90例丙型肝炎患者HCV基因分型研究

目的 了解徐州地区丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因型的分布情况。方法 对９０例血清ＨＣＶ ＲＮＡ阳性的丙型肝炎（ＨＣ）患者，行ＨＣＶ基因酶切分型。结果 ９０例中ＨＣＶ－Ⅱ型７１（７８．９％），ＨＣＶ－Ⅲ型１７例（１８．９％），ＨＣＶ－Ⅱ／Ⅲ混合型２例（２．２％）。结论 徐州地区ＨＣＶ流行株基因型主要为Ⅱ型，同时存在Ⅲ、Ⅱ／Ⅲ混合型。     

丙型肝炎病毒（HCV）基因分型研究中现存的问题

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因分型研究中现存的问题广西区卫生防疫站李平川综述葛宪民审校目前，在ＨＣＶ基因分型研究中所依据的基因区、分型方法、基因型的命名及数目等方面均无统一标准，各家报道很不一致，现将导致上述现象的原因综述如下。１分型所依据的基因区不同目...     

微板核酸杂交技术对江西地区HCV基因分型的观察

目的 采用微板核酸杂交-ELISA技术对HCV RNA进行基因分型。方法 采用PCR、核酸杂交和酶联显色技术，首先将HCV RNA进行RT-PCR扩增，并将扩增产物加入预先包被对HCV通用探针的徽孔板，再加入HCV各基因型显色探针，同时进行微板核酸杂交-ELISA显色，对江西地区129例临床诊断为丙肝RNA阳性患者血清中的HCVRNA进行基因分型研究。结果 江西地区HCV基因型可分为1b、2a、2b、3a、3b、6a、la／2a、1b／2a、1b／3a、1b／6a、3a／5a、2a／3a共12种单一基因型和混合基因型，其中以1b基因型为主，占50．39％；慢性丙肝患者的基因型较为复杂，存在较高比例的混合基因型。结论 江西地区HCV感染者以1b基因型为主．PCR徽板核酸杂交-ELISA方法可以准确、快速、简便进行HCV基因分型，在探讨HCV的流行病学及观察药物对各基因型的疗效方面具有重大的意义。     

反向点杂交法检测广东地区丙型肝炎病毒基因型和基因亚型

目的 建立并应用HCV基因分型技术PCR-反向点杂交法(PCR-RDH),调查广东地区丙型肝炎病毒(HCV)基因型和亚型的分布情况.方法 应用生物信息学软件针对HCV 5'端非编码区(5'UTR)和核心蛋白区(C区)设计特异性捕获探针及生物素标记引物,建立HCV基因分型的PCR-反向点杂交技术.应用本技术对115例慢性丙型肝炎患者血清标本进行HCV基因型和亚型检测,同时对其中38份标本中的HCV进行RT-PCR扩增、测序、系统进化树分析确定HCV基因型和亚型,以评价反向点杂交法的准确性及临床应用价值.结果 115份血清标本中,反向点杂交法HCV基因型及亚型检出率为96.5%(111/115),15份阴性对照全部为阴性.111例检出基因型的标本中1b型63例(56.8%)、2a型9例(8.1%)、3a型4例(3.6%)、3b型6例(5.4%)、6a型28例(25.2%)、1b/2a混合型1例(0.9%).经测序分型确定此法检测准确度为100%,特异度为100%.结论 HCV基因型反向点杂交法检测准确可靠、简便经济、高效,适用于临床检测.广东地区的HCV基因型分布以1b型为主,呈现出1b型比例下降,3a、6a型比例升高的趋势.     

CHC患者HCV基因分型及与肝功能指标的关系

目的 探讨慢性丙型肝炎(CHC,以下简称丙肝)患者丙型肝炎病毒(HCV)基因分型与肝功能指标的关联性。方法 收集2018年1月~2019年7月笔者医院就诊的丙肝患者94例,采用RT-qPCR一步法对其进行HCV基因分型,并统计分析丙肝患者的基因型分布以及基因型与肝功能相关指标的相关性。结果 在94例丙肝患者中,有阳性扩增曲线的HCV基因型共90例,阳性检出率为95.7%,其中1b型、3b型、6a型、3a型和2a型分别占31.9%、23.4%、21.2%、12.8%和6.4%。HCV 3b型CHC患者的丙氨酸转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平高于其他4种基因型(P均<0.01),HCV 6a型的HCV RNA拷贝数高于其他4种基因型(P=0.041)。CHC患者HCV基因型与TIBL和DIBL无明显相关(P均>0.05)。结论HCV基因型最主要型别是HCV 1b型,HCV基因型与ALT、AST水平及HCV RNA拷贝数之间存在相关性。HCV基因分型检测可为临床判断CHC病情提供实验室依据。     

广东地区丙型肝炎患者的HCV基因分型研究

目的了解广东地区慢性丙型肝炎患者的HCV基因分型情况,为丙型肝炎病毒的诊断和预防提供有力依据。方法根据丙型肝炎病毒RNA全序列,在5′-NCR区设计引物,通过套式PCR扩增,特异性产物测序分析并分型。结果检测HCV感染样本58例,扩增出阳性样本47例,共检出3种基因型,分别为1b,2a和4型,其中1b占85.1%,2a占12.8%,4型占2.1%,4型为中国人群中极少报道被检出的罕见型。结论广东地区HCV基因型主要为1b型,其次为2a型,与中国其它地区HCV基因型分布比较一致。     

丙型肝炎基因分型

丙型肝炎病毒(HCV)自从1989年被美国发现以来,HCV感染逐渐成为一个世界性公共卫生问题[1]。在全球范围内大约有1.7亿人感染HCV,WHO报告每年全球至少300～400万人感染HCV,而一旦感染,仅有约20%的人能将病毒从血液中清除出去,很大一部分人可导致肝硬化和肝癌,许多人可终生无症状,成为病毒携带者[2]。在美国每年有5万人感染HCV,我国一般人群感染率达1%～3%。HCV感染后,慢性化率较高,至少50%～70%转氨酶可持续升高,重者有肝硬化表现,HCV和原发性肝癌(HCC)的发生也有密切关系[3]。1HCV的传播途径①HCV可通过输血感染。②可通过其他…     

PCR-RDB技术在HCV基因分型中的应用研究

目的:评价PCR-RDB技术在丙型肝炎病毒(HCV)基因型检测中的临床实际应用价值。方法:随机收集经实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测HCV RNA含量大于1×103 IU/ml血清样本总计158份,其中无临床症状丙型肝炎病毒携带者90例,慢性丙型肝炎(CHC)患者48例,肝硬化(HS)患者16例,肝癌(LC)患者4例。全部血清样本应用PCR和反向斑点杂交技术(RDB)进行HCV基因分型检测,并对检测结果进行统计学分析。结果:所有标本HCV基因分型成功,其中1b型78例,2a型65份,3a型3例,3b型2例,6a型2例,1b和2a混合感染型8例。不同疾病组HCV不同基因型分布差异无统计学意义。结论:HCV基因型与疾病类型无相关性;PCR-RDB杂交技术适用于临床实验室开展HCV基因型检测。     

丙型肝炎病毒基因分型的研究进展

丙型肝炎病毒是一个高度异质性的RNA病毒,目前可分为6个基因型与不同的亚型.本文就 HCV基因型构成、HCV基因分型的检测方法与命名、HCV基因型的流行病学的意义、HCV基因型与疾病严重性、急性HCV感染的转归、IFN-α疗效、HCV基因分型与疫苗的研制等有关的研究作一综述.     

反向斑点杂交技术检测HBV YMDD基序变异 的应用和评价

 【目的】 采用反向斑点杂交技术对拉米夫定治疗后的慢性乙型肝炎患者血清中HBV YMDD基序变异进行检测,并对其临床应用进行方法学评价&#65377;【方法】 提取242例慢性乙型肝炎患者血清中HBV DNA,经聚合酶链反应后进行膜条杂交并同测序比较分析检测结果的一致性,随后对该方法进行灵敏度和混合感染检测能力的评价&#65377;【结果】 242例样本检测结果有236例与测序结果相符,反向斑点杂交检测结果同测序结果的符合率达97.5%;混合型感染58例,占样品总数的24%&#65377;反向斑点杂交技术检测HBV YMDD基序变异的灵敏度达103 IU/mL,在病毒混合感染群体中能检测出约占10%的突变型病毒株&#65377;【结论】 反向斑点杂交技术检测HBV YMDD基序变异具有简单&#65380;准确&#65380;经济实用的特点,具有很好的临床应用前景&#65377;     

逆向斑点杂交.斑点杂交和电镜检测鸭乙型肝炎病毒的比较

本文将逆向斑点杂交同时检测鸭乙型肝炎病毒DNA(DHBV DNA)及其特异DNA多聚酶(DNAp)的结果,与斑点杂交检测DHBV DNA和电镜检测DHBV颗粒的结果作了比较。174份鸭血清用逆向斑点杂交和斑点杂交进行了配对检测,两者结果在统计上无差别。77份用逆向斑点杂交和电镜作了配对检测,结果也无统计学差别。部分样品用三种方法重复检测多次,结果以逆向斑点杂交检测的重复性最好。并认为逆向斑点杂交具有方法简单、可靠、重复性好和一次能同时检测DHBY DNA和特异DNAp两个指标的优点,是研究体内嗜肝病毒复制较为理想的方法。     

重庆地区69例丙型肝炎病毒感染基因分型研究

目的：探讨重庆地区HCV流行的主要基因型。方法：提取69份血清标本的HCV RNA，通过逆转录套式PCR（RTnested-PCR)扩增5'端非编码区（5'NCR)，以4种限制性内切酶BstUⅠ，NciⅠ，HaeⅢ,RsaⅠ对扩增产物进行限制性片段长度多态性分析（RFLP），依据不同的酶切电泳图谱确定HCV基因型。结果：69份HCV感染者血清标本有60份可以通过上述方法进行基因分型，其中主要基因型是1b,2a分别占36．24％和31．88％。结论：HCV－1b,2a仍然是重庆地区主要的基因型，但其所占比例不如中国其它地区高，说明HCV的分布呈地域依赖性。     

反向斑点杂交检测甲/乙型流感病毒及其基因分型的方法研究

目的 建立一种特异、灵敏的检测甲/乙型流感病毒并对其进行基因分型的反向斑点杂交方法.方法 应用生物软件针对甲/乙型流感病毒的膜蛋白(Matrix Protein)基因和血凝素(Hemagglutinin,HA)基因的保守区域设计引物及探针,通过优化PCR和杂交的反应条件.建立检测甲/乙型流感病毒并对其进行基因分型的反向斑点杂交方法.验证方法的特异性和敏感性,并与直接免疫荧光法分别对相同的临床咽拭子标本进行检测,比较两者的检测结果,以评价该方法的临床应用价值.结果 该方法对甲/乙型流感病毒的检测具有特异性,对呼吸道合胞病毒、柯萨奇病毒A型、副流感病毒3型、鼻病毒和腺病毒3型均无交叉反应,检测灵敏度为102～103 copies/μL.在111例发热门诊病人的咽试子标本中.免疫荧光检测出3例甲型流感病毒、0例乙型流感病毒,阳性率为2.7%;反向斑点杂交检测出3例甲型流感病毒,其中1例H1、2例H3、0例H5、0例H9,4例乙型流感病毒,阳性率为6.3%.结论 初步应用结果表明,本研究建立的检测甲/乙型流感病毒并对其进行基因分型的反向斑点杂交方法具有特异、灵敏的特点,为该方法的后续临床应用奠定基础.     

Rapid Detection of Rifampin-resistant Clinical Isolates of Mycobacterium tuberculosis by Reverse Dot Blot Hybridization

Objective A PCR-reverse dot blot hybridization (RDBH) assay was developed for rapid detection of rpoB gene mutations in‘hot mutation region’ of Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis).
Methods 12 oligonucleotide probes based on the wild-type and mutant genotype rpoB sequences of M. tuberculosis were designed to screen the most frequent wild-type and mutant genotypes for diagnosing RIF resistance. 300 M. tuberculosis clinical isolates were detected by RDBH, conventional drug-susceptibility testing (DST) and DNA sequencing to evaluate the RDBH assay.
Results The sensitivity and specificity of the RDBH assay were 91.2%(165/181) and 98.3%(117/119), respectively, as compared to DST. When compared with DNA sequencing, the accuracy, positive predictive value (PPV) and negative predictive value (NPV) of the RDBH assay were 97.7%(293/300), 98.2%(164/167), and 97.0%(129/133), respectively. Furthermore, the results indicated that the most common mutations were in codons 531 (48.6%), 526 (25.4%), 516 (8.8%), and 511 (6.6%), and the combinative mutation rate was 15 (8.3%). One and two strains of insertion and deletion were found among all strains, respectively.
Conclusion Our findings demonstrate that the RDBH assay is a rapid, simple and sensitive method for diagnosing RIF-resistant tuberculosis.     

人乳头瘤病毒感染基因亚型分析

目的 分析HPV各基因亚型感染情况,探讨HPV亚型感染与宫颈病变的关系.方法 应用美国Digene公司杂交捕获法(Hybrid Capture Ⅱ,HC Ⅱ)对我院宫颈疾病专科门诊病例进行高危型HPV筛查,从中随机抽取213例阳性标本应用PCR结合反向寡核苷酸探针斑点杂交技术(reverse dot blot,RDB)进行HPV基因亚型分析.结果 213例HC Ⅱ法检测为高危型HPV阳性的标本中被PCR/RDB法检测出具体HPV高危型别的有195例.共检测出17种HPV型别(包括高危型13种和低危型4种).具体HPV亚型检出率分别是16型(32.3%)、52型(23.1%)、58型(18.0%)、31型(11.8%)、68型(10.3%)、33型(9.7%)、53型(8.2%)、18型(8.2%)、66型(6.2%)、CP8 304型(4.6%)、6型(3.6%)、59型(3.1%)、4 5型(2.1%)、39型(2.1%)、11型(2.1%)、56型(1.5%)、51型(1.0%).单一HPV亚型感染及2种、3种和4种HPV亚型混合感染检出率分别为59.5%、30.8%、8.6%和1.1%.结论 高危型HPV感染检出率最高的HPV亚型为HPV16型(32.3%),其次为HPV52型(23.1%),检出率最低的两种亚型分别是HPV56型(1.5%)和HPV51型(1.0%).HPV58型这种世界范围内少见的一种高危型HPV在中国高危型HPV感染的患者中检出率(18.0%)却并不低.单一高危型HPV亚型感染是引起宫颈病变的主要原因,而多种HPV亚型混合感染在宫颈病变中的作用也不可忽视.     

南宁市102例HIV/HCV共感染者HCV基因型特征分析

目的了解南宁市静脉注射吸毒人群(IDUs)中HIV/HCV共感染者HCV基因亚型流行情况。方法收集2012—2014年间南宁市静脉注射吸毒人员HIV/HCV共感染者血浆样本总共108份,设计特异性引物,通过巢式PCR对HCV NS5B区域长339 bp的片段进行扩增并测序,构建系统进化树对HCV进行基因分型。结果 108份血浆样本中巢式PCR成功扩增基因片段102份,系统进化分析显示检出4种HCV基因型含6种基因亚型,各基因亚型所占样本比例为6a 34.31%(35/102)、3b 33.33%(34/102)、1a 20.59%(21/102)、1b 6.87%(7/102)、3a 3.92%(4/102)和2a 0.98%(1/102)。在不同人口学特征时102份样本HCV基因型组成差异无统计学意义(P0.05)。结论南宁市IDUs人群HIV/HCV共感染者中至少存在6种HCV基因亚型流行,6a、3b和1a为主要流行亚型。     

基于尼龙膜的点杂交条件的建立及优化

目的:进行基于尼龙膜的点杂交条件的建立及优化。方法:采用带正电荷的尼龙膜对斑点杂交的每一步骤进行优化,包括预杂交液,杂交液,洗涤和封闭液等及各步反应时间,并采用最终确立的条件检测糖基转移酶基因多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-Gal NAcT2)在K562、NB4、NI H3T3和SGC7901细胞株中的差异表达以验证膜杂交条件的可行性。结果:建立并优化了膜斑点杂交的条件,本底清晰,结果可靠。结论:建立的斑点杂交技术经济简便,切实可行。     

用三种逆转录PCR扩增系统检测丙型肝炎病毒RNA的比较

目的：比较常用的三种（ＭＭＬＶ／Ｔａｑ，ＡＭＶ／Ｔａｑ和Ｔｔｈ单酶）逆转录ＰＣＲ扩增系统的效果。方法：利用这三个系统对丙型肝炎病毒不同稀释度ＲＮＡ进行逆转录ＰＣＲ扩增，比较其检测灵敏度。结果：ＡＭＶ／Ｔａｑ系统最佳，ＭＭＬＶ／Ｔａｑ系统次之，Ｔｔｈ单酶系统最差，ＡＭＶ／Ｔａｑ系统的检测灵敏度比Ｔｒｈ单酶系统高１００００倍，比ＭＭＬＶ／Ｔａｑ系统高１００倍。结论：建议使用ＡＭＶ／Ｔａｑ酶的逆转录ＰＣＲ扩增系统以提高丙型肝炎病毒的检测灵敏度，减少假阴性的出现。