急性髓系白血病患者IDH1基因突变及其临床意义

目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者IDH1基因突变的发生率,并了解其临床特征及预后。方法:采用基因组DNA-PCR方法扩增IDH1基因4号外显子,应用基因测序分析其基因突变,同时检测NPM1、FLT3-TKD、FLT3-ITD、C-KIT、CEPBA、TET2及JAK2V617F及MLL突变情况,对患者进行随访判定其疗效和预后。结果:192例AML患者中,13例患者被检测到IDH1基因突变,突变率为6.77%[95%CI(5.70%-13.38%)]。IDH1基因突变测序图表现为双峰形,均为杂合突变,其中c.G395A(p.R132H)8例,c.C394T(p.R132C)4例,c.C394A(p.R132S)1例,R132H和R132C较为常见,13例均为错义突变,突变组的中位年龄为52岁,而未突变组中位年龄为40岁,两者存在着显著的差异(P=0.010)。IDH1突变在M1及M2中的发生率明显高于其他FAB亚型,两者在性别、初诊外周血白细胞计数、血红蛋白量、血小板计数、外周血原始细胞、骨髓原始细胞比例之间无明显的统计学差异。IDH1基因突变与NPM1基因突变有一定的相关性,但与FLT3-TKD、FLT3-ITD、C-KIT、TET2及JAK2V617F及MLL突变并无明显的相关性。此外,IDH1突变易发生于正常核型或预后中等风险核型的患者中,11例发生在正常核型患者中,突变率为10.28%,2例发生在核型异常患者中,有明显的统计学差异。在预后中等风险核型的AML患者中,IDH1突变组化疗完全缓解率(CR)低于未突变组,同时IDH1突变患者3年总生存率(OS)低于未突变患者,有明显统计学差异(P0.05)。结论:IDH1基因突变更易存在于年龄偏大AML患者中,在预后中等风险核型患者中IDH1基因突变与患者的临床特点、疗效有一定相关性,提示是预后不良的分子学标志。     

205例急性髓系白血病患者IDH1基因突变的检测及其临床意义分析

本研究检测205例急性髓系白血病(AML)患者IDH1基因R132突变并探讨其临床特征。提取205例成人AML患者初发时外周血或骨髓单个核细胞基因组DNA,通过PCR的方法分别扩增IDH1基因的第4号外显子后进行测序比对。结果发现,205例AML患者中9例有IDH1基因R132突变,突变率4.39%,R132H型突变6例,R132L,R132G,R132S突变各1例,其中5例为AML-M2型白血病,与其他类型比较有统计学意义(P=0.002);9例患者血小板中位数45.5×109/L,低于IDH1为野生型患者(P=0.003);IDH1突变患者在性别、年龄、初发白细胞计数、血红蛋白水平及骨髓幼稚细胞比例上与IDH1为野生型的患者相比无明显差异(P>0.05)。9例患者中4例为正常核型,在71例CN-AML中的突变率为5.63%;合并FLT3/ITD突变5例,与IDH1为野生型患者比较有明显差异(P=0.017);合并c-kit突变的1例;合并NPM1突变2例;无合并CEBPA突变者,与野生型比较有明显差异(P=0.031);无合并WT1突变者。结论:IDH1基因R132突变在中国人AML中发生率为4.39%,以R132H突变为主,易在AML-M2型中发生,具有低血小板计数,易合并FLT3/ITD突变,不易合并CEBPA突变等特征。     

中国人急性髓系白血病中IDH2基因突变及其临床特征分析

本研究检测192例急性髓系白血病（AML）患者IDH2基因突变并探讨其临床特征。提取AML患者初发时外周血或骨髓单个核细胞基因组DNA,通过PCR扩增产物直接测序法检测IDH2基因第4号外显子第140及第172氨基酸突变情况,同时也检测FLT3/ITD,NPM1,CEBPA,c-kit,IDH1,WT1及Dnmt3a突变。结果显示,192例急性白血病患者中共发现IDH2基因突变14例,突变率7.29%,其中R140Q突变9例,R140W突变1例,R172K突变4例。14例IDH2突变患者9例为AML-M5型白血病,与其他类型白血病相比有统计学差异（P〈0.05）。IDH2突变组患者的年龄、性别、白细胞数、血小板数、血红蛋白水平、骨髓原始细胞数与IDH2野生型组相比均无统计学意义（P〉0.05）。免疫分型中,IDH2突变较野生型易表达CD34（P〈0.05）和CD13（P〈0.05）,不易表达CD36（P〈0.05）。IDH2突变在正常核型中的突变率为8.47%（5/59）,与异常核型组比较无明显差异（P〉0.05）;7例合并FLT3/ITD阳性,与野生型比较有无明显差异（P=0.018）;5例合并Dnmt3a突变,与野生型有明显差异（P=0.001）;不易合并IDH1突变发生（P〈0.05）。14例突变中仅1例合并BCR/ABL融合基因,说明其不易发生伴融合基因（P〈0.05）。7例IDH2 R140突变患者中6例达诱导后完全缓解,较野生型高,但无统计学意义。结论：IDH2基因R140及R172突变在中国人急性髓系白血病发病率为7.29%,以R140Q突变为主,其在CN-AML中发生率为7.81%;IDH2突变易发生在AML-M5中,易表达CD34和CD13,不易表达CD36,易合并FLT3/ITD,Dnmt3a突变发生,不易伴IDH1突变及融合基因发生,对完全缓解率无明显影响。     

多重PCR结合毛细管电泳检测FLT3及NPMl基因突变的实验方法的研究

目的建立一种便捷可靠的实验方法能够同时检测FLT3基因突变及NPMl基因突变。方法设计多重PCR结合毛细管电泳（CE）方法同时检测75例初诊急性白血病（AL）患者FLT3基因及NPMl基因突变发生情况。结果应用多重PCR结合CE方法在75例AL患者中检测到FLT3-ITD突变阳性28例,FLT3一TKD突变阳性5例,NPMl突变阳性20例,9例同时存在FLT3．ITD及NPMI基因突变,l例同时存在FLT3．ITD及FLT3．TKD突变。结论多重PCR结合cE是一种能同时检测FLT3基因和NPMl基因突变的便捷可靠的方法,对判断AML患者的临床预后、指导分层治疗有重要意义,有进一步推广的价值。     

IDH2基因突变对急性髓系白血病患者的临床特征及预后影响

目的:分析异柠檬酸脱氢酶2(IDH2)基因突变在急性髓系白血病(AML)中的发生率、临床特征及预后意义。方法:收集2015年1月至2018年10月经MICM分型确诊的223例初治AML患者的骨髓标本,采用PCR扩增产物直接测序法检测IDH2基因4号外显子的突变情况,分析AML中IDH2基因突变的发生率及类型,分析伴IDH2基因突变AML患者的临床特征并评估其治疗疗效。结果:223例AML患者中,23例患者存在IDH2基因突变,突变率为10. 31%,其中IDH2R140Q 15例(65. 22%),IDH2R172K 6例(26. 09%),IDH2R140W 2例(8. 70%)。IDH2基因突变组中位年龄高于未突变组中位年龄(P=0. 008),初诊血小板计数高于未突变组血小板计数(P=0. 010)。IDH2基因突变组FAB分型与非突变组相比无明显统计学差异(P 0. 05),但是IDH2基因突变组M4和M5的发生率较高。IDH2基因突变在正常核型组和NPM1基因突变组的发生率较高,其中IDH2R140Q突变亚型与NPM1基因突变有相关性,但是IDH2R172K突变亚型与NPM1基因突变无相关性。IDH2突变组化疗完全缓解(CR)率为57. 14%,低于非突变组的80. 46%(χ~2=5. 927,P=0. 015),其中IDH2R140Q突变组化疗完全缓解率,与非突变组相比差异无统计学意义(P 0. 05),但IDH2R172K突变组化疗完全缓解率明显低于非突变组(χ~2=7. 734,P=0. 005)。不伴有NPM1突变的患者中,IDH2突变组2年总生存(OS)率为36. 36%,低于非突变组2年总生存率66. 40%(χ~2=3. 958,P=0. 047),其中IDH2R172K突变组2年总生存率明显低于非突变组(P 0. 05);所有随访患者中,IDH2突变组2年总生存率为50%,与非突变组2年总生存率(66. 88%)相比无明显统计学差异(P 0. 05),但是IDH2R172K突变组2年总生存率明显低于非突变组(P 0. 05);在正常核型患者中或伴有NPM1突变的患者中,IDH2突变组2年总生存率与非突变组2年总生存率相比,均无明显统计学差异(P 0. 05)。结论:IDH2基因突变是AML患者较常见的基因突变,IDH2基因突变患者年龄较大,血小板计数较高。IDH2基因突变易发生于正常核型患者,在FAB分型M4和M5的发生率较高。IDH2基因突变与NPM1基因突变有相关性,但是IDH2R172K突变亚型与NPM1基因突变无相关性。IDH2基因突变与患者的预后有一定相关性,其中IDH2R140Q突变对AML患者的预后无影响,IDH2R172K突变可能是AML患者预后不良的分子标志。     

急性髓系白血病中与IDH1/2突变共存的基因突变分析

目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者中与IDH1/2突变共存的基因突变及其与部分临床参数的相关性。方法:采用基因组DNA-PCR联合Sanger测序法筛选IDH1/2基因4号外显子突变;采用高通量DNA测序联合Sanger测序法检测IDH1/2突变患者51种肿瘤靶基因突变。结果:358例患者中共检出46例IDH1/2突变,其中35例IDH1突变,11例IDH2突变。97. 8%(45/46) IDH1/2突变患者同时携带其他基因突变,其中双基因突变8例,3个基因突变共存17例,≥4个基因突变共存20例。每例患者平均突变3. 52次。伴随基因突变中最常见的基因为NPM1(n=29,63. 0%),其他依次为:DNMT3A(n=25,54. 3%)、FLT3-ITD(n=7,15. 2%)、TET2 (n=5,10. 9%)及NRAS(n=5,10. 9%)。在IDH1突变组中,伴NPM1突变者的平均外周血白细胞水平高于正常者,伴DNMT3A突变患者的CR率明显低于正常者,差异均有统计学意义(P=0. 034,0. 003);≥4个基因突变患者的白细胞水平明显高于双基因突变者,差异显著(P=0. 037)。结论:95%以上伴IDH1/2突变的AML患者同时存在额外基因突变,基因突变个数及突变类型对患者的临床特征及CR率有一定的影响。     

FLT3基因突变与急性早幼粒细胞白血病的关系及临床意义

目的 研究FLT3基因内部串联重复(ITD)突变及第二酪氨酸激酶结构域(TKD)点突变在急性早幼粒细胞白血病(APL)患者中的发生情况及其临床意义.方法 采集160例初治APL患者骨髓并分离单个核细胞,采用基因组DNA-PCR方法检测所有患者FLT3基因外显子14、15中ITD突变,阳性标本进一步计算ITD等位基因比例(ITD-AR).采用基因组DNA-PCR结合限制性内切酶酶切方法检测FLT3基因外显子20中TKD点突变.结果 160例初治APL患者中,30例(18.75%)FLT3-ITD突变阳性,17例(10.62%)FLT3-TKD点突变阳性,2例同时存在两种突变.FLT3-ITD+组及FLT3-TKD+组患者初诊时白细胞计数(WBC)均显著高于野生型FLT3(FLT3-wt)组,S型PML-RARα融合基因在两种突变组中所占比例亦均高于FLT3-wt组(P<0.05).FLT3-ITD+组息者中维甲酸综合征(RAS)、DIC发生率分别为41.7%、65.4%,高于FLT3-wt患者(P<0.05),而完全缓解(CR)率较FLT3-wt患者低(69.2%对90.3%,P<0.05);FLT3-TKD+患者RAS、DIC发生率及CR率同FLT3-wt患者相比差异均无统计学意义(P值均>0.05).中位随访时间为26个月,FLT3-ITD+患者总体生存(OS)期显著短于FLT3-wt患者(P<0.05)、无病生存(DFS)期与FLT3-wt患者相比差异无统计学意义(P>0.05);而FLT3-TKD+患者与FLT3-wt患者相比,OS、DFS期差异均无统计学意义(P值均>0.05).30例FLT3-ITD+患者ITD-AR中位值1.0(0.11～6.55),ITD-AR值大于1.0与小于1.0的患者相比,在初诊WBC、RAS、DIC发生率及CR率等方面差异均无统计学意义(P值均>0.05).结论 FLT3基因突变(包括FLT3-ITD及FLT3-TKD突变)是APL患者中常见的突变,两种突变类型都同患者初诊时高WBC及S型PML-RARα融合基因相关.FLTB-ITD突变较FLT3-TKD点突变发生率高,提示预后不良,而FL33-TKD点突变对预后的影响不明显.     

C-kit、NPM1、FLT3基因突变在656例中国急性髓系白血病患者中的分布及其对预后的影响

目的 探讨急性髓系白血病(AML)患者中C-kit、NPM1、FLT3基因突变的发生率和分布情况,并分析其对预后的影响.方法 应用基因测序方法分别检测656例AML患者C-kit基因8、17号外显子,NPM1基因12号外显子,FLT3基因20(酪氨酸激酶区,TKD)、14、15号外显子(内部串联重复,ITD)基因突变情况,并随访患者的预后.结果 656例AML患者中检出C-kit基因8号外显子突变6例(0.9％),17号外显子突变33例(5.0％),NPM1基因突变169例(25.8％),FLT3-TKD突变46例(7.1％),FLT3-ITD突变178例(27.1％).至少有1个突变的患者341例(50.3％).C-kit的8号外显子检测到6种突变类型;C-kit的17号外显子检测到8种突变类型;NPM1检测到15种突变类型,其中10种类型已有报道(A、B、C、D、Nm、I*、J、J+、S、13),5种类型未见报道;TKD检测到11种突变类型.t(8;21)/M2患者常伴有C-kit的17号外显子突变;inv(16)/M4患者常伴有C-kit的8号外显子突变;M3患者中除FLT3基因突变外未检测到其他突变.NPM1和ITD基因突变多见于正常核型患者,在形态学亚型中多见于M5和M1,阳性病例多伴随高白细胞计数、骨髓原始细胞增多、CD34低表达和CD33高表达.随着发病年龄的增长,突变数量增多,白细胞计数平均值增高,高白细胞计数的患者比例升高.在正常核型的群体中突变阳性的比例较其他群体增高,2种、3种突变的比例增多,差异均有统计学意义(P值均＜0.01).FLT3-ITD突变阳性病例中位生存时间(10.0±1.2)个月,与阴性群体中位生存时间(17.0±2.4)个月相比差异有统计学意义(P =0.004),单独NPM1突变与否对总生存率没有显著影响,但NPM1+/ITD-患者的总生存率最高.结论 C-kit、NPM1、FLT3基因突变类型及数量在MICM分型中都有特殊的分布,并与白细胞计数、骨髓原始细胞数和预后均有相关性.对染色体核型正常的患者,基因突变可作为判断预后新的分子标志.     

成人急性白血病患者FLT3基因及FLT3/ITD突变

目的 研究FLT3基因及FLT3基因内部串联重复(internal tandem duplication,ITD)突变(FLT3/ITD突变)与蒙古族成人急性白血病的关系,探索其在急性白血病的诊断及基因分型中的意义.方法 采用聚合酶链反应(PCR)技术检测56例蒙古族成人初发急性白血病、10例蒙古族成人非白血病患者FLT3基因表达及FLT3/ITD突变情况.结果 41例初诊急性髓细胞白血病(AML)患者中FLT3基因表达为70.7%(29/41);FLT3/ITD突变阳性率为19.5%(8/41).15例初诊急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中FLT3基因表达为60.0%(9/15),15例ALL患者均未检测到FLT3/ITD基因突变.10例对照均无FLT3基因表达.结论 FLT3基因在蒙古族成人急性白血病患者中有较高表达,FLT3基因的检出可能有助于急性白血病的诊断.ALL患者一般无FLT3/ITD突变,推测FLT3/ITD突变检测有助于急性白血病基因分型.     

FLT3基因突变和染色体易位与急性髓性白血病预后的关系

目的:探讨FLT3跨膜区内部串联重复(FLT3/internal tandem duplication,FLT3/ITD)突变和染色体易位与急性髓性白血病预后的关系。方法:选取1998-03/2005-10中国医科大学及沈阳医学院附属医院血液科门诊或住院治疗的125例急性髓性白血病患者,均经形态学及骨髓活检确诊,所有患者均签署知情同意书。于治疗前抽取急性髓性白血病患者骨髓标本,短期培养法制备染色体标本,应用R显带技术进行核型分析,每例标本至少分析20个中期细胞。传统酚/氯仿/异丙醇法抽提DNA,调整浓度至200μg/L。针对FLT3基因内部重复串联结构主要发生在11号外显子,在11号外显子近端和远端分别设计引物11F和11R扩增产物133bp。采用PCR联合序列检测伴有或不伴有染色体易位的急性髓性白血病患者FLT3基因突变情况。结果:①染色体核型分析:125例患者中,46例证实存在不同类型染色体易位,总检出率36.8%。染色体易位的类型以t(1621)最多,为9例(19.78%),t(8,21)核型7例(15.22%),t(4,11)核型6例(13.04%),同时发现国内罕见的t(6,9)染色体易位3例(6.52%)。②PCR结合碱基测序检测FLT3基因表达及FLT3/ITD基因突变:46例染色体易位的样本中,31例FLT3基因表达,阳性率67.39%;而79例无染色体易位的样本中,56例FLT3基因表达,阳性率70.89%,两者比较差异无显著性意义(P>0.05)。两组样本FLT3/ITD基因突变阳性率分别为26.09%和11.39%(P<0.05)。③伴有或不伴有染色体易位FLT3/ITD突变阳性患者临床特征:伴有染色体易位FLT3/ITD突变阳性患者外周血白细胞、血红蛋白、血小板、骨髓粒细胞比例与不伴有染色体易位FLT3/ITD突变阳性患者均基本相似[(31.25±5.67)×109L-1,(28.98±7.56)×109L-1;(75.97±1.46)g/L,(70.16±8.46)g/L(71.38±12.51)×109L-1,(78.59±9.42)×109L-1;(7.91±1.28)%,(9.28±0.56)%;P均>0.05]。④伴有或不伴有染色体易位FLT3/ITD突变阳性与临床预后的关系:与不伴有染色体易位FLT3/ITD突变阳性患者比较,伴有染色体易位FLT3/ITD突变阳性患者的死亡率无明显差异(83.33%,77.78%,P>0.05),但平均生存时间明显降低[(8.9±1.5),(13.9±2.39)个月,P<0.05]。结论:伴有染色体易位且FLT3/ITD突变的急性髓性白血病患者预后较差,染色体易位和FLT3/ITD突变可以作为其预后不良的重要标志。