姜黄素影响N2a/APP695swe细胞中ABCA1表达的机制研究

目的：研究姜黄素（Curcumin）对N2a/APP695swe细胞钙调神经磷酸酶（Calcineurin,CaN）活性和三磷酸腺苷结合转运子A1（ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1）表达的影响;探讨Curcumin影响N2a/APP695swe细胞中ABCA1表达的可能机制。方法：MTT法分别检测1、5、10、20、40 μmol/L Curcumin或0.1、0.5、1、2、4 μmol/L CaN活性抑制剂环孢素A（Cyclospo－rinA,CsA）对N2a/APP695swe细胞存活率的影响;依据MTT筛选结果,分为正常对照组、模型组、Curcumin组：5 μmol/L Cur－cumin处理24 h的N2a/APP695swe细胞、CsA组：0.5 μmol/L CsA处理48 h的N2a/APP695swe细胞。酶底物显色法检测CaN活性,real-time PCR、Western blot检测ABCA1表达水平的变化。结果：与未处理组比较,5 μmol/L Curcumin组细胞存活率[（110.495±4.005）%]最高（P=0.023）;0.1、0.5、1、2、4 μmol/L CsA组细胞存活率依次为（105.532±4.292）%、（115.211±4.826）%、（76.317±4.475）%、（69.177±5.267）%、（54.687±3.912）%,与未处理组比较,0.5、1、2、4 μmol/L CsA组差异均有统计学意义（P值依次为0.001、0.000、0.000、0.000）;酶底物显色法显示与正常对照组[（18.519±1.664） nmol/mg]比较,模型组CaN活性[（24.488±3.041） nmol/mg]增加（P=0.007）,Curcumin组[（16.717±2.055） nmol/mg]、CsA组[（4.928±1.232）nmol/mg] CaN活性明显受到抑制（P值依次为0.002、0.000）;real-time PCR和Western blot显示Curcumin组ABCA1表达量（real-time PCR：1.988±0.355;West－ern blot：0.294±0.015）高于模型组（real-time PCR：1.000±0.000;Western blot：0.175±0.008）,差异有统计学意义（real-time PCR：P=0.009;Western blot：P=0.000）;与模型组比较,CsA组（real-time PCR：4.000±0.464;Western blot：0.470±0.016）的ABCA1表达水平增加（real-time PCR：P=0.000;Western blot：P=0.000）。结论：Curcumin能上调N2a/APP695swe细胞中ABCA1的表达,其机理可能与抑制CaN活性有关。     

LXR激动剂TO901317抑制N2a/APP695swe细胞内Aβ生成的机制研究

目的 观察肝脏X受体(LXR)激动剂TO901317对N2a/APP695swe细胞内β-淀粉样蛋白42(Aβ42)生成的影响,并探索其潜在机制。方法 体外培养N2a/APP695swe细胞,并用不同浓度的TO901317(5、10和20μmol/L)作用于细胞,采用ELISA检测细胞上清液中生成的Aβ42水平变化;实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot分别检测N2a/APP695swe细胞内淀粉样前体蛋白(APP)、β-分泌酶(BACE1)和小凹蛋白-1(caveolin-1)mRNA和蛋白水平的表达。结果 ELSIA结果显示,TO901317明显降低了细胞上清液中生成的Aβ42水平(P<0.01),且呈浓度依赖性。RT-PCR和Western blot结果显示,TO901317明显抑制了APP和BACE1 mRNA及蛋白水平表达(P<0.01),促进了caveolin-1 mRNA和蛋白水平表达(P<0.01)。结论 TO901317能明显抑制N2a/APP695swe细胞内Aβ42的生成,其机制可能与TO901317促进caveolin-1...     

姜黄素改善N2a/APP695swe细胞线粒体功能和抑制细胞凋亡的作用

目的：观察姜黄素（curcumin）对N2a/APP695swe细胞线粒体形态和功能及细胞凋亡的影响;探讨其可能的神经保护机制。方法：实验细胞分为4个组：N2a/APP695组（WT）、N2a/APP695swe组（APP）、溶剂对照组（DMSO,5 μmol/L）、姜黄素组（Curcumin,5 μmol/L）。流式细胞术分别检测细胞凋亡、活性氧水平和膜电位水平、免疫细胞化学检测细胞色素C的表达、电镜观察细胞线粒体形态的改变,Western blot检测Caspase3、Caspase9蛋白表达,分光光度检测Caspase3、Caspase9酶活性。结果：流式细胞术结果显示,Curcumin组细胞的凋亡率、活性氧水平较APP组明显降低[（0.05±0.01） vs. （0.18±0.01）,P=0.000;（49.67±4.16） vs. （197.67±8.08）,P=0.000];而Curcumin组线粒体膜电位较APP组升高[（1.00±0.03） vs. （0.64±0.03）,P=0.000]。电镜结果发现姜黄素可以减轻线粒体的肿胀,改善其形态。同时免疫细胞化学结果显示姜黄素减少了细胞色素C的释放。Western blot检测发现,与APP组相比,Curcumin组Caspase3、Caspase9蛋白的表达均降低[（0.62±0.12） vs. （1.39±0.10）,P=0.000;（0.64±0.20） vs. （1.78±0.03）,P=0.000];并且Curcumin组较APP组的Caspase3与Caspase9的活性明显降低[（0.66±0.04） vs. （2.12±0.06）, P=0.000;（0.58±0.04） vs. （0.93±0.03）, P=0.000]。结论：姜黄素能抑制N2a/APP695swe细胞的凋亡,其机制可能与改善线粒体功能有关。     

人参皂苷Rg1对β淀粉样蛋白诱导细胞凋亡的影响

目的 探讨人参皂苷Rg1对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导细胞凋亡的影响及其机制.方法 利用中国仓鼠卵巢瘤细胞系(CHO)采用MTY方法筛选人参皂苷Rgl抗Aβ细胞毒性的有效浓度.通过转染突变型(M146L)PS1基因的CHO细胞(PS1M146L),利用免疫荧光染色、蛋白质免疫印迹方法,探讨人参皂苷Rg1对PS1M146L细胞中Aβ42和凋亡效应基因半胱氨酸蛋白水解酶(caspase-3)活性蛋白表达的影响,通过脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法和Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测,观察人参皂苷Rg1对Aβ促细胞凋亡的影响.结果 加用25、50、100 μmol/L人参皂苷Rg1的CHO细胞活性明显高于未加用组(均P＜0.05).在转染突变型PS1M146L的CHO细胞中,加用人参皂苷Rg1作用24 h后早期细胞凋亡数(10.11.11±0.76)较未加用组(15.01±1.46)少,差异有统计学意义(P＜0.05);同时Aβ42和caspase-3活性片段的蛋白质表达量较未加用组细胞亦不同程度降低(均P＜0.05).结论 人参皂苷Rg1可能通过降低Aβ42生成和降低caspase-3蛋白质表达抑制Aβ诱导的细胞凋亡.     

人参皂苷Rg1对Caco-2细胞PepT1转运功能的影响

[目的]观察人参皂苷Rg1对Caco-2细胞肽转运载体PepT1转运二肽化合物的能力及其蛋白、mRNA表达的影响.[方法]Caco-2细胞长满瓶底后继续培养28d,然后给予人参皂苷Rg1(终浓度为50mmol/L)处理,并设立空白对照组及cAMP抑制剂(Rp-8-Br-cAMP)对照组,采用放射性同位素示踪技术比较Ca...     

人参皂苷Rg1的抗抑郁作用及其作用机制

目的：观察人参皂苷Rg1的抗抑郁作用,探讨其抗抑郁机制。方法：采用小鼠悬尾（tail suspension test）和强迫游泳（forced swim test）建立急性应激模型,选择大鼠慢性温和不可预见性应激（chronic unpredictable mild stress,CUMS）的方法建立长期抑郁模型。同时给予人参皂苷Rg1（5,10,20 mg·kg^-1·d^-1）和度洛西汀（10 mg·kg^-1·d^-1）,观察Rg1的抗抑郁作用。结果：在急性应激实验中,Rg1三个剂量组（5,10,20 mg·kg^-1）均能够显著降低动物的不动时间。慢性应激后,采用强迫游泳和糖水消耗实验进行行为学检测,与模型组相比,Rg1三个剂量均能够显著降低大鼠在强迫游泳实验中的不动时间,增加糖水偏好实验中的糖水消耗百分比,延长动物的睡眠时间。机制研究证明,Rg1可抑制PDE₄引起cAMP的累积,进而激活cAMP介导的抗抑郁信号转导途径,还可增加雄激素水平,而雄激素又能拮抗糖皮质激素的释放和增加基础突触传递。此外,增加突触新生也是抗抑郁的重要机制。结论：人参皂苷Rg1对小鼠急性应激和CUMS诱导的大鼠抑郁行为有显著的改善作用,并可能通过调节神经递质和激素的释放、减少糖皮质激素含量、增加神经营养因子的表达以及增强突触可塑性来发挥抗抑郁作用。     

人参皂苷Rg1的多靶点作用和机制分析

多靶点治疗的意义多年前在国内外医学界尚属有争议的问题,现已达成共识,成为竞相研究并不断取得进展的热点研究课题。近几十年来,新药研究几乎都集中于设计和发现作用于单靶点的药物分子,以求达到高亲和性、高选择性和减少不良反应的目的。     

人参皂苷Rg1延缓造血干细胞衰老及其相关机制

目的 探讨人参皂苷Rg1调控造血干细胞(HSC)衰老的机制,为寻找延缓HSC衰老方法 提供理论指导和实验依据.方法 免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1+HSC后分5组:对照组、衰老组、Rg1组、Rg1治疗衰老组、Rg1延缓衰老组.β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色、细胞周期测定和造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养观察Rg1延缓Sca-1+HSC衰老的生物学作用.反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测衰老相关基因p161NK4a、p19Arf、p53、p21Cipl/Wafl mRNA的表达.Western印迹检测p16INK4a、p21 Cipl/Wafl、细胞周期蛋白(cyclin)D1、cyclin E、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、CDK2蛋白表达.结果 Rg1治疗衰老组及Rg1延缓衰老组Sca-1+HSC的SA-β-Gal染色阳性率(30.1%±2.4%,21.5%±2.8%)低于衰老组(69.5%±5.0%);G1期细胞比例(81.4%±1.2%,78.2%±1.4%)低于衰老组(87.5%±4.0%);生成CFU-Mix数[(8.0±2.2)个/104Sca-1+HSC、(9.2±1.8)个/104 Sca-1+HSC]高于衰老组[(3.0±1.6)个/104Sca-1+HSC];Rg1治疗衰老组及Rg1延缓衰老组Sca-1+HSC的p16INK4a、p19Arf、p53、p21 Cipl/Wafl mRNA及p16INKa、p21 Cipl/Wafl、cyclinD1蛋白表达均下调(均P＜0.01),CDK4、CDK2、cyclinE蛋白表达均上调(均P＜0.01).Rg1延缓衰老组各检测指标均较Rg1治疗组变化明显.结论 Rg1具有延缓及治疗Sca-1+HSC衰老的作用,p16INK4a-Rb及p19Aarf-Mdm2-p53-p21Cipl/Wafl信号通路在其中可能发挥重要作用.     

人参皂苷Rg1在神经系统疾病中的作用机制进展

人参、三七对神经系统疾病有保护作用,人参皂苷Rg1（ginsenoside Rg1）是其主要成分之一。本文回顾了近几年Rg1治疗神经系统疾病的文章,发现Rg1在抗凋亡、促进神经干细胞分化、调节神经元受体和离子通道、抗一氧化氮毒性、抗氧化应激、抗炎性反应以及调节突触可塑性方面等方面均有一定作用。     

姜黄素通过增强Rab7的表达促进N2a/APP695swe细胞中的自噬流

目的:观察姜黄素(curcumin)对稳定表达APP695swe的Neuro-2a小鼠脑神经瘤细胞(N2a/APP695swe)中自噬流的作用;再进一步深入探讨其作用于N2a/APP695swe细胞中自噬流的可能机制.方法:首先将细胞分成4组:野生型对照组(WT组)、空白对照组(Control组)、溶剂对照组(Sham组)、姜黄素组(Curcumin组).透射电镜观察各组中自噬体形态特点,Western blot检测p62和LC3Ⅱ的表达;并分别运用Western blot及免疫荧光检测Rab7蛋白表达,实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测Rab7 mRNA表达.在N2a/APP695swe细胞中分别过表达及沉默Rab7后,将细胞分成5组:Control组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-Rab7组、NC-siRNA组和Rab7-siRNA组.再运用透射电镜观察各组自噬体形态特点,Western blot检测p62和LC3Ⅱ蛋白表达.结果:经姜黄素处理后,透射电镜观察到细胞中的自噬体主要为单层膜结构的自噬溶酶体,同时,自噬活性关键性蛋白LC3Ⅱ的表达增加(P=-0.000),而自噬底物蛋白p62的表达减少(P=0.000);Rab7在蛋白水平及mRNA水平均明显升高(P=0.000、0.000).过表达Rab7后,自噬体主要为单层膜结构的自噬溶酶体,p62蛋白表达明显减少(P=0.000),LC3Ⅱ蛋白表达无明显变化(P=0.669).沉默Rab7后,自噬体主要为双层膜结构的早期自噬体形态,p62蛋白表达明显增加(P=0.000),LC3Ⅱ蛋白表达无明显变化(P=0.622).结论:姜黄素促进N2a/APP695swe细胞中的自噬流,其作用机制可能与增强Rab7表达有关.     

人参皂苷Rg3诱导乳腺癌MCF7Adr细胞凋亡的作用及其可能的分子机制

目的研究人参皂苷Rg3诱导乳腺癌MCF7Adr细胞凋亡的作用及其可能的分子机制。方法培养乳腺癌MCF7Adr细胞,分为不含胎牛血清和药物培养基处理的对照组以及100、200、400、800μmol/L人参皂苷Rg3处理的处理组。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,Western-blot方法检测细胞周期蛋白E(Cyclin E)、细胞分裂周期蛋白25A(CDC25A)水平。结果 100μmol/L人参皂苷组、200μmol/L人参皂苷组、400μmol/L人参皂苷组、800μmol/L人参皂苷组的MTT值、Cyclin E、CDC25A蛋白水平均低于对照组[(76.4±16.4)、(56.3±11.5)、(35.2±6.9)、(20.4±4.2)比(100.0±19.5);(84.3±16.1)、(60.5±12.1)、(39.1±5.2)、(24.5±3.9)比(100.0±18.5);(79.5±14.8)、(59.1±10.9)、(35.4±6.1)、(22.7±4.2)比(100.0±18.5)],差异均有统计学意义(均P<0.01)。;MTT值与Cyclin E、CDC25A蛋白水平呈正相关(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3能剂量依赖性地诱导乳腺癌MCF7Adr细胞凋亡,且这一作用是通过抑制Cyclin E、CDC25A的表达来发挥的。     

人参皂苷Rg1药理作用与肾病综合征发病机制的联系

人参皂苷Rg1是从人参中提取的有效成分,药理作用广泛,虽然还没有在肾病综合征(nephrotic syndrome,NS)方面的实验及临床研究,但某些药理效应与NS的病理改变联系紧密,包括保护肾、抗血栓、抗氧化、调节免疫、部分糖皮质激素样作用等。因此,可考虑将人参皂苷Rg1用于NS的治疗,为深入研究人参皂苷Rg1在NS方面的运用提供思路。     

胰岛β细胞胰岛素分泌的调节及其机制

胰岛素是机体内促进合成代谢的蛋白质激素,它由51个氨基酸组成α、β两条肽链,通过两个二硫键连接在一起。主要作用是促进葡萄糖的氧化代谢和糖原生成,抑制糖异生,维持血糖浓度的恒定。调节胰岛素分泌的因素有很多,其中,葡萄糖、内分泌激素和细胞因子是较为重要的调节因素。机体能够整合这几大类调节因素的信号,使胰岛素的分泌量维持在     

人参皂苷Rg1对IL-1β诱导的人膝软骨细胞降解保护作用机制研究

目的研究人参皂苷Rg1对IL-1β诱导的人膝软骨降解的保护作用及其分子机制。方法收集OA病人滑膜及软骨组织,培养成纤维滑膜细胞(FLS),采用IL-1β激发FLS细胞并与软骨骨片共培养,设空白对照组,IL-1β组(20ng/mL)为阳性对照组,不同浓度Rg1(0、5、50μmol/L)+IL-1β(20ng/mL)为实验组。用番红O染色观察软骨降解情况,qPCR分析MMPs相关基因表达情况,ELISA法检测上清液中MMP-3表达情况,Western blot分析Rg1对OA-FLS细胞中NF-κB通路中相关蛋白的调控。结果 Rg1可以显著抑制IL-1β诱导的软骨降解,发挥软骨保护作用。Rg1对软骨保护作用主要通过抑制成纤维滑膜细胞中MMPs表达,其中主要抑制MMP-3基因和蛋白表达,且该作用可能与Rg1调控NF-κB通路有关。结论人参皂苷Rg1可以抑制IL-1β诱导的软骨降解,发挥软骨保护作用,主要通过抑制FLS中MMP-3基因和蛋白表达。     

姜黄素通过提高Rab家族蛋白的表达增强N2a/APP695swe细胞的自噬作用

目的:研究姜黄素(curcumin)对N2a/APP695swe细胞中自噬和Rab家族蛋白的影响,并且探讨姜黄素调节N2a/APP695swe细胞自噬的可能机制。方法:采用N2a/WT和N2a/APP695swe细胞,并将其分为4个组:N2a/WT组(WT组)、N2a/APP695swe组(APP组)、DMSO溶剂对照组(DMSO组,5μmol/L,24 h)、curcumin处理组(curcumin组,5μmol/L,24 h)。Western blot分别检测各组自噬标志性蛋白LC3BⅡ和底物蛋白SQSTM1的表达,以及Rab家族蛋白Rab1、Rab5、Rab7、Rab9、Rab24和Rab33B的表达;共聚焦显微镜观察免疫荧光进一步验证各组LC3BⅡ与SQSTM1蛋白的表达情况。结果:Western blot结果表示,curcumin组LC3BⅡ蛋白表达量明显高于APP组和DMSO组(0.54±0.02 vs. 0.29±0.09,0.54±0.02 vs. 0.29±0.09,P=0.000);同时,curcumin组SQSTM1蛋白表达量则明显低于APP组(0.67±0.01...     

人参皂苷Rg1抑制TGF-β1诱导肾小管上皮细胞转分化实验研究

目的 :通过观察人参皂苷Rg1对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)细胞转分化的影响,探讨人参皂苷Rg1在肾小管纤维化形成方面的作用。方法 :将NRK52E细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养;实验分为空白对照组、TGF-β1诱导组(5 ng/mL TGF-β1),人参皂苷Rg1与TGF-β1共同干预组(5 ng/mL TGF-β1的基础上分别加入10、20、40μg/mL的人参皂苷Rg1),培养72 h。在倒置显微镜下观察各组细胞形态的改变,并通过CCK8法检测人参皂苷Rg1对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响。结果 :TGF-β1能显著诱导大鼠肾小管上皮细胞纤维样改变,与对照组相比有明显差异(P<0.05),人参皂苷Rg1能抑制TGF-β1的作用,且其作用随浓度增加而增加。结论 :人参皂苷Rg1能抑制TGF-β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化的作用,可以延缓或抑制肾间质纤维的过程。     

人参皂苷Rg3与Rh2的研究进展

人参是我国传统的名贵中草药材,人参皂苷是人参的主要有效成分。人参皂苷Rg3,Rh2具有抗疲劳、舒张血管、提高免疫力、抗肿瘤等药理作用。综述了人参皂苷Rg3,Rh2的药理作用及制备方法。