大叶紫薇叶中熊果酸的分离纯化及结构

利用溶剂萃取、薄层层析对大叶紫薇提取物中三萜化合物进行分离,通过 DSC,UV, IR和HPLC/MS对分离产物中具有降血糖的成分 3 进行结构分析,结果表明:以氯仿∶丙酮为展开剂,可在硅胶板中将大叶紫薇中三萜化合物有效分离。对分离出的成分 3,DSC测定其熔点为 283~287 ℃,焓值为43 727 J/g;UV最大吸收波长为 206 nm; MS测定其相对分子质量为 457; IR光谱符合乌苏果烷型结构.经分析,具有降血糖的成分3即为熊果酸.     

超滤分离癞葡萄水溶性降糖活性物质

采用超滤法从癞葡萄水提物中初步分离降血糖活性物质.考察了进料流量、操作压力、操作温度及料液质量浓度等工艺参数对超滤过程中膜通量的影响,并对超滤后两组分的相对分子质量分布及降血糖活性进行了测定.结果表明:用截留相对分子质量为10 000的中空纤维膜对癞葡萄水提物进行超滤分离的最适工艺条件为:进料流量200 L/h、温度25 ℃、压力0.10 MPa、料液质量浓度20 g/L.超滤有效地将癞葡萄水提物分成两个组分,其中相对质量较小的组分具有显著的降血糖活性,而相对质量较大的组分不具有降血糖活性.     

苜蓿叶蛋白及其酶解物抗氧化活性的比较

通过提取、酶解和超滤从苜蓿叶蛋白中分离得到相对分子质量不同的可溶性苜蓿叶蛋白及其酶解粗肽和精制肽,研究了其氨基酸组成和相对分子质量分布,并对其抗氧化活性进行了比较.结果表明:虽然从苜蓿叶分离的各种蛋白质其氨基酸组成相近,但相对分子质量大的可溶性苜蓿叶蛋白SALPr未发现抗氧化活性,而酶解后的粗肽CALPe以及超滤后的精制肽PALPe均表现出较强的抗氧化活性,并且存在剂量效应关系,而且PALPe抗氧化活性强于CALPe.这可能是由于PALPe中疏水性氨基酸和小分子肽的含量均高于CALPe.     

3-甲磺酰基丙基异硫代氰酸酯的提取分离与抗肿瘤的体外试验

为了得到具有抗癌有活性的、较高纯度的3-甲磺酰基丙基异硫代氰酸酯(iberin),作者研究了iberin的提取、分离及纯化工艺.确定了以丙酮为溶剂,从甘蓝种子的硫苷酶解产物中超声提取iberin粗提物,并用GC-MS鉴定其结构,再依次通过正相硅胶柱与Sephadex LH-20凝胶柱分离提纯得到iberin样品,HPLC测定其纯度为80.9%.采用体外细胞筛选试验研究iberin的抗肿瘤活性,结果显示iberin对小鼠白血病细胞P388和人鼻咽癌细胞CNE均有很强的抑制效果.     

大鼠睾丸间质细胞的原代培养、鉴定与功能监测

目的:采用改良方法对大鼠睾丸间质细胞进行分离、纯化和原代培养,以得到更高纯度和稳定的间质细胞原代培养体系。方法:采用酶消化法分离大鼠睾丸间质细胞,再用Percoll连续密度梯度离心除去生精细胞、支持细胞等杂细胞,实现进一步纯化;用3β-HSD特异性染色法鉴定间质细胞,同时采用放射免疫法测定间质细胞睾酮分泌活性。结果:培养的间质细胞纯度达到95%以上,每个睾丸可获取间质细胞约1×106个;通过3β-HSD特异性染色鉴定,该间质细胞胞质呈蓝黑色,而且细胞具有分泌睾酮的活性。结论:酶消化后以Percoll连续密度梯度离心可分离得到高纯度且具有睾酮分泌活性的间质细胞,操作简单易行,实验方法稳定。     

IL-6/STAT3信号通路在脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1表达上调中的作用

目的 探讨白细胞介素6/信号转导及转录激活因子3(IL-6/STAT3),信号通路在脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)表达上调中的作用.方法 健康雄性Wistar大鼠90只,10～14周龄;体重250～300 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=30):假手术组(S组)、脓毒症组(CLP组)和抗IL-6单克隆抗体组(IL-6组).采用盲肠结扎穿孔法制备大鼠脓毒症模型.IL-6组于术前1h时腹腔注射抗IL-6单克隆抗体0.5 mg/kg,S组和CLP组给予等容量生理盐水.于术后6、12、24、48、72 h时分别处死大鼠6只,取肺组织,分别采用酶联免疫吸附法和实时荧光定量聚合酶链反应法检测肺组织HMGB1含量和HMGB1 mRNA表达;采用凝胶阻滞电泳分析技术检测肺组织STAT3 DNA结合活性.结果 与S组比较,CLP组和IL-6组肺组织HMGB1含量和HMGB1 mRNA表达、STAT3DNA结合活性升高(P＜0.05);与CLP组比较,IL-6组肺组织HMGB1含量和HMGB1 mRNA表达、STAT3 DNA结合活性降低(P＜0.05).结论 IL-6/STAT3信号通路参与了脓毒症大鼠肺组织HMGB1表达上调.     

电泳制备家蝇幼虫抗菌肽及其性质

通过体壁损伤法诱导家蝇幼虫产生免疫血淋巴,经沸水浴热变性,透析浓缩处理,后经Tricine SDS PAGE得到诱导前后家蝇幼虫血淋巴中蛋白差异表达带,将该条带电泳回收,复性,抗菌活性检测等步骤,分离纯化得到3种抗菌肽:MDL 1、MDL 2、MDL 3.研究结果表明:MDL 1分子中富含Gly,相对分子质量为6200,对革兰氏阴性菌E.coli有较强抗性;MDL 2分子中富含Pro,相对分子质量为11000,对革兰氏阴性菌E.coli和革兰氏阳性菌S.aureus均有抗性;MDL 3分子中富含Gly,相对分子质量为14000,对革兰氏阳性菌S.aureus有较强抗性;3种抗菌肽具有很强的温度耐受性,均没有凝血活性和溶血活性.同时电泳制备抗菌肽的实验方法为此类微量生物活性物质的分离纯化提供了有效的途径.     

大承气颗粒药物血清对小鼠肠上皮内淋巴细胞产生/分泌IL-2的作用

目的:探讨大承气颗粒药物血清对小鼠肠上皮内淋巴细胞产生/分泌白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)的作用.方法:以不同浓度的大承气颗粒剂灌胃大鼠后不同时间点于无菌条件下采取腹腔静脉血,制备药物血清;分离培养肠上皮内淋巴细胞(intestinal intraepithelial lymphocytes,IELs),以药物血清作用于IELs,设培养液对照、IEL对照、正常血清对照,采用放射免疫分析法测定IL-2.结果:不同浓度大承气颗粒的药物血清在多数时间点的作用明显强于培养液对照、IEL对照及正常大鼠血清对照.正常大鼠血清对照组与IEL对照组的IL-2水平很接近.同时间点的药物血清比较,在30 min和12 h时,4%大承气颗粒的药物血清作用强;在3 h时,40%大承气颗粒的作用最强.4%、20%大承气颗粒的药物血清使小鼠分泌IL-2的作用在1.5 h达峰值,在24 h出现第二个峰值;40%大承气颗粒药物血清使IEL分泌IL-2的峰值在3 h.结论:不同浓度的大承气颗粒制备的药物血清具有使IEL产生/分泌IL-2的作用;该作用涉及到药物本身和药物在体内的活性代谢物和/或其诱导的内源性活性物质的作用.     

油茶肉质果、肉质叶提取液的保健功效

研究油茶肉质果、肉质叶提取液（EFF，EFY）的抗自由基、降血糖和抗癌作用。采用TBA比色法和小鼠红细胞氧化溶血抑制试验测定抗自由基作用；采用四氧嘧啶诱导糖尿病小鼠模型，分别用EFF和EFY灌胃7d测定降血糖作用；利用H22移植性实体瘤的方法研究抗癌作用。EFF具有显著消除体内自由基及抗脂质过氧化作用，与维生素E抗自由基及脂质过氧化效果相同；对实验性糖尿病小鼠血糖有明显的降低作用，接近中药消渴丸的效果；能明显抑制小鼠H22移植性实体瘤的生长，油茶肉质果组的抑瘤率为54．9％，油茶肉质叶组的抑瘤率为30．2％，对动物白细胞、脾指数、胸腺指数无明显影响。EFF和EFY能有效控制糖尿病小鼠的血糖水平，维持正常代谢，对正常血糖小鼠无影响；具有提高SOD活性，清除自由基的作用；对癌症小鼠有显著的抑癌效果，与已报道的20种具有显著抗癌作用的蔬菜相比，油茶肉质果排在第9位，油茶肉质叶排在第15位。     

JAK2/STAT3信号通路在川芎嗪减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的 评价Janus激酶2/信号转导与转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路在川芎嗪减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 健康成年雄性Wistar大鼠64只,体重250～300 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n＝ 16):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、川芎嗪组(T组)和JAK2特异性抑制剂AG490组(AG组).采用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min的方法制备心肌缺血再灌注损伤模型.S组开胸暴露心脏,左冠状动脉前降支仅穿线;T组于阻断左冠状动脉前降支前20 min静脉注射川芎嗪20 mg/kg; AG组于阻断左冠状动脉前降支前20min静脉注射川芎嗪20 mg/kg,再灌注前5min静脉注射AG490 3 μg/g.再灌注l20 nin时,取下腔静脉血样,测定血清肌酸激酶(CK)及乳酸脱氢酶(LDH)的活性;观察心肌超微结构,计算心肌梗死体积百分比.结果 与S组比较,I/R组、T组和AG组血清CK和LDH的活性升高(P<0.01);与I/R组比较,T组血清CK、LDH活性和心肌梗死体积百分比降低,AG组血清CK、LDH活性降低(P<0.01);与T组比较,AG组血清CK、LDH活性和心肌梗死体积百分比升高(P<0.05).T组心肌病理学损伤较I/R组和AG组减轻.结论 JAK2/STAT3信号通路参与了川芎嗪减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用.     

紫薇提取物面部去皱作用的研究

目的:探讨紫薇提取物去除面部皮肤皱纹的临床疗效。方法:招募20名面部有明显皱纹、肌肤松弛的健康受试者。两侧眼外眦和鼻唇沟按照随机原则分为产品侧和对照侧,分别使用产品或对照品。于使用前、使用后28天和56天对受试部位皮肤进行皮肤弹性测量,同时对受试者眼外眦部位的皱纹进行临床评分。结果:使用56天后,受试者眼外眦、鼻唇沟部位产品侧受试者皮肤弹性度较对照侧出现明显改善(P0.05)。使用28和56天,受试者产品侧鱼尾纹评分与对照侧评分相比明显降低(P0.05)。结论:紫薇提取物对面部皱纹具有一定的去皱作用,安全性好。     

大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导失巢凋亡过程中半胱氨酸蛋白酶-3的作用

[目的]探讨在体外诱导骨髓问充质干细胞失巢凋亡过程中半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的作用。[方法]将体外培养的骨髓间充质干细胞随机分为3组：对照组、诱导凋亡组、抑制凋亡组。应用Caspase-3活性检测试剂盒，荧光比色法和Western blotting法检测失巢凋亡中Caspase-3活性的改变；借助流式细胞仪分析骨髓间充质干细胞凋亡的变化。[结果]流式细胞术显示诱导凋亡组出现了明显的凋亡峰，凋亡率随诱导时间的延长而明显增加；其它两组的凋亡率较低且较稳定。Westem blotting检测和Caspase-3活性荧光检测显示，诱导凋亡组Caspase-3的活性以及蛋白表达水平随诱导凋亡时间的延长而明显升高，且与细胞凋亡率相关，以后者更灵敏，其余两组活性无明显变化。[结论]Caspase-3蛋白在诱导骨髓间充质干细胞失巢凋亡的过程中发挥着重要作用；抑制Caspase-3的活性可以有效降低细胞失巢凋亡率。     

抗PSA/抗CD3两种双特异性单链抗体的活性研究

目的:研究并比较已成功构建的抗PSA/抗CD3两种双特异性单链抗体的生物学活性。方法:利用流式细胞仪和51Cr释放试验评价抗PSA/抗CD3双特异性单链抗体的抗原亲和活性和体外介导杀伤靶细胞的效果。建立前列腺癌裸鼠模型,分为非治疗组、对照组、双特异性单链抗体(BsAb)组和多价双特异性单链抗体(mBsAb)组,分析两种双特异性单链抗体在体内介导细胞毒T细胞对肿瘤细胞杀伤的能力。结果:流式细胞仪结果显示:BsAb与LNCaP细胞和Jurkat细胞的阳性结合率分别为56.3%和55.4%;mBsAb与LNCaP细胞和Jurkat细胞的阳性结合率分别为74.0%和83.0%。在体外,有细胞毒T细胞存在时两种抗体均可引起前列腺癌细胞的裂解,裂解效率分别与抗体浓度和T细胞与靶细胞比例呈正相关。与对照组比较,接种前列腺癌细胞的裸鼠在体内注射激活的细胞毒T细胞的同时分别接受两种抗体的治疗后,肿瘤生长均明显受到抑制(P<0.05)。在亲和力、体外杀伤和体内抑制肿瘤生长等方面,mBsAb的活性明显优于BsAb。结论:抗PSA/抗人CD3 BsAb及其四聚体均具有良好的生物学活性,单链抗体四聚体的形成可以明显改善抗体的生物学活性。     

Caspase-3和Caspase-8基因沉默保护大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的 观察Caspase-3和Caspase-8基因沉默对大鼠肝脏缺血再灌注损伤((IRI)的保护作用.方法 分别构建针对大鼠caspase-3和caspase-8基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体.肝脏IRI前48 h经门静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)、空载体或Caspase-3和Caspase-8shRNA,实验随机分为4组,假手术组、PBS组、空载体组和shRNA组.阻断大鼠70%入肝血流40min,再灌注6、12、24 h、3、5、7 d检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,肝组织Caspase-3和Cmpase-8 mRNA的表达,Caspase-3和Caspase-8蛋白活性,细胞凋亡情况,丙二醛(MDA)以及超氧化物岐化酶(SOD)的含量.结果 与PBS组和空载体组比较,shRNA组再灌注6、12、24 h、3、5 d血清ALT和AST水平显著降低(P＜0.05),Caspase-3和Caspase-8 mRNA水平、Caspase-3和caspase-8蛋白活性(Cmpme-3活性:0.18±0.03比0.36±0.03和0.38±0.02,P＜0.05;caspase-8活性:0.16±0.03比0.32±0.02和0.34±0.03,P＜0.05)、肝细胞凋亡指数[(22.46±3.25)%比(35.24±2.33)%和(37.36±2.51)%,P＜0.05]和肝组织中MDA含量[(76.2±15.3)比(123.5±12.4)、(136.7±13.6)nmol/mg,P＜0.05)显著降低,SOD活性显著升高[(24.1±3.2)比(12.2±3.1)、(11.4±2.9)U/mg,P＜0.05].结论 Caspase-3和Caspase-8基因沉默可以抑制细胞凋亡的发生,从而起到保护肝脏IRI的作用.     

人胎盘提取液促成纤维细胞生长的研究

目的：从人胎盘中提取一种促成纤维细胞生长的美容产品。方法：通过对健康的新鲜胎盘的粗选、匀浆、酶消化、离心、DE-52阴离子交换柱层析，获得提取物，MTT法检测各抽提成分及不同成分混合的生物学活性。结果：柱层析后可获得三个不同成分：P1、P2、P3，P3活性明显，经混合活性不明显的P2后活性明显增强。结论：建立了从胎盘中提取活性成分的方法，以混合成分的形式作为一种美容产品，不仅可增强效果，还充分利用了资源，提高了单位产量。     

SMAD3 Functions as a Transcriptional Repressor of Acid‐Sensing Ion Channel 3 (ASIC3) in Nucleus Pulposus Cells of the Intervertebral Disc

The goal of this investigation was to study the regulation of acid‐sensing ion channel (ASIC)3 expression by TGFβ in the nucleus pulposus cells of the intervertebral disc. Analysis of human nucleus pulposus tissue indicated decreased ASIC3 and elevated TGFβ expression in the degenerate state. In a parallel study, treatment of nucleus pulposus cells with TGFβ resulted in decreased expression of ASIC3 mRNA and protein. Suppression of ASIC3 promoter activity was evident when the nucleus pulposus cells were treated with TGFβ or co‐transfected with the constitutively active ALK5 or a smad3 construct. On the other hand, co‐transfection of dominant negative smad3 or smad7 restored ASIC3 promoter activity. We validated the role of smad3 in controlling ASIC3 expression using cells derived from smad3‐null mice. ASIC3 promoter activity in the null cells was 2‐ to 3‐fold higher than the wildtype cells. Moreover, expression of smad3 in null cells decreased ASIC3 promoter activity by almost 50%. Further studies using deletion constructs and trichostatin A treatment showed that the full‐length smad3 was necessary, and the suppression involved recruitment of histone deacetylase to the promoter. To determine the mechanism, we evaluated the rat ASIC3 promoter sequence and noted the presence of two smad interacting CAGA box motifs. Gel‐shift and supershift analysis indicated that smad3 protein was bound to this motif. Chromatin immunoprecipitation analysis confirmed that smad3 bound both the CAGA elements. Results of these studies clearly show that TGFβ is highly expressed in the degenerate disc and through smad3 serves as a negative regulator of ASIC3 expression.     

Study on the antioxidant activity of Menthae longifoliae folium and effect of pesticide treatment with Topsin M on the antioxidant activity

This study evaluated both the antioxidant activity of Menthae longifoliae folium and the influence of Topsin M (a pesticide which is widely used nowadays) upon the antioxidant activity of the drug. In this respect, there have been used leaves of Mentha longifolia (L.) Huds., both untreated and treated with Topsin M. The leaves were dried, powdered and extracted with aqueous methanol. Taking into account the fact that polyphenols, and especially flavonoids act as antioxidants, these compounds were quantified in the crude extracts. Both the capacity of inhibition of 15-lipoxygenase and the diphenylpicrylhydrazyl radical-scavenging capacity were also evaluated. The undergone study highlighted the fact that crude extracts of Menthae longifoliae folium had a good antioxidant activity; the extracts were active both as diphenylpicrylhydrazyl radical scavengers and as 15-lipoxygenase inhibitors. Treatment with Topsin M did not consistently influence the antioxidant activity of the drug.     

蓝舌病毒湖北株对人前列腺癌PC-3细胞杀伤效应的研究

目的体外实验研究蓝舌病毒湖北株3（BTV-HbC3）对人前列腺癌PC-3细胞的杀伤效应并且初步探讨BTV-HbC3靶向性溶瘤的机制。方法观察PC-3细胞感染BTV-HbC3后所致的病变效应（CPE）变化;透射电镜观察细胞感染病毒后超微结构的变化;CCK-8法研究病毒致细胞病变效应的特征;DNA Ladder分析病毒诱导细胞凋亡的情况;流式细胞仪检测病毒对PC-3细胞凋亡的影响。结果 BTV-HbC3感染PC-3细胞后可见到明显的细胞效应;透射电镜发现胞浆内有大量病毒颗粒和典型细胞凋亡的形态变化;CCK-8法检测到病毒明显抑制细胞生长;DNA Ladder分析见阶梯状条带;流式细胞仪检测到明显细胞凋亡的存在,可见明显的亚二倍体峰。结论 BTV-HbC3在体外可有效地杀伤PC-3细胞,并能诱导其凋亡。