miRNA－92a在缺血再灌注肾损伤中的表达变化

目的观察miRNA-92a在缺血再灌注（I／R）损伤4h、24h后小鼠肾组织的表达变化,探讨肾脏缺血损伤后血管生成的可能机制。方法采用双侧夹闭小鼠肾蒂的方法制备急性缺血再灌注肾损伤模型,术后灌注24h后收集血清和。肾脏标本,分别检测肾功能及观察肾组织病理学改变。实时定量逆转录聚合酶链反应（real—time RT-PCR）的方法检测小鼠I／R损伤4h和24h组中miRNA-92a的表达水平。结果（1）采用血清肌酐（Scr）和尿素氮（UN）评估肾功能,肾脏I／R 24h组与假手术组（sham）比较有显著性差异（P〈0．05）;HE染色观察肾组织病理改变明显,肾缺血再灌注模型成功。（2）而I／R4h和24h后,miRNA-92a的表达上调,其上调倍数分别为3．23±0．74．1．53±0．33（P〈0．05）。结论小鼠I／R损伤中miRNA-92a表达显著上调,miRNA-92a可能参与缺血再灌注肾组织损伤的血管再生的调控过程。     

神经肽Y在急性肾缺血再灌注损伤中的变化

目的探讨血浆神经肽Y（NPY）在急性肾缺血再灌注损伤时的变化规律。方法SD大鼠32只,随机分为对照组和缺血再灌注组,每组16只。建立大鼠急性肾缺血再灌注损伤模型,缺血再灌注后3h分别检测血浆NPY,血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及观察肾组织的病理学变化。结果与对照组比较,缺血再灌注组血浆NPY,血清BUN、Cr、MDA水平显著升高（P〈0.05）,SOD水平显著降低（P〈0.05）;与对照组比较,缺血再灌注组肾组织病理损伤程度明显加重。结论大鼠急性肾缺血再灌注损伤血浆NPY水平与肾脏受损程度呈正相关,NPY可作为在急性肾缺血再灌注损伤中估计肾脏受损程度的主要检测指标之一。     

MicroRNA在大鼠心肌缺血再灌注损伤中表达谱的变化

目的:分析微小RNA(mieroRNA)在大鼠心肌缺血再灌注损伤中表达谱的变化,为缺血再灌注损伤治疗中的microRNA干预策略提供可供选择的目标microRNA.方法:利用microRNA基因芯片技术检测大鼠正常心肌及缺血再灌注损伤心肌micmRNA表达谱的差异.实时定量PCR检测上述2组大鼠心肌组织中基因芯片结果差异性表达的microRNA,验证芯片结果的可信性.结果:与正常大鼠心肌组织相比,缺血再灌注心肌组织中表达上调的microRNA有10个,分别为mo-microRNA-21、mo-micmRNA-26b、mo-microRNA-499、mo-microRNA-126、mo-let-7e、mo-microRNA-23a、mo-microRNA-23b、mo-let-7a、mo-let-7d、mo-microRNA-26a;表达下调的microRNA有6个mo-microRNA-214、mo-microRNA-125b-5p、mo-microRNA-1、mo-microRNA-133a、mo-microRNA-133b、mo-microRNA-24.结论:缺血再灌注损伤中伴有microRNA表达谱的变化.     

缺血预处理对常温下肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的 :探讨缺血预处理对大鼠常温缺血再灌注损伤是否有保护作用。方法 :SD大鼠分为 3组 ,假手术组 (S组 ) ,缺血再灌注组 (IR组 ) ,预处理组 (PC组 )。于再灌注 2 4h取血、尿及肾组织标本 ,行血肌酐 (Scr)、尿素氮(BUN)、丙二醛 (MDA)、超氧化物歧化酶 (SOD)、一氧化氮 (NO)、尿微量白蛋白 (UALB)、尿α1 微球蛋白 (U α1 M)测定及形态学检查。结果 :(1 )血Scr、BUN、MDA、尿UALB、Uα1 M :PC组明显低于IR组 (P <0 .0 5 )。 (2 )血SOD、NO :PC组明显高于IR组 (P <0 .0 5 )。 (3)形态学 :IR组可见大量肾小管坏死 ,超微结构多呈不可逆性改变。PC组肾小管坏死较少 ,超微结构多为可逆性改变。结论 :缺血预处理对常温下大鼠肾缺血再灌注损伤具有保护作用     

大鼠肾脏热缺血再灌注损伤的缺血后处理模型的建立

目的：建立大鼠肾脏缺血再灌注损伤（IRI）的缺血后处理模型。方法：行右肾切除，左肾蒂分别钳夹0分钟、30分钟、45分钟、60分钟，再灌注24小时后，根据肾功能检测指标确定大鼠IRI模型；大鼠随机分为4组，对照组、缺血再灌注组、缺血后处理1组和缺血后处理2组，再灌注24小时后根据肾功能检测指标和肾组织病理损伤程度分级的变化确定缺血后处理模型。结果：右肾切除，左肾蒂钳夹60分钟，再灌注24小时后，肾脏功能检测指标显著升高（P〈0．05），确定IRI模型肾蒂钳夹时间为60分钟；与I／R组相比，经缺血后处理-1干预后，大鼠肾脏功能检测指标显著降低（P〈0．05），肾组织损伤明显改善，病理损伤分级明显降低（P〈0．05）；经缺血后处理-2干预后，大鼠肾脏功能和组织损伤程度无明显改善（P〉0．05）。结论：采用缺血后处理1-的方法可以成功建立大鼠肾脏IRI的缺血后处理模型。     

急性缺血-再灌注肾损伤小鼠肾组织Caspase-1蛋白表达及酶活性变化

目的探讨急性缺血-再灌注肾损伤时caspase-1蛋白表达及酶活性变化。方法复制急性缺血-再灌注肾损伤小鼠模型,应用全自动生化分析仪测定血尿素氮(BUN)及血清肌酐(Scr)水平,应用免疫组化及荧光标记法分别测定肾组织caspase-1蛋白表达水平以及其酶活性的变化。结果模型组Scr和BUN水平均较假模组显著升高;模型组肾组织caspase-1表达强度较假模组显著升高;模型组肾组织caspase-1酶活性也较假模组显著升高。结论Caspase-1产生及活性升高参与急性缺血-再灌注肾损伤,抑制该酶活性,从而控制其下游炎症因子的过度活化可能对肾脏急性缺血-再灌注具有保护作用。     

小鼠肾缺血再灌注损伤后缺氧诱导因子的表达变化

目的 观察小鼠肾缺血再灌注损伤中缺氧诱导因子-1(HIF-1)在缺血再灌注后不同时间点的的表达变化.方法 采用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾带制备急性缺血/再灌注肾损伤模型,分为假手术对照组和缺血再灌注组,于缺血再灌注后4h、1d、3d分别处死.采用半定量RT-PCR法检测缺血再灌注后各时间点HIF-1 mRNA的表达变化....     

性别差异在肾脏缺血再灌注损伤中的作用机制

肾脏的急性缺血再灌注损伤是肾功能衰竭的一个重要危险因素，其引起的并发症和死亡率很高，严重危害着健康。大量实验研究证明肾脏缺血再灌注损伤存在性刺差异，并且揭示了雌激素的肾脏保护作用以及雄激素或者雌雄激素比倒在缺血再灌注损伤中起着比雌激素更为重要的作用。     

磷酸化膜突蛋白与大鼠肾脏缺血再灌注损伤的关系

目的研究磷酸化膜突蛋白(phosphorylated moesin,p-Moesin)与大鼠肾脏缺血再灌注损伤的关系。方法 2.5月龄Wistar雄性大鼠15只。随机选取5只行假肾脏缺血再灌注手术,即打开腹腔后未进行肾脏动静脉夹闭(假手术组);10只行肾脏缺血再灌注手术(行双侧肾脏动静脉夹闭45min再灌注24h),其中5只未给予治疗(手术组),其他5只在手术后给予盐酸法舒地尔治疗(治疗组)。留取肾组织免疫组化法观察p-Moesin在肾组织的表达情况。结果 p-Moesin定位于大鼠肾脏肾小管上皮细胞胞浆和胞核。手术组大鼠肾脏p-Moesin的表达(阳性着色面积评分)(3.55±0.04)较假手术组(1.04±0.08)增多(P<0.05);治疗组大鼠肾脏p-Moesin的表达(1.86±0.09)较手术组减少(P<0.05)。结论 p-Moesin在大鼠肾脏定位于肾小管上皮细胞胞浆与胞核,其表达与大鼠肾脏缺血再灌注损伤有关。     

小鼠肾脏急性缺血再灌注损伤不同时间点基因表达谱的差异

目的:探讨小鼠肾脏急性缺血再灌注损伤不同时间点基因表达谱的差异。方法:建立小鼠肾脏急性缺血再灌注损伤模型,收集再灌注4 h与24 h时缺血侧与对照侧肾脏组织标本,采用基因表达谱芯片技术检测各组标本的基因表达水平,再结合生物信息学技术分析差异表达的基因种类(gene ontology,GO)与信号通路,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法验证表达上调、下调与未变化的基因。结果:小鼠肾脏急性缺血再灌注24 h差异表达的基因数目多于再灌注4 h;再灌注4 h时的变化基因主要为代谢与应激相关类型,24 h时的变化基因涉及炎性反应与细胞凋亡等;再灌注4 h和24 h时,缺血再灌注引起的表达上调的基因数目均多于表达下调的基因数目;随机挑选的表达上调、下调与未变化基因可以被实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法验证。结论:缺血再灌注损伤伴随着大量基因表达的改变,缺血再灌注损伤不同时期的差异表达基因与病理生理变化密切相关。     

BALB/c小鼠肾缺血再灌注损伤模型的建立与评价

背景：对于一些药物研究,小鼠是理想的造模工具,但由于小鼠耐受性相对较差,肾脏及肾蒂小且难于寻找,容易增加实验误差,导致造模失败。目的：探讨BALB/c小鼠肾缺血再灌注损伤模型的建立方法,评价肾脏缺血时间对肾缺血再灌注损伤的影响。方法：采用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾蒂的方法建立雄性BALB/c小鼠肾缺血再灌注损伤模型,根据肾缺血时间不同分为0min组（对照组）、30min组、35min组、45min组,肾再灌注后24h观察肾功能和肾脏病理组织学的变化,比较不同的肾脏缺血时间对上述指标的影响;观察45min组小鼠肾缺血再灌注损伤后的生存率。结果与结论：模型成功率95.9%,与对照组相比,肾缺血30min组、35min组和45min组再灌注后24h血清肌酐、尿素氮和肾脏病理组织学评分均升高,肾缺血45min组生存率明显下降,差异均有显著性意义（P〈0.05）。结果提示,应用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾蒂的方法可制备稳定肾缺血再灌注损伤模型,雄性小鼠肾缺血35～45min是造模较为理想的肾缺血时间,所得模型效果满意。     

BALB/c小鼠肾缺血再灌注损伤模型的建立与评价

背景:对于一些药物研究,小鼠是理想的造模工具,但由于小鼠耐受性相对较差,肾脏及肾蒂小且难于寻找,容易增加实验误差,导致造模失败.目的:探讨BALB/c小鼠肾缺血再灌注损伤模型的建立方法,评价肾脏缺血时间对肾缺血再灌注损伤的影响.方法:采用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾蒂的方法建立雄性BALB/c小鼠肾缺血再灌注损伤模型,根据肾缺血时间不同分为 0 min组(对照组)、30 min组、35 min组、45 min组,肾再灌注后24 h观察肾功能和肾脏病理组织学的变化,比较不同的肾脏缺血时间对上述指标的影响;观察45 min组小鼠肾缺血再灌注损伤后的生存率.结果与结论:模型成功率95.9%,与对照组相比,肾缺血30 min组、35 min组和45 min组再灌注后24 h血清肌酐、尿素氮和肾脏病理组织学评分均升高,肾缺血45 min组生存率明显下降,差异均有显著性意义(P < 0.05).结果提示,应用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾蒂的方法可制备稳定肾缺血再灌注损伤模型,雄性小鼠肾缺血35～45 min是造模较为理想的肾缺血时间,所得模型效果满意.     

Prevention of ischemia/reperfusion injury by hepatic targeting of nitric oxide in mice

Macromolecular nitric oxide (NO) donors possessing the ability to target a specific type of liver cells were developed for delivering NO to the liver. Six NO molecules were covalently bound to mannosylated (Man) or galactosylated (Gal) bovine serum albumin (BSA) through an S-nitrosothiol linkage to obtain Man-poly SNO-BSA and Gal-poly SNO-BSA, respectively. The carrier parts of Man-poly SNO-BSA and Gal-poly SNO-BSA predominantly accumulated in the liver after intravenous injection in mice. In an ischemia/reperfusion injury mouse model, in which hepatic injury was induced by occluding the portal vein for 15 min followed by a 6 h reperfusion, the elevation of plasma alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase levels was significantly inhibited by a bolus intravenous injection of Man-poly SNO-BSA or Gal-poly SNO-BSA, just before the start of reperfusion. In marked contrast, S-nitroso-N-acetyl penicillamine and NO-conjugated BSA, two classical S-nitrosothiols, had no statistically significant effects on the serum levels of the markers. The released NO in mouse liver was detected by electron spin resonance spectrometry only in the liver of mice receiving Man-poly SNO-BSA or Gal-poly-SNO-BSA. These findings indicate that Man-poly SNO-BSA and Gal-poly SNO-BSA are promising compounds for preventing hepatic ischemia/reperfusion injury by delivering pharmacologically active NO to the liver.     

Role of carbon monoxide and biliverdin in renal ischemia/reperfusion injury

Heme oxygenase (HO) isoforms catalyze the conversion of heme to carbon monoxide (CO) and biliverdin/bilirubin with a concurrent release of iron. There is strong evidence that HO activity and products play a major role in renoprotection, however the exact molecular mechanisms underlying the beneficial effects exerted by this pathway are not fully understood. This review is aimed at illustrating the possible mechanism/s by which HO is renoprotective in the context of ischemia/reperfusion. We will first analyze the effects of exogenous administration of bilirubin/biliverdin and CO and then describe their biological activities once generated endogenously following stimulation of the HO pathway by either pharmacological means or gene targeting-mediated approaches.     

丙酮酸作用下大鼠移植小肠缺血再灌注损伤中核转录因子的变化

目的:研究证实丙酮酸对移植小肠缺血再灌注损伤具有保护作用,并且与其影响细胞因子水平有关.核转录因子在各种细胞外刺激介导的细胞信号转导调控中起核心作用,实验拟观察丙酮酸作用下移植小肠缺血再灌注损伤中核转录因子κ B的变化并分析其意义.方法:①实验于2003-10/2004-04在解放军第四军医大学西京医院胃肠外科实验室完成.选用成年雄性SD大鼠78只,动物处置方法符合动物伦理学标准.②按随机数字表法分为3组:假手术组(n=6)行剖腹、左侧肾切除与移植组对照:移植小肠缺血再灌注组和丙酮酸处理组(n=36)均建立移植小肠缺血再灌注动物模型,丙酮酸处理组于供体小肠阻断血流、灌冼前10 min向肠腔内注入含有分析纯丙酮酸的营养液.③分别于缺血45.90 min和再灌注30,180 min留取移植小肠组织标本(n=6),光镜下观察组织学改变:另外分离、提取核蛋白并定量,通过电泳迁移改变分析实验检测肠组织中的核转录因子KB的活性.结果:78只大鼠全部进入结果分析.①缺血再灌注不同时相移植小肠缺血再灌注组小肠黏膜组织损伤程度均重于假手术组(P＜0.01);而丙酮酸处理组损伤程度轻于移植小肠缺血再灌注组(P＜0.01),与假手术组差异无显著性意义(P＞0.05).②再灌注30min时移植小肠缺血再灌注组核转录因子κ B活性高于其他两组(P＜0.01):丙酮酸处理组核转录因子κB活性高于假手术组(P＜0.05).再灌注180 min时移植小肠缺血再灌注组核转录因子κ B活性略降低.但仍高于其他两组(P＜0.01),丙酮酸处理组核转录因子κ B活性与假手术组差异无显著性意义(P＞0.05).结论:丙酮酸作用下大鼠移植小肠缺血再灌注损伤过程中核转录因子κ B的活性降低,该结果可能是丙酮酸保护移植小肠缺血再灌注损伤的重要作用途径之一.     

肾缺血再灌注模型细胞凋亡与吡咯烷二硫代氨基甲酸的干预(英文)

背景:肾缺血/再灌注诱导产生大量活性氧,导致核因子κB的活化。激活的核因子κB通过调节诱导型一氧化氮合酶的生成,进而导致一氧化氮的大量产生和触发细胞凋亡。目的:观察吡咯烷二硫代氨基甲酸对肾缺血再灌注后肾脏组织中核因子κB、诱导型一氧化氮合酶、一氧化氮、caspase-3和细胞凋亡指数的作用。方法:将健康雄性 Wistar 大鼠随机分为 3组:缺血再灌注组和吡咯烷二硫代氨基甲酸组通过右侧肾切除+左肾动脉夹闭45 min 建立肾缺血/再灌注模型,吡咯烷二硫代氨基甲酸组于实验前 30 min 尾静脉注射吡咯烷二硫代氨基甲酸(100 mg/kg)。假手术组不给予缺血再灌注处理。结果与结论:与假手术组相比,缺血再灌注组大鼠再灌注后肾组织核因子κB表达水平、血肌酐水平、尿素氮水平、诱导型一氧化氮合酶活性、一氧化氮表达水平、caspase-3 表达水平和细胞凋亡水平增加(P<0.05);而与缺血再灌注组相比,吡咯烷二硫代氨基甲酸组大鼠再灌注后以上指标均好转。说明肾缺血/再灌注损伤可引起肾组织结构损伤和细胞凋亡,且与核因子κB引起的一氧化氮高表达有关;应用核因子κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸可对缺血再灌注肾损伤发挥明显的保护作用。     

银杏叶提取物对肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的：通过观察银杏叶提取物（EGB）对家兔肾缺血再灌注（I／R）损伤模型血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）含量和磺胺嘧啶代谢的影响，探讨EGB对肾I／R损伤的保护作用。方法：24只家兔随机分为假手术组（A组）、IR组（B组）和EGB预处理组（c组）。B、C组家兔肾缺血45min，再灌注4h建立家兔肾I／R损伤模型．C组加用EGB预处理。于再灌注同时注射磺胺嘧啶，测定其分布半衰期（t1/2α）、消退半衰期（t1/2β），并检测不同时间点血清BUN和Cr含量变化，同时观察肾组织病理学改变。结果：B组磺胺嘧啶的t1/2α与A组相比明显缩短，而t1/2β明显延长（均P〈0．05），其血清中BUN、Cr含量亦明显升高（P〈0．05），肾组织出现明显的病理改变。而经EGB预处理的c组磺胺嘧啶的t1/2α与B组相比延长，t1/2β缩短，血清中BUN、Cr含量降低．差异有显著性（P〈0．05），肾组织病理改变明显减轻。结论：EGB对肾I／R损伤有一定的保护作用。[著者文摘]     

G-CSF动员骨髓干细胞向缺血-再灌注肾脏归巢并促进肾脏修复的研究

目的 观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)是否可以有效动员骨髓干细胞进入外周血并向缺血-再灌注损伤肾脏归巢,提高肾脏修复的效能.方法 6周龄全身表达绿色荧光蛋白(GFP)的C57BL/6J转基因小鼠提供骨髓,6～8周龄同种无荧光标记的C57BL/6J小鼠20只作为骨髓受体.骨髓移植前,受体小鼠接受致死剂量的γ放射线137Cs照射,骨髓重建情况经流式细胞仪检测确认.骨髓重建完毕后所有小鼠均接受单侧肾脏缺血-再灌注损伤.实验动物分组:(1)对照组(n=10),术前3d至术后4d,皮下注射生理盐水,0.2 ml/d.(2)动员组(n=10),术前3d至术后4d,皮下注射人重组粒细胞集落刺激因子200μg/(kg·d).干细胞动员效果及向肾脏归巢情况经流式细胞仪检测鉴定.损伤1周后取肾脏标本行HE染色,评估肾小管损伤程度.损伤4周后通过组织切片免疫荧光组织化学方法观察并计数血管内皮细胞数.实验数据中计量资料以均数±标准差((x-)±s)表示,两组计量资料之间比较采用独立样本t检验.结果 G-CSF动员后,分别为Sca-1、c-Kit、CD29、CD34阳性的四群干细胞占外周血非红系细胞的比例均高于对照组(P＜0.05).损伤1周后,G-CSF动员组的缺血侧肾脏中,骨髓来源并且分别表达Sca-1、c-Kit、CD34的干细胞的比例均高于对照组(P＜0.05);肾小管损伤程度评分分值低于对照组(P＜0.05).损伤4周后动员组的肾脏中CD31阳性的内皮细胞数目高于对照组(P＜0.05).结论 (1)G-CSF可以有效动员骨髓干细胞进入外周血并向缺血肾脏归巢;(2) G-CSF动员可以提高肾脏修复的效能,减轻肾脏组织病理学损伤程度.