巨噬细胞炎症蛋白-1α对小鼠肝癌的基因治疗

目的　观察重组腺病毒载体介导的小鼠巨噬细胞炎症蛋白 1α(MIP 1α)对小鼠肝癌的基因治疗效果。方法　携带小鼠MIP 1α基因的腺病毒载体 (AdmMIP 1α)体外感染小鼠肝癌细胞株Hepa1 6 。 48h后 ,用载体自身报告基因表达的绿色荧光蛋白检测感染效率 ;RT PCR法检测感染后细胞内MIP 1α的表达 ;每天计数细胞 ,观察细胞的体外生长曲线。皮下接种Hepa1 6细胞建立小鼠肝癌模型 ,肿瘤局部分别单次注射 1× 10 9cfu的AdmMIP 1α、空载体对照 (Ad empty)和PBS ,观察肿瘤大小和小鼠生存期。结果　腺病毒载体AdmMIP 1α体外能有效地感染靶细胞Hepa1 6 ,并在感染后的细胞内检测到mMIP 1α的mRNA ,体外感染对Hepa1 6的生长曲线无显著影响。瘤体内单次注射AdmMIP 1α导致 4/ 9只小鼠肿瘤完全消退 ,并延长小鼠生存期 ,与对照组比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 0 1)。结论　腺病毒介导的MIP 1α基因治疗对小鼠肝癌有一定的效果 ,可能成为肝癌基因治疗的候选方案     

活化蛋白-1和巨噬细胞炎性蛋白-1α在实验性关节炎大鼠发病中的分子机制及亚砷酸的影响

目的研究活化蛋白(AP)-1和巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1α在佐剂性关节炎大鼠发病中的分子机制及亚砷酸(SA)对它们的影响。方法随机将大鼠分成4组:正常对照组(NC组)、模型组(M组)、SA1组(腹腔注射SA0.5mg·kg-·1d-1)、SA2组(腹腔注射SA1.0mg·kg-1·d-1)。免疫组织化学检测各组C-fos、MIP-1α的表达;生化法测C反应蛋白。结果NC组未见C-fos和MIP-1α表达,M组C-fos及MIP-1α大量表达(P<0.05),C反应蛋白水平升高(P<0.01);与M组比较,SA1组及SA2组C-fos、MIP-1α表达降低(P<0.05),C反应蛋白水平下降(P<0.01),且SA2组更明显。结论AP-1和MIP-1α在大鼠佐剂性关节炎发生发展具有重要作用;亚砷酸能下调AP-1和MIP-1α的表达,降低CRP的水平,提示亚砷酸对RA有一定的治疗作用。     

自体细胞因子诱导的杀伤细胞联合肝癌靶向治疗对老年肝癌患者生活质量的影响

目的探讨自体细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)联合肝癌靶向治疗对肝癌老年患者生活质量的影响。方法所有入组患者均口服索拉非尼进行靶向治疗,采用随机数字表法分为治疗组和对照组,治疗组在给予索拉非尼(0.4 g/次,2次/d,空腹,连服3个月)基础上,同时给予自体CIK细胞治疗3次(每月1次),每次3 d;对照组仅口服索拉非尼(剂量同上),同时定期随访。采用肝胆肿瘤治疗功能评定量表(FACT-Hep)评价肝癌患者治疗后的生活质量和安全性。结果治疗结束后第6周,与对照组比较,治疗组FACT-Hep量表各内部评分、FACT-Hep总分均显著升高(P<0.05)。两组患者试验过程中均未出现严重不良事件。结论自体CIK联合肝癌靶向治疗对改善肝癌老年患者生活质量疗效肯定,并且不良反应相对较小。     

基于单核巨噬细胞炎症模型的络风宁1号抗炎机制初探

目的：制备单核巨噬细胞炎症模型,并观察络风宁1号含药血清对模型细胞增殖的影响。方法采用脂多糖（LPS）体外诱导建立单核巨噬细胞炎症模型,造模的同时加入不同浓度的络风宁1号及匹伐他汀钙含药血清干预,共同孵育24 h后,收集细胞上清,ELISA法检测炎症因子基质金属蛋白酶9（MM P 9）水平。结果与空白组相比,模型组 THP 1单核细胞显著升高（ P ＜0．01）;不同浓度络风宁1号含药血清干预后,高浓度组的抑制作用最明显（ P ＜0．01）。结论单核巨噬细胞炎症模型制备成功,基于此模型,络风宁1号含药血清可以抑制 LPS对炎症细胞的增殖作用,这可能是其抗炎症、防治冠心病不稳定性心绞痛的主要机制之一。     

KAI1基因对肝癌MHCC97-H细胞生长及侵袭能力的影响

KAI1基因是从前列腺癌中克隆的肿瘤转移抑制基因。用基因转染技术研究KAI1基因对肝癌细胞生长及侵袭能力的影响。     

小鼠肺巨噬细胞一氧化氮合酶与肿瘤杀伤细胞间的关系

一氧化氮（ＮＯ）为活化的巨噬细胞的细胞毒效应分子之一。我们测定肺巨噬细胞（ＡＭ）内的诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）及产物ＮＯ水平,并应用特异性一氧化氮合酶（ＮＯＳ）抑制剂来观察ＡＭ对肿瘤细胞杀伤作用的影响,以探讨ＮＯＳ活性与肿瘤杀伤力之间的关系。材料...     

慢性乙型肝炎患者外周血NK细胞杀伤细胞凝集素样受体G1表达及其对NK细胞杀伤功能的影响*

目的 探讨CHB患者外周血NK细胞杀伤细胞凝集素样受体亚家族G成员1(KLRG1)表达的变化以及其对NK细胞杀伤功能的影响。方法 在120例CHB患者和120例健康体检者,抽取外周血,提取外周血单个核细胞,使用流式细胞仪检测NK细胞、KLRG1⁺ NK细胞和分泌γ-干扰素的NK细胞百分率,体外检测NK细胞对LX-2细胞的杀伤力。结果 CHB患者外周血NK细胞百分率为(17.2±7.7)%,显著高于对照组 [(11.3±6.9)%,t=9.85,P=0.01】, KLRG1⁺NK细胞百分率为(52.2±20.3)%,显著高于对照组 【(30.3±16.9)%,t=6.57,P=0.01】,分泌IFN-γ的NK细胞百分率为(14.6±3.8)%,显著低于对照组【(42.5±9.5)%,t=11.24,P=0.01】;CHB患者外周血NK细胞CD38、CD69、HLA-DR和TRAIL表达均显著高于对照组(P=0.012,P=0.015,P=0.025,P=0.019);CHB患者NK细胞诱导LX-2细胞发生早期凋亡率为11.5% (6.6%～13.7%),晚期凋亡率为7.2% (5.1%～8.5%),与对照组的15.4% (11.5%～24.3%)和13.5% (8.1%～20.4%) 比,显著降低 (U=6.50, P=0.025;U=2.02,P=0.002) 。结论 CHB患者NK细胞表达KLRG1增强,通过减少分泌INF-γ而导致其杀伤功能减弱,可能系造成慢性感染的重要原因。     

糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞巨噬细胞炎性蛋白-1α表达的影响

目的　探讨糖基化终产物 (AGEs)对大鼠主动脉平滑肌细胞巨噬细胞炎性蛋白 1α(MIP 1α)mRNA及蛋白表达的影响。　方法　将培养的大鼠主动脉平滑肌细胞用不同浓度 (10 0、2 0 0、4 0 0mg/L)的AGEs孵育 2 4h及同一浓度 (4 0 0mg/L)AGEs孵育 0、12、2 4、36h ,采用RT PCR方法及流式细胞仪检测MIP 1αmRNA及蛋白的表达水平。　结果　对照组平滑肌细胞内MIP 1α呈弱表达 ,10 0、2 0 0、4 0 0mg/LAGEs培养平滑肌细胞 2 4h显著增高MIP 1αmRNA的表达 ,其电泳条带相对积分吸光度值分别为对照组的 1 36、1 75、2 4 5倍 (P <0 0 5 ) ;10 0、2 0 0、4 0 0mg/LAGEs孵育2 4h后 ,各组平滑肌细胞MIP 1α蛋白的平均荧光强度分别为 197± 3、2 6 0± 6及 375± 6 ,分别为对照组(15 8± 4 )的 1 2 4、1 6 3、2 37倍 (P <0 0 5 )。 4 0 0mg/LAGEs培养 12、2 4、36h后 ,各组平滑肌细胞MIP 1αmRNA的表达也明显增高 ,其电泳条带相对积分吸光度值分别为 0h组的 1 5 2、2 38、2 5 3倍(P <0 0 5 ) ;4 0 0mg/LAGEs孵育 12、2 4、36h后 ,各组平滑肌细胞MIP 1α蛋白的平均荧光强度分别为 2 4 4± 5、375± 6及 4 2 5± 3,分别为 0h组 (170± 5 )的 1 4 3、2 2 1、2 4 9倍 (P <0 0 5 )。　结论　糖基化终产物以时间及剂量     

巨噬细胞炎症蛋白-1α在机械通气大鼠肺泡巨噬细胞中的表达

目的 通过检测不同潮气量机械通气大鼠肺泡巨噬细胞炎症蛋白-1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)和核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)p65蛋白表达水平,探讨肺泡巨噬细胞(AM)活化在呼吸机所致肺损伤(VILI)中的作用.方法 32只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、小潮气量组、常规潮气量组和大潮气量组.采用SABC法分别测定各组大鼠BALF肺泡MIP-1α及NF-κB p65蛋白表达水平.并用100-CX型透射电镜观察其AM的超微结构.结果 大潮气量和常规潮气量组大鼠BALF肺泡MIP-1α及NF-κB p65蛋白染色阳性细胞百分比均明显高于对照组和小潮气量组(P＜0.01);大潮气量组大鼠BALF肺泡MIP-1α及NF-κB p65蛋白染色阳性细胞百分比与常规潮气量组比较亦有显著差异;小潮气量组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).透射电镜下显示,大潮气量和常规潮气量组大鼠AM呈功能激活状态.结论 AM是引起VILI的始动细胞之一,在VILI的发病中具有重要作用;AM活化并释放MIP-1α是引起肺内PMN聚集、活化,导致VIL1发生的一个重要因素;AM表达与释放MIP-1α在某种程度上可能受NF-κB的调控.     

小窝蛋白-1在肝癌细胞及间质中的表达及意义

目的探讨Cav-1在肝癌细胞及其间质中的表达情况及临床意义。方法选取80例肝癌标本及其癌旁组织标本为研究对象,采用免疫组织化学法检测以上标本的Cav-1表达情况,并探讨Cav-1与肿瘤分化程度、周围器官侵犯、血管侵犯等病理参数的关系。结果 Cav-1在肝癌细胞中的表达显著高于癌旁组织,在肝癌间质的表达明显低于癌旁间质(P0.05)。Cav-1在肝癌实质中的表达与肝硬化、周围器官侵犯、血管侵犯、癌栓形成有关(P0.05)。Cav-1在肝癌间质中的表达与最大径,是否多发,是否有卫星、侵犯周围器官、血管侵犯、癌栓形成有关(P0.05)。结论 Cav-1在肝癌中的表达上调,在肝癌间质中的表达下降,其表达水平均与肝癌的侵袭性相关,可作为肝癌治疗的有效靶标。     

Wnt抑制因子-1对肝星状细胞活化的影响

目的观察wnt抑制因子-1（WIF）对转化生长因子β1（TGF-β1）活化肝星状细胞（HSC）的影响。方法构建真核表达质粒pEGFP-C1-WIF并通过脂质体介导方法,将pEGFP-C1-WIF转染体外培养的HSC-T6细胞株,用TGF-β1刺激转染（试验组）和未转染的HSC-T6细胞株（对照组）,并用逆转录PCR（RT-PCR）和Western blot法检测各组细胞（包括正常细胞组）smad3、β-连环蛋白（β-catenin）mRNA及其蛋白质的表达。结果试验组HSC-T6细胞株smad3、β-catenin mRNA及蛋白质表达明显低于正常组HSC-T6细胞株,更低于对照组HSC-T6细胞株（P〈0.05）。β-catenin和smad3蛋白质的表达均与α-肌动蛋白（α-SMA）蛋白质的表达显著相关（r=0.800,P〈0.01;r=0.743,P〈0.01）。结论 WIF能通过下调wnt/β-catenin以及TGF-β1/smads信号通路的生物学效应抑制HSC-T6细胞的活化,从而延缓肝纤维化的发展。     

转化生长因子β1对大鼠肝星状细胞表达β-连环蛋白的影响

目的研究转化生长因子β1（TGF—β1）对大鼠肝星状细胞（HSC）表达β-连环蛋白（β-catenin）的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）比较经不同浓度的TGF-β1刺激不同时间后HSC表达β-catenin、smad3和α-SMA mRNA的变化,并比较三者之间的关系。结果1ng／ml TGF—β1刺激2h后,HSC表达β—catenin mRNA、smad3 mRNA和α—SMA mRNA量最大,β—catenin mRNA表达与两者均具有明显的相关关系（r=0．947,P〈0．01;r=0．950,P〈0．01）。结论β—catenin在TGF—β1活化HSC的过程中发挥重要作用。     

桑黄灵芝UE-1对SMMC-7721细胞生物学行为的抑制作用

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小干扰RNA沉默垂体瘤转化基因1对肝癌细胞增殖和凋亡水平的影响

肝癌是全世界范围的高发恶性肿瘤,在亚洲的发病率、病死率都很高。肝癌的分子学发病机制尚不完全清楚,包括基因结构和功能的缺陷、癌基因的激活、抑癌基因的失活、细胞周期紊乱、染色体的非整倍体出现以及细胞凋亡途径受阻等。垂体瘤转化基因(PTTG)1是细胞周期调节蛋白,能抑制姐妹染色单体分离,导致染色体不稳定,形成非整倍体。在成人大多数正常组织中PTTG1表达较弱,甚至检测不到,而在垂体肿瘤等多种肿瘤细胞中表达明显升高,PTTG1基因可能是一种潜在的抗癌基因治疗靶点[1]。本研究用小干扰RNA (siRNA)降低肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721细胞中PTTG1的表达,检测PTTG1表达下调对肝癌细胞增殖及凋亡的影响,探讨PTTG1对肝癌细胞生物学行为的影响以及作为肝癌治疗靶基因的可能性。     

Effect of Daxx on cholesterol accumulation in hepatic cells

AIM： To study the effect of Daxx on cholesterol accumulation in hepatic cells. METHODS： Sprague Dawley （SD） rats were fed a normal or high fat diet for 6 wk, and serum lipids and Daxx expression of hepatic tissues were measured by immunoblot assays. HepG2 cells were transfected with the pEGFP-C1/Daxx or pEGFP-C1 plasmid. Cells stably transfected with Daxx were identified by RTPCR analysis. Total cholesterol levels were determined by high performance liquid chromatography. Activated- SREBP and caveolin-1 were assayed by western blotting. RESULTS： Hepatic Daxx protein was higher in normal rats than in high fat diet-fed rats. Noticeable negative correlations were seen between Daxx and LDL-C （γ=-7.56, ρ=0.018）, and between Daxx and TC （γ=-9.07, ρ= 0.01）, respectively. The total cholesterol of HepG2/GFP-Daxx cells was lower than that of control cells or HepG2/GFP cells （9.28±0.19 vs 14.36± 4.45 or 13.94±2.62, both P 〈 0.05）. Furthermore, in HepG2/GFP cells, the expression of activated SREBP was lower than that of control cells, whereas caveolin-1 expression was higher. CONCLUSION： Overexpression of Daxx in HepG2 cells decreased intracellular cholesterol accumulation, which might be associated with inhibition of SREBP activity and an increase in caveolin-1 expression.     

老年人肝癌切除术围手术期肝功能损伤的临床研究

目的 研究老年人原发性肝癌肝切除术围手术期肝功能损伤的原因及防治措施,以提高其临床疗效.方法 回顾性分析原发性肝癌肝切除病例62例,老年组32例,非老年组30例,采用单因素分析和多元逐步回归模型分析围手术期老年组与非老年组、肝门阻断组和非阻断组、出血量多组(≥500 ml)和出血量少组(＜500 ml)肝功能损害的影响因素.结果 老年肝癌切除术后肝功能损伤的发生率为32.6%,肝功能衰竭的病死率为1.6%.单因素分析显示肝门阻断、术中出血、术中输血量及肿瘤大小与术后肝功损伤有关.多元逐步回归模型显示肝门阻断的标准化回归系数0.314,(t=2.272,P＜0.05),肝门阻断是决定术后肝功能损伤的独立因素.结论 老年肝癌肝切除术后肝功能损伤的主要原因是肝门阻断和术中大出血,提高手术技能、缩短肝门阻断时间和减少术中出血是预防老年人肝癌术后肝功能损伤的主要措施.     

大鼠肝细胞对肝星状细胞增殖与活化的影响及其机制探讨

目的观察肝细胞对原代肝星状细胞（HSC）增殖、表型、胶原表达等生物学特性的影响，并为探讨其作用机制提供线索。方法原位灌流分离大鼠HSC，与大鼠肝细胞系BRL共培养48h。在相差显微镜下观察HSC的表型变化，用Westernblot方法检测其α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型前胶原的表达，TUNEL方法检测其凋亡。取BRL细胞的培养上清液培养原代HSC，用MTT法检测其增殖。采用抗体芯片投水碌示BRL细胞的培养上清液与对照培养基之间细胞凶子的表达差异。结果BRL细胞的培养上清液明显促进HSC增殖（P〈0．01）。与BRL细胞共培养的原代HSC胞体收缩性增强，Ⅰ型前胶原及α-SMA的表达上调，凋亡增加（P〈0．01）。较对照培养基，BRL细胞的培养上清液中帆管内皮生长因子（VEGF）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP-1）等三种细胞因子显著上调。结论肝细胞可促进原代HSC的增殖与活化，其机制可能与肝细胞分泌VEGF、MCP-1、TIMP-1等细胞因子有关。     

氢化可的松对人NK细胞增殖及其对胰腺癌SW1990细胞杀伤效率的影响

目的 探讨氢化可的松对人外周血NK细胞增殖及其对胰腺癌SW1990细胞杀伤力的影响.方法 分离健康人外周血单个核细胞加入到含IL-15细胞因子的NK细胞培养基中诱导培养NK细胞.当NK细胞纯度达到70％以上时,加入10-6、10-5、10-4、10-3 μmol/L氢化可的松继续培养7d.以未加氢化可的松的NK细胞作为对照组.采用锥虫蓝染色计数细胞;采用流式细胞术检测CD3-CD56+ NK细胞含量及其穿孔素、颗粒酶B和IFN-γ的表达;以20∶1的效靶比将NK细胞与SW1990细胞共培养,用细胞增殖-毒性检验法(CCK-8)检测NK细胞对SW1990细胞的杀伤效应.结果 用氢化可的松处理7d后NK细胞量平均达到70.72％ ～ 76.39％,与对照组的(72.61±3.76)％差异无统计学意义;10-6、10-5、10-4、10-3 μmol/L氢化可的松处理组NK细胞的增殖倍数分别为(9.13±0.94)、(9.67±1.51)、(10.33± 1.07)、(8.40±1.47)倍,均显著高于对照组的(4.23±0.82)倍(P值均＜0.01);NK细胞对SW1990细胞的杀伤效率分别为(58.58±4.89)％、(62.27±5.63)％、(64.02±5.79)％、(63.88±3.61)％,均较对照组的(57.46±5.11)％增强,其中10-4μmol/L组的差异具有统计学意义(P ＜0.05);10-4、10-3μmol/L氢化可的松处理组NK细胞穿孔素表达分别为(96.71±3.04)％、(97.56±2.18)％,显著高于对照组的(92.40±3.53)％(P ＜0.05或0.01);10-5 μmol/L氢化可的松处理组NK细胞的颗粒酶B表达为(78.23±2.94)％,显著高于对照组(73.68±3.52)％(P＜0.05);10-5、10-4、10-3 μmol/L氢化可的松处理组NK细胞IFN-γ表达分别为(96.61±2.04)％、(97.58±2.17)％、(98.00±1.77)％,均显著高于对照组的(92.44±2.74)％(P值均＜0.01).结论 氢化可的松可促进IL-15活化的NK细胞增殖,适当浓度条件下增强对SW1990细胞杀伤活性,其机制可能与其穿孔素、颗粒酶B和IFN-γ表达上调有关.     

姜黄素预防肝纤维化作用与肝星状细胞的关系

目的观察姜黄素预防大鼠肝纤维化作用及活化肝星状细胞(HSC)的数目、分布、凋亡等变化,并探讨两者间的关系。方法以四氯化碳制作大鼠肝纤维化模型,同时按每100 g体重分别给予20、10、5 mg姜黄素灌胃处理,设立正常对照组、肝纤维化组和阳性对照组;8周后处死大鼠,留取肝左叶行HE、Masson染色,参照肝纤维化半定量计分系统进行肝纤维化程度评分,免疫组织化学方法检测α-平滑肌肌动蛋白以了解活化HSC的数量变化, TUNEL与肌源性特异性标志物结合蛋白(Desmin)免疫组织化学双染法检测HSC凋亡。结果姜黄素可明显改善四氯化碳所致大鼠肝纤维化的病理学改变;α-平滑肌肌动蛋白在肝纤维化时表达明显增多,姜黄素使活化HSC数量减少, }[SC凋亡增加,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0．05),且具有量效关系。结论姜黄素可抑制HSC活化、增殖,诱导HSC凋亡,可能为预防肝纤维化的作用机制之一。     

原代培养大鼠肝星状细胞、枯否氏细胞及肝素的干预作用

目的同步分离培养大鼠肝星状细胞及枯否细胞,应用肝素进行干预,观察肝素在体外对肝星状细胞及枯否细胞的影响.方法应用Nycodenz一步密度梯度离心法一步分离肝纤维化大鼠的肝星状细胞及枯否细胞.分别将不同浓度的肝素加入肝星状细胞和枯否细胞培养板中,应用MTT比色法检测各组肝星状细胞和枯否细胞的增殖状况,免疫细胞化学检测各组肝星状细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、层连蛋白(LN)的表达.结果加入高浓度肝素、低浓度肝素及未用药的肝星状细胞0D值分别为0.0626±0.0137、0.0746±0.0131和0.1106±0.0198.加入高浓度肝素、低浓度肝素及未用药的枯否氏细胞0D值分别为0.1340±0.0270、0.1540±0.270和0.2120±0.0444.二肝素组肝星状细胞、枯否氏细胞0D值均显著低于未加药组.高浓度肝素组肝星状细胞及枯否氏细胞0D值较低浓度肝素组为低,但无显著性差异.加入肝素的肝星状细胞α-SMA、TGF-β1,LN的表达较未用药的肝星状细胞为弱.高浓度肝素组α-SMA、TGF-β1 LN的表达较低浓度肝素组弱.结论肝素可抑制肝星状细胞的增殖、活化及胶原的分泌,且对枯否氏细胞也具有抑制作用.