肿瘤坏死因子α介导人脐动脉血管平滑肌细胞成骨样钙化

目的 观察肿瘤坏死因子α（TNF-α）对体外培养人脐动脉血管平滑肌细胞（hUASMC）骨特异性碱性磷酸酶（BAP）、骨桥蛋白（OPN）和骨形成蛋白2（BMP-2）等成骨样分化标志蛋白表达以及细胞外钙盐沉积的影响。 方法 植块贴壁法原代培养人hUASMC。予以TNF-α刺激，甲O-酚酞络合酮方法测定细胞外基质钙盐沉积；Von Kossa法观察钙化染色；实时定量PCR法测定血管平滑肌细胞BAP和OPN mRNA表达水平；免疫印迹法观察血管平滑肌细胞BAP、OPN和BMP-2蛋白表达水平。 结果 一定浓度范围内的TNF-α可促进hUASMC增殖；增加细胞外基质钙盐沉积。TNF-α 50 μg/L刺激可在第3天上调血管平滑肌细胞BAP和OPN mRNA表达水平（BAP mRNA：1.908±0.034比1.000±0.033，OPN mRNA： 3.600±0.073比1.000±0.079，均P < 0.05）。TNF-α 50 μg/L刺激可在第5天上调血管平滑肌细胞BAP、OPN和BMP-2蛋白表达水平（BAP蛋白：3.394±0.083比1.000±0.030，OPN蛋白： 1.967±0.134比1.000±0.070，BMP-2蛋白：2.745±0.289比1.000±0.208， 均P < 0.05）。 结论 一定浓度范围的TNF-α可刺激hUASMC增殖；介导细胞成骨样分化；增加细胞外基质钙盐沉积，从而参与血管钙化的发生发展。     

尿毒症血清诱导人脐动脉平滑肌细胞成骨样转化和钙化的研究

目的 研究尿毒症血清对原代培养人脐动脉平滑肌细胞（HUASMC）成骨样转化和细胞外基质钙沉积的影响。 方法 收集40例健康人、40例非透析尿毒症患者和45例透析尿毒症患者血清，检测有关生化指标。组织植块法原代培养HUASMC，分别给予健康人血清（对照组）、透析（透析组）和非透析（非透析组）尿毒症血清孵育。茜素红S钙沉积染色及甲氧-酚酞络合酮法检测细胞层钙盐含量。实时定量PCR、荧光定量法及Western 印迹分别检测骨特异性碱性磷酸酶（BAP）、骨桥蛋白（OPN）和骨形成蛋白2（BMP２）基因以及蛋白表达。 结果 血清生化检测结果显示尿毒症血清较健康对照存在高磷、高脂、高全段甲状旁腺激素（iPTH）、高C反应蛋白（CRP）、白细胞介素6（IL-6）和低胎球蛋白A（P < 0.05），而透析组血清的三酰甘油、CRP、IL-6较非透析组血清高（P < 0.05）。与健康对照组相比，透析组和非透析组尿毒症血清均使HUASMC钙盐沉积更显著，BAP、OPN以及BMP2的表达上调（P < 0.05），且透析组血清作用更明显。 结论 尿毒症血清体外能够诱导HUASMC成骨样转化和钙化，提示可能和尿毒症相关的血管钙化有关。透析并发的微炎性反应状态可能加速了这一过程。     

普伐他汀抑制肿瘤坏死因子α介导的人脐动脉血管平滑肌细胞成骨样钙化

目的 研究普伐他汀干预对肿瘤坏死因子α（TNF-α）介导的人脐动脉血管平滑肌细胞（hUASMC）成骨样分化标志蛋白骨特异性碱性磷酸酶（BAP）、骨桥蛋白（OPN）和骨形成蛋白2（BMP-2）表达以及细胞外钙盐沉积的影响，并探讨普伐他汀在血管钙化防治中的潜在作用。 方法 植块贴壁法原代培养人hUASMC。予以TNF-α刺激和普伐他汀干预，甲O-酚酞络合酮方法测定细胞外基质钙盐沉积；实时定量PCR法观察血管平滑肌细胞BAP和OPN mRNA表达水平；免疫印迹法观察血管平滑肌细胞BAP、OPN和BMP-2蛋白表达水平。 结果一定浓度范围的普伐他汀呈浓度依赖方式抑制TNF-α对hUASMC的促增殖作用（r = －0.946，P < 0.01）；一定浓度范围的普伐他汀呈浓度依赖方式下调TNF-α介导上调的BAP、OPN mRNA表达（r = －0.972，P < 0.01）与蛋白的表达水平（BAP蛋白，r = －0.820，P < 0.01；OPN蛋白，r = －0.972，P < 0.01；BMP-2蛋白，r = －0.928，P < 0.01），抑制血管平滑肌细胞成骨样分化，减少细胞外基质钙盐的沉积（r = －0.973，P < 0.01）。 结论 普伐他汀可抑制TNF-α对hUASMC的促增殖作用，抑制细胞成骨样分化，减少细胞外基质钙盐的沉积。     

巨噬细胞雄激素受体通过调控白细胞介素1β基因表达影响高磷诱发的血管平滑肌细胞钙化

目的:探讨巨噬细胞雄激素受体（androgen receptor,AR）是否通过调控白细胞介素（interleukin, IL）- 1β基因表达影响高磷诱发的血管平滑肌细胞钙化。 方法:采用人单核细胞系THP-1细胞,利用染色质免疫沉淀实验检测AR是否与 IL-1β启动子的...     

白细胞介素6对前列腺癌细胞体外生长的影响及其调节

目的　了解白细胞介素６（ＩＬ６） 对前列腺癌（ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ,ＰＣａ） 细胞体外生长的影响及地塞米松（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ,Ｄｅｘ） 对此的调节。方法　采用ＥＬＩＳＡ 法测定ＰＣａ 细胞系ＰＣ３ｍ 细胞ＩＬ６ 的自分泌及Ｄｅｘ 处理后的分泌状况,并用结晶紫法观察ＩＬ６ 、抗ＩＬ６ 抗体和Ｄｅｘ 对ＰＣ３ｍ 细胞生长的影响。结果　ＰＣ３ｍ 细胞可自分泌ＩＬ６,ＩＬ６ 无促进ＰＣ３ｍ 细胞增殖作用（ Ｐ＞ ０．０５）;抗ＩＬ６ 抗体可抑制ＰＣ３ｍ 细胞生长,细胞毒性由（１４．８４ ±１．２５） ％ 递增至（４１ ．４１ ±０ ．８０）％ ,呈剂量依赖关系（ Ｐ＜０．０５） 。Ｄｅｘ 不能减少ＩＬ６ 的产生但可抑制ＰＣ３ｍ 细胞增殖。细胞毒性由（１４ ．０６ ±０．２０）％ 递增至（３１ ．２５ ±１ ．１９）％ ,呈浓度依赖关系（ Ｐ＜ ０ ．０５）。结论　ＩＬ６ 为ＰＣ３ｍ 细胞的自分泌生长因子;Ｄｅｘ 可抑制ＰＣ３ｍ 细胞增殖,但并非通过抑制ＩＬ６ 的生成而发挥作用。     

高磷对牛血管平滑肌细胞钙化及其骨桥素分泌的影响

血管钙化是一种类似于骨和软骨形成过程，具有可调节性，其中高磷具有促进血管钙化发生和进展的作用．然而，其机制尚未完全清楚。为此，我们进行牛血管平滑肌细胞体外培养，观察不同磷浓度对钙沉积影响，并探讨其与骨桥素（OPN）的关系。     

白细胞介素6对人脐静脉血管内皮细胞-间质细胞转化的作用

目的:观察白细胞介素6（IL-6）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）表型和功能的影响,探索IL-6在内皮-间充质转化（EndMT）过程中的作用。方法:采用实验研究方法。取产妇行分娩手术后弃用的新鲜正常胎儿脐带,分离培养原代细胞的第2天在倒置相差显微镜下观察细胞形态;免疫荧光法鉴定第4代细胞是否为HUVEC后,取2批第3～...     

白细胞介素-10对人牙囊细胞RANKL表达的影响

目的:研究人牙囊细胞白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)蛋白的表达及其对破骨细胞分化因子(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)表达的影响.方法:采用组织块加胶原酶消化法培养人牙囊细胞,进行IL-10免疫组化染色.2 5ng/m1IL-10作用于牙囊细胞0、1、3、6 h,用RT-PCR检测RANKL mRNA表达的变化.结果:人牙囊细胞IL-10表达阳性.25ng/ml IL-1 0降低人牙囊细胞PANKL的表达,且具有时间依赖性.结论:人牙囊细胞表达IL-10,IL-10通过降低人牙囊细胞RANKL的表达,在牙齿萌出过程中起重要的调控作用.     

重组人骨形态发生蛋白-2对体外培养的肺动脉平滑肌细胞增殖的影响及其机制

目的探讨重组人骨形态发生蛋白(rhBMP)-2对体外培养的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的影响及机制。方法将用贴块法培养的PASMC传代后分成5组,Ⅰ组:含0.1?S培养基培养;Ⅱ组:含10?S培养基正常培养;Ⅲ组:10?S rhBMP-2 1μg/L;Ⅳ组:10?S rbBMP-2 10μg/L;Ⅴ组:10?S rhBMP-2 100μg/L。倒置相差显微镜及免疫荧光法观察并鉴定培养的PASMC;使用噻唑蓝(MTT)比色法测定PASMC增殖率;流式细胞仪分析PASMC细胞周期的变化;3H-TdR掺入实验检测DNA合成情况;RT-PCR检测细胞周期素(Cyclin)D1 mRNA的表达量;Western blot检测pSmad蛋白量及Cyclin D1蛋白表达。结果抗SM-α-actin免疫荧光染色鉴定所培养细胞为PASMC;Ⅱ组引起PASMC增殖率升高(90.26±30.12),S期细胞百分比增加(35.90±0.73),DNA合成增加(4890±372)的作用可以被Ⅲ、Ⅳ组的rhBMP-2抑制(66.29±27.19、15.90±0.61、3390±198,P<0.01),同时Ⅲ、Ⅳ组的rhBMP-2明显增加了pSmad蛋白量(1.37±0.26,1.68±0.31,P<0.01),并抑制了Cyclin D1 mRNA及蛋白表达(1.38±0.13,1.01±0.10,P<0.01)。结论rhBMP-2可以通过Smad信号转导途径抑制10?S培养的PASMC表达Cyclin D1,进而抑制血清刺激引起的PASMC增殖。     

雌激素对去卵巢小鼠肿瘤坏死因子-α、白细胞介素6水平的影响

补充雌激素可预防绝经后女性多种疾病,如骨质疏松、冠心病、阿尔茨海默病等,说明雌激素（E2）缺乏是上述疾病产生的重要因素。而E2缺乏导致绝经女性相关疾病的具体机制仍未完全阐明。文献报道可能与E2下降,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）水平异常升高有关。本     

RhoA/SRF信号通路介导Nelin诱导人血管平滑肌细胞表型转化

目的 探讨Nelin基因对人血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型转化的调控机制.方法 应用过表达慢病毒载体[Nelin-VSMC]及干扰慢病毒载体[LV-Nelin-SiRNA-VSMC]制备稳定转染的VSMC细胞模型,通过荧光定量PCR以及蛋白质印迹分析(Western blotanalysis,WB)等技术手段,观察Nelin蛋白过表达及表达抑制对人VSMC表型转化的影响及其调控机制.结果 Nelin-VSMC组细胞呈收缩表型,细胞细长,成“谷-峰”样生长,Nelin mRNA、Nelin蛋白和平滑肌分化标志蛋白平滑肌α-肌动蛋白(SMoα-actin)表达显著增加,同时SMα-actin相关调控因子-血清反应因子(SRF)入核转位,RhoA总蛋白表达上调,经Rho激酶特异性抑制剂Y-27632作用后,SRF在细胞核中表达显著减少,同时SMα-actin表达下调;LV-Nelin-SiRNA-VSMC组细胞呈合成表型,细胞体积变大,细胞极性消失,生长状态无序,Nelin mRNA、Nelin蛋白和SMα-actin蛋白表达显著降低,同时伴有SRF出核转位及RhoA总蛋白表达下调.结论 在体外培养的人VSMC中,Nelin依次激活SMα-actin蛋白相关调控因子RhoA和SRF引起SMα-actin表达增加,促进VSMC向收缩表型转换.     

瑞芬太尼对人肠系膜小动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的影响

目的 观察瑞芬太尼对人肠系膜小动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BKCa)的影响,探讨其扩张血管的机制.方法 酶消化法急性分离人肠系膜小动脉平滑肌细胞,采用全细胞膜片钳技术,+80 mV钳制电压下记录不同浓度瑞芬太尼(1.2、4.8、19.4、77.4和310.0 nmol/L)给药后人肠系膜小动脉平滑肌细胞BKCa电流及达峰时间,计算BKCa激活率.结果 瑞芬太尼可激活BKCa,使电流密度-电压曲线上移,激活电压不变;随瑞芬太尼浓度升高,BKCa激活率逐渐升高(P＜0.01),19.4 nmol/L时BKCa激活率趋于稳定;各浓度瑞芬太尼给药后BKCa电流达峰时间比较差异无统计学意义(P＞0.05);瑞芬太尼浓度与BKCa激活率成对数曲线关系,其半数最大激活效应浓度为(118±7)nmol/L.结论 瑞芬太尼浓度依赖性地激活人肠系膜小动脉平滑肌细胞BKCa,该作用可能是其产生扩张血管作用的机制.     

骨形态发生蛋白-2对人脐带间充质干细胞增殖和分化的影响

目的 观察骨形态发生蛋白-2(BMP-2)对人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)增殖和分化的影响.方法 体外培养hUCMSCs,在培养基中加入20 mg/L BMP-2,噻唑蓝(MTT)比色法观察BMP-2对hUCMSCs的增殖效果,流式细胞术检测BMP-2作用后细胞表面STRO-1的表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测量BMP-2作用后hUCMSCs骨桥蛋白(OPN)、碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1)的mRNA表达变化,碱性磷酸酶染色观察hUCMSCs在BMP-2培养基作用下ALP染色变化,Von kossa染色实验观察BMP-2对hUCMSCs钙结节的形成.结果 细胞在未加BMP-2和加BMP-2培养基中培养1、3、5、7 d,虽然细胞的增殖率上升,但各组间比较差异无统计学意义(P＞0.05),同时发现在2%血清的培养基中培养7 d后,hUCMSCs的增殖促进约10%左右.BMP-2培养7 d后细胞表面STRO-1阳性细胞比例上升明显,由25.1±4.0上升至51.1±6.4,差异有统计学意义(P＜0.01).BMP-2培养条件下COL1 mRNA的表达增强,差异有统计学意义(P＜0.05),OPN mRNA出现表达,ALP mRNA比无BMP-2培养明显增强,差异有统计学意义(P＜0.05).在BMP-2培养条件下ALP染色出现大片细胞阳性染色.在培养28 d,Von kossa染色出现明显的钙结节.结论 BMP-2对hUCMSCs成骨诱导分化作用明显,而增殖作用很弱.