纳米金标记黄曲霉毒素B1新型检测方法

本文建立了两种基于银增强纳米金标记探针的高灵敏度免疫分析方法.方法一是用黄曲霉毒素B1(AFB1)抗体与金标抗原、待测抗原进行竞争免疫反应,然后加入银增强溶液,以金为核沉积生长银,通过检测光密度来确定待测物中AFB1的含量,该方法的检出限可达到0.01 ng/mL.方法二是在前一种方法的基础上,将银化学溶出,通过化学发光法检测沉积的银量来确定待测物中AFB1的含量,该方法的检出限可达到0.002 ng/mL.     

ELISA法检测红曲中的黄曲霉毒素B1

探讨了红曲中黄曲霉毒素B1的提取方法,发现在传统提取方法甲醇/水溶液(体积比1∶1)直接提取的基础上加氯仿进行液液萃取后,进行ELISA法测定其含量,可以消除假阳性,同时提高了检测灵敏度.在加标质量分数分别为2.5,5,10 μg/kg时,加标回收率达到101%～146.8%,方法的重复性较好,变异系数小于13%,样品最低检测限达2.5 μg/kg.     

黄曲霉毒素B1完全抗原构建中结合位点研究

通过衍生化反应,合成了AFB1羧甲基活化物,然后利用碳二亚胺法合成AFB1-O-BSA偶联物,构建AFB1完全抗原,并通过多种光谱和质谱对合成完全抗原过程中偶联比和结合位点进行研究。通过荧光光谱在分子水平上探讨AFB1与BSA载体蛋白的偶联机制及偶联反应对BSA的构象影响,推测黄曲霉毒素和牛血清白蛋白反应的结合部位,同时发生在BSA的酪氨酸残基和色氨酸残基上,使得BSA疏水性增加,肽链伸展程度降低。     

银杏叶提取物对黄曲霉毒素B_1诱导的大鼠肝癌的化学预防作用

目的 探讨银杏叶提取物(EGb761)对黄曲霉毒素B_1(AFB_1)致大鼠肝癌(HCC)发生发展的干预作用及其机制.方法 A组(AFB_1组28只)、B组(AFB_1+EGb761组29只)和C组(对照组14只)3组大鼠,定期肝活检并于第64周全部处死,观察实验肝癌发生过程中大鼠肝组织病理学、肝癌发生率、丙二醛(MDA)及8-羟基鸟嘌呤核苷(8-OHdG)蛋白表达的变化.结果 B组大鼠诱癌各时期肝脏损害均较A组轻,增生性病变发生亦较迟,肝癌诱发率(26.92%)明显低于A组(76.00%)(P<0.01),对照组无肿瘤发生.在各检测点(实验第14、28、42、64周),B组大鼠肝组织MDA含量(nmoL/mg蛋白)分别为0.14±0.01、0.24±0.01、0.36±0.01、0.60±0.01,均显著低于A组的0.27±0.01、0.66±0.01、0.56±0.01、0.93±0.02(P<0.05),在第64周时还明显低于C组的0.84±0.03(P<0.05);B组在第28、42和64周时8-OHdG蛋白的表达强度均显著低于A组(P<0.05).结论 EGb761能够明显抑制AFB_1诱发大鼠肝癌的发生,这可能与其降低了自由基所致的脂质过氧化反应、减轻AFB_1诱导的氧化损伤有关.     

广西地区乙肝病毒/黄曲霉毒素双暴露因素下肝细胞癌染色体遗传学改变的初步研究

目的 探讨广西地区人群乙肝病毒/黄曲霉毒素(HBV/AFB1)双暴露相关性肝细胞癌(HCC)染色体遗传学改变的特点.方法 32例HCC的癌组织,运用微阵列比较基因组杂交技术(Array CGH)检测其22对染色体的变化.结果 (1)32例HCC中,大部分的染色体拷贝数都有不同程度的变化.发生扩增的区段有1 q、7q、8q,其中1q、8q为高频扩增区段.发生缺失区段有1 p、4q、8p、9p、13q、14q、16p、16q、17p、18q、19p、Y,其中1p、4q、8p、16q、17p、19p为高频缺失区段;(2)同时,还存在着若干DNA拷贝数扩增或缺失的小区段.缺失显著的小区段有:2p25.1-p25.2、3q22.3-q23、7p14.1-p14.3.扩增显著的小区段有:9p13.2-9p21;(3)聚类分析发现:13q缺失发生率在HBsAg(+)/AFB1(+)、HBsAg(+)/AFB1(-)、HBsAg(-)/AFB1(+)、HBsAg(-)/AFB1(-)4个亚组中呈依次递减(x2=6.452,P＜0.05).4p在HBsAg(+)/AFB1(-)组中以扩增为主,而在HBsAg(-)/AFB1(+)组与HBsAg(-)/AFB1(-)组则以缺失为主.19q在HBsAg(+)/AFB1(+)组中以扩增为主,在HBsAg(-)/AFB1(+)组与HBsAg(-)/AFB1(-)组中以缺失为主.结论 广西地区肝癌染色体遗传学改变具有多样性,其中19p、2p25.1-25.2、3q22.3-q23的缺失及9p13.2-9p21的扩增可能为该地区肝癌特有的遗传学特征之一.13q的缺失可能与该地区乙肝病毒/黄曲霉毒素双因素的协同作用有关.     

结肠直肠癌B7S1表达与免疫浸润的关系

目的:探讨B7S1(由VTCN1编码)mRNA水平及蛋白质水平在结肠直肠癌(colorectal cancer,CRC)中的表达,分析其与临床病理特征、免疫细胞浸润以及预后的相关性,评估其作为CRC免疫治疗靶点的潜在应用价值.方法:利用Oncomine及TIMER数据库检索VTCN1在人体多种实体瘤中的表达.利用UAL...     

载脂蛋白A1、B联合检测对冠心病患者诊断的价值

目的评价联合检测载脂蛋白A1、载脂蛋白B对冠心病患者诊断的临床价值。方法采用全自动生化分析仪分别检测经冠状动脉造影确诊的55例冠心病患者（观察组）及53例冠状动脉造影阴性者（对照组）的血清ApoA1、ApoB的水平,并对结果进行比较分析。结果两组受检患者ApoA1、ApoB水平差异均具有统计学意义（P〈0.05）;ApoA1、ApoB联合检测作为冠心病诊断试验的指标,其真实性及预测性高于单独采用ApoA1或ApoB,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 ApoA1、ApoB联合检测对冠心病患者的诊断及预测具有重要意义。     

Kiss-1在大肠癌中表达的研究及其与NF-κB的关系

目的 探讨Kiss-1与NF-κB在大肠癌中的表达及其与生物学行为的关系,并分析两者的关系.方法 应用免疫组化SP法检测Kiss-1、NF-κB在103例大肠癌及正常大肠黏膜组织中的表达.结果 (1)Kiss-1蛋白在大肠癌中的阳性率为43.69%(45/103),在正常组织中的阳性率为79.61%(82/103),两者间的差异有统计学意义(P<0.05),Kiss-1在癌组织的表达明显低于对照组;NF-κB蛋白在大肠癌中的阳性率为66.02%(68/103),在正常组织中的阳性率为22.33%(23/103),两者间的差异有统计学意义(P<0.05),NF-κB在癌组织的表达明显高于对照组.(2)Kiss-1在大肠癌中的表达与淋巴结转移及临床分期有关(P<0.05).(3)NF-κB在大肠癌中的表达与淋巴结转移、临床分期及浸润深度有关(P<0.05),Kiss-1及NF-κB与性别、年龄等其他临床病理参数无关.(4)Kiss-1与NF-κB在大肠癌中的表达呈负相关(χ2=6.7811,P<0.05).结论 Kiss-1和NF-κB的异常表达可能与大肠癌的发生发展密切相关,两者在肿瘤的恶性进程中扮演重要角色.     

严重烧伤后细胞免疫改变及其与高迁移率族蛋白B1的相关性

目的 探讨严重烧伤患者T细胞免疫功能的变化规律及其与高迁移率组蛋白B1(HMGB1)的相关性.方法 采集35例烧伤体表总面积>30%的患者静脉血样,根据是否并发多器官功能障碍综合征(MODS)分组(MODS组13例、非MODS组22例),采集患者伤后第1、3、5、7、14、21、28大的外周静脉血,采用酶联免疫吸附试验检测血浆HMGB1水平;观察外周血T淋巴细胞增殖反应和白细胞介素2(IL-2)的产生能力,并通过流式细胞仪检测CD4+/CD8+T细胞的比值.结果 严重烧伤患者伤后第1天血浆HMGB1水平即明显升高,其中伤后第1、7、21、28天MODS组HMGB1显著高于非MODS组(P<0.05).两组间比较,外周血T淋巴细胞增殖反应和IL-2的产生能力、CIM4+/CD8+T淋巴细胞比值在伤后第1、14、21、28天MODS组显著低于非MODS组(P均<0.05).大面积烧伤患者伤后血浆HMGB1含量与细胞免疫功能指标包括T淋巴细胞增殖活性、IL-2含量、CD4+/CD8+T细胞比值呈显著负相关(P<0.05).结论 大面积烧伤后T淋巴细胞免疫功能紊乱与患者并发MODS密切相关,严重烧伤患者血浆HMGBI水平的持续升高对机体细胞免疫功能异常具有显著影响.     

肾脏缺血再灌注损伤过程中天然免疫分子高迁移率族蛋白B1释放变化

目的 观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在小鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)中的表达变化.方法 建立小鼠IRI模型,再灌注0、3、6 h或24 h后取外周血及左肾,测定血肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平,免疫组织化学及Western blot检测肾组织全蛋白和胞质蛋白HMGB1的表达,并观察病理学变化(HE)及细胞凋亡.结果与假手术组比较,再灌注0 h时小鼠血清Cr和BUN无明显升高,而再灌注3、6、24 h后呈阶梯性显著性升高.假手术组肾组织HMGB1几乎均表达于细胞核内,而肾脏缺血损伤后HMGB1即开始在(主要是肾小管上皮细胞)胞质或胞外表达,且HMGB1在细胞核外的表达量在再灌注3 h时最强,之后缓慢减弱,而24 h内细胞总蛋白HMGB1表达量未见明显变化.再灌注0、24 h病理损伤渐进性加重,而凋亡细胞显著性增加.结论 HMGB1在肾IRI早期表达总量恒定而表达部位发生改变,且表达部位的改变先于肾功能的变化,HMGB1可能作为重要早期炎症因子在IRI启动中发挥作用.     

Ameliorative effect of selenium nanoparticles on the structure and function of testis and in vitro embryo development in Aflatoxin B1-exposed male mice

The purpose of the research was to investigate the therapeutic ability of selenium nanoparticles (Se-NPs) on the aflatoxin B1 (AFB1) toxicity induced in the male reproductive system. For this experiment, the mature male mice were put into four groups. Control (0.5 ml PBS, 60 days; IP, n = 7), Se-NPs (0.5 µg kg⁻¹ day⁻¹ for 60 days; IP), AFB1 (4.5 mg kg⁻¹ day⁻¹ for 60 days; IP) and AFB1 + Se-NPs (4.5 mg kg⁻¹ day⁻¹ + 0.5 µg kg⁻¹ day⁻¹ for 60 days; IP). After treatment, the histological structure of testis, serum testosterone level and sperm parameters, including concentration, motility, viability, morphology and DNA fragmentation, were examined. The results demonstrated that the AFB1 destroyed the testicular tissue structure and decreased the sperm concentration, motility, viability and normal morphology significantly. AFB1 also could significantly increase sperm DNA fragmentation and reduce in vitro fertilisation and embryo development compared to the control group (p < .001). Our data show that Se-NPs could inhibit AFB1-induced damage to the testis and improve sperm parameters as well as in vitro fertilisation and embryo production in AFB1 exposed male mice. This study revealed that the administration of Se-NPs could attenuate the testicular injury of AFB1 and improve the male reproductive system function in AFB1 exposed mice.     

pVAX1-Ag85B质粒的构建及其免疫原性的可视化研究

构建以Ag85B基因为基础的DNA疫苗,并用活体红色荧光成像探讨其在动物体内免疫原性。方法：以pET28a—Ag85B基因组DNA为模板,用PCR扩增获得Ag85B全长基因;将PCR产物构建成pUCm—Ag85B亚克隆;经限制性内切酶消化后克隆人pVAX1载体中构建pVAX1-Ag85B,酶切、DNA测序鉴定。并将构建的DNA疫苗经肌肉免疫可视化膀胱癌移植瘤模型,通过活体红色荧光成像,从整体上直接、可视地观测Ag85B的免疫原性。结果：经NheI和HindⅢ双酶切、DNA测序鉴定后证实,Ag85B基因定向克隆人pVAX1载体,碱基无突变,序列完全正确。免疫小鼠后,pVAX1-Ag85B组和BCG组均可提高淋巴细胞增殖活性,但效果不及卡介苗。结论：成功地构建了pVAX1-Ag85B质粒,为膀胱肿瘤的基因免疫治疗提供可靠的实验方法。免疫小鼠后,可提高膀胱癌小鼠免疫水平,但效果不及卡介苗。     

B7H1及其受体病理作用的研究进展

B7H1是近年来发现的B7家族的一个新成员.它与活化T细胞表面表达的PD-1受体结合后,具有抑制T细胞增生和产生细胞因子的作用.研究发现B7H1在外周耐受、自身免疫病、慢性感染等疾病中具有负性调节作用.近期发现许多肿瘤细胞表面亦可大量B7H1分子表达,参与肿瘤的免疫逃逸.阻断B7H1/PD-1通路可能有助于自身免疫病及恶性肿瘤的治疗.     

Steroidogenic and Spermatogenic Potentials of the Male Rat after Acute Treatment with Aflatoxin B1

150 microgram of aflatoxin B1 were injected i.p]. to male rats on three occasions at intervals 48 h. Sperm production and plasma and testicular testosterone concentrations were determined in rats killed 24 h after the last dose of aflatoxin with or without stimulation with human chorionic gonadotropin (HCG). Neither sperm production nor testosterone secreting capacity was significantly depressed by the acute aflatoxin treatment. The Leydig cell function was however impaired as indicated by the extremely reduced responsiveness of the Leydig cells of the aflatoxin-pretreated rats to HCG stimulation. It may be concluded that the disruption of spermatogenesis by chronic aflatoxin treatment is preceded and caused by the impairment of the Leydig cell function and the resultant drop in testosterone in the testis.     

pVAX1-Ag85B的构建及其免疫原性的初步探索

目的构建以Ag85B基因为基础的DNA疫苗,并对其在小鼠体内的免疫原性进行初步分析。方法以pET28a-Ag85B基因组DNA为模板,PCR扩增获得Ag85B全长基因;将PCR产物构建成pUCm-Ag85B亚克隆;经限制性内切酶消化后克隆入pVAX1载体中构建真核表达质粒pVAX1-Ag85B,酶切、DNA测序鉴定。并将构建的DNA疫苗经肌肉免疫荷瘤小鼠,检测血清特异性抗体水平和脾淋巴细胞的增殖活性,并与BCG组、空白质粒组、生理盐水组相比较。结果经NheⅠ和HindⅢ双酶切、DNA测序鉴定后证实,Ag85B基因定向克隆入pVAX1载体,碱基无突变,序列完全正确。免疫荷瘤小鼠后,pVAX1-Ag85B组和BCG组均可提高淋巴细胞增殖活性,但效果不及卡介苗;pVAX1-Ag85B组的抗体滴度为1∶400,BCG免疫组的抗体滴度为1∶800。结论成功地构建了pVAX1-Ag85B质粒,为膀胱肿瘤的基因免疫治疗提供可靠的实验依据。免疫小鼠后,可提高小鼠免疫水平,但效果不及卡介苗。     

Overexpression and enhanced specific activity of aldoketo reductases (AKR1B1 & AKR1B10) in human breast cancers

The incidence of breast cancer in India is on the rise and is rapidly becoming the primary cancer in Indian women. The aldoketo reductase (AKR) family has more than 190 proteins including aldose reductase (AKR1B1) and aldose reductase like protein (AKR1B10). Apart from liver cancer, the status of AKR1B1 and AKR1B10 with respect to their expression and activity has not been reported in other human cancers. We studied the specific activity and expression of AKR1B1 and AKR1B10 in breast non tumor and tumor tissues and in the blood. Fresh post-surgical breast cancer and non-cancer tissues and blood were collected from the subjects who were admitted for surgical therapy. Malignant, benign and pre-surgical chemotherapy samples were evaluated by histopathology scoring. Expression of AKR1B1 and AKR1B10 was carried out by immunoblotting and immunohistochemistry (IHC) while specific activity was determined spectrophotometrically. The specific activity of AKR1B1 was significantly higher in red blood cells (RBC) in all three grades of primary surgical and post-chemotherapy samples. Specific activity of both AKR1B1 and AKR1B10 increased in tumor samples compared to their corresponding non tumor samples (primary surgical and post-chemotherapy). Immunoblotting and IHC data also indicated overexpression of AKR1B1 in all grades of tumors compared to their corresponding non tumor samples. There was no change in the specific activity of AKR1B1 in benign samples compared to all grades of tumor and non-tumors.     

肾透明细胞癌组织中B7-H1的表达及其与预后的关系

目的探讨B7-H1在肾透明细胞癌组织中的表达及其与预后的关系。方法采用免疫组织化学方法检测132例肾透明细胞癌患者术后肿瘤标本中B7-H1的表达,单因素及多因素分析B7-H1的表达与预后的关系。结果 132例患者中,B7-H1阳性46例（34.85%）,其中无瘤生存26例,复发6例,死亡14例,至最后随访期限,疾病无进展生存期（PFS）为（32.29&#177;12.56）个月,总生存期（OS）为（27.08&#177;15.43）个月;阴性86例（65.15%）,其中无瘤生存79例,复发3例,死亡4例,PFS为（38.77&#177;20.00）个月,OS为（37.02&#177;20.00）个月,两者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。单因素分析表明,B7-H1阳性表达与肿瘤大小、原发肿瘤分期、区域淋巴结转移、远处转移、临床分期、组织学分级呈显著正相关（均P〈0.05）,而与患者年龄、性别无相关性。多因素分析表明,在控制肿瘤大小、TNM分期、临床分期、组织学分级的影响后,B7-H1阳性表达具有更高的肿瘤特异性死亡率[危险因素（RR）3.918,95%可信区间（95%CI）1.305～11.765,P〈0.05]和复发率[RR4.486,95%CI1.404～14.333,P〈0.05]。结论 B7-H1阳性表达与肾透明细胞癌患者术后死亡率及复发率呈正相关,B7-H1是肾透明细胞癌的一个独立预后因素。