shRNA沉默GnT-V基因表达对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响

目的构建针对N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V（GnT-V）的小片段发夹状RNA（shRNA）表达质粒,研究shRNA表达质粒沉默GnT-V基因后对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。方法设计针对GnT-V基因的小于扰RNA（siRNA）靶序列,构建shRNA表达载体并转染PC-3细胞,通过G418筛选,建立稳定表达GnT-V基因的细胞株,采用RT-PCR和蛋白质印迹检测GnT-VmRNA和蛋白的表达,并通过CCK-8增殖实验、流式细胞仪评价GnT-VshRNA对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。结果成功构建了GnT-VshRNA表达质粒,且该质粒明显下调GnT-V的表达;PC-3细胞GnT-V／1079的tuRNA和蛋白质水平的抑制率分别为76．5％和67．0％,对PC3细胞呈明显抑制效应;CcK-8增殖实验显示,与对照组相比,PC-3GnT-V／1079的增殖受到明显抑制（P〈0．01）,以48h为著;流式细胞仪检测结果表明,PC-3GnT-V／1079的凋亡率明显增加（P〈0．05）。结论shRNAGnT-V能显著降低GnT-V基因的表达水平,从而有效抑制PC-3细胞增殖。并促进细胞凋亡,该GnT-V的siRNA序列可能成为治疗前列腺癌的有效靶点。     

沉默核干因子基因表达对HL-60白血病细胞凋亡的影响

本研究探讨靶向沉默白血病细胞的核干因子（nucleostemin,NS）基因对HL-60白血病细胞凋亡的影响。用T7启动子介导体外合成两条短发夹状干扰RNA（NS-shRNA）,以其中沉默NS基因作用强的一条NS-shRNA转染HL-60细胞,同时以与NS基因序列无关小干扰RNA转染HL-60细胞作对照,应用RT-PCR检测被转染的HL-60细胞NS-mRNA抑制效果,倒置显微镜下观察活体细胞形态变化,Wright-Giemsa染色观察细胞胞体和细胞核形态学变化,以流式细胞仪（FCM）和TdT介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）测定凋亡细胞数并计算凋亡阳性率。结果表明：HL-60细胞被NS-shRNA转染48小时后NS-inRNA阻断率达到74．94％,凋亡率分别为（25．32±3．06）％和（27．3±3．21）％,对照组仅（3．12±0．38）％和（3．30±1．52）％,转染组与对照组比较差异显著（P〈0．01）。Wright-Giemsa染色显示细胞发生核碎裂并出现“凋亡小体”。结论：靶向沉默NS基因表达可诱发和促进HL-60白血病细胞发生凋亡,为NS基因作为恶性肿瘤治疗的候选靶基因奠定了理论基础。     

c-myc小干扰RNA诱导人髓系白血病细胞系HL-60细胞凋亡

本研究探讨c-myc小干扰RNA对白血病细胞系HL-60诱导凋亡的作用。将体外合成的siRNA转染HL-60细胞,观察形态学变化,应用MTT法绘制细胞生长曲线,用细胞集落培养观察c-mycsiRNA对HL-60细胞增殖的影响;应用DNA片段化分析细胞的凋亡,RT—PCR及Western blot检测c-mycsiRNA作用前后Comyc基因mRNA及蛋白表达水平的变化。结果表明：ComycsiRNA能明显抑制HL-60细胞增殖,半数抑制浓度（IC50）约为150nmol／L;DNA片段化的检出证实C-mycsiRNA能有效诱导HL-60细胞调亡,凋亡率与药物作用时间呈正相关。C-mycsiRNA与HL-60细胞作用后C-myc基因和蛋白的表达水平与作用时间呈负相关。结论：C-mycsiRNA能有效抑制HL-60细胞增殖,降低C-myc基因和蛋白的表达,诱导其凋亡。     

RNA干扰生存素基因表达对肺腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的采用RNA干扰技术探讨生存素（survivin）对人肺腺癌细胞增殖及凋亡的影响及其可能的分子机制。方法采用脂质体介导将pGCsi—shsurvivin与pGCsi质粒转染人肺腺癌细胞株A549,经G418筛选获得稳定抑制survivin表达的肺腺癌细胞模型;Westernblot检测转染细胞survivin、p21、鼠双微体基因2（MDM2）蛋白表达;M,丌比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性;流式细胞仪检测各组细胞凋亡。结果成功构建稳定抑制survivin表达的肺腺癌细胞模型。与对照组相比,反义组p21表达及细胞凋亡率显著增加,而MDM2表达及细胞增殖显著降低。结论下调A549细胞survivin表达后,细胞增殖降低而细胞凋亡增加,其作用机制与p21表达增加和MDM2降低有关。     

HDAC1 siRNA转染对肺腺癌NCI-H1299细胞增殖及凋亡的影响

目的 通过HDACl siRNA转染肺腺癌细胞株NCI-H1299,观察HDACs中HDACl对肺腺癌细胞增殖、周期和凋亡的影响,明确HDACl在肺腺癌细胞生长中的作用.方法 MTT法检测不同时间点HDACl siRNA转染对NCI-H1299细胞体外增殖的影响,流式细胞术榆测RNA干扰后细胞周期及凋亡率的变化;Western印迹法检测细胞内组蛋白H4乙酰化水平的变化.结果 HDACl siRNA转染NCI-H1299细胞后,HDACl在转录和表达水平均下降,组蛋白H4乙酰化表达增高.siRNA干扰后NCI-H1299细胞的体外生长抑制呈时间依赖性,流式细胞术检测结果显示细胞阻滞于G2/M期,细胞凋亡增加.结论 HDACl siRNA转染能有效地抑制HDACl在NCI-H1299细胞中的表达,增加NCI-H1299细胞中组蛋白的乙酰化,并影响NCI-H1299细胞相关生物学行为,抑制肺腺癌细胞的生长,为HDACl基因治疗应用于肺腺癌奠定了基础.     

慢病毒介导的RNA干扰HMGA2基因表达对HL-60细胞增殖及细胞周期素B2、A2表达的影响

目的 探讨慢病毒介导的RNA干扰沉默高迁移率族蛋白A2(HMGA2)基因表达对人急性白血病细胞系HL-60细胞增殖及细胞周期素(cyclin) B2、cyclin A2表达的影响.方法 制备表达HMGA2基因短发夹RNA(shRNA)的重组慢病毒载体,转染HL-60细胞.通过半定量RT-PCR和Western blot检测特异性shRNA转染后HL-60细胞HMGA2基因表达;CCK-8法检测细胞增殖抑制率;软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术(FCM)检测细胞周期; RT-PCR及Western blot检测cyclin B2、cyclin A2 mRNA和蛋白表达水平.结果 RT-PCR和测序证实,成功构建了表达HMGA2 shRNA的重组慢病毒载体;RT-PCR和Western blot证实经嘌呤霉素筛选出的阳性克隆转染的HL-60细胞HMGA2 mRNA和蛋白表达水平与空载体组相比明显受抑,抑制率分别达(80.66 ± 7.98)%和(76.35±12.72)%;CCK-8比色结果显示,HMGA2表达受到稳定干扰的HL-60细胞增殖活力明显受到抑制,细胞增殖曲线低平,缺乏指数增殖特征.FCM检测显示,与对照组相比,转染特异性shRNA的HL-60细胞出现了明显的G2/M期阻滞,G2/M期细胞分别为(13.90±4.07)%和(30.00±5.78)%(P<0.05).HMGA2特异性shRNA转染的HL-60细胞cyclin B2 mRNA和蛋白表达与未转染细胞相比,抑制率分别为(67.55±7.69)%和(51.77±4.81)%(P<0.01).而cyclin A2的表达无明显改变.结论 HMGA2基因沉默可下调cyclin B2表达,从而使细胞出现明显的增殖抑制和G2/M期阻滞.     

siRNA沉默Annexin Ⅱ对淋巴瘤细胞系Jurkat细胞增殖和趋化能力的影响

目的 观察沉默Annexin Ⅱ(AnxA2)基因对淋巴瘤细胞系Jurkat细胞增殖、趋化能力的影响.方法 应用实时荧光定量RT-PCR和流式细胞术鉴定小干扰RNA(siRNA)对人淋巴瘤细胞系Jurkat细胞的转染效果,应用MTT法检测AnxA2 siRNA对Jurkat细胞增殖的作用,应用Transwell检测对细胞趋化能力的影响.结果 AnxA2 siRNA干扰组在24、48、72 h细胞生长抑制率分别为(17.4±2.3)%、(22.4±3.8)%和(37.6±1.5)%,与阴性对照组[分别为(-1.3±5.1)%、(-5.5±4.4)%和(-10.8±5.5)%]比较差异有统计学意义(P<0.05),AnxA2 siRNA干扰对Jurkat细胞增殖起抑制作用;AnxA2 siRNA干扰组细胞趋化能力(11.3±4.2)显著低于阴性对照组(54.3±8.7,P<0.01),AnxA2 siRNA干扰可显著降低细胞趋化能力.结论 siRNA沉默AnxA2基因可抑制Jurkat细胞增殖、趋化能力.     

特异性siRNA抑制XIAP基因表达对人内膜癌细胞凋亡的影响

【目的】探讨RNA干扰抑制内膜癌RL95-2细胞XIAP基因表达及对细胞凋亡的影响。【方法】设计并合成XIAP基因特异性siRNA,转染人内膜癌RL95-2细胞,Real time RT-PCR检测转染后XIAP mRNA的变化,Western Blot检测 XIAP蛋白的变化,MTT 及流式细胞仪法检测细胞增值和凋亡的变化。【结果】XIAP siRNA转染后,特异性转染组mRNA转录量的相对倍数值为0．04±0．06,相对蛋白表达量分别为0．590±0．178,较各对照组明显减少（P＜0．05）;特异性转染组细胞生长抑制率为（47．86±4．46）％,较对照组明显增高（P＜0．05）。【结论】体外实验表明,合成的 siRNA能在mRNA水平及蛋白水平有效抑制人内膜癌RL95-2细胞内 XIAP基因的转录及表达,进而显著的促进内膜癌细胞凋亡,其促凋亡机制仍有待进一步研究。     

RNA干扰Livin基因联合顺铂对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨RNA干扰Livin基因联合顺铂对喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2细胞增殖和凋亡的影响。方法 取人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株1株进行体外培养,取对数生长期细胞随机分为对照组(细胞未经任何处理)、干扰组(细胞经RNA干扰Livin转染)、顺铂组(细胞经6μmol/L顺铂处理)、联合组(细胞经RNA干扰Livin转染+6μmol/L顺铂处理),每组设置6个复孔。处理48 h后,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测各组细胞增殖抑制率,采用流式细胞仪双染法检测细胞凋亡率和细胞周期分布,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达。结果 联合组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均高于干扰组、顺铂组,差异有统计学意义(P<0.05)。联合组G₀/G₁期细胞占比均高于干扰组、顺铂组,S期和G₂/M期细胞占比均低于干扰组、顺铂组,差异有统计学意义(P<0.05)。联合组Bcl-2 mRNA水平低于干扰组、顺铂组,Bax mRNA水平高于干扰组、顺铂组,差异有统计学意义...     

RNA干扰骨髓基质细胞衍生因子表达对共培养Jurkat细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨阻抑骨髓基质细胞衍生因子(SDF1)表达对与其共培养的Jurkat细胞增殖、凋亡的影响。方法脂质体介导SDF1特异性RNA干扰质粒转染培养的急性白血病骨髓基质细胞,G418筛选阳性克隆(A组),采用ELISA法检测SDF1表达变化;与Jurkat细胞共培养,绘制生长曲线并计算倍增时间,用流式细胞术检测细胞周期,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺失末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡,免疫细胞化学检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl2、Bax、Fas、FasL表达。以未转染急性白血病骨髓基质细胞(B组)及正常骨髓基质细胞(C组)作为对照。结果A组骨髓基质细胞培养上清SDF1含量为(384±41)pg/ml,较B组[(2474±271)pg/ml]、C组[(1324±154)pg/ml]明显降低。与之共培养的Jurkat细胞,A组与B组、C组比较,细胞增殖速度减缓,倍增时间延长(A组42h,B组29h,C组33h);细胞周期分析G0/G1期细胞比例增多[A组(28.47±2.39)%,B组(19.43±2.80)%,C组(27.15±2.07)%],S期细胞减少[A组(25.57±1.90)%,B组(74.48±3.23)%,C组(60.99±2.33)%],G2/M期细胞增多[A组(45.96±3.24)%,B组(6.09±1.96)%,C组(11.86±1.98)%];细胞凋亡率增加[A组(15.2±0.8)%,B组(5.4±0.7)%,C组(9.5±0.4)%];PCNA、Bcl2、Fas表达减少,Bax、FasL表达增多。结论阻抑SDF1表达在一定程度上抑制与骨髓基质细胞共培养的Jurkat细胞的增殖活性,并促进其凋亡。     

Embelin对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的 研究Embelin对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响,并对其作用机制进行初步探讨.方法 用不同浓度的Embelin处理HL-60细胞,采用MTT法绘制生长曲线,通过Annexin V/PI 复染及JC-1染色,观察Embelin对HL-60细胞凋亡的影响;通过流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD33、CD34、CD11b和CD14表达的变化.在对HL-60细胞研究的基础上,选择9例急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者的骨髓进行相应的研究.结果 Embelin对HL-60细胞具有增殖抑制作用,且作用呈时间和剂量依赖性.24 h的,IC50值为429.98 μmoL/L.33.97 μmol/L的Embelin作用HL-60细胞3 d,流式细胞术检测结果 显示CD11b、CD14阳性细胞率均升高(P值均<0.01);339.67 μmol/L Embelin作用于HL-60细胞后12、24及48 h的特异性凋亡率分别为(9.23 ±0.05)%、(25.86 ±0.30)%和(39.03±0.07)%,10.19、33.97、101.90、339.67及1019.02 μmol/L Embelin作用于HL-60细胞24 h后特异性凋亡率分别为(0.07±0.03)%、(7.43±0.30)%、(14.01±0.01)%、(25.52±0.03)%和(39.15±0.01)%,其诱导凋亡的作用呈时间及剂量依赖性.33.97 μmol/L的Embelin作用于ANLL 患者骨髓细胞3 d,3例M3患者骨髓细胞表面分化抗原出现显著性改变;339.67 μmol/L的Embelin作用患者骨髓细胞24 h,9例均发生凋亡.结论 亚细胞毒浓度的Embelin可诱导HL-60细胞向单核细胞分化;高浓度的Embelin对HL-60细胞具有增殖抑制及促进凋亡的作用.其促进凋亡的机制与线粒体凋亡途径有关.亚细胞毒浓度的Embelin对体外培养的M3患者骨髓细胞具有促进分化的作用;339.67 μmol/L的Embelin对ANLL骨髓细胞具有促进凋亡的作用.     

大萼香茶菜甲素对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的 探讨大萼香茶菜甲素(macrocalyxin A,MA)对白血病细胞系HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响,并对其作用机制进行初步探讨.方法 用不同浓度的MA处理HL-60细胞,锥虫蓝染色、MTT比色法观察对HL-60细胞增殖的影响;以细胞形态学、DNA含量及细胞周期分析、Annex-in-V/PI双标记和Hoechst 33258荧光染色等分析细胞凋亡;通过细胞表面抗原CD11b、CD13、CD14,NBT试验和细胞形态学检测MA诱导HL-60细胞的分化作用;用流式细胞术检测Bcl-2、Bax、P53、Fas表达和线粒体膜蛋白、线粒体跨膜电位(△Ψm)的变化.结果 HL-60细胞经MA作用后,MA呈时效及量效性地抑制HL-60细胞增殖,24、48、72 h的IC50值分别为8.76、7.17、7.14μg/ml;形态学出现典型的凋亡细胞特征,亚G1期细胞和Annexin-V/PI标记阳性细胞显著升高;细胞发生部分分化,CD11b表达增加,NBT阳性细胞增多;MA诱导HL-60细胞凋亡和分化过程中,Bcl-2、Fas、P53表达无明显变化,Bax、线粒体膜蛋白表达显著增加,Bax/Bcl-2比值升高,线粒体膜电位(△Ψm)下降.结论 MA能抑制HL-60细胞增殖、诱导HL-60细胞向粒系分化、促进细胞凋亡,其机制与上调bax基因和bax/bcl-2比值、提高线粒体膜通透件和下调线粒体膜电位等有关.     

小檗碱对HL-60细胞增殖、凋亡及血管内皮生长因子受体2表达的影响

本研究旨在观察小檗碱对人早幼粒白血病HL-60细胞的增殖、凋亡及血管内皮生长因子受体-2(VEGFR2)表达的影响。选用HL-60细胞体外培养,在不同浓度的小檗碱(6-96μg/ml)作用下,应用CCK-8法检测小檗碱对HL-60细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞仪检测HL-60细胞的凋亡水平及细胞周期的分布;用RT-PCR及Western blot分别检测VEGFR2 mRNA及VEGFR2蛋白表达的变化。结果显示,小檗碱能抑制HL-60细胞的增殖,促进其凋亡,呈浓度和时间依赖关系。随着小檗碱浓度增加,G1期细胞增多,S期细胞减少,同时VEGFR2 mRNA和VEGFR2蛋白表达减少。结论:小檗碱可抑制HL-60细胞增殖,促进细胞凋亡,改变HL-60细胞周期,下调VEGFR2 mRNA及VEGFR2蛋白的表达。     

Mcl-1基因在HL-60细胞对全反式维甲酸耐药机制中的作用

目的探讨髓系白血病-1(Mcl-1)基因在HL60细胞对全反式维甲酸(ATRA)耐药中的作用。方法采用少量、递增、反复ATRA诱导HL-60细胞,建立ATRA耐药细胞系HL60/ATRA;利用鸡尾酒法制备Mcl-1基因的小片段干扰RNA(SmallinterferenceRNA,siRNA),并通过脂质体介导将其导入HL60/ATRA细胞;Westernblot检测Mcl-1蛋白在细胞中的表达;MTT实验、NBT还原反应实验、TUNEL免疫组化染色法分别检测细胞的增殖、分化和凋亡情况。结果HL60/ATRA细胞Mcl1蛋白相对灰度值为0.624±0.127,较野生型HL60细胞(相对灰度值为0.162±0.127)明显高表达,并可耐受100nmol/L的ATRA,而不发生分化、凋亡[凋亡率为(1.0±0.5)%];Mcl1siRNA导入HL60/ATRA细胞后,Mcl1蛋白表达下调(相对灰度值为0.267±0.086),恢复对ATRA的敏感性[凋亡率为(18.5±4.5)%]。结论Mcl1基因可能参与了HL60细胞ATRA耐药的形成;抑制Mcl-1基因可能成为一种新的逆转ATRA耐药的策略。     

脂质体转染细胞周期素A反义脱氧寡核苷酸对HL-60细胞增殖及凋亡的调控作用

目的探讨脂质体转染细胞周期素A(cyclin A)反义脱氧寡核苷酸(ASON)对HL-60细胞增殖及凋亡的影响.方法采用脂质体转染技术将cyclin A ASON与HL-60细胞共同培养,用MTT法绘制细胞生长曲线,用电镜、细胞原位凋亡检测(POD)等方法观察细胞凋亡,用流式细胞术(FACS)及RT-PCR法检测cyclin A、bcl-2表达,并通过裸鼠成瘤实验验证cyclin A在白血病发生中的作用.结果脂质体转染cyclin A ASON组和cyclin A ASON组的HL-60细胞生物抑制率分别为68.9%和24.8%(P<0.01).脂质体转染cyclin A ASON组cyclin A及bcl-2表达水平(1.1%和21.9%)较对照组(38.8%和65.0%)明显减低(P值均<0.01),并能检测出DNA断裂,观察到凋亡细胞.裸鼠实验中发现脂质体转染cyclin A ASON组与对照组相比,其成瘤率低,成瘤时间延长,同一时间成瘤的瘤体体积明显缩小.结论脂质体转染cyclin A ASON能在体外及动物体内明显抑制白血病细胞的生长,且有诱导细胞凋亡的作用,可能会成为基因治疗的一个新靶点.     

c-Met siRNA对U87-EGFRvⅢ胶质瘤细胞凋亡和增殖的影响

目的:合成针对c-Met的小干扰RNA(siRNA),研究其对U87-EGFRvⅢ(表皮生长因子受体Ⅲ型突变体)胶质瘤细胞凋亡和增殖的影响.方法:用脂质体转染合成的c-Met siRNA入U87-EGFRvⅢ细胞,未转染组为对照组,荧光实时定量PCR和Western blotting分别检测c-Met基因和蛋白的表达,MTT和AnnexinV-FITC/PI法检测细胞增殖和凋亡情况.结果:c-Met siRNA明显抑制c-Met表达(P＜ 0.05);明显增加细胞凋亡率(P＜0.05).同时,c-Met siRNA单独或协同EGFRvⅢsiRNA可抑制胶质瘤细胞增殖(P＜0.05).结论:c-Met siRNA可抑制U87-EGFRvⅢ胶质瘤细胞增殖、诱导其凋亡,为研究c-Met基因在胶质瘤中的作用及其靶向联合治疗提供了理论基础.     

黄芩苷诱导HL-60细胞凋亡的分子机制研究

本研究旨在探讨黄芩苷对急性髓系白血病HL-60细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。CCK-8法检测黄芩苷对HL-60细胞增殖抑制情况;普通光学显微镜和Hoechst 33342染色后荧光显微镜下观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测凋亡相关基因caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax mRNA表达;Westernblot检测Bcl-2、Bax、caspase-8及caspase-3剪切片段的蛋白表达。结果表明,黄芩苷对HL-60细胞具有明显的增殖抑制作用,呈浓度和时间依赖性;在光学显微镜和荧光显微镜下细胞均呈凋亡的形态学改变;AnnexinⅤ/PI法检测到细胞早期凋亡;caspase-3、caspase-9、Bax基因mRNA表达水平呈上升趋势,Bcl-2 mRNA表达水平呈下降趋势,Bax、caspase-8及capsase-3剪切片段蛋白表达上调,同时Bcl-2蛋白表达下调,Bcl-2/Bax比值降低。结论:黄芩苷显著抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与降低Bcl-2/Bax比值,激活线粒体凋亡途径及死亡受体途径有关。     

染料木黄酮诱导HL-60细胞凋亡的作用途径

背景：近年的研究发现，染料木黄酮具有抗氧化、抑制血管生成、调节细胞周期等生物活性。 目的：观察染料木黄酮在体外诱导HL-60细胞凋亡过程中，对HL-60细胞c—Myc，Bcl-2和增殖细胞核抗原表达水平的影响，并分析其作用途径。 设计、时间及地点：对比观察的细胞分子生物学实验，于2006—03／2007—09在广东医学院血液疾病研究室完成。 材料：人早幼粒细胞白血病细胞株HL-60来源于中国典型培养物保藏中心。 方法：HL-60细胞分别以0．1，0．5和1．0mmol／L的染料木黄酮处理12～16h，显微镜下观察并经DNA凝胶电泳检测细胞凋亡情况。分别经碘化丙啶染色和经异硫氰酸荧光素标记的鼠抗人Bcl-2，c-Myc及增殖细胞核抗原单克隆抗体作用后，用流式细胞仪检测凋亡细胞和Bcl-2，c-Myc和增殖细胞核抗原阳性细胞的表达百分率。 主要观察指标：①HL-60凋亡细胞的形态学变化。②HL-60细胞凋亡百分率和c-Myc，Bcl-2及增殖细胞核抗原表达阳性率。 结果：①HL-60细胞经染料木黄酮处理12～16h，显微镜下可见核碎裂和凋亡小体等细胞凋亡形态学改变：DNA凝胶电泳显示典型的凋亡DNA梯形条带。②0．1～1．0mmol／L的染料木黄酮在诱导HL-60细胞凋亡同时，下调Bcl-2，c-Myc和增殖细胞核抗原表达水平。且均呈剂量效应关系。 结论：染料木黄酮可能通过抑制Bcl-2和c-Myc的表达水平从而诱导HL-60细胞凋亡；而增殖细胞核抗原表达下调，则可能是染料木黄酮诱导HL-60细胞凋亡的结果。     

干扰素α-2b对人类早幼粒白血病细胞株HL-60细胞的抑制增殖与促进凋亡的作用

背景:儿童急性白血病复发的主要根源是微小残留白血病细胞的存在,在试图清除微小残留病的众多治疗方法中,免疫生物治疗越来越受重视。以前的研究发现干扰素α-2b能有效抑制神经母细胞瘤和恶性淋巴瘤患儿体内肿瘤细胞的增长,其能否抑制白血病细胞的增长?目的:通过体外实验观察干扰素α-2b对白血病细胞的影响。设计:以人类早幼粒白血病细胞株HL-60为观察对象,对比观察实验。单位:青岛大学医学院附属医院儿科研究所细胞培养室、免疫实验室、细胞室。材料:HL-60细胞系由山东省医学科学院基础所提供。干扰素α-2b购自Megagene公司,FITC-兔抗鼠Ig工作液(CatEK001)和CD13抗人单克隆抗体工作液(Cat.DK013Y)购自协和干细胞基因工程有限公司。方法:体外建立HL-60细胞培养体系,调整细胞浓度为1×10~9 L~(-1),分为对照组和实验组,各实验组中加入终含量分别为5×10~5,1×10~6,2×10~6,5×10~6,1×10~7U/L的干扰素α-2b,对照组加入等量生理盐水,继续培养48 h。光镜下采用瑞氏染色观察HL60细胞的形态变化,采用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双染色观察细胞凋亡,通过CD13蛋白表达测定观察细胞膜抗原表达及成熟分化,通过MTT实验检测HL-60细胞增殖活性。主要观察指标:根据HL-60细胞核染色质是否均匀一致及着色情况,判断细胞是否发生凋亡;根据酶标仪检测的吸光度(A值)判断HL-60细胞增殖情况;根据CD13阳性细胞数量判断HL-60细胞成熟程度。结果:①HL-60细胞凋亡:培养48h,当干扰素α-2b为5×10~5U/L时,以早期凋亡细胞为主,当干扰素α-2b含量为1×10~7 U/L时,以晚期凋亡细胞为主,HL-60细胞凋亡率均高于对照组,差异有显著性意义(X~2= 23.79.29.57,P<0.01)。②HL-60细胞增殖情况:当干扰素α-2b含量为2×10~6 U/L和1×10~7 U/L时,A值均低于对照组,差异有显著性意义(t=5.65,11.31,P<0.01)。③HL-60细胞成熟程度:当干扰素α-2b含量为1×10~6U/L和1×10~7 U/L时,CD13~ 细胞百分比均低于对照组,差异有显著性意义(x~2=6.89,14.73,P<0.01)。结论:干扰素α-2b有促进HL-60细胞凋亡、抑制HL-60细胞增殖和促进分化成熟的作用。