黑曲霉产木聚糖酶的特性

研究了木聚糖酶产生菌黑曲霉(A.niger)238的产酶特性和麸曲的浸提条件,并对其浸提酶液进行浓缩.结果表明,菌株黑曲霉(A.niger)238产木聚糖酶受诱导物的影响,发酵时间在68～72h期间达到产酶高峰,酶活力为286U/mL.最佳氮源为(NH4)2SO4,装料量为每瓶10g,接种量为每瓶0.3mL.其发酵麸曲用固液比为1∶5的2g/dLCaCl2溶液,30℃浸提1.5h;浸提液采用25℃,40kPa,冷却水温度18℃条件超滤浓缩可获得90%以上回收率.     

KPC-12型碳青霉烯酶分子进化及与β-内酰胺类药物分子对接分析

目的 分析KPC-12型碳青霉烯酶分子进化及其与10种β-内酰胺类药物的结合自由能.方法 根据有无碳青霉烯酶活性将A类β-内酰胺酶分为两蔟,用MEGA4.1软件中的Minimum Evolution法分析KPC-2～ KPC-13、SFC-1、SME-1、IMI-1和NMC-A型具有碳青霉烯酶活性的A类β-内酰胺酶及TEM-1和SHV-1型无碳青霉烯酶活性的A类β-内酰胺酶氨基酸序列的分子进化.根据KPC-2型晶体结构在SWISS-MODEL数据库作KPC-12型同源建模,并用ArgusLab 4.1软件中的DOCK模块做KPC-12型碳青霉烯酶与10种β-内酰胺类药物底物的分子对接,最后计算酶与底物的结合自由能(△G).结果 KPC-12型与KPC-2型分子进化最为接近.KPC-12型碳青霉烯酶与β-内酰胺类药物结合自由能下降居前3位的为青霉素G钠盐、厄他培南和氨苄西林,△G分别为-8.45149、-8.36383和-8.19326 kcal/mol;结合自由能下降排在后2位的为氨曲南和克拉维酸,△G分别为-6.50614和-6.88533 kcal/mol.结论 KPC-12型碳青霉烯酶对青霉素G钠盐、厄他培南和氨苄西林的催化能力高,而对氨曲南和克拉维酸的催化能力低.     

adc-57型头孢菌素酶分子进化及与底物结合自由能分析

目的 分析adc-57型头孢菌素酶分子进化及其对各种底物的结合自由能.方法 用mega 5.0软件中的最小进化法分析adc-57和其他19种β-内酰胺酶的分子进化,参照同类酶cmy-2型酶作同源建模获得adc67型头孢菌素酶分子的3d结构,并用arguslab 4.1软件中的dock模块作adc-57型头孢菌素酶与11种β-内酰胺类药物底物的分子对接,最后计算酶与底物的结合自由能值(△g).结果 adc-57与cmy-2、dha-1、adc-7、adc-56归属为c类β-内酰胺酶,均为头孢菌素酶,且与adc-56关系最为密切.adc-57与β-内酰胺类药物结合自由能下降居前3位的为厄他培南、头孢西丁和头孢他啶,结合自由能下降排在后2位的为克拉维酸和氨曲南.结论 adc-57型头孢菌素酶对厄他培南、头孢西丁和头孢他啶的催化能力高,而对克拉维酸和氨曲南的催化能力低.分子对接分析有助于了解酶对各种β-内酰胺类药物(各种底物)的水解能力. abstract： objective to analyze molecular evolution and binding free energies of cephalosporinase adc-57.methods minimum evolution method in mega 5.0 was used to analyze molecular evolution of cephalosporinase adc-57 and other 19 kinds of beta-lactamases.tertiary structure of adc-57 was predicted by homology modeling referring to tertiary structure of cmy-2.the molecular docking of adc-57 to 11kinds of beta-lactams substrates was performed using dock module in arguslab 4.1and the binding free energies (△g) was calculated.results adc-57,cmy-2,dha-1,adc-7,adc-56 were all belong to class c beta-lactamase,and molecular evolution between adc-57 and adc-56 was closest.the top three antibiotics with declining binding free energy of beta-lactams were ertapenem,cefoxitin and ceftazidine,while the last two were clavulanic acid and aztreonam.conclusions catalytic activities of cephalosporinase adc-57 to ertapenem,cefoxitin and ceftazidine are high,while to clavulanic acid and aztreonam are low. hydrolytic activities of enzyme to beta-lactams (substrates) can be analyzed by molecular docking.     

KPC型碳青霉烯酶分子进化及与底物结合自由能分析

目的 分析KPC-2、KPC-5和KPC-10型碳青霉烯酶的分子进化及与10种β-内酰胺类药物的结合自由能.方法 用MEGA 4.1软件中的Minimum Evolution法分析KPC-2、KPC-5和KPC-10型碳青霉烯酶的分子进化,用ArgusLab 4.1软件中的Dock模块作这3种酶与10种β-内酰胺类药物的分子对接,并计算酶与底物的结合自由能（△G）.结果 有碳青霉烯酶活性的A类β-内酰胺酶在同一簇且保守性较好,无碳青霉烯酶活性的普通A类β-内酰胺酶则在另一簇.KPC-2、KPC-5和KPC-10型碳青霉烯酶与碳青霉烯类药物结合自由能均下降,且降幅居前,它们的结合自由能比第三代头孢类抗生素更低.结合自由能较高的为氨曲南和克拉维酸.结论 KPC型碳青霉烯酶对碳青霉烯类药物的催化能力高于对第三代头孢类抗生素的催化能力,对氨曲南和克拉维酸的催化活性最低.     

大肠埃希菌和志贺菌mazef基因搜索及蛋白分子进化分析

目的 对已完成基因组测序的10株大肠埃希菌、6株志贺氏菌和1株未定名肠杆菌进行maze和mazf蛋白的分子进化分析.方法 用biocyc提供的pathway tools(13.5版)搜索已完成基因组测序的10株大肠埃希菌、6株志贺菌和1株未定名肠杆菌毒素mazf编码基因mazf(别名chpa)和抗毒素maze编码基因maze(别名chpr),再用mega4.1软件中的minimum evolution法对maze和mazf蛋白做分子进化分析.结果 共有12株搜索到毒素mazf(编码基因为mazf),11株搜索到抗毒素maze(编码基因为maze),另有5株没有搜索到mazef编码基因.分子进化分析提示大肠埃希菌和志贺菌的maze和mazf的保守性较好.结论 mazef是在原核染色体发现的第一个毒素-抗毒素(ta)系统,但不是每株大肠埃希菌和志贺菌均存在这个系统,有可能存在其他ta系统.mazef缺失株表现为对抗菌约物抵抗,又因mazef介导细菌的细胞程序性死亡,mazef有可能成为抗菌药物的新靶位. abstract： objective to perform molecular evolution analysis of mazef gene in genome sequenced strains of escherichia coli and shigella. methods pathway tools (version 13.5) provided by biocyc was used to search encoding gene mazf of toxin mazf ( chpa) and encoding gene maze of antitoxin maze (chpr) in genome sequenced 10 strains of escherichia coli, 6 strains of shigella and 1 strain of unkown enterobacteria. then minimum evolution method in mega4. 1 software was used to analyze molecular evolution of maze and mazf. results encoding gene mazf of toxin mazf was found in 12 strains, and encoding gene maze of antitoxin maze was found in 11 strains, while neither maze nor mazf was found in rest 5 strains. both maze and mazf had good conservation in molecular evolution analysis. conclusions mazef is the first toxin-antitoxin system found in prokaryotic chromosomes, but not in all strains of escherichia coli and shigella. mazef deletion is associated with antibiotic resistance and it also mediates programmed cell death in bacteria, so mazef might be a new target for antimicrobial agents.     

顶青霉木聚糖酶的分离纯化与鉴定

使用硫酸铵分级沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５凝胶色谱脱盐、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５和ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－５０离子交换色谱等分离纯化技术，从顶青霉（Ｐｅｎｃｉｌｉｕｍｃｏｒｙｌｏｐｈｉｌｕｍ）培养液中分离到３种木聚糖酶组分，分别称为ＰａｒｔＡ、ＰａｒｔＢ和ＰａｒｔＣ．ＰａｒｔＢ和ＰａｒｔＣ经ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００凝胶过滤色谱和ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和色谱进一步分离纯化，分别得到２个纯木聚糖酶组分．ＰａｒｔＢ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为单带，相对分子质量为２４２００；ＰａｒｔＣ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定基本为单带，相对分子质量为４８３００     

顶青霉木聚糖酶的纯化与性质

从顶青霉(Pencillium corylophilum)P-3-31培养液中分离到3种木聚糖酶组分，分别称为PartA、PartB和PartC.PartB进一步纯化，经SDS-PAGE鉴定为单带，相对分子质量为24200；PartC进一步纯化，经SDS-PAGE鉴定也是单带，相对分子质量为48300.PartA和PartB的最适反应条件为pH4.0,45℃;PartC的最适反应条件为pH5.5,55℃.PartA和PartB对木聚糖以外的底物不能水解；PartC具有水解CMC的交叉活性和β-木糖苷酶活性，但不能将木二糖水解成木糖.3个纯化酶组分和粗酶对不同来源的木聚糖底物均表现出不同的活性.对于粗酶，若桦木木聚糖为底物的相对酶活为100%，则玉米芯木聚糖为底物的相对酶活为143%，蔗渣木聚糖为底物的相对酶活为124%.     

F/10和G/11木聚糖酶家族的不同热稳定性机制

应用生物信息学方法分析了木聚糖酶初级序列中20种氨基酸同其最适温度之间的关系,发现在F/10家族中有正相关作用的氨基酸是W,负相关作用的是 A,D,H,S;理论上最高最适温度是119 8 ℃在G/11家族中有正相关作用的氨基酸是L,D,P,Y,负相关作用的是 H;理论上最高最适温度为105 6 ℃.惊奇地发现在不同家族中 D起不同的作用,这只能从它们各自不同的蛋白质空间结构上进行解释.从初级序列基础上证明了木聚糖酶的不同蛋白质家族有不同的热稳定性机制.     

细菌木聚糖酶粗酶的提取及性质的研究

在 2 0℃条件下 ,采用相对饱和度为 50 %的 (NH4) 2 SO4一步盐析并经 4 5～ 50℃烘干 1 0h得到木聚糖酶粗酶粉 .初步研究了该酶的一些基本性质 ,结果表明 ,该酶在 55℃下 ,pH值为 4 .6～1 0 .5之间较稳定 .最适作用温度与 pH值分别为 50℃和 7.6.该粗酶产品适合造纸工业的纸浆处理 .     

宇佐美曲霉木聚糖酶的纯化和性质

采用缓冲液浸提、硫酸铵盐析、Phenyl—Sepharose CL-4B疏水层析和Sephadex G-75凝胶过滤层析等分离纯化手段，从宇佐美曲霉E001固态发酵曲中分离出木聚糖酶组分，再经DEAE-Sepharose fast flow阴离子交换层析进一步纯化，获得了两种电泳纯木聚糖酶XynⅠ和XynⅡ．分别采用SDS-PAGEG-75凝胶过滤层析测得XynⅠ、XynⅡ相对分子质量，两种酶均为单体蛋白质；等电聚焦电泳测得两种酶的等电点（pI）；测定了XynⅠ、XynⅡ的酶动力学常数；序列测定XynⅡN末端15个氨基酸残基的．     

草菇木聚糖酶的纯化提取和酶学性质

草菇产胞外木聚糖酶通过各级浓缩和纯化,获得接近电泳纯蛋白.通过SDS PAGE测得相对分子质量为24500.木聚糖酶为糖基化修饰的蛋白,含有质量分数20.24%的糖.O 糖基化能增加木聚糖酶的活性,O 和N 糖基化都能提高木聚糖酶的稳定性.5min反应,草菇木聚糖酶在60℃和pH值5.65时活性最高.在此条件下,该酶的Km值为3.87mg/mL,Vmax为1250IU/mg.纯酶的稳定pH值为6.54,57℃时半衰期为1h.     

木聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达及表达蛋白的纯化

热海栖热袍菌Thermotogamaritima是一个嗜极端高温的厌氧细菌,其产生的耐高温和热稳定性的木聚糖酶B具有很好的工业应用前景.利用PCR技术将嗜热产乙醇菌T.maritima编码高度热稳定性木聚糖酶的基因克隆至原核表达载体pET-20b,使之与组氨酸标签融合,并在大肠杆菌JM109(DE3)中得到了高效表达.最后采用金属Ni2+螯和层析柱对基因表达产物进行了纯化.     

草菇木聚糖酶SDS-PAGE后的复性及活性染色

草菇木聚糖酶经SDS PAGE后在胶中能够原位复性,通过银染和刚果红活性染色比较,可确定该酶在胶中的位置.草菇木聚糖酶是单亚基蛋白,相对分子质量为24500.     

短芽孢杆菌耐碱性木聚糖酶（xylB）的分子生物学研究

根据已发表的环状芽孢杆菌(Bacillus circulan)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)木聚糖酶基因序列设计引物,首次扩增出短芽孢杆菌(Bacillus brevis)中的β-1,4-内切木聚糖酶(以下简称木聚糖酶,E.C.3.2.1.8)基因片段.序列分析表明,该基因与已登录的木聚糖酶基因AF490979.1和AF490980.1分别有97%和96%的同源性,与其它芽孢杆菌属的同源性也较高.将此基因片段插入表达载体pET-30a(+)构建重组质粒,转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3).重组基因工程菌破碎后进行SDS-PAGE电泳检测,结果表明,IPTG诱导后,木聚糖酶基因在大肠杆菌的胞内获得高效表达,且酶活力最高可达26.14 U/mL.重组木聚糖酶最适温度为50℃,最适pH为9.0.     

大肠杆菌生产重组极耐热木聚糖酶的诱导条件及其酶学性质

构建重组菌(JM109/pTrc 99A xylIV)作为极耐热木聚糖酶的生产菌株,研究了IPTG诱导时间、IPTG浓度、重组菌生长的不同阶段加IPTG和温度对重组菌生产极耐热木聚糖酶的影响以及它的酶学性质.结果表明,IPTG诱导8h后极耐热木聚糖酶的表达量基本维持不变,0.5～5mmol/L浓度的IPTG诱导重组菌表达极耐热木聚糖酶的效果基本相同;当重组菌生长到OD600为1.2左右时加IPTG诱导最好,诱导温度对极耐热木聚糖酶表达水平的影响不大.重组耐热木聚糖酶的最适反应pH值为5.4～5.8,重组极耐热木聚糖酶的最适反应温度大于100℃,重组极耐热木聚糖酶在pH值4.2～7.5都比较稳定,重组极耐热木聚糖酶的温度稳定性好,在90℃下保温2h后残存酶活还有90%.     

米曲霉RIBl28耐酸性木聚糖酶的研究

通过RBB-Xylan筛选平板和固体培养方法获得了产木聚糖酶菌株米曲霉(Aspergillus     

Evolution of surgery

The problem of hemothorax has been presented from the standpoint of its pathology and management. The results of the experiences encountered in this war have cleared some doubt and uncertainty in regard to treatment and have offered many of us an opportunity to observe the pathology of hemothorax. The mortality and morbidity of chest wounds in this war has been greatly improved in this war by: (1) Excellent early primary surgery in the hospitals in the combat zone; (2) the availability of excellent endotracheal anesthesia; (3) the abundance of the chemotherapeutic agents penicillin and sulfanilamide; (4) the abundance and availability of blood and plasma; (5) the recognition of the value of postoperative endotracheal and bronchoscopic suction.Active treatment after careful evaluation, in the form of chest aspirations appears to give the best results as compared to conservative treatment. In the case in which bleeding continues a thoracotomy is indicated. In cases of large clotted hemothorax, thoracotomy and decortication offers a prompt return to a normal anatomical and physiological restoration of the involved lung.