微量聚合酶链反应对人类白细胞抗原的基因分型

目的 探讨应用于移植的人类白细胞抗原（ＨＬＡ）二类基因（ＤＲＢ／ＤＱＢ）快速分型新技术。方法 采用快速ＤＮＡ抽提技术,建立了ＨＬＡ＿ＤＲＢ／ＤＱＢ微量序列特异性引物聚合酶链反应基因分型方法,对１４２份供受者ＤＮＡ进行ＨＬＡ－ＤＲＢ／ＤＱＢ基因分型,并与单克隆抗体一叔法ＨＬＡ血清学分型技术进行对比研究。结果 应用微量ＰＣＲ－ＳＳＰ方法共检出１３种ＤＲＢ１等位基因和 ＤＱＢ１等位基因,与血清学分型结果     

对142例β地中海贫血基因携带者进行缺失型α地中海贫血1基因分析

目的了解广东地区常见的β地中海贫血（地贫）与α地贫１复合存在的发生率。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对１４２例经筛查确定为轻型β地贫的成人血样ＤＮＡ进行α地贫１基因检测,阳性者又应用突变引物ＰＣＲ特异扩增或用等位基因特异寡核苷酸探针反向点杂交（ＡＳＯ／ＲＤＢ）技术,确定其β地贫基因突变类型。结果１４２例中有１３例轻型β地贫样本同时合并有α地贫１基因,占总数的９１５％,其β地贫基因的突变类型分别是：ＣＤ４１４２（－ＴＣＴＴ）突变５例,ＩＶＳ２６５４（Ｃ→Ｔ）突变３例,ＣＤ１７（Ａ→Ｔ）突变２例,ＣＤ７１７２（＋Ａ）、ＣＤ４３（Ｇ→Ｔ）和－２８（Ａ→Ｇ）突变各１例。结论β地贫复合α地贫１的双重杂合子在轻型β地贫个体中的发生率较高,是该地区在地贫的遗传咨询和产前诊断工作中值得重视的一个问题。     

支气管哮喘HLA—DRB1等位基因研究

目的：研究山西汉族支气管哮喘患者的ＨＬＡ－ＤＲＢ１等位因基的频率。方法：采用顺序特异引物聚合酶链反应（ＰＣＲ／ＳＳＰ）技术检测山西汉族６４例支气管哮喘患者ＨＬＡ－ＤＲＢ１等位基因频率,并与山西正常人群进行比较分析。结果：支气管哮喘组ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊１５０１／１５０２基在频率明显增高（Ｐ〈０．０５）,Ｏ ２３．４４％;其它等位基因频率在两组间无显著差异。结论：在山西汉族人群中ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊１５     

应用序列特异引物PCR法对广西壮族HLA—DQA1进行基因分型

应用序列特异引物多聚酶链反应（ＰＣＲ）方法对８２名无血缘关系的广西壮族健康人的ＨＬＡ－ＤＱＡ１进行基因分型。共检出７种ＤＱＡ１等位基因，以ＤＱＡ１＊０３０１的频率最高，达３１％，其次为ＤＱＡ＾０１０４，０１０２和０５０１，检出率分别为２４．３％，１６．９％和１１．７％。未出的等位基因有ＤＱＡ１＊０２０１，０３０２和０６０１。结果表明，壮族的ＨＬＡ－ＤＱＡ１等位基因频率分布除与中国南方人相似外。     

应用序列特异引物PCR法对广西壮族HLA－DQA_1进行基因分型

应用序列特异引物多聚酶链反应（ＰＣＲ）方法对８２名无血缘关系的广西壮族健康人的ＨＬＡ－ＤＱＡ＿１进行基因分型。共检出７种ＤＱＡ＿１等位基因，以ＤＱＡ＿１＊０３０１的频率最高，达３１％，其次为ＤＱＡ＿１＊０１０４，０１０２和０５０１，检出率分别为２４．３％，１６．９％和１１．７％。未检出的等位基因有ＤＱＡ＿１＊０２０１，０３０２和０６０１。结果表明，壮族的ＨＬＡ－ＤＱＡ＿１等位基因频率分布除与中国南方人相似外，尚有其特点。序列特异引物ＰＣＲ方法不需要放射性同位素，简便快速、准确可靠的ＨＬＡ－ＤＱＡ＿１基因分型新方法。     

用序列特异性引物的PCR方法分析慢性淋巴细胞性甲状腺炎患者…

慢性淋巴细胞性甲状腺炎（ＣＬＴ）是一种器官特异性自身免疫性疾病，其遗传易感性与ＨＬＡ－Ⅱ类基因具有相关性，本研究用序列特异性引物的ＰＣＲ（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法，分析２６名由病理证实的ＣＬＴ及正常对照２０例外周血白细胞基因组ＤＮＡ的ＭＨＣ－ＤＱＡ１位点的基因多态性分布，发现两组间有明显不同，其中ＤＱＡ１＊０３０１的等位基因频率显著高于对照组（Ｐｃ小于０．０５）ＤＱＡ１＊０３０１／０３０１的纯合子频率     

HLA-B40交叉反应组血清学与高分辨度DNA分型的比较研究

目的 比较研究中国汉族人群ＨＬＡＢ４０ 交叉反应组血清学分型与高分辨度ＤＮＡ 分型结果。方法研究样本１９９ 份,包括血清学分型Ｂ４０ 组阳性样本１７７ 份、可疑阳性１２ 份和阴性对照１０ 份。同时对血清学分型和高分辨度顺序特异引物聚合酶链反应（ＰＣＲＳＳＰ） ＤＮＡ 分型进行比较。结果 ＤＮＡ分型成功率９９ ．５ ％ ,总耗时５ 小时,特异性和敏感性好,可准确分辨出Ｂ４０ 组１０ 个等位基因。血清学分型成功率９９ ．４ ％ ,总耗时２ 小时,总误差２０ 个,误差率１１ ．２ ％ 。检出中国汉族人群Ｂ４０ 组各等位基因所占比例：Ｂ６０ 为６７ ．４ ％ 、Ｂ６１ 为２０ ．８ ％ 、Ｂ４８０１ 为９ ．６ ％ 、Ｂ４００５ 为２ ．２ ％ 。结论 高分辨度ＰＣＲＳＳＰ 方法用于ＨＬＡＢ４０ 组分型比血清学分型更加精确,适合于临床应用。     

HLA的PCR—SSP分型技术

ＰＣＲ－ＳＳＰ是采用ＰＣＲ技术，针对被检基因设计一系列具有等位基因多态性的序列特异上物扩增被检标本，分析ＰＣＲ产物判定ＨＬＡ型别，ＨＬＡ－ＤＲＩ￣ＤＲ１８可以采用１９对引物检定，采用两步法以７９对引物可以检定ＤＲ全部基因型。ＨＬＡ－ＤＱ采用２０条引物不同组合，陈检定与血清学型别一致的特异性还可分析部份基因型；以２２对引物则可检定ＤＱＢ１全部基因型。ＰＣＲ－ＳＳＰ技术比ＰＣＲ－ＳＳＯＰ及ＰＣＲ－ＲＥ     

HLA—DPB1等位基因与特发性血小板减少性紫癜的相关性研究

采用多聚酶链反应（ＰＣＲ）结合限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）技术对５３例正常人和５５例慢性特发性血小板减少性紫癜（ＩＴＰ）患进行ＨＬＡ－ＤＰＢ１等位基因分型。结果显示，对照组无一例有ＤＰＢ１·１３０１等位基因，ＩＴＰ组６例存在ＤＰＢ１·１３０１等位基因（ＲＲ＝１４．０２，Ｐ〈０．０５），此外，ＤＰＢ１·０２０１＋０２０２所对应的ＤＰｗ２抗原纯合子在ＩＴＰ组明显多于对照组（ＲＲ＝３．９４，Ｐ〈０     

聚合酶链反应—单链构象多态性分析与反向杂交法进行骨髓移植…

用聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增骨髓移植（ＢＭＴ）受者及７８例无关供者ＨＬＡ－ＤＰＢ１基因，作单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析，初步选出与受者ＨＬＡ－ＤＰＢ１ＳＳＣＰ带型相同者；最后进行反向杂交检测，确定ＨＬＡ－ＤＰＢ１更为相容的供者。应用上述技术，从７８例无关供者中选择出１例与ＢＭＴ受者基因相同的供者。整个过程快速、经济、准确性高。     

42例广东籍重型β-地中海贫血与HLA-DQB1*等位基因的相关性分析

为探讨HLA－DQB1＊位点与β－地中海贫血的相关性，应用聚合酶链反应－序列特异引物（PCR－SSP）方法对42例无血缘关系的广东籍汉族重型β－地中海贫血患进行HLA－DQB1＊分型，同时随机检测45例广东籍正常人群作为对照。结果发现HLA－DQB1＊06位点等位基因在β－地中海贫血患群体中频率为19．0％，而对照组为4．4％，两组有显性差异（χ^2=8.961,P＜0．01）。结论提示HL-DQB1*06等位基因与广东地区β－地中海贫血的发病有关联。     

ERCC1基因多态性与肝癌患者易感性分析

目的探讨切除修复交叉互补基因1(ERCC1)-4533/8092位点单核苷酸多态性(SNPs)与广西壮族人群肝癌易感性之间关系。方法通过聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测88例原发性肝癌患者和82例健康对照者的ERCC1-4533/8092基因多态性。结果 ERCC1-4533位点的基因分型在病例组和对照组的频数分布差异无统计学意义(P0.05),ERCC1-8092位点的基因分型在病例组和对照组的频数分布差异具有统计学意义(P0.05)。与携带ERCC1-8092CC基因型的个体相比,携带ERCC1-C8092CA/AA基因型的个体具有更高的肝癌易感性(CA:OR=2.556,95%CI:1.345~4.855;AA:OR=8.667,95%CI:1.000~75.092)。以携带ERCC1-8092C等位基因作为参照,携带ERCC1-C8092A等位基因可以增加原发性肝癌的发病危险性(OR=2.387,95%CI:1.428~3.992)。结论 ERCC1-8092位点基因多态性与广西壮族人群肝癌易感性有关。     

中国汉族人群鼻咽癌患者HLA-DQB1等位基因多态性分析★

背景:目前开展HLA-DQB1基因与鼻咽癌疾病相关性研究一方面受昂贵的进口试剂所制约,另一方面单纯做HLA-DQB1第2外测序分型,模棱两可,结果较少。目的:采用HLA-DQB1基因第2至第3外显子双向测序分型检测技术方法。方法:纳入286份中国汉族健康人群血液样本,46例鼻咽癌患者样本,使用Gentra DNA提取试剂制备基因组DNA,取100份健康人群样本作为平行对照组进行基因分型,选择及自行设计HLA-DQB1基因第2至3外显子扩增引物及测序引物,探索最适合PCR扩增及测序反应条件。采用商品化HLA-DQB1基因单向测序分型试剂盒作对照。结果与结论:100份平行对照组样本与HLA-SBT测序分型结果一致。286例健康个体中共检出13种等位基因,27例样本的等位基因为纯合子。鼻咽癌人群共检出DQB1等位基因11种,5例样本的等位基因为纯合子。鼻咽癌患者DQB1*02等位基因频率高于对照组,但所有等位基因频率比较,差异无显著性意义(χ2<3.84,P>0.05)。未发现HLA-DQB1基因与鼻咽癌有相关性。说明采用的中国汉族人群HLA-DQB1基因测序分型方法具有操作方便、结果稳定和低成本消耗等优势。     

广西壮族人群HIV协同受体CCR5基因突变的检测

目的了解广西壮族人群中HIV协同受体CCR5△32等位基因突变频率和多态性的特点,为评估广西壮族人群对HIV的遗传易感性和艾滋病的防治提供理论依据。方法以152例壮族大学生为研究对象,应用PCR和DNA直接测序等方法检测CCR5及CCR5△32突变体。结果未发现CCR5△32等位基因。结论由于未发现CCR5△32,推测广西壮族人群对HIV-1病毒感染可能具有较大的遗传易感性。     

用等位基因阶梯分析D1S80位点遗传多态性

目的为了解广西壮族人群D1S80位点群体遗传资料.方法使用扩增片段长度多态性(Amp-F1p)和PCR结合聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术,以等位基因阶梯作为分型标准对300名广西壮族无关个体D1S80位点多态性分析.结果观察到23个等位基因,74个基因型,杂合度、非父排除率、个体识别力及多态信息含量分别为0.824,0.763,0.968,0.875.其基因型频率分布符合Hardy-weinberg定律.对5个家系相关个体分析符合孟德尔定律.结论该方法具有简便、快速、准确,灵敏性高的特点.     

529例中国汉族健康人群HLA-DQB1基因型遗传特征研究

目的 探讨中国汉族健康人群HLA-DQB1基因型遗传特征.方法 应用聚合酶链反应-测序分型(polymerase chain reaction sequence-based typing,PCR-SBT)法对529例中国汉族健康人群HLA-DQB1位点进行基因测序分型.结果 在529例中国汉族健康人群中,共检出18种等...     

广西壮族与汉族人群白细胞介素1β基因5号外显子+3953C/T多态性的差异

背景:研究发现白细胞介素1β基因5号外显子 3953C/T位点处存在多态性,这种基因多态性与胃癌、风湿病、关节炎等疾病有关,而白细胞介素1β基因型在中国壮族的分布特点又如何呢?目的:观察白细胞介素1β基因5号外显子 3953C/T多态性在中国广西壮、汉两民族中的分布,并与高加索人和非洲白人进行比较。设计:对比观察。单位:右江民族医学院组织学与胚胎学教研室。对象:观察对象为广西右江民族医学院附属医院健康体检者。壮族155名,男80名,女75名,平均年龄(37±9)岁;汉族195名,男100名,女95名,平均年龄(38±9)岁。相互间无血缘关系,且均对检测项目知情同意。方法:实验于2003-06/2005-05在广西医科大学医学科学实验中心完成。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术检测155名壮族人和195名汉族人的白细胞介素1β基因5号外显子 3953C/T多态性,用基因直接计数法计算健康人群白细胞介素1β的基因型及等位基因频率,并结合文献与高加索人、非洲白人进行了不同种族间的分析比较。主要观察指标:不同种族人群白细胞介素1β( 3953)位点基因型频率及等位基因携带频率比较。结果:纳入壮族和汉族健康体检者分别155和195名,均进入结果分析。①广西壮、汉族人群白细胞介素1β基因 3953C/T基因型和等位基因分布频率相近(壮族人群CC,CT,TT基因型和C,T等位基因分布频率:94.8%,5.2%,0,97.4%,2.6%@汉族分别为93.3%,6.7%,0,96.7%,3.3%,P>0.05)。②高加索人、非洲白人与广西壮、汉两民族人群间白细胞介素1β基因型分布及等位基因携带频率差异明显(高加索人CC,CT,TT基因型和C,T等位基因分布频率:52.2%,43.9%,3.9%,74.1%,25.9%@非洲白人分别为60.4%,33.2%,6.4%,76.4%,23.6%,P<0.01)。结论:广西壮、汉族白细胞介素1β基因5号外显子 3953C/T多态性分布相近,但与高加索人、非洲白人分布存在明显差异。     

PCR结合银染技术分析pMCT118多态性

目的　了解广西汉族、壮族人群pMCT118遗传多态性。方法　应用PCR结合聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术对150名汉族无关个体及300名壮族无关个体进行基因扩增分型。结果　汉族人群中检出21个等位基因、63个基因型，壮族人群中校出23个等位基因、74个基因型。汉族人群杂合度、非父排除率、个体识别力及多态信息含量分别为0．873、0．770、0．973、0．879，而壮族则分别为0．824、0．762、0．968、0．875。广西汉、壮族人群pMCT118基因频率分布的差异无显性(P＞0．1)，且两个群体基因型频率分布均符合Hardy—Weinber8平衡。结论研究显示pMCT118位点为高度多态的遗传标记，在个体识别、亲权鉴定、群体遗传及器官移植等方面均有重要的应用价值。     

广西红水河流域壮族长寿家系MTP-493G/T基因多态性与血脂水平关系

目的探讨广西红水河流域壮族长寿家系微粒体三酰甘油转移蛋白（microsomal triglyceride transferprotein,MTP）-493G/T基因多态性与血脂水平的相关性。方法应用PCR-RFLP方法对广西红水河流域壮族长寿家系（HZL组）MTP基因的-493G/T位点进行基因分型,并与当地非壮族长寿家系（HNL组）、壮族非长寿家系（HZN组）进行比较;测定3组血清总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平,分析几种基因型与血脂水平的关系及其在长寿中的作用。结果 3组间等位基因及基因型频率差异无统计学意义（P〉0.05）;HZL组和HNL组TT基因型个体低密度脂蛋白胆固醇水平及HZL组TT基因型个体高密度脂蛋白胆固醇水平均明显低于GG和GT基因型个体（P〈0.05）;HZN组内各基因型个体血脂水平比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论广西红水河流域壮族长寿人群存在MTP-493G/T单碱基突变,TT基因型个体与低密度脂蛋白胆固醇水平降低有关。     

Genetic, autoimmune, and clinical characteristics of childhood- and adult-onset type 1 diabetes

OBJECTIVE: To assess whether there are any differences in genetic, autoimmune, or clinical features between type 1 diabetes presenting in childhood and that diagnosed later. RESEARCH DESIGN AND METHODS: We studied 352 individuals (252 children and adolescents <20 years of age and 100 adults > or =20 years of age) manifesting clinical signs of type 1 diabetes over a period of 7.5 years at a university hospital in northern Finland with a primary catchment area population of approximately 300,000. The patients were analyzed for susceptible and protective HLA-DQB1 alleles (*02, *0302, *0301, *0602, *0603, and *0604), islet cell antibodies (ICA), insulin autoantibodies, and antibodies to GAD and IA-2 (IA-2A). Their clinical symptoms and signs were recorded at diagnosis. RESULTS: The adult patients carried the high-risk DQB1*02/0302 genotype less frequently than the children and more often had protective genotypes. They also had a decreased frequency of all 4 single autoantibody specificities and of multiple (> or =3) autoantibodies. The proportion of patients testing negative for all autoantibodies was lower among the children than among the adults. IA-2A were associated with the DQB1*0302/x genotype in both the children and adults, and the same held true for ICA among the adults. The adults were characterized by a higher proportion of males, a longer duration of symptoms, and a lower frequency of infections during the preceding 3 months. In addition, they had a higher relative body weight on admission and milder signs of metabolic decompensation (higher pH, base excess, and bicarbonate concentrations) and a lower glycated hemoglobin level at diagnosis than the children. CONCLUSIONS: Clinical manifestation of type 1 diabetes before the age of 20 years is associated with a strong HLA-defined genetic disease susceptibility, an intensive humoral immune response to various beta-cell antigens, a higher frequency of preceding infections, and a shorter duration of symptoms and more severe metabolic decompensation at diagnosis. Taken together, these observations suggest that the age at clinical onset of type 1 diabetes is determined by the intensity of the beta-cell-destructive process, which is modulated by both genetic and environmental factors.