中药马勃对大鼠皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

［摘 要］ 目的：中药马勃作用于体外培养大鼠皮肤的成纤维细胞,观察大鼠成纤维细胞增殖及胶原合成的能力,探讨马勃有效组分在细胞水平上促皮肤患处愈合的作用机制。方法：运用体外细胞培养技术对新生大鼠乳鼠皮肤的成纤维细胞进行培养,实验分为对照组（不给药组）和马勃有效组分37.5、75.0、150.0及300.0 mg/L组;实验组于传代培养24 h后加入不同浓度的药物,继续培养24、48、72 h后收集细胞。采用MTT比色法测定细胞增殖,生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法测定细胞胶原含量。结果：与对照组比较,37.5、75.0、150.0及300.0 mg/L实验组的成纤维细胞增长率和成纤维细胞胶原合成能力均显著性升高（P＜0.01）。在药物作用时间方面,与对照组比较,在24、48和72 h观察细胞增殖率和胶原合成能力均显著增强,72 h最强,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：在不同剂量马勃有效组分作用下,大鼠成纤维细胞活化增殖,胶原合成的能力增强。     

芦荟凝胶对人皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的研究芦荟凝胶(aloe gel,AG)对人皮肤成纤维细胞(human skin fibroblast,HSFb)的增殖及胶原蛋白合成的影响。方法原代培养人皮肤成纤维细胞,传代培养后加入不同浓度的芦荟凝胶作用后,应用流式细胞仪检测细胞周期变化,应用碱水解法检测培养液中羟脯氨酸的含量变化,应用免疫组化法检测芦荟凝胶对成纤维细胞Ⅰ型前胶原合成的影响。结果细胞周期时项分析结果显示5%、10%浓度芦荟凝胶处理组细胞周期S G2/M期细胞百分率及增殖指数PI值较对照组增高(P<0.05),但在不同时间点检测的细胞周期差异无统计学意义(P>0.05)。各浓度芦荟组在不同时间段时其成纤维细胞培养液中羟脯氨酸含量均明显高于空白对照组(P<0.05)。经10%浓度芦荟凝胶处理后的成纤维细胞Ⅰ型前胶原表达增加(P<0.05)。结论芦荟凝胶能有效促进人皮成纤维细胞的增殖和胶原的合成。     

维拉帕米对人巩膜成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

为探讨维拉帕米防治部增殖性疾病的可能性，在体外观察了维拉帕米对人巩膜成纤维产殖指数和胶原合成的影响。     

维拉帕米对人巩膜成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

为探讨维拉帕米防治眼部增殖性疾病的可能性，在体外观察了维拉帕米对人巩膜成纤维细胞增殖指数和胶原合成的影响。结果：维拉帕米２０～４０ｍｇ·Ｌ￣（－１）作用４８ｈ可使细胞ＤＮＡ含量和增殖指数明显下降（Ｐ＜０．００１），ＩＤ＿（５０）＝３８ｍｇ·Ｌ￣（－１）；４０ｍｇ·Ｌ￣（－１）可使胶原合成明显下降，作用２４ｈ组ＩＤ＿（５０）＝４６ｍｇ·Ｌ￣（－１），作用４８ｈＩＤ＿（５０）＝３３ｍｇ·Ｌ￣（－１）。结果提示：维拉帕米可抑制人巩膜成纤维细胞增殖及胶原合成，可能具有防治眼部增殖性疾病的价值。     

溶血磷脂酸对心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的：观察溶血磷脂酸（LPA）对体外培养心脏成纤维细胞（CF）的细胞增殖和胶原合成的影响。方法：用消化法培养新生SD大鼠的CF，实验分为四组。对照组（加含5％小牛血清的DMEM培养液），实验组根据不同浓度的LPA又分为10^-6μmol／L组、10^-7μmol／L组和10^-8μmol／L组。用单四唑（MTT）比色法测定细胞增殖，羟脯氨酸碱水解法测定胶原合成，分别观察不同浓度LPA对CF增殖和胶原合成的影响。结果：①随着LPA浓度的升高，MTT比色法吸光度（A490）值呈上升趋势。在药物作用48h后，仅有10^-6μmol／L组A。值较对照组有显著升高（P〈0．05）；作用至72h后，10^-8μmol／L组、10^-7μmol／L组、10^-6μmol／L组A490值均较对照组显著升高（P〈0．05）；作用至96h后，各实验组A。值较对照组均有显著升高（P〈0．05和P〈0．01）。②随着LPA浓度和作用时间的增加，CF分泌的胶原呈递增趋势。LPA作用48h仅10^-6μmol／L组胶原浓度较对照组显著升高（P〈0．01）；作用至72h后，10^-7μmol／L组、10^-8μmol／L组胶原含量较对照组有显著升高（P〈0．05和P〈0．01）；作用至96h，各实验组胶原含量均较对照组有显著升高，10^-6μmol／L组与10^-7μmol／L组、10^-8μmol／L组之间差异亦有显著性意义（P〈0．05）。结论：LPA具有促进SD新生大鼠CF增殖和胶原合成的作用。     

氢化可的松对体外培养的皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:研究激素对体外培养的成纤维细胞增殖及分泌功能的影响,初步探讨其治疗瘢痕的作用机制.方法:采用MTT比色法和3H-脯氨酸掺入法,观察氢化可的松对体外培养的皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响.结果:氢化可的松(0.1 g/L)能够抑制体外培养成纤维细胞增殖(MTT值0.523±0.051 vs 0.347±0.036,P<0.05)及分泌胶原的功能[3H-脯氨酸掺入量(248±6) Bq vs (181±6) Bq,P<0.05],并呈剂量依赖性(r=-0.8208).结论:氢化可的松可通过抑制瘢痕成纤维细胞增殖及胶原的合成,从而达到治疗瘢痕的作用.     

川芎嗪对心脏成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的观察川芎嗪（TMP）对体外培养心脏成纤维细胞（CF）的增殖与胶原合成的影响。方法用消化法培养新生SD大鼠的CF，用四氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖，羟脯氨酸碱水解法测定胶原合成．观察不同浓度TMP对CF增殖和胶原合成的影响。结果随着TMP浓度的升高，MTT比色法A490值呈下降趋势；CF分泌的胶原随着TMP作用浓度和时间的增加呈递降趋势。结论TMP具有抑制SD新生大鼠CF增殖和胶原合成的作用。     

普伐他汀对大鼠心肌成纤维细胞增殖和前胶原基因表达的影响

目的:探讨普伐他汀(Pray)对培养的Wistar大鼠心肌成纤维细胞(CF)增殖及前胶原基因表达的影响.方法:取1～3日龄Wistar大鼠心室,以酶消化法分离培养大鼠CF.分组①空白对照组:不加干预药物;②不同浓度Prav组:Prav10-6mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L;③血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)组:Ang Ⅱ 10-6mol/L;④Ang Ⅱ+Prav组:各组在加入Ang Ⅱ 10-6mol/L基础上再分别加入Pray10-6nol/F、10-5mol/L、10-4mol/L.MTT法测定细胞增殖,KT-PCR方法测定Ⅰ型前胶原基因(P Ⅰ Cp)的含量.结果:①AngⅡ和Prav浓度组两个因素之间没有交互作用(P=0.144),Prav各浓度组明显抑制CF的增殖(F=6.547,P<0.001),Prav10-4mol/L组抑制作用最明显.②AngⅡ能刺激P Ⅰ CP mRNA的表达,Prav各浓度组可明显抑制AngⅡ刺激下P Ⅰ CP mRNA的表达(F=1926.758,P<0.001),其作用具有浓度依赖性.结论:Prav呈浓度依赖性地抑制基础状态和AngⅡ介导的CF增殖和Ⅰ型前胶原的合成.     

红花对增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的探讨红花对增生性瘢痕成纤维细胞（HSFB）增殖和胶原合成的影响及其意义。方法通过MTT比色试验和生长曲线测定法检测红花对体外培养的HSFB增殖活性的影响；^3H-脯氨酸掺入法测定红花对细胞胶原蛋白合成的影响；用光镜和电镜观察药物作用后HSFB形态学和超微结构的改变。结果红花可明显抑制HSFB的增殖和胶原蛋白的合成，且在一定范围内具有时间-剂量依赖性，以8μg／ml浓度组第3天作用最为显著；HSFB的形态和超微结构呈抑制改变。结论红花具有抑制HSFB增殖和胶原合成的作用，为应用该药治疗瘢痕提供了实验依据。     

不同浓度腐胺对人皮肤成纤维细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的探讨不同浓度腐胺对人皮肤成纤维细胞（human skin fibroblasts,HSF）增殖、迁移、凋亡的影响。方法将体外HSF
分为腐胺组和对照组,以含腐胺浓度分别为0.5、1、5、10、50、100、500、1000 μg/ml完全培养基培养细胞设为腐胺组,不添加腐胺
设为对照组。经对照组及不同浓度腐胺组处理的HSF培养24 h后,再以四唑化合物电子耦联显色法（MTS法）测定细胞增殖能
力（用吸光度值表示）,Transwell迁移实验测定细胞的迁移能力,流式细胞技术（Flow Cytometry, FCM）Annexin V/PI标记法测
定细胞凋亡率。结果（1）细胞增殖能力（MTS）测定结果显示,0.5、1、5、10 μg/ml 腐胺组HSF的吸光度值较对照组升高（P<
0.01）,并且1 μg/ml时达峰值（0.754±0.024）;500、1000 μg/ml腐胺组HSF吸光度值较对照组降低（P<0.01）;50、100 μg/ml腐胺
组HSF的吸光度值与对照组无明显差异（P>0.05）;（2）Transwell迁移实验结果显示,1 μg/ml腐胺组穿过微孔膜的细胞数目较对
照组显著增加（P<0.01）,且达到峰值309±21;50 μg/ml及以上浓度腐胺组HSF穿过微孔膜的数目较对照组减少（P<0.05）;0.5、
5、10 μg/ml腐胺组HSF穿过微孔膜的细胞数目与对照组比较无明显差异（P>0.05）;（3）流式细胞凋亡结果显示,0.5、1、5、10 μg/ml
腐胺组HSF凋亡率较对照组显著降低（P<0.05）,而且在1 μg/ml时细胞凋亡率达最低值（11.10±0.79）%;100 μg/ml及以上浓度
腐胺组细胞凋亡率较对照组显著升高（P<0.01）,而且随着浓度增加凋亡率逐渐升高;50 μg/ml腐胺组与对照组比较细胞凋亡率
无明显差异（P>0.05）。结论微量腐胺可维持细胞正常的迁移能力,显著提高HSF的细胞增殖能力,而较高浓度的腐胺能显著
抑制HSF迁移与增殖,并诱导细胞发生凋亡,提示不同浓度的腐胺会对创面愈合起到完全不同的作用。
     

谷甾醇-3-O-葡萄糖苷对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡及胶原合成的影响

目的探索谷甾醇-3-O-葡萄糖苷对瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts,KF)抑制作用的研究。方法 0(对照组),3.125、6.25、12.5、25、50、100μg/m L的谷甾醇-3-O-葡萄糖苷作用KF细胞48 h后,MTT法检测细胞活力,Ed U染色法检测细胞增殖,流式细胞术分别检测细胞凋亡及细胞周期,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞中COL I、COL III含量。结果 3.125、6.25、12.5、25、50、100μg/m L谷甾醇-3-O-葡萄糖苷能显著的降低KF细胞活力(P0.01),提高细胞增殖抑制率(P0.01),IC50=(27.54±2.18)μg/m L。与对照组比较,12.5、25、50μg/m L谷甾醇-3-O-葡萄糖苷能显著的降低细胞增殖率(P0.01),提高细胞早期及晚期凋亡率(P0.01),使细胞周期阻滞在G1期(P0.01),同时还能显著的降低细胞中COL I、COL III含量(P0.01)。结论谷甾醇-3-O-葡萄糖苷能显著的抑制KF细胞增殖,诱导细胞凋亡,同时还能抑制胶原的合成。     

几类常用外用中药成分对人皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的体外观察珍珠粉、血竭、乳香、鹿茸、砒石的主要成分(水溶性珍珠粉、血竭素高氯酸盐、乳香水提物、鹿茸多肽、三氧化二砷)对人皮肤成纤维细胞(HSFb)的增殖及胶原蛋白合成的影响,初步探讨其治疗慢性皮肤溃疡的机制。方法组织块法体外培养HSFb;MTT法检测细胞增殖活性;羟脯胺酸比色法测定细胞胶原合成含量。结果药物分别作用于HSFb 48 h后,水溶性珍珠粉在1.25×102~1×103mg/L,血竭素在5.0×100~2.0×101mg/L,乳香水提物在6.4×10-1~2.0×103mg/L,鹿茸多肽在6.25×10-3~4.0×10-1mg/L浓度范围内对HSFb具有促增殖作用,与对照组比较差异显著(P<0.01或P<0.05),三氧化二砷在1.6×10-1~8.0×10-1mg/L浓度范围内对HSFb增殖具有抑制作用,与对照组比较差异显著(P<0.01)。药物分别作用于HSFb 48 h后,水溶性珍珠粉在2.5×102~1×103mg/L,血竭素高氯酸盐在2.5×100~2.0×101mg/L,乳香水提物在6.4×10-1~2.0×103mg/L,鹿茸多肽在1.6×10-3~4.0×10-1mg/L浓度范围内对HSFb胶原蛋白合成具有促进作用,与对照组比较差异显著(P<0.05或P<0.01),三氧化二砷在3.2×10-2~8.0×10-1mg/L浓度范围内对HSFb胶原蛋白合成具有抑制作用,与对照组比较差异显著(P<0.05或P<0.01)。结论敛口生肌药珍珠粉(水溶性珍珠粉)、活血生肌药血竭(血竭素高氯酸盐)、活血生肌药乳香(乳香水提物)、温阳生肌药鹿茸(鹿茸多肽)可促进人皮肤成纤维细胞增殖和胶原合成,蚀疮化腐药砒石(三氧化二砷)抑制人皮肤成纤维细胞增殖和胶原合成。     

地塞米松对肾间质成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的"探讨糖皮质激素在肾脏病治疗中可能的作用机理. 方法"采用MTT比色法和L-3H-脯氨酸掺入法,观察地塞米松对体外培养的肾间质成纤维细胞增殖及胶原合成的影响. 结果"一定浓度范围内的地塞米松抑制成纤维细胞的胶原合成,但未见其对细胞增殖有影响. 结论"糖皮质激素可作用于肾间质成纤维细胞,抑制胶原的合成,从而可延缓肾间质纤维化的进程.     

地塞米松对肾间质成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的 探讨糖皮质激素在肾脏病治疗中可能的作用机理。方法 采用ＭＴＴ比色法和Ｌ－＾３Ｈ－脯氨酸掺入法,观察地塞米松对体外培养的肾间质成纤维细胞增殖及胶原合成的影响。结果 一定浓度范围内地地塞米松抑制成纤维细胞的胶原合成,但未见其对细胞增殖有影响。结论 糖皮质激素可作用于肾间质成纤维细胞,抑制胶原的合成,从而可延缓肾间质纤维化的进程。     

染料木素和槲皮素对成纤维细胞增殖和胶原合成的抑制作用

目的：研究染料木素（genistein,GE)和槲皮素（quercetin,QU)对成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法：用结晶紫染色法测定光密度值检测NIH3T3成纤维细胞增殖,用3H－脯氨酸掺入法测定3H－脯氨酸掺入NIH3T3细胞的Bq值表示胶原合成作用,结果：GE和QU都能浓度依赖性 抑制血清,血小板源生长因子（PDGF）或转化生长因子β1（TGF－β1）刺激的NIH3T3细胞增殖和胶原合成。结论：GE和QU具有体外抑制成纤维细胞增殖和胶原合成的作用。     

组织金属蛋白酶抑制物对大鼠脑外伤后神经细胞凋亡及基质金属蛋白酶9、胱天蛋白酶3表达的影响

目的探讨组织金属蛋白酶抑制物(TIMP)对大鼠脑外伤后海马区脑组织中神经细胞凋亡及基质金属蛋白酶9(MMP-9)、胱天蛋白酶3(caspase-3)表达的影响,以了解TIMP在大鼠脑外伤后的脑保护作用及其机制。方法将90只体质量为250~350 g的SD大鼠按抽签法随机分为3组,各30只。正常对照组:不作处理;生理盐水组:制作大鼠弥漫性轴索损伤模型前0.5 h向侧脑室注入0.9%氯化钠溶液10μL;TIMP组:制作大鼠弥漫性轴索损伤模型前0.5 h向侧脑室注入TIMP10μL。将生理盐水组及TIMP组大鼠利用颅脑瞬间旋转模型致鼠脑弥漫性轴索损伤。每组分别于制作脑损伤模型后1、3、6、24、72、168 h共6个时间点处死大鼠,每个时间点随机选取大鼠5只,取3组大鼠海马区脑组织标本,用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测凋亡神经细胞,用免疫组织化学法测定MMP-9、caspase-3表达,并比较分析同一时间点3组间的差异。结果 1正常对照组中少见凋亡神经细胞,受损伤两组中凋亡神经细胞数明显增多(P<0.05),TIMP组各时间点凋亡神经细胞数均显著低于生理盐水组(P<0.05)。2与正常对照组比较,生理盐水组和TIMP组中MMP-9、caspase-3有明显表达(P<0.05),与生理盐水组比较,TIMP组中在各时间点MMP-9、caspase-3表达显著下降(P<0.05)。结论脑外伤后大鼠海马区脑组织中存在神经细胞凋亡及MMP-9、caspase-3表达的变化,而TIMP能抑制MMP-9表达及caspase-3的激活,使抗凋亡作用增强,减少脑外伤后大鼠海马区脑组织中神经细胞凋亡,表明其对脑外伤后大鼠具有一定的脑保护作用。     

组织金属蛋白酶抑制物对大鼠脑外伤后神经细胞凋亡及基质金属蛋白酶9、caspase-3表达的影响

目的：探讨组织金属蛋白酶抑制物（ TIMP）对大鼠脑外伤后海马区脑组织中神经细胞凋亡及基质金属蛋白酶9（MMP-9）、caspase-3表达的影响,以了解TIMP在大鼠脑外伤后的脑保护作用及其机制。方法将90只体质量为250～350 g的SD大鼠按抽签法随机分为三组,各30只。正常对照组：不作处理;生理盐水组：制作大鼠弥漫性轴索损伤模型前0．5 h 向侧脑室注入0．9％氯化钠溶液10μL;TIMP组：制作大鼠弥漫性轴索损伤模型前0．5 h向侧脑室注入TIMP 10μL。将生理盐水组及TIMP组大鼠利用颅脑瞬间旋转模型致鼠脑弥漫性轴索损伤。每组分别于制作脑损伤模型后1、3、6、24、72、168 h共6个时间点处死大鼠,每个时间点随机选取大鼠5只,取三组大鼠海马区脑组织标本,用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测凋亡神经细胞,用免疫组织化学法测定MMP-9、caspase-3表达,并比较分析同一时间点三组间的差异。结果①正常对照组中少见凋亡神经细胞,受损伤两组中凋亡神经细胞数明显增多（P＜0．05）,TIMP组各时间点凋亡神经细胞数均显著低于生理盐水组（P＜0．05）。②与正常对照组比较,受损伤两组中 MMP-9、caspase-3有明显表达（P＜0．05）,与生理盐水组比较,TIMP组中在各时间点 MMP-9、caspase-3表达显著下降（P＜0．05）。结论脑外伤后大鼠海马区脑组织中存在神经细胞凋亡及MMP-9、caspase-3表达的变化,而TIMP能抑制MMP-9表达及caspase-3的激活,使抗凋亡作用增强,减少脑外伤后大鼠海马区脑组织中神经细胞凋亡,表明其对脑外伤后大鼠具有一定的脑保护作用。     

基质金属蛋白酶9、微量元素和胎膜早破的关系

胎膜早破(PROM)指临产前的胎膜破裂,其发生率国外5%~15%,国内2·7%~17%[1],是威胁母儿健康的一个常见产科并发症,因此PROM日益受到产科界重视。尽管对PROM发生的原因研究颇多,但其确切病因尚不清楚。近年认为胎膜破裂与胎膜本身的结构变化密切相关。基质金属蛋白酶是一类结构中     

基质金属蛋白酶9、微量元素和胎膜早破的关系

胎膜早破(PROM)指临产前的胎膜破裂,其发生率国外5%～15%,国内2.7%～17%[1],是威胁母儿健康的一个常见产科并发症,因此PROM日益受到产科界重视.尽管对PROM发生的原因研究颇多,但其确切病因尚不清楚.近年认为胎膜破裂与胎膜本身的结构变化密切相关.基质金属蛋白酶是一类结构中含Zn2+和Ca2+的蛋白水解酶,能降解细胞外基质中的所有蛋白成分,调控细胞外基质含量和胎膜结构.另外羊膜的弹性、脆性是由纤维母细胞层决定的,而铜参与赖氨酰氧化酶的生化过程,后者与弹性蛋白和胶原纤维的合成有关.本文就MMP-9、Cu2+和胎膜早破的关系作一综述.     

强脉冲光对UVB照射后人皮肤成纤维细胞金属基质蛋白酶-1、金属基质蛋白酶-3表达的影响

目的 观察强脉冲光(IPL)照射人皮肤成纤维细胞后金属基质蛋白酶-1(MMP-1)、金属基质蛋白酶-3(MMP-3)表达的变化,探讨强脉冲光嫩肤的分子生物学机制.方法 原代培养人皮肤成纤维细胞,分为三组:A组(正常对照组):无UVB照射无IPL照射;B组(UVB照射组):采用UVB(20 mJ/cm2)照射成纤维细胞;C组(UVB+IPL照射组):先用UVB(20 mJ/cm2)照射成纤维细胞,24 h后再用强脉冲光照射成纤维细胞.培养48 h后采用免疫组化检测细胞中MMP-1、MMP-3的表达.结果 UVB照射后成纤维细胞中MMP-1及MMP-3表达较对照组显著升高(P＜0.05),C组成纤维细胞MMP-1及MMP-3表达较B组显著降低.结论 强脉冲光能显著抑制UVB导致的成纤维细胞MMP-1、MMP-3的表达升高,可能通过该机制改善光老化中皱纹的形成.