分离玫瑰花结与非玫瑰花结淋巴细胞的改良技术

本文介绍了分离玫瑰花结与非玫瑰花结淋巴细胞的改良技术。普遍认为,因人T淋巴细胞有羊红细胞受体,所以能与新鲜的SRBC形成E花结。形成花结的基本过程包括用聚蔗糖—泛影葡胺混合液分离全血得到单个核细胞;使之与神经氨酸酶处理过的SRBC在37℃一同孵育5分钟。随后离心,再于4℃孵育1小时。为了分离E花结与非E花结细胞,将细胞小团重混悬。重混悬过     

自身花环及其在某些良恶性疾病中的变化

本文介绍了外周血淋巴细胞(PBL)形成自身花环(A-R)的检测方法。“自身花环”是由人淋巴细胞(LC)在体外与自身红细胞(ARBC)结合而成。 作者按Caraux的方法改良,取10~7/毫升的LC0.2毫升与0.05毫升自身血清置4℃预先孵育30分钟,再加入3×10~8/毫升的ARBC0.05毫升,低速离心后放于4℃冰箱孵育过夜,次日轻轻混悬沉淀斑块,计数200只LC中A-C(一只LC结合至少三只ARBC)形成数。以此法测定了122名正常     

CD_8~+T细胞是小鼠对弓浆虫防护性免疫应答的主要淋巴细胞亚群

弓浆虫感染可诱导产生对该寄生虫的体液免疫应答及细胞免疫应答,其中细胞免疫是宿主抗弓浆虫感染的主要因素。为了研究过继转移的主要T 细胞亚群抗弓浆虫感染的能力,以弓浆虫RRA 株感染10～12周龄BALB/c 雄性小鼠,8个月后无菌取感染鼠及未感染鼠脾,用RPMI1640制成脾细胞悬液,以尼龙/羊毛纯化T 细胞,调节T 细胞浓度为10~7个/ml,加入抗CD_4单克隆抗体或抗CD_8单克隆抗体,在冰上作用40分钟,洗涤后加入兔补体,37℃孵育40分钟,洗涤后再制成悬液,经尾静脉给受鼠注入10~7细胞,24小时后,以弓浆虫感染—腹腔注射20个弓浆虫孢囊。     

分泌抗人A型、B型红细胞单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立(摘要)

本实验分别采用洗涤过的10％正常人A型或B型红细胞悬液、或蒸馏水低渗法提取相当于50％压积红细胞膜抗原0.2～0.3毫升经腹腔或肌肉给8～10周龄BALB/c小鼠两次基础免疫,融合前三天再以0.1毫升上述抗原经尾静脉或脾内加强免疫一次。按常法取此种免疫鼠脾细胞1×10~8与骨髓瘤细胞(NSI或SP2/0)1×10~7在50％PEG(MW1000)、37℃下进行融     

介绍一种简便测定γ-干扰素活性的方法

<正> Virelizier等人报道γ-干扰素有较明显抑制溶血空斑的形成,为此我们采用稍加改良的空斑减少法,测定γ-干扰素活性。 先给实验组小鼠肌肉注射不同稀释度的Hu-IFN-γ,同时从尾部静脉注入10％SRBC 0.2ml。对照组只注入10％SRBC 0.2ml。免疫4天后,将小鼠拉颈处死,取脾脏磨制成含5×10~6细胞/ml的生理盐水悬液。在直径9cm平皿内倒入0.8％底层琼脂糖9ml。另取一试管,装入0.4％琼脂糖1.5ml,置50℃水浴中保温,然后加入10％SRBC 0.15ml,5×10~6/ml脾细胞是液0.15ml,混匀,迅速倒入已铺     

人扁桃体细胞体外培养及诱生原发性免疫反应的研究

本文提告了人扁桃体细胞在体外培养和诱生原发性抗SRBC反应的实验条件。发现比较合适的培养细胞密度是0.5～1.0×10~7个有核细胞/ml在添加混合的牛血清和马血清的培基中,比单独使用牛血清或马血清的培基能诱生出更多的抗体形成细胞(即空斑形成细胞PFC)。适当剂量的胰岛素、脂多糖或胸腺嘧啶核苷和次黄嘌呤都有增加PFC数的作用。人扁桃体细胞在体外培养中诱生出的抗SRBC PFC数一般是100～300个PFC/10~6个有核细胞。     

气功外气对小鼠淋巴细胞和肿瘤细胞作用的体外试验

一、气功外气对小鼠脾淋巴细胞增殖的作用按本室常规制备小鼠脾细胞悬液(2×10~6/ml),ConA最终浓度为3μg/ml或不加ConA,淋巴细胞转化试验用~3H-TdR掺入法测定,细胞悬液分装于设有对照组与试验组的平皿内各6ml,试验组接受气功外气15分钟,对照组不接受外气,发功完毕两组细胞充分摇匀后,分别吸取0.2ml加入96孔培养板内,每组设6个复孔,37℃,5%CO_2培养72小时。结果发现,气功外气对无     

用单克隆抗体检出一种新的急性白血病相关幼稚细胞抗原

作者用1～2×10~7Reh细胞株(cA-LL细胞系)免疫两只6周龄的雌性BALB/c小鼠,静脉注射每周1次,连续3周。末次注射后第3天取脾制成单个细胞悬液,脾细胞与P3×65—Ag8骨髓瘤细胞以7:1的比率在50%聚乙烯二醇液中融合,融合后     

一种快速检测杂交瘤上清中免疫球蛋白的新方法

按照Fauci等方法,取100微升压积红细胞加入1毫升现配的三氯化铬(100微克/ml盐水)和100微升葡萄球菌蛋白A(1.25毫升/ml)中。在30℃孵育40分钟后用盐水离心细胞洗涤两次。用含1毫克/ml牛血清白蛋白的PBS配制成2.25×10~8/ml的葡萄球菌蛋白A致敏羊红细胞悬液(E-SPA)。在微量滴定板上,用含10％胎牛血清(FCS)的RPMI 2倍稀释从正常小鼠血清提取的免疫球蛋白(IgG和     

几种阿片肽对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

本实验观察了几种阿片肽及氢化考的松对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬染料中性红能力的影响。 18-20克雄性LACA小鼠断颈髓处死后用Hanks＇液洗出腹腔巨噬细胞。用含10％小牛血清的RpMI_1,640液将细胞制成悬液(2×10~6细胞/ml)。在40孔细胞培养板中,每孔加入100μl细胞悬液。药物用RpMI_1,640液稀释成10~(-5)、10~(-7)、10~(-9)、10~(-11)M,分别加入细胞悬液中(每孔容量10μl),药物最终浓度分别为10~(-6)、10~(-8)、10~(-10)、10~(-12)M,同一浓度加入10孔中,即为10复管。细胞经37℃、24小时孵育后,弃去培养液,每孔加入     

分泌抗体细胞空斑检测方法的改进

作者用一种特制的毛细微玻片代替载玻片,来进行形成空斑细胞(PFC)的检侧。这种微玻片的规格为0.22mm×4mm×10mm,其容量为88μl。使用时只需将微玻片的一端放入微孔板中配好的反应混合液内,由于毛吸作用,微玻片即可被充满。用石蜡封口,放37℃孵育1—2小时后,即可用低倍光镜或自动电子计数器计数结果。通过小鼠脾细胞PFC检侧实验表明,此方法重复性很好,与Gunningham玻片法比较,PFC/10~6脾细胞;SRBC免疫小鼠后不同时间脾细胞PFC     

空斑形成细胞测定技术的进展及临床免疫应用

一、简介空斑形成细胞(Plaque-forming cell.PFG)测定技术又称溶血空斑技术,为Jerne等在1963年建立,主要用于体外单个抗体分泌细胞的检测。PFC技术具有敏感、特异、简便、快速的优点,因而在免疫学各领域得到广泛应用,成为免疫学研究不可缺少的工具之一。Jerne等建立的方法为平皿法,即用羊红细胞(SRBC)免疫小鼠,经一段时间取脾制成细胞悬液,加入含SRBC的琼脂介质中,倾到平皿,孵育后加入补体。由于抗体分泌细胞分泌抗SRBC抗体,致敏了周围的SRBC,经补体作用使SRBG溶解,形成溶血空斑。     

654-2对Fe~(2+)所致红细胞膜损伤的保护作用

本实验探讨654-2对Fe~(2+)所致红细胞膜损伤的保护作用。取正常大白鼠红细胞,生理盐水制成红细胞悬液(8×10~(?)个细胞/ml)。取0.2ml悬液,分别加入下列药物37℃孵育120分钟,观察红细胞形态变化,TBARs产生及红细胞内血红蛋白释出情况。实验分为五组:1.对照组(红细胞+生理盐水);2.红细胞+Fe~(2+)(FeSO_4     

白细胞粘附抑制试验法的改进

一、~(51)Cr LAI法:用国产~(51)Cr(13～20毫居里/毫升)标记接种过S180肉瘤的昆明杂种小鼠的白细胞以进行LAI。用通常剂量40微居里的~(51)Cr标记的白细胞5×10~4进行试验,不能鉴别粘附细胞的多少。改用200微居里的~(51)Cr与10~7～10~8(在0.2毫升内)细胞温育37℃30分钟,洗涤后每管用2×10~6/毫升0.05毫升(即1×10~6)细胞作LAI,则可从放射计数判断细胞数目的多少。用此方法测定接     

缺钙复钙对肺动脉内皮细胞影响的初步探讨

本实验研究肺动脉内皮细胞缺钙复钙时细胞的损伤情况。取培养至第3～6代的小牛肺动脉内皮细胞,随机分成正常对照组(Ca~(++):1.25mM,7℃,孵育120分钟);缺Ca~(++)组(无钙液,37℃,孵育120分钟);缺钙复     

内毒素对肺动脉内皮细胞的损伤及产生前列环素的影响

内毒素在革兰氏阴性杆菌感染引起休克的发生发展过程中起重要作用,而肺组织的瘀血、水肿并发展为呼吸窘迫综合征是休克病人难以救治的重要原因。因此,内毒素对肺血管内皮的损伤及产生前列环素的影响是一个值得研究的问题,本实验用培养的牛肺动脉内皮细胞进行,24孔板内每孔细胞数约2×10~5个,每孔加铬酸钠~(51)Cr 2μCi,37℃孵育40分钟,弃上清,冲洗后加入含内毒素50μg/ml的培养基,37℃孵育30分钟,取上清在γ计     

细胞酶联免疫吸附试验(ELISA)——用微量滴定板培养淋巴细胞7天后直接检查和半定量检查Ig阳性细胞

本文介绍检测免疫球蛋白阳性细胞(IpCS)的一种敏感ELISA技术。作者用5×10~3/mlTNP—SRBC 0.5ml免疫6—8周龄CBA系雌性小鼠,7天后取其脾(Sp)和肠集合淋巴结(Pp)分离淋巴细胞。用组织培养微量滴定板进行培养,分别加入LPS、LPS+ConA、SRBS进行刺激,培养7天后,做细胞ELISA检查IPC,并检查培养上清液Ig总量。细胞ELI-SA方法如下: 1、细胞培养7天后,取其上清液,保存于-20℃,每孔中加含0.05%吐温20的磷酸盐缓冲液(PBS/T)200±μl。在微量滴定板振荡器上振动30秒。2、然后用平板离心器800rpm离心10分钟,弃上清液后,37℃干燥30分钟。3、每孔加甲醇50μl,置室温固定5分钟,除去多余的甲醇,空气干燥微量板。     

免疫小鼠脾脏RNA引起的免疫记忆参与细胞

本工作用体外抗体产生系统,研究了由免疫核糖核酸(iRNA)引起的、参与免疫记忆的T细胞与B细胞.实验动物采用8-12周龄的BALB/C小鼠及由BALB/C小鼠培育的裸鼠.抗原用10%绵羊红细胞(SRBC)或马红细胞(HRBC).取0.1ml抗原给小鼠作腹腔内注射,四周后再加强注射.免疫后五天将小鼠解剖,用改进Kidson法自小鼠脾脏提取iRNA.取500μgiRNA给小鼠作腹腔注射,四周后再加强注射.脾细胞的制备及试管内抗体形成的测定:在双玻皿内将小鼠脾脏切开,加入培养液制备成无菌的单个细胞悬液.在1ml RPMl1640培养液内计数脾细胞1×10~7,并加入青霉素G50U/ml、硫酸链霉素50μg/ml、硫烷醇(5×10~(-5)M),再补足20%胎     

应用K562测定NK活性和临床应用

本文介绍用K562作为靶细胞测定NK活性和临床应用,结果如下。 方法:取静脉血5毫升,用肝素抗凝,采用连续密度梯度分离法,分离出单个核细胞作为效应细胞计数,测定活性后备用。 用~(51)铬标记K562,Hela细胞,作为靶细胞备用。靶效比例,K562为1:10,37℃孵育4小时;而Hela细胞为1:20,孵育18小时。孵育后离心沉淀,     

用人血清致敏绵羊红细胞花环形成法测定人的B淋巴细胞

本文报导以新鲜人血清致敏的绵羊红细胞(SRBC)作为指示细胞进行B淋巴细胞花环试验,以计数外周血液中的B细胞。现将方法介绍如下: 一、人血清致敏SRBC的制备:取业经Hanks溶液洗涤三次的SRBC配成1％悬液,加等量正常人新鲜混合血清(按血清内抗