新型血清异常凝血酶原试剂盒对原发性肝癌的诊断价值

自１９８４年Ｌｉｅｂｍａｎ等［１］首次提出由于维生素Ｋ缺乏或拮抗剂诱导产生的异常凝血酶原（ＰＩＶＫＡ－Ⅱ）可作为原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）的标志物以来,国内外许多学者在ＰＩＶＫＡ－Ⅱ与ＨＣＣ关系方面作了很多工作,但由于ＰＩＶＫＡ－Ⅱ产生机理尚不清楚和检测方法困难等原因,使之尚难以在临床上推广应用。新近,日本Ｅｉｓａｉ公司在原来Ｅｉｔｅｓｔ　Ｍｏｎｏ　Ｐ－Ⅱ试剂盒基础Ｌ改良研制成一种新的试剂盒Ｅｉｔｅ－ｓｔＰＩＶＫＡ－Ⅱ。本文旨在用该试剂盒采用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ法）检测ＨＣＣ患者血清ＰＩＶＫ…     

不同临床型HCV感染的基因分型与血清学分型研究

采用酶免疫（ＥＩＡ）和反转录聚合酶链反应９ＲＴ－ＰＣＲ）技术对不同临床型ＨＣＶ感染的血清标本进行ＨＣＶ分型，结果显示，各临床型ＨＣＶ感染的的型别构成无明显差异。主要为基因Ⅱ型（９３．７％）、少量基因Ⅲ型（２．７％）和Ⅱ＋Ⅲ混合型（３．６％）未见基因Ⅰ、Ⅳ、菲分型一血清学分型总符合率为９７．９６％，血清学分型率与ＨＣＶ抗－ＣＳ／Ｃ 正相关；ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性者９３．７５％可基因分型，但仅有５２．０８     

HCV RNA链扩增反应（PCR）检测及其基因分型方法的建立

我们用选自ＨＣＶ５’ＮＣＲ和Ｃ区引物建立了检测血清中ＨＣＶＲＮＡ及其基因型的ＲＴ／ＰＣＲ方法，可以敏感而特异地检出血清中ＨＣＶＲＮＡ及其４种基因型。５０例抗ＨＣＶ阳性献血员ＨＣＶＲＮＡ检出率为８４％（４２／５０），４２例ＨＣＶＲＮＡ阳性者中ＨＣＶⅡ型占５９．５％（２５／４２），Ｉ型和混合型（包括Ⅰ／Ⅱ、Ⅱ／Ⅲ、Ⅰ／Ⅲ和Ⅰ／Ⅱ／Ⅲ各２例）分别占１１．９％和１９％，另有４例Ｃ区分型结果阴性，为未定型，占９．５％，没有发现Ⅳ型。上述结果说明我国献血员中存在无症状ＨＣＶ携带者，ＨＣＶ基因型则以Ⅱ型为主，Ⅰ型次之，Ⅲ型较少。     

丙型肝炎患者胃粘膜中病毒抗原的检测

了解肝炎患者胃粘膜组织中忆型肝炎病毒（ＨＢＶ）和丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的感染状况。采用免疫组化Ｓ－Ｐ法以抗－ＨＣＶＮＳ３单克隆抗体及抗－ＨＢｓ、抗－ＨＢｃ多克隆抗体对３３例慢性丙型肝炎患者胃粘膜组织中ＨＢＶ和ＨＣＶ进行了检测。同时还用双标记技术对二种抗原进行了双重染色以了解其在胃粘膜组织中的分布。ＨＣＶＮＳ３、ＨＢｓＡｇ及ＨＢｃＡｇ的检出率分别为３３．３３％（１１／３３）、４８．４８％（１６／３３     

上海地区Ⅱ、Ⅲ型丙型肝炎病毒包膜区cDNA序列分析

目的 分析上海地区丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｗ,ＨＣＶ）Ⅱ、Ⅲ型包膜区ｃＤＮＡ序列变异。方法 采用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增ＨＣＶ包膜区Ｅ１、Ｅ２／ＮＳ１片断（１ ００５ｂｐ）,在３７３ＤＮＡ全自动测序仪上进行了序列分析。结果 ＨＣＶ－Ｅ１、Ｅ２／ＮＳ１区核苷酸和氨基酸同源性比较显示：上海株Ⅱ型、Ⅲ型间同源性分别为６２．４８％和５９．１０％;上海株与加内外同型株间     

重型肝炎患者丙型肝炎病毒抗体的存在状态及其意义

采用合成肽酶免疫分析法（ｓｐＥＬＩＳＡ）和美国Ｏｒｔｈｏ公司第２代ＥＬＩＳＡ（２ｎｄＥＬＩｓＡ）对１０３例重型肝炎患者血清丙型肝炎病毒抗体（抗ＨＣＶ）作筛选，阳性血清用重组免疫印迹法（４·ＲＩＢＡ）作鉴定，并用逆转录聚合酶链反应检测ＨＣＶＲＮＡ，以重新评价重型肝炎患者血清抗ＨＣＶ存在状态及其意义。发现ｓｐＥＬＩＳＡ和２ｎｄＥＬＩＳＡ检测抗ＨＣＶ的阳性率分别为２２．３３％（２３／１０３）和１９．１０％（１７／８９），阳性血清经４·ＲＩＢＡ鉴定仅５９．０９％（１３／２２）阳性，ＨＣＶＲＮＡ检出率亦仅为６０．００％（９／１５）。动态观察，约１／３抗ＨＣＶ阳性患者抗ＨＣＶ持续２～４周消失。血清反复冻融可使阳性检测吸光值（Ａ４９２）下降，阴性检测Ａ４９２值升高。血清抗ＨＣＶ阳性和（或）ＨＣＶＲＮＡ阳性患者均合并乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染，但合并ＨＣＶＲＮＡ阳性患者预后较差。结果提示单独ＨＣＶ感染不是本地区重型肝炎发生的主要原因，部分患者抗ＨＣＶ存在可能属既往感染或系“被动输入”所致，也可能为假阳性，检测ＨＣＶＲＮＡ对于确切了解重肝患者ＨＣＶ感染状况和判断预后有一定的意义。     

慢性乙型肝炎患者血清及肝组织中乙型肝炎病毒核心基因的研究

３６例肝穿刺诊断为慢性乙型肝炎患者的肝组织及血清，用ＨＢＶ全基因核酸杂交法及聚合酶链反应（ＰＣＲ）法扩增了病毒的ＰｒｅＣ／Ｃ区基因片段。发现ＰＣＲ法扩增后再经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ吸印转移及核酸杂交（ＰＣＲ－ＳＢＨ）可显著提高检出ＨＢＶ基因的敏感性。对５例无任何血清ＨＢＶ标记者证实在其肝内存在ＨＢＶ基因。用ＡｖａⅡ，ｓａｕ３ＡＩ，ＸｍｎＩ，ＢｓｔＮＩ及ＴａｑＩ酶切图谱分析上述病例的ｃ基因，与ｐＡＤＲ－１Ｃ基因比较，有４例（５份标本）有Ｓａｕ３ＡＩ的异常酶切位点，提示ＨＢＶ不仅ＰｒｅＣ区存在变异株，Ｃ基因中亦可有变异。     

甘油三酯和极低密度脂蛋白对肝星状细胞增殖的影响

目的探讨甘油三酯（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ，ＴＧ）和极低密度脂蛋白（ｖｅｒｙｌｏｗ－ｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｉｏｎ，ＶＬＤＬ）对大鼠肝星状细胞（ｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｌａｔｅｃｅｌ，ＨＳＣ）增殖的影响。方法用链霉蛋白酶和胶原酶原位灌流，Ｎｙｃｏｄｅｎｚ密度梯度离心分离大鼠ＨＳＣ，并以ＭＴＴ比色法观察ＴＧ和ＶＬＤＬ对ＨＳＣ增殖效应。结果ＴＧ和ＶＬＤＬ可影响ＨＳＣ的增殖，ＴＧ和ＶＬＤＬ浓度分别在１２５ｍｇ／Ｌ和（２５～１００）ｍｇ／Ｌ时对ＨＳＣ增殖有促进作用（Ｐ＜００５或Ｐ＜００１）。结论体外细胞培养表明，ＴＧ和ＶＬＤＬ可促进ＨＳＣ增殖，其与脂肪肝肝纤维化的发生可能有关。     

无症状HBsAg携带者血清HBV感染指标检测结果分析

无症状ＨＢｓＡｇ携带者血清ＨＢＶ感染指标检测结果分析临沂市卫生防疫站（２７６００４）王彦厚邱方为了解ＨＢｓＡｇ无症状携带者（ＡＳＣ）有无传染性，我们对１２７例ＡＳＣ患者的血清ＨＢＶ┐ＤＮＡ及ＨＢｅＡｇ、抗┐ＨＢｓ、抗┐ＨＢｃ、抗┐ＨＢｅ进行了检测。现...     

重组丙型肝炎病毒基因转染H9细胞模型的建立

目的：建立重组ＨＣＶ基因转染的Ｈ９细胞（人ＣＤ４，Ｔ细胞）模型。方法：以载体ＣＤＺ２（连接有１６９３ｂｐＨＣＶＤＮＡ，包括完整的ＨＣＶ结构区）为模板，通过ＰＣＲ获得高保真的１．７３ｋｂＤＮＡ片段（包括１６９３ｂｐＨＣＶｃＤＮＡ和部分载体ＤＮＡ序列），其特异性被ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证实。将ＨＣＶｃＤＮＡ片段插入载体ｐＣＤ－ＳＲα，经菌落原位杂交以及酶切分斤和ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｏＩｔ筛选，获得重组ＨＣＶ（ｐＣＤ－ＨＣＶ），并与ｐＳＶ２－ｇｐｔ载体共转染Ｈ９细胞。结果：从选择性培养基中筛选口阳性克隆细胞，经ＲＴ－ＰＣＲ．ｄｏｔＥＬＩＳＡ和ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ验证表明ｐＣＤ－ＨＣＶ在Ｈ９细胞中可进行复制、转录和表达，表达的约１．３×１０５大小蛋白具有ＨＣＶ抗原性。转染ｐＣＤ－ＨＣＶ的细胞培养至９０天时，仍可检测到ＨＣＶｍＲＮＡ和ＨＣＶ抗原。结论：建立ｐＣＤ－ＨＣＶ转染的Ｈ９细胞模型获得成功。