/M期细胞增加，尤其是G2期/M期细胞数增加明显。结论 5-DFUR与CDDP联合应用对人肝癌细胞BEL-7402可产生显著的协同杀伤作用，其细胞周期调节发生在G2～M期，细胞被阻滞于G2～M期。     

AG1024对肝癌细胞系增殖与凋亡的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-IR)酪氨酸激酶阻断剂AG1024(3-溴-5-叔丁基-4-羟基苯叉苹果酸腈)对人肝癌癌细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导作用.方法 采用MTY、流式细胞术、细胞侵袭实验、RT-PCR和Western blot等方法检测在不同浓度(0～40 μmol/L)的AG1024作用下,人肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721的细胞形态学及分子生物学特性的改变.结果 MTT检测显示,AG1024剂量依赖性地抑制肝癌细胞的增殖.流式细胞术提示,AG1024明显促进肝癌细胞的凋亡.Transwell小室侵袭实验显示,AG1024能明显抑制肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721的侵袭能力,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR结果显示,肝癌细胞中IGF-IR呈高表达,不同浓度AG1024作用后,剂量依赖性地增加细胞色素C的表达.Western blotting结果显示,AG1024降低胞外途径信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)的磷酸化水平,下调procaspase-3的表达,而总ERK保持不变.结论 AG1024阻断胰岛素样生长因子1型受体,从而阻断其下游的信号传导途径,抑制肝癌细胞的增生,诱导凋亡.     

美洛昔康对肝癌细胞系HepG2的生长抑制作用

目的观察环氧合酶(COX)-2在肝癌细胞系(HepG2、HLE、HG116、SMMC7402)中蛋白、mRNA水平的表达,探讨COX-2的选择性抑制剂美洛昔康对肝癌细胞系HepG2的生长抑制作用。方法用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)和细胞免疫化学方法研究COX-2在人肝癌细胞系中的表达,并用噻唑蓝(MTT)法和流式细胞仪检测COX2的抑制剂美洛昔康对人肝癌细胞系HepG2的生长抑制作用。结果应用免疫组织化学和RTPCR在4种肝癌细胞系中检测COX-2蛋白及其mRNA均有阳性表达。美洛昔康对肝癌细胞系HepG2有较明显的生长抑制作用(P<0.01),并呈时间、剂量依赖性。时间相同时,50μmol/L浓度组抑制率最高,在1、3、5d的抑制率分别为12.5%、39.1%、56.1%,与5、20μmol/L组比较差异有统计学意义(P<0.05);5μmol/L组与20μmol/L组之间差异无统计学意义(P>0.05)。浓度相同时,第5天抑制率最高,5、20、50μmol/L组抑制率分别可达15.6%、28.1%、56.1%,第5天与第1天差异有统计学意义(P<0.01),结论美洛昔康作为COX-2选择性抑制剂对肝癌细胞有明显的生长抑制作用,为肝癌的防治提供了一个新的实验依据。