Annexin Al在小鼠胚泡植入不同时期子宫内膜组织中的表达及意义

目的:探讨Annexin Al在小鼠胚泡植入期的作用.方法:双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)分析孕d 3、d 5、d 7小鼠子宫内膜蛋白质组,用差异蛋白质组学显示pI约5.1、分子量约38 kD的蛋白点在d 3、d 5.上调,且在d 5更明显.经基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质量指纹谱(peptide mass fingerprint,PMF)和数据库搜索对此蛋白点进行鉴定;再用RT-PCR、原位杂交、Western blot和免疫组织化学技术进行验证分析.结果:该蛋白点鉴定为鼠源性Annexin Al;d 5小鼠子宫内膜组织中Annexin Al的mRNA和蛋白质水平均增加.结论:Annexin Al可能参与胚泡着床这一重要生命活动过程.     

sLe~x在小鼠胚泡植入早期子宫内膜中的表达及作用

目的:探讨唾液酸化的路易斯寡糖(sLex)在胚泡植入早期小鼠子宫内膜的表达及作用。方法:①应用免疫组化方法对sLex在小鼠妊娠早期子宫内膜的表达进行定位,免疫印迹法以另一侧为自身对照,检测妊娠d1-5小鼠子宫内膜sLeX的表达情况。②向妊娠小鼠一侧子宫角注射sLeX单克隆抗体,观察其对胚胎着床的影响。结果:妊娠d1-5小鼠子宫内膜组织中,sLeX表达量逐渐增加,在植入窗口期(d4)达高峰;子宫角注射抗体后对胚泡植入有明显的抑制作用。结论:在小鼠胚泡植入早期,sLex参与了胚泡的植入过程,在胚泡和子宫内膜的识别过程中发挥重要的作用。     

STAT3在围植入期小鼠子宫内膜的表达及意义

目的:检测信号转导和转录激活因子3(STAT3)在小鼠围植入期子宫内膜的表达,探讨STAT3在胚泡植入中的生物学作用。方法:取未孕动情期、真孕及假孕1天、2天、3天、4天上午、4天下午、4天午夜、5天、6天、7天、8天小鼠子宫做切片,用免疫组化技术和图像分析方法对STAT3在围植入期子宫内膜的表达进行定位和半定量分析。结果:STAT3主要分布于小鼠子宫内膜腔上皮、腺上皮和蜕膜细胞。真孕组小鼠子宫内膜腔上皮和腺上皮的STAT3于孕4天上午开始呈强阳性表达,孕4天下午表达最强,此后表达逐渐减弱;蜕膜细胞的STAT3表达则从孕5天开始逐渐增强。假孕组小鼠子宫内膜中STAT3只在孕4天呈弱阳性表达。未孕组小鼠子宫内膜中STAT3弱表达。真孕组小鼠子宫内膜中STAT3含量明显高于同期各假孕组。结论:STAT3参与胚泡植入过程和子宫内膜容受性的建立。STAT3还可能参与植入后胚泡滋养层的扩展、分化及子宫内膜蜕膜化反应。STAT3在子宫内膜的表达不仅受母体因素调控,而且可能与胚泡的刺激有关。     

补肾益气和血方中药对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜表面胞饮突表达的影响

目的　观察补肾益气和血方中药对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜表面胞饮突表达的影响。方法　选择 8～ 12周龄昆明小鼠 ,于妊娠第 4天 (Pd4 )晨 ,皮下注射米非司酮 ,制成胚泡着床障碍模型。然后将妊娠小鼠随机分为正常组、模型组和治疗组 ,治疗组从Pd1开始灌服中药 (补肾益气和血方 ) ,正常组和模型组则给予等量生理盐水灌服 ,模型组和治疗组于Pd4晨皮下注射米非司酮 ,正常组则注射等量生理盐水。采用扫描电镜观察各组小鼠在Pd4晚 2 1时 30分～ 2 2时 (第 1时间点 ,T1)和Pd5上午 9时 30分～ 10时 (第 2时间点 ,T2 ) ,共两个时间点子宫内膜表面胞饮突的表达。结果　模型组妊娠率 ( 2 5 % )较正常组 ( 90 % )显著降低 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,模型组平均着床胚泡数为 ( 7 7± 1 3)个 ,正常组为 ( 14 7± 1 4 )个 ,两组比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 0 1) ;治疗组的妊娠率 ( 5 5 % )及平均着床胚泡数 [( 12 3± 0 8)个 ]均较模型组显著增加 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。T1时正常组子宫内膜表面表达大量发育中的胞饮突 ,至T2时则表达大量发育完全的胞饮突 ;T1时模型组子宫内膜发育不同步 ,胞饮突仅在局部少量表达 ,至T2时则表达完全消失 ;T1时治疗组子宫内膜表面表达大量发育中的胞饮突 ,与正常组相比略延     

米非司酮对围植入期小鼠子宫内膜中STAT3表达的影响

目的:探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)在小鼠胚泡植入过程中的生物学作用。方法:将孕鼠随机分为米非司酮组、溶剂组和空白对照组,用免疫组织化学技术和图像分析方法检测各组小鼠孕3～8 d子宫内膜中STAT3的动态表达,并对其进行半定量分析。结果:溶剂组和对照组小鼠子宫内膜中STAT3的表达在孕3 d明显增强,孕4 d达到峰值,且溶剂组和对照组间在孕3～8 d各时间点的表达差异无统计学意义;米非司酮组STAT3的表达较2个对照组显著降低(P<0.01),在孕4 d亦无表达高峰。结论:STAT3是介导胚泡植入的重要因子之一,米非司酮可能通过抑制孕激素与其受体结合而下调STAT3的表达,影响子宫内膜容受性的建立,阻碍胚泡顺利植入。     

对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜容受性的研究

目的:建立胚泡着床障碍小鼠模型,并研究其子宫内膜容受性。方法:于妊娠d4上午利用米非司酮诱导昆明小鼠胚泡着床障碍,12h后处死小鼠,观察小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数,利用光镜观察小鼠子宫内膜形态结构,采用免疫组化SP法检测子宫雌、孕激素受体(ER、PR)表达,采用RT-PCR检测子宫ER、PR基因表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数明显降低,子宫内膜发育明显受抑制;子宫内膜腺体、间质ER、PR表达范围和强度均显著降低。结论:米非司酮能成功诱导建立胚泡着床障碍模型,其着床期子宫内膜发育受抑制,子宫内膜容受性降低,胚泡着床失败。     

着床研究模型:离体胚泡与子宫内膜“共培养”

本工作用小鼠和豚鼠的离体胚泡与子宫内膜共培养方法,为研究着床与抗着床机理提供了一个体外研究模型。子宫内膜取自妊娠小鼠第5天上午8时前和妊娠豚鼠第4天下午,分别与小鼠或豚鼠胚泡共培养。经培养2～3天后可见胚泡从透明带逸出并附着于子宫内膜,部分植入内膜。     

兔胚泡液糖蛋白对子宫内膜代谢的调节

着床前的兔胚泡液经ConA-Sepharose亲和柱层析和Sephadex G-100凝胶过滤柱层析,得到大分子量(ConA GP 1)和小分子量(ConA GP 2)糖蛋白两个组份。作者进一步观察了这两组份对孕兔子宫内膜蛋白质和前列腺素F 2α(PGF 2 α)合成与分泌的影响。以~3H-Leu、~3H-GlcNH 2,~3H-Gal和~3H-Fuc分别作为蛋白质、糖蛋白上糖链合成的前体,用RIA法测定PGF 2α浓度。结果发现胚泡液ConA GP两组份均选择性地调节于宫内膜蛋白质的合成与分泌和糖蛋白上糖链的装配。ConA GP1增加子宫内膜~3H-GlcNH 2标记糖蛋白的合成,减少它的分泌,高浓度时抑制。~3H-Leu标记蛋白质的合成。ConA GP 2除具有与ConA GP 1一致的对~3H-GlcNH 2标记糖蛋白的作用外,还增加子宫内膜~3H-Gal标记糖蛋白的合成,减少它的分泌。高浓度的ConA GP 2抑制子宫内膜。~3H-Leu标记蛋白质的合成与分泌。两种组份对~3H-Fuc标记糖蛋白的影响不显著。结果还表明,两种组份均显著减少子宫内膜PGF 2α的释放。显然,着床前兔胚泡分泌糖蛋白参与了孕兔子宫内膜蛋白质、糖蛋白中糖链和PGF 2α的代谢调节。     

核因子-κB在小鼠胚泡着床前后子宫表达的初步研究

探讨核因子-κB(NF-κB)在小鼠胚泡着床过程中是否存在的短暂激活。方法:采用免疫组织化学检测小鼠子宫内膜NF-κB的亚基p65蛋白的定位和表达,Western印迹法检测子宫内膜NF-κB的抑制性蛋白IκBα的降解。结果:p65在小鼠胚胎着床前后子宫内膜均有表达,其部位主要在腔上皮细胞和腺上皮细胞的胞浆部分,基质细胞和子宫肌层也有微弱表达。妊娠后子宫内膜p65的表达增加,妊娠d5达最高值,d8仍然维持较高水平;而d5IκBα的降解最明显。结论:NF-κB可能通过其短暂激活来参与调节小鼠胚泡着床。     

小鼠胚泡黏附时子宫内膜Galectin-1的变化

目的：探讨小鼠胚胎黏附时子宫内膜Galectin-1的变化。方法：双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)分析妊娠d5小鼠胚泡黏附时着床点、着床旁子宫内膜总蛋白，以同龄未交配鼠子宫内膜为对照，差异蛋白质组学显示pⅠ约5．1、分子量约15ku的蛋白点在着床点、着床旁子宫内膜表达上调，且在着床点更明显。对此蛋白点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定其胶内酶解后的肽质量指纹谱(peptidemassfingerprint，PMF)。结果：Mascot：PMF在SWISS．PROT数据库查询为鼠源性Galectin．1。RT．PCR．~果显示d5孕小鼠子宫内膜Galectin．1mRNA水平也明显增加。结论：Galectil9．1可能参与胚泡着床这一重要生命活动过程。     

TRAIL在小鼠胚胎着床过程中子宫内膜的表达

目的:检测TRAIL在小鼠胚胎着床过程中子宫内膜的表达,探讨它在蜕膜细胞凋亡中的作 用。方法:采用RT-PCR及免疫组化技术检测妊娠d 1-8小鼠子宫组织TRAILmRNA及蛋白的表 达情况。结果:妊娠d 1-8的小鼠子宫组织均有TRAIL mRNA的表达,且着床期间的表达较着床前 明显增加(P<0．05)。妊娠d 1-3,小鼠子宫内膜无TRAIL蛋白表达;妊娠d 4,TRAIL表达在小鼠胚 胎定位、黏附点的子宫内膜腔上皮细胞;妊娠d 5-6,TRAIL定位于胚胎着床点附近的蜕膜细胞中; 妊娠d 7-8,TRAIL表达在与子宫蜕膜邻近的胚胎滋养层细胞中。结论:在小鼠胚胎着床过程中, TRAIL诱导子宫内膜腔上皮细胞凋亡可能是胚胎跨越上皮屏障的重要机制之一,且TRAIL诱导的 蜕膜细胞和胚胎滋养层细胞的凋亡在滋养层细胞对子宫内膜的适度侵入过程中起重要作用。     

小鼠囊胚在子宫内膜体外共培养模型上着床的超微结构观察

目的:进一步证明已建立的体外着床模型的可行性。方法:将妊娠d4的小鼠囊胚培养在已建立的体外子宫内膜共培养模型上,电镜观察胚胎植入时囊胚与子宫内膜上皮细胞相互关系的超微结构。结果:小鼠囊胚能正常脱透明带、黏附和扩展。扫描电镜见黏附在子宫内膜上的囊胚呈椭圆形或扁平形;胚胎表面具微绒毛;在胚胎与子宫内膜细胞接触点可见胚胎滋养细胞黏附于胞饮突上。透射电镜观察显示,胚胎滋养细胞通过微绒毛黏附于上皮细胞上,有些滋养细胞通过微绒毛开始植入,局部滋养细胞与上皮细胞形成紧密连接。胚胎滋养细胞与上皮细胞间形成许多镶嵌连接。超微结构显示粗面内质网、线粒体、溶酶体和核糖体非常丰富。结论:小鼠囊胚在子宫内膜体外模型上生长发育良好,该胚胎与子宫内膜共培养系统是研究胚胎着床机理的理想体外模型。     

肿瘤坏死因子α转换酶(TACE)在早孕小鼠子宫内膜的表达规律

目的:探讨肿瘤坏死因子α转换酶(TACE)在胚胎植入过程中的作用。方法:①用RT-PCR及免疫组化方法分别检测未孕(n=10)及孕d1-7小鼠(n=10×7)子宫内膜TACE mRNA和蛋白的表达;②向妊娠小鼠(n=6)左侧子宫角注射TACE抗体,观察TACE对胚胎着床数的影响。并以右侧为自身对照和注射生理盐水为手术对照组(n=6)。结果:①TACE mRNA在早孕期小鼠子宫内膜的表达明显高于未孕期,且随妊娠天数的增加而逐渐增加,于孕d4达高峰,随后渐降。免疫组化结果与RT-PCR一致;②子宫角TACE抗体注射后胚胎植入数目明显减少。结论:在小鼠妊娠早期,TACE表达增高,其在胚泡植入中可能发挥着重要作用。     

Survivin在早孕小鼠子宫内膜中的表达

目的:探讨Survivin在早孕小鼠子宫内膜中的动态表达及在胚胎着床中的作用。方法:用FQ-PCR及免疫组化方法分别检测未孕及妊娠d2-7各组小鼠子宫内膜Survivin基因和蛋白的表达。结果:FQ-PCR检测妊娠组Survivin mRNA的表达明显高于未孕组(P<0.01),并且随着妊娠天数的增加子宫内膜Survivin mRNA的表达逐渐增加,到孕d6达到高峰,随后下降,但孕d7仍明显高于未孕组(P<0.01)。免疫组化检测Survivin蛋白在子宫内膜的表达规律与FQ-PCR结果一致。结论:早孕小鼠子宫内膜着床期Survivin mRNA和蛋白均高表达,然后下降,提示Survivin可能通过抗细胞凋亡,促细胞增殖和血管形成的作用,参与胚胎着床。     

肿瘤转移抑制因子CD9/MRP-1基因在小鼠围着床期子宫内膜的动态表达

目的:探讨肿瘤转移抑制基因(CD9)/运动相关蛋白(MRP-1)mRNA和蛋白在胚胎着床过程中的作用。方法:应用RT-PCR和免疫组化技术观察CD9/MRP-1mRNA和蛋白在早孕和假孕小鼠子宫中的表达规律。结果:早孕d1-4小鼠子宫组织均有CD9/MRP-1mRNA表达,且d4表达最多;其蛋白主要表达在d1-4的子宫内膜上皮细胞,且早孕d2-4CD9/MRP-1在子宫基质细胞散在阳性表达。假孕d1-8小鼠子宫组织均有CD9/MRP-1mRNA表达,假孕d5表达开始增加,至d6达到峰值。而CD9/MRP-1蛋白在假孕d1-8子宫内膜腺上皮均有表达,而子宫内膜腔上皮均无表达。假孕d2-5,子宫基质细胞出现散在阳性表达。结论:①CD9/MRP-1在早孕小鼠子宫中呈动态表达,提示它在胚胎精确侵袭子宫内膜的调节中发挥作用。②CD9/MRP-1在妊娠小鼠子宫的表达是非胚胎依赖性的。     

mmu-miR-141在早孕小鼠胚胎着床前、后子宫内膜中的表达及作用

目的:探讨mmu-miR-141在早孕小鼠胚胎着床前、后子宫内膜组织中的表达及作用。方法:荧光定量PCR(FQ-PCR)及原位杂交检测早孕小鼠胚胎着床前、后子宫内膜mmu-miR-141的表达;MTT和流式细胞术检测孕第4日(d 4)子宫内膜基质细胞被mmu-miR-141抑制剂作用72 h后其细胞活力和细胞凋亡情况。结果:mmu-miR-141在小鼠胚胎着床后(d 6)子宫内膜组织中的表达明显低于着床前(d 4)(P<0.05),且表达于基质细胞;其表达下调能使基质细胞增殖活力下降(P<0.05),细胞凋亡增加(P<0.01)。结论:mmu-miR-141通过调控子宫内膜基质细胞的增殖或凋亡,在早孕小鼠胚胎着床前、后的子宫内膜组织中发挥重要的作用。