解毒活血通络中药复方含药血清对人脐静脉内皮细胞LOX-1、TNF-α、ICAM-1表达的影响

目的:研究解毒活血通络中药复方防治动脉粥样硬化的作用机制及其效应靶点。方法:选取新西兰大耳白兔18只,随机分为3组,分别以生理盐水和解毒活血通络中药复方、阿托伐他汀连续灌胃7d,心脏采血,分离血清;体外培养人脐静脉内皮细胞,用脂多糖(LPS)刺激后,用含药血清干预,收集细胞,用Real-time PCR方法和Western Blot方法分别检测凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)mRNA和蛋白表达、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA表达。结果:与空白对照组比较,用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起LOX-1 mRNA和蛋白、TNF-α、ICAM-1 mRNA的高表达(P<0.01),与模型组比较,用中药含药血清干预,显著抑制LOX-1mRNA和蛋白、TNF-α、ICAM-1 mRNA的高表达(P<0.01,P<0.05)。结论:解毒活血通络中药复方对LPS刺激后的人脐静脉内皮细胞具有保护作用,其机制与解毒活血通络中药复方对LOX-1、TNF-α和ICAM-1表达有抑制作用,减少单核细胞与血管内皮细胞黏附有关。     

益气活血复方对Toll样受体4信号转导通路及下游炎症因子的影响

目的研究益气活血复方含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)信号转导通路及下游炎症因子血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的影响,从基因和蛋白水平研究益气活血复方防治动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的机制。方法含药血清的制备:选择新西兰大耳白兔20只,随机分为4组,即空白对照组、中药高浓度组、中药中浓度组、中药低浓度组,每组5只。正常组以生理盐水灌胃;中药高浓度组、中药中浓度组、中药低浓度组分别以高、中、低浓度益气活血复方灌胃,连续灌胃7天。在末次灌胃给药2h后,心脏取血,离心后分离血清。体外培养HUVECs,随机分为6组,即空白对照组、模型组、西药对照组、中药高、中、低浓度组,用LPS刺激2h后,分别加入高、中、低浓度益气活血复方含药血清干预,24h后收集细胞,用荧光定量PCR方法测定TLR4、骨髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)、Toll样受体相关分子(TRAM)、Toll样受体相关的干扰素活化因子(TRIF)、核转录因子-κB(NF-κB)、LOX-1、TNF-α及ICAM-1的基因表达,用Western blot法分别测定TLR4、MyD88、TRAF-6、LOX-1的蛋白表达。结果用LPS刺激HUVECs后,引起TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM、TRIF、NF-κB、LOX-1、TNF-α及ICAM-1的高表达,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),而用益气活血复方含药血清干预以后显著抑制TLR4、MyD88、TRAF-6、NF-κB、LOX-1、TNF-α及ICAM-1的高表达,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05);对TRAM和TRIF无抑制作用。结论益气活血复方可抑制TLR4信号转导通路及LOX-1、TNF-α及ICAM-1的表达,这可能是其治疗各种免疫炎症性疾病及防治动脉粥样硬化作用的机制之一。     

3种不同治法的中药复方防治动脉粥样硬化的机制研究

目的研究补阳还五汤、血府逐瘀汤、四君子汤3种不同治法的中药复方含药血清对血管内皮细胞Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/NF-κB信号转导通路及下游血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1,LOX-1)、TNF-α、血管细胞黏附因子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)及细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)等炎症因子的影响,探讨其防治动脉粥样硬化的机理。方法将20只新西兰白兔随机分为正常血清组、补阳还五汤血清组(6.7 g/kg)、血府逐瘀汤血清组(3.6 g/kg)及四君子汤血清组(1.6 g/kg),每组5只,给药7天,末次给药2 h后,心脏采血,每只约取50 mL制备药物血清。培养人脐静脉内皮细胞株ECV304 18 h后随机分为空白对照组、模型组、西药对照组、补阳还五汤组、血府逐瘀汤组、四君子汤组,除空白对照组外其他各组用LPS刺激2 h后,西药对照组及中药各组给予含10%对应含药血清干预24 h。用荧光定量PCR方法和Western blot方法测定TLR4、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(tumor necrosis factor receptor-associated factor-6,TRAF-6)、NF-κB、LOX-1、TNF-α、VCAM-1及ICAM-1的基因及蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组TLR4、MyD88、TRAF-6、NF-κB、LOX-1、TNF-α、VCAM-1及ICAM-1mRNA表达升高,TLR4、NF-κB、LOX-1、TNF-α、VCAM-1及ICAM-1蛋白表达水平明显升高(P0.01);与模型组比较,补阳还五汤组、血府逐瘀汤组及西药对照组可以抑制各指标mRNA及蛋白表达,差异有统计学意义(P0.05);而补阳还五汤组、血府逐瘀汤组各指标mRNA表达及蛋白表达较西药对照组高,差异有统计学意义(P0.05)。四君子汤组各项指标与其他各组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论补阳还五汤和血府逐瘀汤防治动脉粥样硬化作用的机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号转导通路及下游LOX-1、TNF-α、VCAM-1及ICAM-1等炎症因子的表达有关,而四君子汤无相关作用。     

Corilagin对血管内皮细胞的保护作用及LOX-1蛋白表达的影响

目的 观察Corilagin对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的保护作用及其机制.方法 MTT法检测Corilagin对ox-LDL损伤HUVEC的保护作用,免疫荧光测定LOX-1的蛋白表达.结果 Corilagin对HUVEC无明显的毒性作用,Corilagin减弱ox-LDL对HUVEC的损伤作用,Corilagin下调ox-LDL诱导的HUVEC LOX-1蛋白表达.结论 Corilagin对ox-LDL损伤HUVEC具有一定的保护作用.     

泻心汤含药血清对RAW264.7源性泡沫细胞TLR9/MyD88/NF-κB p65信号通路的影响

目的:通过体外细胞实验研究泻心汤对巨噬细胞源性泡沫细胞Toll样受体9(TLR9)信号通路的影响,探讨泻心汤抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:50只SPF级雄性SD大鼠随机分为泻心汤低、中、高剂量组(1. 4,4. 2,12. 6 g·kg~(-1)·d~(-1))及正常组,除正常组20只外,其余每组10只,正常组给予等体积的纯水灌胃,各组连续灌胃7 d,末次给药1 h后,分离血清,制备泻心汤低、中、高剂量组含药血清及正常组血清。用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)干预RAW264. 7巨噬细胞分化为泡沫细胞。采用油红O染色法鉴定细胞泡沫化;噻唑蓝(MTT)比色法观察含药血清对巨噬细胞源性泡沫细胞增殖的影响后,选择各剂量浓度为20%的含药血清作用于泡沫细胞模型,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测白细胞介素-1β(IL-1β),γ-干扰素(INF-γ)的含量;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)分别测定TLR9,髓样分化因子88(MyD88),核转录因子-κB(NF-κB) mRNA及蛋白表达。结果:油红O染色显示出ox-LDL干预后细胞内红色颗粒明显,泡沫细胞模型制备成功; MTT比色法结果显示,与正常组血清比较,泻心汤高剂量组含药血清在10%～30%浓度范围内,其细胞增殖差异无显著性。后续选择各剂量浓度为20%的含药血清干预经ox-LDL诱导的泡沫细胞,与正常组比较,模型组用ox-LDL干预后诱导了TLR9,MyD88,NF-κB p65,IL-1β,INF-γ的高表达(P 0. 05,P 0. 01);与模型组比较,不同剂量组泻心汤含药血清干预后降低了TLR9,MyD88,NF-κB p65,IL-1β,INF-γ的表达(P 0. 05,P 0. 01),且部分干预作用呈现出剂量依赖性。结论:泻心汤含药血清可抑制泡沫细胞TLR9/MyD88/NF-κB p65通路以及促炎因子IL-1β,INF-γ的转录和过表达,这可能是泻心汤抗动脉粥样硬化重要作用机制之一。     

痰瘀同治方含药血清对ox-LDL损伤人脐静脉内皮细胞 NF-κB和ICAM-1表达的影响

目的:观察痰瘀同治方含药血清对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)核因子-κB(NF-κB)的活化和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,探讨痰瘀同治方抗动脉粥样硬化的分子机制.方法:SD大鼠随机分为正常组,痰瘀同治方低、中、高剂量组( 24,48,72 g·kg-1·d-1)和辛伐他汀组(18 mg·kg-1·d-1),制备含药血清.体外培养HUVECs,实验分为6组:①正常组;②模型组;③痰瘀同治方低剂量组;④痰瘀同治方中剂量组;⑤痰瘀同治方高剂量组;⑥辛伐他汀组.其中①、②组用20％正常鼠血清,③～⑥组用20％各组含药血清,除正常组外其余各组加入100 mg·L-1 ox-LDL刺激3h或24 h后进行各项指标测定.Real-time PCR法检测HUVECs NF-κB p65和ICAM-1mRNA表达,Western blotting检测ICAM-1蛋白表达,细胞免疫荧光法检测NF-κB p65核移位变化.结果:HUVECs经ox-LDL刺激后NF-κB p65和ICAM-1的表达与正常组比较均明显升高(P＜0.01).痰瘀同治方和辛伐他汀含药血清能显著降低NF-κB p65 mRNA表达及抑制其核移位(P＜0.05),降低ICAM-1 mRNA和蛋白表达(P＜0.05),其中以辛伐他汀和痰瘀同治方大剂量含药血清作用尤为显著(P＜0.01).结论:痰瘀同治方能够通过抑制血管内皮细胞NF-κB通路,降低ICAM-1表达,进而减少炎症反应,这可能是其抗动脉粥样硬化分子机制之一.     

糖肾汤对氧化低密度脂蛋白诱导的系膜细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1表达及细胞外基质分泌的影响

目的:观察糖肾汤对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的系膜细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)表达及转化生长因子-β1(TGF-β1)和细胞外基质分泌的影响,探讨其防治糖尿病肾病的机制。方法:培养大鼠系膜细胞,分为空白组、ox-LDL组、糖肾汤高、中、低剂量组和罗格列酮组,培养24h后,RT-PCR检测系膜细胞mRNA表达,ELISA技术检测细胞上清液中TGF-β1、四型胶原(ColⅣ)和纤黏连蛋白(FN)含量。结果:糖肾汤、罗格列酮含药血清均能抑制ox-LDL诱导的TGF-β1、LOX-1 mRNA表达上调,及TGF-β1、FN、ColⅣ的分泌,其中糖肾汤含药血清呈剂量依赖性作用,中浓度作用最强。结论:糖肾汤可能通过降低ox-LDL受体LOX-1的表达以减少ox-LDL摄入及由此引起的细胞因子分泌和细胞外基质产生,从而起到防治糖尿病肾病的作用。     

血府逐瘀汤对血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1等炎症因子表达的影响

目的:研究血府逐瘀汤含药血清对血管内皮细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管细胞黏附因子-1(VCAM-1)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,探讨血府逐瘀汤防治动脉粥样硬化的机制。方法:血管内皮细胞随机分为对照组、模型组、西药对照组和血府逐瘀汤组,用LPS刺激2 h后分别加入阿托伐他汀和血府逐瘀汤含药血清干预,24 h后收集细胞,用荧光定量PCR方法和Western blot方法测定LOX-1、TNF-α、VCAM-1及ICAM-1的基因及蛋白表达。结果:用LPS刺激内皮细胞后,引起LOX-1、TNF-α、VCAM-1及ICAM-1的表达升高,差异有统计学意义(与对照组比较P0.01),而用血府逐瘀汤含药血清干预以后显著抑制LOX-1、TNF-α、VCAM-1及ICAM-1的表达,差异有统计学意义(与模型组比较P0.05)。结论:血府逐瘀汤可抑制LOX-1、TNF-α、VCAM-1及ICAM-1等炎症因子的表达,这可能是其防治动脉粥样硬化作用的机制之一。     

搜风祛痰中药对Ang II诱导人脐静脉内皮细胞LOX-1mRNA及NF-κB mRNA表达的影响

目的观察搜风祛痰中药对AngⅡ诱导体外培养人脐静脉内皮细胞凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）与核因子-κB基因表达的影响。方法制备家兔中药复方活心汤含药血清。采用酶消化法体外培养HUVECs2-3代用于实验。采用RT-PCR法测定脐静脉血管内皮细胞LOX-1 mRNA水平。随机分为正常对照组、AngⅡ组、AngⅡ＋低剂量中药血清组、AngⅡ＋中剂量中药血清组、AngⅡ＋高剂量中药血清组。用中药先孵育2h后再加入0.5μmol／L AngⅡ刺激2h,取出细胞盖玻片固定。结果与对照组比较,活心汤含药血清可抑制AngⅡ导致的细胞损伤,减少LOX-1 mRNA及NF-κB mRNA的表达。结论活心汤可抑制AngⅡ所致的HUVECs损伤,保护血管内皮细胞功能。     

补阳还五汤含药血清对Toll样受体4信号转导通路及氧化低密度脂蛋白受体-1表达的影响

目的:从补阳还五汤含药血清对脂多糖( lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs) Toll样受体4(toll-like receptor4,TLR4)信号转导通路及血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)的影响,研究补阳还五汤防治动脉粥样硬化( atherosclerosis,AS)的机制.方法:含药血清的制备:选择新西兰大耳白兔20只,随机分为正常组、补阳还五汤高、中、低浓度组,每组5只.中药组分别以13.2,6.6,3.3 g·kg-1补阳还五汤ig,正常组以同等量的生理盐水ig,连续ig7 d.在末次ig给药2h后,心脏采血,离心后分离血清,获得3种不同浓度药物血清;体外培养人脐静脉内皮细胞,用脂多糖(LPS)(1 mg·L-1)刺激后,分别加入含10％高、中、低浓度补阳还五汤药物血清干预,24 h后收集细胞,用荧光定量PCR方法测定TLR4,MyD88,TRAF-6,TRAM,TRIF,NF-κB及LOX-1的基因表达,用Western blotting法测定TLR4,MyD88,TRAF-6,LOX-1的蛋白表达.结果:用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起TLR4,MyD88,TRAF-6,TRAM,TRIF,NF-κB及LOX-1的高表达(与空白对照组比较P＜0.01),用补阳还五汤含药血清干预后显著抑制TLR4,MyD88,TRAF-6,NF-κB及LOX-1的高表达(与模型组比较P＜0.05),而对TRAM和TRIF与模型组比较无明显抑制作用.结论:补阳还五汤可抑制TLR4和MYD88依赖性信号转导通路及LOX-1的表达,这可能是其治疗各种免疫炎症性疾病及防治动脉粥样硬化作用的机制之一.     

化瘀祛痰颗粒剂含药血清对LPS诱导大鼠内皮细胞p65表达的影响

目的:通过研究化瘀祛痰颗粒剂含药血清对原代培养的大鼠内皮细胞p65mRNA和蛋白表达的影响,探讨其抗炎机制。方法:以血清药理学方法制备中药化瘀祛痰颗粒剂含药血清;原代培养的大鼠内皮细胞分为空白组、阳性对照组、化瘀祛痰颗粒剂含药血清低剂量组、中剂量组和高剂量组、采用RT—PCR方法观察各组p65mRNA表达情况;用WestenBlot方法检测p65蛋白表达情况。结果:与空白组比较,阳性对照组p65mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.001);与阳性对照组比较,化瘀祛痰颗粒剂含药血清各组p65mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05);血清各组在影响p65蛋白含量方面存在剂量依赖性(P<0.05),但在影响p65mRNA表达方面无明显剂量依赖性(P>0.05)。结论:化瘀祛痰颗粒剂能够通过抑制核因子KB,减少炎症因子的基因表达起到抗炎作用进而发挥其抗动脉硬化作用。     

益气活血解毒法对氧化低密度脂蛋白诱导内皮细胞黏附作用的影响

目的 验证益气活血解毒法对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤人脐静脉内皮细胞(HUVEC)后的细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、核转录因子(NF-KB p65)的表达及与人单核细胞黏附的影响.方法 培养HUVEC作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加ox-LDL模拟细胞损伤模型.分别以黄芪注射液、血塞通冻干粉、清开灵注射液代表益气、活血、解毒三法.将培养的HUVEC分为6组:ox-LDL组、ox-LDL+益气活血解毒组、益气活血组、活血解毒组、益气解毒组、正常对照组.光镜下观察给药后细胞形态学改变;MTT法检测细胞活性;BCA蛋白定量法检测HUVEC与单核细胞的黏附率;荧光定量PCR法检测HUVEC的ICAM-1和VCAM-1、NF-KB p65的mRNA表达.结果 ox-LDL作用HUVEC 24h时,人单核细胞与内皮细胞的黏附率显著升高,HUVEC的ICAM-1和VCAM-1、NF-KB p65的mRNA表达水平也明显升高,均高于空白对照组(P＜0.05,P＜0.01);益气活血解毒三法组合可明显降低人单核细胞与HUVEC的黏附率及ICAM-1和VCAM-1、NF-KBp65的mRNA表达水平,与ox-LDL组及其他治法组合比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).SPSS 16.0统计软件数据分析.结论 益气活血解毒法能通过下调内皮细胞表面黏附分子和核转录因子的表达,抑制单核-血管内皮细胞黏附,减轻ox-LDL对内皮细胞的损伤,有利于减少或抑制动脉粥样硬化的形成.     

软脉煎对氧化低密度脂蛋白造成血管内皮细胞损伤的影响

目的:为了探讨具有补肾益气作用的中药复方软脉煎干预动脉硬化(AS)的机制,主要是对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)造成血管内皮细胞(VEC)损伤的影响.方法:采用人脐静脉内皮细胞原代培养,加ox-LDL共同孵育造成血管内皮细胞损伤模型,用中药血清药理学方法将药物血清作用于细胞模型,用MTT法测细胞生存率,并设舒降之(辛伐他汀)组进行对照.结果:ox-LDL组内皮细胞生存率明显降低(P＜0.01);软脉煎组和舒降之组均能显著提高细胞生存率(软脉煎组P＜0.01,舒降之组P＜0.05);软脉煎组细胞生存率高于舒降之组(P＜0.01).结论:软脉煎能改善ox-LDL对内皮细胞的毒性作用,且优于舒降之组.     

肾康灵对氧化低密度脂蛋白诱导系膜细胞增殖后 MAPK 信号通路的影响

目的探讨肾康灵干预小儿原发性肾病综合征(PPNS)的作用机制。方法将诱导系膜细胞(MCs)随机分为正常对照组、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)组、ox-LDL+CXCR6(CXCL16受体CXCR6)组、肾康灵低浓度组(1.5g/ml)、肾康灵高浓度组(3.0g/ml)、阿托伐他汀低浓度组(50μmol/L)、阿托伐他汀高浓度组(100μmol/L),观察各组MCs的CXCL16、CD36蛋白含量、MAPK信号通路相关蛋白(p38、ERK1/2、SAPK/JNK)及核因子-κB p65(NF-κB p65)的磷酸化水平。结果 ox-LDL+CXCR6组较正常对照组CXCL16、CD36蛋白含量、MAPK信号通路相关蛋白(p38、ERK1/2、SAPK/JNK)及NF-κB p65的磷酸化水平显著升高(P0.01);与ox-LDL组及ox-LDL+CXCR6组比较,肾康灵低、高浓度组及阿托伐他汀低、高浓度组的CXCL16、CD36蛋白含量、p38、SAPK/JNK、NF-κB p65的磷酸化水平显著降低(P0.01),肾康灵低、高浓度组及阿托伐他汀高浓度组的ERK1/2的磷酸化水平显著降低(P0.05或P0.01);肾康灵高浓度组CXCL16、CD13蛋白含量、SAPK/JNK、NF-κB p65的磷酸化水平明显低于阿托伐他汀低浓度组(P0.05)。结论肾康灵可能通过抑制MAPK信号通路相关蛋白(p38、ERK1/2、SAPK/JNK)、NF-κB p65及CXCL16、CD36,有效抑制MCs的增殖,从而实现减轻或延缓肾小球纤维化的作用。     

HMGB1对人肺成纤维细胞ERK1/2-NF-κB信号通路的影响及补阳还五汤含药血清的干预作用

目的:观察肺纤维化中诱导免疫损伤的高迁移率族蛋白Box-1(high mobility group Box-1 protein,HMGB1)刺激人肺成纤维细胞(HFL1)后细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinase1/2,ERK1/2),核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路的活化情况,以及补阳还五汤含药血清对HMGB1刺激HFL1后以上信号通路的干预作用。方法:采用含药血清药理学的实验方法,以5%,10%,15%,20%的补阳还五汤含药血清和空白血清来干预HMGB1诱导刺激的HFL1细胞。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞总蛋白中ERK1/2,胞浆胞核中NF-κB p65蛋白的表达。结果:与空白组比较,HMGB1刺激组诱导后ERK1/2蛋白,胞浆和胞核中NF-κB p65蛋白及IL-1β含量的表达均增高(P0.05,P0.01);与20%空白血清预培养加HMGB1组比较,HMGB1刺激组诱导后ERK1/2蛋白,胞浆和胞核中NF-κB p65蛋白及IL-1β含量的表达均增高(P0.05);与HMGB1刺激组比较,补阳还五汤含药血清各组能够降低ERK1/2蛋白,胞浆和胞核中NF-κB p65蛋白及IL-1β含量的表达,其中15%和20%补阳还五汤含药血清组降低ERK1/2的表达(P0.05);胞浆10%补阳还五汤含药血清组和胞核20%补阳还五汤含药血清组降低NF-κB p65蛋白的表达(P0.05);15%补阳还五汤含药血清组降低IL-1β的含量(P0.05)。结论:补阳还五汤含药血清在体外实验中,可抑制HMGB1引起的人肺成纤维细胞中ERK1/2/NF-κB信号通路的活化,减少IL-1β等炎症因子分泌。提示补阳还五汤可能通过调控人肺成纤维细胞中ERK1/2/NF-κB信号通路,防治肺纤维化的发生发展。     

冠心康对脂质损伤的人血管内皮细胞保护机制的研究

目的:探讨中药复方制剂冠心康对损伤血管内皮细胞的保护作用,寻找其抗动脉粥样硬化、防治冠心病可能的作用机制.方法:建立细胞损伤模型,用氟伐他汀及冠心康药物血清处理损伤的内皮细胞72h后,分别用硝酸还原酶法、放射免疫法以及ELISA法测定培养上清液中NO、ET以及sICAM-1水平,RT-PCR法测各组细胞sICAM-1mRNA表达水平.结果:中药复方制剂冠心康能明显上调NO水平,降低ET、sICAM-1及其mRNA水平,与模型组比较有显著性差异(P＜0.01).与西药氟伐他汀比较,在下调ET、sICAM-1及其mRNA水平方面,冠心康明显优于氟伐他汀(P＜0.01);在上调NO水平方面,西药则明显强于冠心康(P＜0.01).结论:冠心康能改善受损的内皮细胞分泌功能,减少内皮细胞与单核细胞的黏附,从而减少血管内皮损伤,防止动脉粥样硬化的发生与发展.     

沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白影响内皮细胞Bcl-2、Bax、p53和caspase-3蛋白表达的调节

目的：研究沥水调脂胶囊抑制氧化型低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡的机制。方法：沥水调脂胶囊舍药血清和ox-LDL与人脐静脉内皮细胞(hUVEC)共同孵育15h，用免疫荧光标记结合流式细胞仪分别测定Bcl—2、Bax、p53和caspase-3蛋白表达量。结果：发现ox-LDL可使hUVEC Bcl—2蛋白表达降低，Bax、p53和caspase-3蛋白表达量升高，而沥水调脂胶囊可使ox-LDL对Bcl-2、p53和caspase-3的上述作用明显减弱，但对Bax未见明显影响。结论：沥水调脂胶囊抑制ox-LDL诱导的血管内皮细胞凋亡，可能是从正反两个方面、多条途径调节与凋亡密切相关的基因表达以及保护细胞结构功能有关。     

中药含药血清对尿酸盐诱导的人血管内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的观察中药尿酸利仙(含药血清)对尿酸盐诱导的人血管内皮细胞(endothelial cell of vessels, ECV)细胞间黏附分子-1(intercelluar adhesion molecule,ICAM-1)基因和蛋白表达的影响.方法1070μmol/L尿酸盐溶液刺激血管内皮细胞,同时用含不同浓度(2.5%、5.0%、10.0%)中药含药血清的培养液进行干预,分别用流式细胞术(FCM)、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术测定细胞ICAM-1的表达.结果①血管内皮细胞在尿酸盐刺激下,ICAM-1基因和蛋白表达均较空白对照组显著上调.② 5.0%浓度中药尿酸利仙含药血清可显著抑制尿酸盐诱导的血管内皮细胞ICAM-1基因表达(P＜0.01);2.5%、10.0%浓度的尿酸利仙含药血清均可显著抑制ICAM-1蛋白表达(P＜0.01).结论中药尿酸利仙含药血清抑制ICAM-1表达的作用是减轻尿酸盐诱导的人血管内皮细胞炎症损伤的机制之一.     

解毒化瘀药含药血清对白血病HL60/ADR耐药 细胞NF-κB信号靶向干预研究

目的:探讨解毒化瘀药含药血清对白血病HL60/ADR细胞核周因子κB(NF-κB)信号基因表达的影响。方法:将HL60/ADR耐药细胞分为牛血清组、兔血清组、含药血清高、中、低剂量处理组和干扰素对照组,用Western blot法检测各组细胞NF-κB/p65,NF-κB/p50,IκBα的表达情况。结果:流式细胞仪检测结果显示非细胞毒作用的解毒化瘀药血清能够增加HL60/ADR细胞内柔红霉素的浓度。HL60/ADR耐药细胞NF-κB信号基因呈高表达,HL60敏感细胞未见表达,加用不同浓度解毒化瘀含药血清处理后,p65,p50和IKBa的表达均有不同程度下降,以高、中剂量组对p65的下调作用更明显。结论:解毒化瘀药对HL60/ADR细胞的耐药逆转作用是通过阻断NF-κB信号通路实现的。     

连梅方含药血清抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化及机制研究

目的：观察连梅方含药血清是否能够减缓泡沫细胞的形成,并探讨其作用机制。方法：采用氧化型低密度脂白（oxidized low density lipoprotein , ox-LDL）诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞建立泡沫化模型,制备不同浓度的连梅方含药血清,将不同浓度的含药血清作用于ox-LDL诱导的RAW264.7细胞,用油红O 染色法观察细胞泡沫化程度,通过RT-PCR、 Western Blot检测B 类Ⅰ型清道夫受体（scavenger receptor class B type I, SR-B1）及CD36 mRNA和蛋白表达情况。结果：细胞油红O染色显示,镜下可观察到染色后的红色脂滴随连梅方含药血清浓度的升高而减少。连梅方含药血清组SR-B1的mRNA和蛋白表达较空白和模型组均明显升高(P < 0.05);CD36的mRNA和蛋白表达较空白血清组和模型组均明显降低（P＜0.05）。结论：连梅方含药血清可抑制ox-LDL 诱导的巨噬细胞泡沫化,其机制与连梅方含药血清调节SR-B1 及CD36 的表达有关。