汉族人AGT基因5′-调控区序列分析

目的 分析汉族人血管紧张素原（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｏｎｇｅｎ,ＡＧＴ）基因５′－调控区多态笥与其与原发性高血压的关联。方法 应用ＰＣＲ产物单链构象的多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）和ＰＣＲ直接测序方法,鉴定１００例高血压患者和５０例正常血压对照者的血管紧张素原基因５′－调控区－１５５至＋２５ｂｐ核酸序列。结果（１）汉族人ＡＧＴ基因５′－调控区－２０位是腺嘌呤核苷酸（Ａ）,而白种人该位是胞嘧啶核苷酸（     

血管紧张素原基因调控序列多态性与原发性高血压相关性分析

应用ＰＣＲ／ＳＳＣＰ分析及ＤＮＡ测序方法分析正常汉族人群和原发性高血压患者血管紧张素原基因多态性。比较３种不同ＳＳＣＰ带型在７３例原发性高血压患者组及７４例正常对照组中的分布频率，发现带型Ｃ在病例组中的比例（５／７３）高于对照组（１／７４）；ＤＮＡ序列分析表明３种不同带型是由于血管紧张素原基因５＇－调控区－２１６位，点存在Ｇ→Ａ的碱基变异所致，而带型Ｃ的个体为－２１６位，点Ａ／Ａ纯合子，提示该碱基变异可能与原发性高血压的发病相关。     

错配PCR—RFLP检测乙型肝炎病毒X基因／C基因启动子变异

设计错配ＰＣＲ－限制性片段长度多态性分析（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）检测中国ＨＢＶ毒株Ｃ基因启动子（ＢＣＰ）区第２个ＡＴ丰富区的一对点突变；核苷酸（ｎｔ）１７６２的碱基由Ａ→Ｔ和１７６４的碱基由Ｇ→Ａ变异。结果发现在３２例慢性ＨＢＶ感染者中ＢＣＰ变异者有１０例总检出率为３１．２％。提示在我国ＨＢＶ毒株ＢＣＰ区这一联合估变较常见。ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术与序列分析结合，对于研究这一新发现的热点变异与临床的关系具     

HLA－DQA1启动子区多态性与胰岛素依赖型糖尿病发病的关系

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增产物直接序列分析，鉴定早发及迟发胰岛素依赖型糖尿病（ＩＤＤＭ）患者ＨＬＡ－ＤＱＡ１５′－上游启动子区（ＱＡＰ）的核苷酸序列。结果表明，早发ＩＤＤＭ的ＱＡＰ－９２ｂｐ位发生胞嘧啶被胸腺嘧啶取代（Ｃ→Ｔ－９２）；迟发糖尿病在－１４６ｂｐ位置发生胸腺嘧啶（Ｔ）被胞嘧啶（Ｃ）取代，即Ｔ→Ｃ－４６。提示启动子区不同位置单个碱基取代，可能不同程度上改变其与ＤＮＡ结合蛋白的亲和力，而导致ＨＬＡ－ＤＯＡ１异常诱导表达。     

PCR循环测序法检测K-ras和HCV 5'非编码区基因变异

目的：建立一种简单、快速、可靠的ＤＮＡ序列分析方法，并利用此方法分析Ｋｒａｓ基因和ＨＣＶ５′非编码区基因的变异情况。方法：ＰＣＲ循环测序法是将ＰＣＲ扩增与核酸序列分析相结合的一种研究方法。根据此技术原理，建立了以ＰＣＲ扩增引物为测序引物，利用ＴａｑＤＮＡ聚合酶、荧光标记的２′，３′双脱氧核苷三磷酸（ｄｄＮＴＰ）直接进行ＰＣＲ扩增产物序列分析的方法。应用该方法对人肺癌组织中的Ｋｒａｓ癌基因和丙型肝炎病毒５′非编码区（ＨＣＶ５′ＮＴＲ）进行了序列测定。结果：肺癌组织中的Ｋｒａｓ基因第１外显子第３５位碱基发生点突变（ＧＧＴ→ＧＡＴ）；属于高度保守区的ＨＣＶ５′ＮＴＲ存在基因变异。结论：ＰＣＲ循环测序法具有简单、快速、结果可靠等特点，为基因突变的检测和病原体的核酸序列分析提供了一个快速实用的方法。     

HLA—DQAL启动子区多态性与胰岛素依赖型糖尿病发病的关系

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增产物直接序列分析，鉴定早发及迟发胰岛素依赖型糖尿病（ＩＤＤＭ）患者ＨＬＡ－ＤＱＡ１５′－上游启动子区（ＱＡＰ）的核苷酸序列。结果表明，早发ＩＤＤＭ的ＱＡＰ－９２ｂｐ位发生胞嘧啶被胸腺嘧啶取代（Ｃ→Ｔ－９２）；迟发糖尿病在－１４６ｂｐ位置发生胸腺嘧啶（Ｔ）被胞嘧啶（Ｃ）取代，即Ｔ→Ｃ－１４６。提示启动子区不同位置单个碱基取代，可能不同程度上改变其与ＤＮＡ结合蛋白的亲和力     

武汉地区汉族人AT1受体基因A1166C与原发性高血压的关系

血管紧张素Ⅱ１型（ＡＴ１）受体基因突变体Ａ１１６６Ｃ（碱基Ａ被Ｃ取代）可能与原发性高血压的发生有关,但目前的研究结果并不一致。利用对靶基因的ＰＣＲ扩增片段进酶切的方法对武汉地区１０３例汉族人ＡＴ１受体基因多态性（Ａ１１６６Ｃ）与原发性高血压发生的关系进行了分析。发现正常人和原发性高血压患者两组间Ａ１１６６Ｃ基因型频率分别为４０％和６２％（Ｘ＾２＝４．９５,Ｐ〈０．０５）。初步结果表明,被检测者中Ａ     

中国汉族人依赖还原型辅酶Ⅰ／Ⅱ醌氧化还原酶基因多态性

目的：确定中国汉族人依赖还原型辅酶Ⅰ／Ⅰ「ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：」醌氧化还原酶（ＮＱＯ１）基因ｃＤＮＡ的６０９位点Ｃ→Ｔ（Ｃ６０９→Ｔ）突变的频率分布。方法Ｌ：利用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）技术分析了８１名正常中国汉族人ＮＱＯ１基因ｃＤＮＡ的６０９位点的多态性。结果：中国流放人ＮＱＯ１基因的Ｃ６０９→Ｔ的频率为０．５２６；基因型Ｔ６０９／Ｔ６０９、Ｃ６０９／Ｃ６０９与Ｃ６０９／     

人体结直肠癌Ki－ras基因点突变检测

采用ＰＣＲ和寡核苷酸探针杂交技术检测了３５例结直肠癌和５例息肉活检组织ｋｉ—ｒａｓ基因第１２位密码子的点突变。发现１０例结直肠癌具有点突变，其中ＧＧＴ→ＧＴＴ（Ｇｌｙ→Ｖａｌ）突变３例，ＧＧＴ→ＧＡＴ（Ｇｌｙ→Ａｓｐ）突变７例；１例息肉有突变（ＧＧＴ→ＧＴＴ）。     

Ⅰ型糖尿病合并肺癌患者HLA－DQA_1启动子的核苷酸序列

应用聚合酶链反应产物与序列特异性寡核苷酸探针杂交（ＰＣＲ／ＳＳＯＰ）、ＰＣＲ产物单链构象分析（ＰＣＲ／ＳＳＣＰ）和ＰＣＲ直接测序等方法，鉴定１例Ⅰ型糖尿病合并肺癌患者ＨＬＡ－ＤＯＡ_１等位基因及ＤＱＡ_１启动子核苷酸序列。结果显示该患者携带ＨＬＡ－ＤＱＡ_１（０５０１）／ＤＱＡ_１（０３０１）等位基因；启动子区核苷酸序列第－１５５位为Ｇ／Ａ杂合型，且一１６１至一１６３ｂｐ发生ＣＡＡ碱基缺失突变。该突变可能影响顺式调控元件与反式因子的相互作用，并在转录水平调控ＨＬＡ－ＤＱＡ_１的表达。这种突变是否与肺癌发病相关，有待深入研究。     

β3 肾上腺能受体基因多态性分析及其初步应用

目的：建立β３－肾上腺能受体基因多态性检测方法。了解其表型行征。方法：应用ＰＣＲ－限缺性片段长度多态性ＰＣＲ－双脱氧链终止法测序技术分析β３－肾上腺能受体（β３－ＡＲ）基因型,结果：４８例北方汉族糖尿病人和３２例正常对照者中均存在β３－ＡＲ基因１９０位Ｔ→Ｃ的单碱基变异,两组人群中基因型的构成比例无显著差异。结论：Ａｒｇ６４Ａｒｇ纯合子可能具有糖尿病早发的特点。但β３－ＡＲ基因不是造成肥胖、脂质紊     

肾素-血管紧张素系统基因多态性与原发性高血压之间的关系

目的通过检测肾素－血管紧张素系统（ＲＡＳ）两个重要成分血管紧张素原（ＡＧＴ）及血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）基因在正常人及原发性高血压患者中的频率分布，阐明ＡＧＴ和ＡＣＥ基因在高血压的发病作用。方法对两组对象进行血压、身高、体重及空腹血脂、血糖的测定。用饱和盐析法常规提取ＤＮＡ。采用多聚酶链反应（ＰＣＲ）结合限制性内切酶方法检测ＡＧＴ的两种等位基因—Ｍ２３５Ｔ与Ｔ１７４Ｍ的突变；ＰＣＲ扩增后直接电泳检测ＡＣＥ基因多态性。结果（１）Ｍ２３５Ｔ等位基因突变频率在高血压组中比正常对照组高（０．４５ｖｓ０．３２，Ｐ＜０．０５），尤其在男性高血压患者与男性对照组中差别更为明显（Ｐ＜０．０１）；Ｔ１７４Ｍ及ＡＣＥ等位基因频率在两组人群中分布没有差别。（２）在有家族史的高血压患者中，ＡＣＥＤ等位基因频率高于正常对照组（０．５８ｖｓ０．４３，Ｐ＜０．０５），Ｍ２３５Ｔ突变基因型（ＴＴ型）高于正常对照组（４２．１％ｖｓ１８．８％，Ｐ＜０．０５）。结论（１）Ｍ２３５Ｔ基因突变与高血压患者密切相关。ＡＧＴ基因变异对男性高血压影响更大。Ｔ１７４Ｍ基因突变与ＥＨ之间不存在相关性。ＡＣＥ基因多态性与高血压无关。（２）在有家族史的高血压患者     

亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与原发性高血压的关系

目的：探讨上海社区人群亚甲基四氢叶酸还原酶（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ,ＭＴＨＦＲ）基因多态性与原发性高血压的关系。方法：用聚合酶链反应限制性片段的多态性（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ,ＰＣＲＲＦＬＰ）技术,检测１２７例原发性高血压及１７０例正常对照的ＭＴＨＦＲ基因多态性。结果：ＭＴＨＦＲ基因第６７７位核苷酸呈多态性,可分为３种类型：Ｃ／Ｃ、Ｔ／Ｔ、Ｃ／Ｔ。原发性高血压病例组３种基因型频率为：Ｃ／Ｃ,３４．６％;Ｃ／Ｔ,５３．５％;Ｔ／Ｔ,１１．８％。对照组中分别为３６．５％;４９．４％;１４．１％。病例组与对照组Ｔ／Ｔ基因型频率无显著性差异。结论：在上海社区人群中,ＭＴＨＦＲ基因多态性可能不是原发性高血压的危险因素。     

武汉地区汉族人血管紧张素原基因变异与原发性高血压的关系探讨

利用对靶基因的ＰＣＲ扩增片段进行酶切的方法对武汉地区汉族人血管紧张素原突变体（Ｍ２３５Ｔ与１７４Ｍ）与原发性高血压发生的关系进行了分析。发现正常人和原发性高血压患者两组间Ｍ２３５Ｔ基因型频率分别为７％和１４％（Ｐ〉０．１），Ｔ１７４Ｍ基因型频率分别为３１％和５１％（Ｐ〉０．０５）。初步结果表明，被检测者中血管紧张素原基因突变率在原发性高血压患者和正常人两组间没有显著性差异。     

中国汉族人依赖还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ醌氧化还原酶基因多态性

目的：确定中国汉族人依赖还原型辅酶Ⅰ／Ⅱ［ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：］醌氧化还原酶（ＮＱＯ１）基因ｃＤＮＡ的６０９位点Ｃ→Ｔ（Ｃ６０９→Ｔ）突变的频率分布。方法：利用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（ＰＣＲＲＦＬＰ）技术分析了８１名正常中国汉族人ＮＱＯ１基因ｃＤＮＡ的６０９位点的多态性。结果：中国汉族人ＮＱＯ１基因的Ｃ６０９→Ｔ的频率为０４２６；基因型Ｔ６０９／Ｔ６０９、Ｃ６０９／Ｃ６０９与Ｃ６０９／Ｔ６０９的比率分别为０１７、０３２和０５１。结论：该结果提示中国汉族人ＮＱＯ１基因的Ｃ６０９→Ｔ位点的多态性分布规律与西方人有明显的差异。     

I型糖尿病合并肺癌患者HLA—DQA1启动子的核苷酸序列

应用聚合酶链反应产物与序列特异性寡核苷酸探针杂交（ＰＣＲ／ＳＳＯＰ），ＰＣＲ产物单链的构象（ＰＣＲ／ＳＳＣＰ）和ＰＣＲ直接测序等方法，鉴定１例Ｉ型糖尿病合并肺癌患者ＨＬＡ－ＤＱＡ１等位基因及ＤＱＡ１启动子核苷酸序列。结果显示该患者携带ＨＬＡ－ＤＱＡ１０５０１／ＤＱＡ１０３０１等位基因；启动子区核苷酸序列第一位１５５位为Ｇ／Ａ杂合型，且－１６１至－１６３ｂｐ发生ＣＡＡ碱基缺失突变。该突变可能影响顺序     

聚合酶链反应技术在腓骨肌萎缩症基因诊断中的应用

目的 探讨应用聚合酶链反应（ＰＧＲ）技术建立中国人腓骨肌萎缩症（ＣＭＴ）基因诊断的方法。方法 分别应用ＰＣＲ－双酶切、聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）、聚合酶链反应－变性梯度凝胶电泳（ＰＣＲ－ＤＧＧＥ）或ＰＣＲ直接测序等方法对３２个确诊的ＣＭＴ家系进行了ＰＭＰ２２、ＭＰＺ、Ｇx３２等致病基因的突变检测。结果 ２１．９％的ＣＭＴ家系患者有Ｇx３２、ＭＰＺ和ＰＭＰ２基因的突变。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测到１０个家系有异常泳带,经ＰＣＲ测序证实有５个为多态;另５个为与疾病相关的致病的点突变,即４个Ｇx３２和１个ＭＰＺ基因的点突变。PCR-双酶切诊断了２个包含ＰＭＰ２２基因在内的大片段重复突变的ＣＭＴ１Ａ型家系。ＰＣＲ－ＤＧＧＥ仅１个家系患者异常泳带,该结果也可经ＰＣＲ－ＳＳＣＲ方法检出。结论 ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ－双酶切可作为Ｇx３２、ＭＰＺ、ＰＭＰ２２基因的点突变和ＣＭＴ１Ａ的大片段重复突变的初筛的方法,而ＰＣＲ－ＤＧＧＥ方法用于Ｇx３２基因的突变检测不理想,点突变应经ＤＮＡ测序证实。     

老年原发性高血压AT1—R基因多态性的研究

目的 研究老年原发性高血压（ＥＨ）血管紧张素ＩＩ１型受体（ＡＴ１－Ｒ）基因Ａ／Ｃ＾１１６６多态性的特征。方法 应用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）技术检测８７例汉族老年ＥＨ患者和５５例正常老年人的ＡＴ１－Ｒ基因Ａ／Ｃ＾１１６６多态性分布。结果 ８７例老年ＥＨ患者的Ｃ＾１１６６等位基因频率为０．１ １５,５５例正常老年人为０．０３６,经统计学分析两组间有显著差异（Ｐ〈０．０５）     

高血压患者及大鼠线粒体ATPase6基因的克隆,表达与突变研究

研究正常血压与高血压鼠以及正常血压与高血压患者的差异基因,方法用差别杂交法（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）筛选正常人心脏ｃＤＮＡ文库的部分克隆,得到多个在自发性高血压鼠（ＳＨＲ）心肌和高血压患者外周白细胞中高表达的线粒体基因。重组质粒,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和测序,进行基因突变分析,结果：ＳＨＲ鼠心肌线粒体ＡＴＰａｓｅ６基因构象改变,８７０１位碱基由Ｇ→Ａ（Ｇ８７０１Ａ）,编码的第     

蛋白C基因多态性在正常人和血栓病人的分布频率

目的探讨蛋白Ｃ基因多态性在中国正常人和血栓病人的分布情况。方法用聚合酶链式反应－单链构型多态性银染法分析了蛋白Ｃ（ＰＣ）的第一、六外显子的两个多态性：ＰＣ－１４７６Ａ／Ｔ和ＰＣ－３３４２Ｔ／Ｇ,检测了９０名汉族正常人和１０５例血栓病人。结果ＰＣ－１４７６Ａ／Ｔ的基因分布频率在正常人为０．８６７／０．１３３,与西方人群（０．４／０．６）明显不同（Ｐ＜０．００５）,而ＰＣ－３３４２Ｔ／Ｇ的分布频率在中西方人非常接近,分别为０．６０／０．４０和０．５９／０．４１;两多态性基因频率分布符合Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡定律,且连锁不平衡。ＰＣ－１４７６Ａ／Ｔ和ＰＣ－３３４２Ｔ／Ｇ的少见等位基因ＰＣ－１４７６Ｔ和ＰＣ－３３４２Ｇ在血栓病人的分布频率分别为０．２１和０．４６,高于在正常人群的分布频率（０．１３和０．４０）。结论此两ＰＣ基因多态性可能是动静脉血栓的遗传性相关因素。