小鼠RAPD—PCR反应体系及扩增程序的筛选

筛选优化小鼠ＲＡＰＤ－ＰＣＲ反应体系及扩增程序。;方法以４０条引物对９个品系的小鼠基因组ＤＮＡ在各种不同条件下进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ,分析比较扩增结果。结论以上述反应体系及扩增程序进行小鼠ＲＡＰＤ－ＰＣＲ,扩增结果稳定。     

黑素瘤抑制蛋白启动子在小鼠体内的表达活性

目的;观察黑素瘤抑制蛋白（ＭＩＡ／ＣＤ－ＲＡＰ）启动子在小鼠体内的表达活性。方法：利用ＰＣＲ技术扩增２．２ｋｂ的ＭＩＡ／ＣＤ－ＲＡＰ启动子,分子克隆技术构建ＭＩＡ启动子－半乳糖苷酶（２．２１ａｃＺ）载体,显微注射法将纯化的２．２ｌａｃＺ ＤＮＡ注入来自Ｂ６ＳＪＬ杂交小鼠受精卵的原以制备转基因小鼠。提取幼鼠尾ＤＮＡ,用ｌａｃＺ特异性引物筛选阳性转基因小鼠。结果：８只首建小鼠以体基因组整合有２．２ｌａ     

小鼠β趋化因子受体CCR5基因的克隆

目的：克隆小鼠β趋化因子相关的受体并研究其表达。方法：使用共同引物用ＲＴ－ＰＣＲ方法，从ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔巨噬细胞的Ｐｏｌｙ（Ａ）＾＋ＲＮＡ中扩增出一０．５ｋｂ ｃＤＮＡ，再根据其序列，设计一特异引物，用Ｍａｒａｔｈｏｎ ＰＣＲ法扩增得一２．８ｋｂ ｃＤＮＡ，用Ｓｏｕｔｈｅｍ方法检测分析该ＡＤＬＤ，Ｎｒｔｈｅｒｎ方法分析其表达。结果：成功克隆出小鼠ＣＣＲ５ ｃＤＮＡ，其开放阅读框为１０６５ｂｐ，     

应用α—珠蛋白3′—HVR探针进行小鼠的DNA指纹分析

目的：探讨３′－ＨＶＲ探针及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术应用于实验小鼠遗传质量监测的可行性。方法：采用人源α－珠蛋白３′－ＨＶＲ探针,应用ＥＣＬ试剂盒,以ＨＲＰ标记进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,以化学发光法进行检测,对５种近交系小鼠（ＢＡＬＢ／ｃ、ＤＢＡ／２、Ｔ７３９、ＴＡ１、６１５）、１种封闭群小鼠（ＫＭ）及２种免疫缺陷小鼠（ＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ／ｎｕ及Ｃ．Ｂ－１７ＳＣＩＤ）进行ＤＮＡ指纹分析。结果：其不     

湖南汉族群体HLA—DR2等位基因多态性与系统性红斑狼疮的相？…

以ＨＬＡ－ＤＲＢ基因类扩增为参照,通过ＨＬＡ－ＤＲ２组特异性扩增确定ＨＬＡＤＲ２携带者,ＰＣＲ／ＳＳＰ作亚型分型,并用银染ＰＣＲ／ＳＳＣＰ分析ＨＬＡ－ＤＲ２等位基因第二外显子单链构象,调查湖南地区汉族群体ＳＬＥ（系统性红斑狼疮）患者５８例和健康对照５９例ＨＬＡ－ＤＲ２等位基因分布。结果示,ＨＬＡ－ＤＲ２与ＳＬＥ相关,ＨＬＤ－ＤＲＢ１＊１５０１为疾病相关等位基因,该群体中检出的另外两种亚型ＤＲＢ１＊     

6个近交系小鼠线粒体DNA D-Loop区PCR-RFLP分析

分析Ｔ７３９等６个近交系小鼠线粒体ＤＮＡＤ－Ｌｏｏｐ区的多态性,探讨近交系小鼠的遗传监测方法。方法：ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术,即ＰＣＲ技术结合限制性片段长度多态分析。结果Ｄ－Ｌｏｏｐ片段经ＨａｅⅢ、ＨｉｎｆⅠ、ＥｃｏＲⅤ、ＩＮＤⅢ、ＨｐａⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＡｐａⅠ、ＮｄｅⅡ、ＸｈｏⅠ、ＸｂａⅠ内切酶消化后,Ｔ７３９、ＴＡ２、６１５、ＢＡＬＢ／Ｃ、Ｃ３Ｈ、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠表现出完全相同的酶切栈局,未发     

小鼠电针镇痛模型的建立与实验观察

目的：建立小鼠电针镇痛模型，在不同品系小鼠上观察各种电针参数引起的电针镇痛效果。方法：应用不ＬＨ型ＨＡＮＳ刺激仪，采用辐射热甩尾测痛法，比较了６种品系小鼠的电针镇痛效应。结果：（１）品系的差异：１００Ｈｚ电针时ＤＢＡ／２品系的镇痛效果显优于其它品系，２Ｈｚ电针时ＤＢＡ／２品系和ＢＡＬＢ／ｃ品系显优于ＩＣＲ品系；（２）性别差异：２Ｈｚ电针ＤＢＡ／２、Ｃ５７、ＴＢＡＬＢ／ｃ３种品系的雌鼠优于雄鼠，     

小鼠电针镇痛模型的建立与实验观察

目的：建立小鼠电针镇痛模型,在不同品系小鼠上观察各种电针参数引起的电针镇痛效果。方法：应用ＬＨ型ＨＡＮＳ刺激仪,采用辐射热甩尾测痛法,比较了６种品系小鼠的电针镇痛效应。结果：（１）品系的差异：１００Ｈｚ电针时ＤＢＡ／２品系的镇痛效果显著优于其它品系,２Ｈｚ电针时ＤＢＡ／２品系和ＢＡＬＢ／ｃ品系显著优于ＩＣＲ品系;（２）性别差异：２Ｈｚ电针ＤＢＡ／２、Ｃ５７、ＢＡＬＢ／ｃ３种品系的雌鼠优于雄鼠,１００Ｈｚ电针仅ＢＡＬＢ／ｃ品系的雌鼠优于雄鼠;（３）刺激强度方面：１２２ｍＡ组针效显著优于０．５１．５２．５ｍＡ组或１１．５２ｍＡ组;（４）ＤＢＡ／２和Ｃ５７品系小鼠的电针镇痛与吗啡镇痛呈正相关性;（５）纳洛酮翻转：剂量为１ｍｇ·ｋｇ－１的纳络酮能翻转２Ｈｚ电针效果;而翻转１００Ｈｚ电针效果,则需剂量为２５ｍｇ·ｋｇ－１的纳络酮。结论：小鼠电针镇痛存在品系（遗传背景）和性别差异。阿片受体参与了小鼠电针镇痛,低频和高频电针镇痛分别由不同亚型的阿片受体介导。     

不同品系小鼠脾细胞中膜白细胞介素－2受体阳性细胞的检测和参考值

用自制生物素－链霉亲和素试剂和抗膜白细胞介素－２受体（ＩＬ－２Ｒ）单克隆抗体，通过酶免疫技术，检测了ＫＭ、ＮＩＨ、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、ＤＢＡ／２、ＢＡＬＢ／ｃ和ＢＡＬＢ／ｃ－ｕｎ六个品系小鼠脾脏中静息期和经ＰＨＡ诱导后的ｍＩＬ－２Ｒ阳性细胞表达率，且证明环磷酸胺对小鼠脾脏ｍＩＬ－２Ｒ阳性细胞有明显抑制作用。     

兔的单引物PCR指纹分析

本研究结合ＤＮＡ指纹杂交和随机扩增多态性ＤＮＡ(ＲＡＰＤ)技术 ,探索了适用于动物基因组的操作简捷、快速以及敏感性可靠性强的分子标记方法———单引物ＰＣＲ指纹技术。应用单引物ＰＣＲ指纹技术 ,采用的 1条小卫星引物Ｍ13(5′ＧＡＧＧＧＴＧ ＧＣＧＧＴＴＣＴ3′)和 2条微卫星引物 { (ＧＴＧ) 5、(ＧＡＣＡ) 4}对Ｖｃ Ⅰ系、Ｖｃ Ⅱ系獭兔、日本大耳白兔 (ＺＤＢ)和青紫蓝 (ＱＺＬ)四个品系各8只 ,总计 32个个体的遗传结构进行了分析。根据结构应用ＰｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃＣｏｍｐｕｔｅｒＴｏｏｌｓ软件计算出四个品系间及 32个个…     

应用RAPD引物区分小鼠品系

目的 用随机扩增多态DNA（Random amplidfed polymorphic DNA,RAPD）方法区分10个常用小鼠品系。方法 从120条随机引物中筛选出稳定性、重复性好的4条多态性引物对10个常用小鼠品系进行RAPD扩增。扩增产物在含溴化乙锭的1．5％琼脂糖凝胶中电泳,紫外透射仪上观察照相。结果 仅用这4条引物就可将10个品系小鼠完全区分开来,其中包括遗传背景或外观形态很相似的品系,如BALB／c与BALB／c-nu、KM与BALB／c也能区分出来。结论 筛选出的4条引物对实际工作具有指导意义,适用于小鼠常规遗传监测。     

10个品系小鼠的AFLP分析

目的：实验用小鼠的遗传质量分析和品系鉴定。方法：应用AFLP技术对10个品系小鼠进行分析。结果：共应用25条单酶切引物、25对双酶切引物进行检测，其中17条单酶切AFLP引物、20对双酶切AFLP引物检测到10个品系小鼠的多态性变化。单酶切AFLP共扩出251条带，片段大小在100－2000bp，共得到89个多态位点，占总扩增带的35．5％。双酶切AFLP在50－600bp扩增出清晰条带，统计1507条带，共得到378个多态位点，占总扩增带的25．1％。对多态性片段进行统计，计算出不同品系间的相似指数和遗传距离指数。结果表明昆明鼠（KM）与TA2、BALB／c、BALB／c-nu关系较近；所有品系间关系最近的两品系为BALB／c和BALB／c-nu；关系较远的是DBA／2与T739、615、C57BL／6J，与小鼠品系来源及培育史相符。结论：通过筛选获得特异性AFLP标记，可用以区分遗传背景或外观形态很相似的品系。为小鼠的遗传质量分析和品系鉴定提供了参考资料。     

对5个S180克隆细胞株RAPD特征的研究

目的运用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术建立S180的5个克隆细胞株的特异性图谱。方法运用23条引物对S180-S2D9、S180-S2D7、S180-S1F11、S180-S1H10、S180-S1B115个克隆细胞株的基因组DNA进行RAPD-PCR扩增,以琼脂糖电泳观察结果。结果筛选出3条在各克隆株扩增产物间有差异的引物。结论5个S180克隆细胞株的RAPD特征有明显区别。     

5个S180克隆细胞株RAPD特征及S180-S2D9传代细胞生物学特性研究

目的 研究5个S180克隆细胞株随机扩增多态性DNA（RAPD）特征以及S180-S2D9传代细胞的生物学特性。方法 运用23条引物对S180-S2D9、S180-S2D7、S180-S1F11、S180-S1H10、S180-S1B11的基因组DNA进行RAPD-PCR扩增,以琼脂糖电泳观察结果;对S180-S2D9原代、25代、50代、75代细胞基因组DNA．进行RAPD分析;计数染色体数目;原代、50代细胞分别接种入KM小鼠腹腔,观察腹水的生长情况及小鼠的存活天数;流式细胞仪测DNA含量。结果 筛选出3条在各克隆株扩增产物间有差异的引物,通过这3条引物分析S180-S2D9的RAPD特征,原代、25代、50代、75代细胞之间的RAPD条带无差异;原代、25代、50代、75代细胞的染色体数差异无统计学意义。原代、50代细胞分别接种于10只昆明小鼠腹腔,两组的存活天数分别为13～23d、13～20d,原代与50代组存活天数的差异无统计学意义。流式细胞仪测DNA相对含量分别为0．3890、0．3542、0．3575、0．3984。以上结果提示,S180-S2D9传到75代时未发现遗传变异。结论 可以运用RAPD-PCR技术对克隆细胞株进行质量控制。S180-S2D9克隆株性质均一,致瘤特性稳定。     

非小细胞肺癌的随机扩增多态DNA分析

目的：用ＲＡＰＤ技术检测非小细胞肺癌组织的遗传改变。方法：选用４０条含１０个碱基的随机引物对１６例非小细胞肺癌进行ＲＡＰＤ扩增,扩增产物在含溴化乙锭的１．５％琼脂糖凝胶中电泳,紫外透视仪上观察照相。结果：４０条引物都能扩增出清晰的条带,其中２２条引物产生的条带在肿瘤与其相应正常组织间无差异,表现为单态性;１８条引物扩增出的ＤＮＡ序列在肿瘤与其相应正常组间存在差异,表现为带的缺失、增加、移动和带强弱     

应用AFLP技术对不同品系小鼠进行遗传检测的初步研究

目的 探讨应用AFLP技术对不同品系小鼠进行遗传检测的可行性。方法 应用人工设计的与接头序列相应的AFLP选择性引物,对不同品系的小鼠基因组DNA进行AFLP－PCR,以琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。结果 不同品系小鼠基因细胞的扩增结果具有差异。结论 AFLP技术是一种适宜于小鼠的遗传检测方法。     

长爪沙鼠与实验大小鼠RAPD图谱比较研究

目的比较长爪沙鼠与实验大、小鼠的RAPD图谱，为实验室日常鉴别动物品种品系提供一种分子生物学方法。方法提取基因组DNA（封闭群沙鼠、近交系小鼠BALB／c和C57BL／6、封闭群小鼠KM、近交系大鼠F344和BN以及封闭群大鼠SD），用6条随机引物对其进行PCR扩增。结果在6条随机引物中，p1、p2、p3、p4和p6这5条引物扩增的条带差异较为明显，表现为不同的RAPD图谱。结论RAPD方法可用于鉴定长爪沙鼠与实验大小鼠的差异。     

小鼠11个品系20个微卫星基因位点的遗传分析

目的利用PCR对近交系小鼠11个品系的20个微卫星基因座进行遗传检测,为实验室日常检测近交系小鼠的遗传背景提供一种分子生物学方法.方法用20个微卫星引物对11个品系近交系小鼠的基因组DNA进行PCR扩增.根据MMDBJ数据库信息,已知品系C3H、DBA、BALB/c和C57BL/6的多态性位点大小,由此可推知其他品系C57BL/6-Bg、C57BL/10、TA1、TA2、T739、M615和SCID的多态性位点大小.结果应出现的220条条带中有193条与预期的一致.结论利用这20个微卫星基因位点可以将11个品系的近交系小鼠区分开来,近交系小鼠具有丰富的遗传多样性,这些结果对于近交系小鼠的遗传检测具有重要指导意义.     

应用RAPD方法对近交系小鼠进行遗传检测的研究

目的　为实验室日常检测近交系小鼠的遗传背景提供一种分子生物学方法。方法　用 6条随机引物对 6个品系近交系小鼠基因组DNA进行PCR扩增。结果　 6条随机引物中p2、p3、p5和p6四引物扩增的条带差异较为明显。结论　RAPD方法是一种有效的近交系小鼠遗传检测手段