端粒酶RNA反义核酸联合其催化亚单位反义核酸对子宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用

目的　探讨端粒酶RNA反义核酸 (反义hTR)联合端粒酶RNA催化亚单位反义核酸(反义hTERT) ,对宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用及作用机理。方法　实验分为空白对照、脂质体对照、正义hTR、正义hTERT、反义hTR、反义hTERT及反义hTR +反义hTERT组。分别采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法、PCR 端粒重复序列扩增 (TRAP) 酶联免疫吸附实验 (ELISA)、吖啶橙染色法、流式细胞术检测宫颈癌Hela细胞转染反义hTR和反义hTERT后细胞的增殖、端粒酶活性及细胞形态学、细胞凋亡和细胞周期阻滞的变化。结果　宫颈癌Hela细胞转染端粒酶反义核酸后 ,出现明显的细胞增殖抑制、端粒酶活性下降、细胞凋亡形态学改变、细胞凋亡率升高及细胞周期阻滞。反义hTR、反义hTERT组与空白对照、脂质体对照及正义hTR、正义hTERT组比较 ,差异有统计学意义 (P <0 0 1)。Hela细胞转染反义核酸 (0 2 μmol/L) 3d后 ,反义hTR +反义hTERT组 ,细胞增殖抑制率、相对端粒酶活性 (相对于空白对照组 )、细胞凋亡率分别为 6 9 3%、19 6 %、2 8 6 % ,与反义hTR组和反义hTERT组比较 ,差异均有统计学意义 (P <0 0 1) ,Q值分别为 0 86 7、0 919、1 0 75。反义hTR +反义hTERT组G0 /G1期细胞比例增加。结论　端粒酶反义核酸能通过特异性抑制端粒酶活性、诱导细     

端粒酶催化亚基反义基因抑制卵巢癌裸鼠移植瘤生长作用的观察

端粒酶是一种具有逆转录作用的核酶 ,端粒酶催化亚基(ｈＴＥＲＴ)反义脱氧寡核苷酸能通过降低端粒酶活性、增强细胞周期阻滞及诱导细胞凋亡等途径 ,抑制卵巢癌细胞生长 ,与顺铂 (Ｃ ＤＤＰ ,简称ＤＤＰ)联合应用能增强对癌细胞的杀伤作用[1 5] 。本研究旨在观察端粒酶ｈＴＥＲＴ反义脱氧寡核苷酸对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的作用 ,及其与ＤＤＰ联合应用的效果。一、材料与方法1 实验材料 :(1)实验动物 :纯合型雌性裸鼠 (ｎｕ/ｎｕ) ,鼠龄为 4周 ,体重为 (14 4± 2 1)ｇ ,购自北京肿瘤研究所动物中心。在无特定病原体环境下饲养。 (2 )卵巢癌细…     

卡铂诱导卵巢癌细胞凋亡与端粒酶活性、hTERT基因表达改变的关系

目的研究卡铂诱导的卵巢癌细胞凋亡与端粒酶活性、hTERT基因表达改变的关系。探讨检测端粒酶活性和hTERT基因表达作为铂类药物治疗卵巢癌细胞的监测指标的潜在应用价值。方法在卵巢癌细胞HO-8910、COC1中采用PCR—ELISA方法检测端粒酶活性、RT—PCR半定量方法检测hTERT基因mRNA的表达。采用流式细胞仪分析Annex—V—Fluos染色的肿瘤细胞细胞凋亡情况。结果不同浓度卡铂1μM，10μM和100μM诱导卵巢癌细胞凋亡后，卵巢癌细胞HO-8910、COC1中的端粒酶活性和hTERT基因的表达浓度呈现出剂量依赖性和时间依赖性的下降。端粒酶活性和hTERT基因的表达的下降与卡铂诱导的卵巢癌细胞凋亡增加呈负相关（R=0．613，P=0．0347）。而且hTERT基因表达的改变比端粒酶活性更为敏感。结论检测端粒酶活性和hTERT基因的表达程度有助于判定卡铂诱导的卵巢癌凋亡的敏感性。     

siRNA LSINCT5联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨沉默LSINCT5联合顺铂对人卵巢癌SKOV3细胞增殖及凋亡的影响。方法:选取SKOV3细胞株,采用小干扰技术将LSINCT5基因片段转入卵巢癌SKOV3细胞中,同时联合顺铂作用于卵巢癌细胞。按不同处理因素将SKOV3细胞分为5组:对照组、NC-siRNA组、顺铂组、LSINCT5-siRNA+顺铂组和LSINCT5-siRNA组。CCK-8检测转染后SKOV3细胞对顺铂的敏感性。显微镜下观察细胞的生长状况及形态变化。Western blot和RT-PCR法分别检测与凋亡相关的Caspase 3蛋白和基因表达水平。结果:CCK-8显示,3μg/ml顺铂作用于卵巢癌细胞的抑制率较为适中,故作为后续实验的处理浓度。沉默LSINCT5能显著提高卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。LSINCT5-siRNA+顺铂组中Caspase 3蛋白和mRNA相对表达量均明显高于其他各组(P0.05)。结论:沉默LSINCT5提高了卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。沉默LSINCT5联合顺铂能明显抑制卵巢癌细胞的增殖,促进卵巢癌细胞凋亡。     

人端粒酶催化亚基基因反义寡核苷酸对卵巢癌细胞端粒酶活性及细胞生长的影响

目的：探讨人端粒酶催化亚基（hEST2)基因反义寡核苷酸（AODN）对卵巢 癌细胞系SKOV3、COC1细胞端粒酶活性及细胞生长的影响。方法：分别采用逆转录聚酶链反应技术、端粒重复扩增法、四甲基偶氮唑蓝法、 绘制细胞生长曲线的方法检测hEST2基因AODN转染前后SKOV3、COC1细胞hEST2 mRNA表达、端粒酶活性的变化,以及对细胞增殖能力及细胞生长的影响。结果：hEST2基因AODN能够下调SKOV3、COC1细胞hEST2 mRNA的表达,降低端粒酶活性,抑制细胞的生长,作用具有明显的时效性。以浓度为30μmol／L的AODN治疗48h的作用最显著,SKOVE、COC1细胞hEST2 mRNA的表达分别下降54．6％、44．6％,对两 株细胞的端粒酶活性抑制率分别达到47．9％、42．7％,与相同浓度的随机寡核苷酸（RODN）、正义寡核苷酸（SODN） 相比,差异有显著性（P＜0．05)。结论：hEST2基因的反义治疗能够抑制卵巢癌细胞的增殖能力,该基因有望成为卵巢治疗的新方向。     

铁死亡激活剂Erastin通过活化凋亡增强卵巢癌细胞顺铂敏感性的研究

目的:探讨铁死亡激活剂Erastin对人上皮性卵巢癌细胞顺铂(DDP)敏感性的影响及其机制。方法:CCK-8法检测上皮性卵巢癌细胞株HEY、SKOV3、OVCAR3、ES2对Erastin的敏感性,选择Erastin不敏感的细胞株,CCK-8法测定联合Erastin前后顺铂半数抑制浓度(IC_(50)),流式细胞学检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白caspase 3的表达情况。结果:人上皮性卵巢癌HEY、SKOV3、OVCAR3、ES2细胞株中,HEY、SKOV3细胞株对Erastin引起的细胞死亡较不敏感。在联合Erastin后,细胞顺铂的IC_(50)值显著降低(P0.05)。流式结果提示Erastin可以增加顺铂诱导的HEY、SKOV3凋亡细胞数,Western blot结果显示促凋亡蛋白cleaved-caspase 3表达升高。结论:铁死亡激活剂Erastin可能通过活化凋亡通路进而提高HEY、SKOV3细胞对顺铂的敏感性。铁死亡激活剂可为改善临床EOC铂类耐药提供全新的思路。     

NAC-1通过自噬介导卵巢癌细胞顺铂耐药的研究

目的:探讨NAC-1在自噬介导的卵巢癌细胞顺铂耐药中的作用。方法:Western blot及流式细胞术检测顺铂诱导的耐药卵巢癌细胞(SKOV3/DDP)自噬及凋亡过程中,NAC-1蛋白的表达情况。采用siRNA下调NAC-1表达,检测其对SKOV3/DDP细胞自噬及凋亡的影响,并检测其对顺铂耐药性的影响。结果:顺铂处理SKOV3/DDP细胞后,细胞自噬及凋亡水平升高,NAC-1蛋白表达升高。siRNA下调NAC-1基因后,顺铂处理SKOV3/DDP细胞的自噬水平降低,凋亡升高,细胞顺铂耐药性降低。结论:NAC-1基因可能通过调节自噬参与卵巢癌细胞顺铂耐药,降低NAC-1基因表达有助于提高顺铂对卵巢癌细胞的杀伤作用。     

有卵巢癌家族史妇女卵巢表皮细胞端粒不稳定与增生活性下降

端粒不稳定与肿瘤发生有关,永生化细胞中端粒虽然缩短,但由于端粒酶激活使端粒保持稳定。近年来有报道端粒酶中催化功能亚基对端粒酶活性的作用较RNA部分更加重要,端粒酶激活是细胞永生化与肿瘤发生的关键。在正常卵巢上皮细胞中端粒酶阴性,而在卵巢癌细胞及腹水肿瘤细胞中端粒酶呈阳性。本研究以SV-40大T抗原转染有乳腺癌/卵巢癌家族史妇女的卵巢上皮细胞系(FHIOSE)及无此家族史妇女的卵巢上皮细胞系(NFHIOSE),比较两种转染细胞的生长能力、平均端粒长度及端     

端粒酶抑制剂对顺铂不同敏感性卵巢癌细胞株的影响

目的:通过检测顺铂(CDDP)敏感株和耐药株在经CDDP处理前后的端粒酶活性变化,了解端粒酶活性与CDDP耐药性的关系,及端粒酶抑制剂叠氮胸苷(AZT)和全反式维甲酸(AT-RA)对CDDP不同敏感性的卵巢癌细胞株的影响,试图寻找一个解决常规化疗耐药问题的新方法。方法:将卵巢癌CDDP敏感株A2780和耐药株CAOV3、OVCAR3在不同浓度的CDDP、AZT和ATRA中培养,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性,MTT法检测药物对细胞增殖的影响。结果:未加CDDP时,敏感株和耐药株的端粒酶活性没有明显差别,经CDDP处理后敏感株的端粒酶活性明显降低,而耐药株没有明显变化。端粒酶抑制剂对CDDP敏感株和耐药株的细胞增殖都有明显的抑制作用。结论:通过不同方式抑制端粒酶活性,均可抑制CDDP敏感株和耐药株的细胞增殖。端粒酶的活性与卵巢癌细胞株对CDDP的耐药性有关。     

端粒酶激活与上皮性卵巢癌化疗敏感性及其预后的关系

目的：探讨端粒酶活性水平对卵巢化疗疗效及预后影响。方法：以TRAP－PCR－ELISA法检测卵巢癌组织中端粒酶活性;以MTT法检测卵巢癌细胞对CDDP、ADM敏感。结果：22例卵巢癌组织中,端粒酶阴性者3例（13．64％）,阳性者19例（86．36％）。8例端粒酶活性高于2U者,PAC方案化疗有效者5例（62．5％）,11例端粒酶活性低于2U者,化疗均有效（100％）。端粒酶活性高于2U者,进展与复发或死亡5例（62．5％）,而端粒酶活性低于2U者仅1例出现复发,无死亡。结论：随着端粒酶活性增高,卵巢癌对CDDP、ADM敏感性下降。     

Akt基因在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的:检测Akt基因在正常卵巢组织、上皮性卵巢囊肿、交界性上皮性卵巢肿瘤和上皮性卵巢癌组织中的表达水平,探讨其在上皮性卵巢癌演变过程中的作用及临床意义。方法:收集正常卵巢组织10例、良性上皮性卵巢囊肿组织15例、交界性上皮性卵巢肿瘤组织15例和上皮性卵巢癌组织40例。RT-PCR和Western blot法分别检测Akt mRNA和蛋白的表达水平,并分析其与临床病理特征的相关性。采用Akt激酶特异性抑制剂Triciribine分别作用于上皮性卵巢癌SKOV3、ES-2细胞,MTT法和FCM分别检测细胞增殖和凋亡,比较单独抑制剂Triciribine、单独顺铂及联合两种制剂的治疗方案对SKOV3、ES-2细胞的作用。结果:(1)Akt1、Akt2、Akt3 mRNA及p-Akt在正常卵巢组织、上皮性卵巢囊肿、交界性上皮性卵巢肿瘤和上皮性卵巢癌组织中均有表达,上皮性卵巢癌组织中的表达水平显著高于其余3组(P0.05);(2)p-Akt表达水平、总Akt mRNA水平与上皮性卵巢癌的临床分期和组织分级有关(P0.05),而与患者年龄和病理类型无关(P0.05);(3)Triciribine能有效抑制SKOV3、ES-2细胞中p-Akt水平,呈浓度依赖性抑制癌细胞生长率,联合顺铂处理可增加癌细胞的凋亡率。结论:Akt在上皮性卵巢癌组织过度激活,与临床分期和组织分级相关。Akt异常激活不仅是上游PI3K异常激活的后续效应,同时与Akt自身扩增密切相关。Triciribine阻断Akt的信号传导可增强顺铂化疗的疗效。     

低浓度化学药物配合淋巴因子激活的杀伤细胞对人卵巢癌细胞体外 …

探讨低浓度化学药物配合淋巴因子激活的杀伤细胞能否增强对卵巢癌细胞的体外杀伤敏感性。方法应用１．５μｇ／ｍｌ泰素４μｇ／ｍｌ顺铂、２５μ／ｍｌ氟尿嘧啶,与人卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３作用１８小时后,采用＾５１Ｃｒ释放法,观察ＳＫＯＶ３对被白细胞介素２激活的ＬＡＫ细胞的杀伤敏感性;     

表没食子酸酯诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡及机制的研究

目的：探讨表没食子酸酯（EGCG）对人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：SKOV3细胞分为4组,即阴性对照组（以正常培养液培养）、EGCG低浓度组（1 μmol/L EGCG）、EGCG中浓度组（10 μmol/L EGCG）和EGCG高浓度组（100 μmol/L EGCG）。应用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定各组SKOV3细胞的增殖抑制率,Hoechs染色观察细胞核凋亡,电镜观查细胞形态,蛋白质印迹（Western blot）检测Caspase-3表达。结果：细胞增殖抑制实验结果显示,EGCG低、中、高浓度组SKOV3细胞的增殖率为（81.33±3.71）%、（67.00±7.21）%和（54.67±3.84）%,与阴性对照组（101.00±3.06）%比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。Hoechst33258染色结果显示,EGCG低、中、高浓度组凋亡细胞比例分别为（16.77±2.48）%、（24.33±3.70）%和（39.67±4.11）%,与阴性对照组[（2.00±1.45）%]相比差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。电镜观察结果显示,随着EGCG作用浓度的增加,SKOV3细胞超微结构损害程度逐渐明显。此外,EGCG可以升高Caspase-3表达水平。结论：EGCG通过增强Caspase-3表达诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡。     

野生型p53基因对人卵巢癌细胞株的生长抑制作用

目的：探讨野生型ｐ５３(ｗｔ ｐ５３)基因对人卵巢癌细胞株的生长抑制作用。方法：利用脂质体介导，将含有人全长ｗｔ－ｐ５３基因ｃＤＮＡ的真核表达载体质粒ｐＣＥＰ４／ｐ５３和空载体质粒ｐＣＥＰ４分别转染卵巢癌ＳＫＯＶ３细胞株，分别命名为ＳＫＯＶ３－ｐＣＥＰ４／ｐ５３细胞(C组)、ＳＫＯＶ３－ｐＣＥＰ４细胞(B组)，另设ＳＫＯＶ３细胞为正常对照组（Ａ组）。观察细胞体外生长情况和凋亡变化。结果：外源性ｐ５３基因在Ｃ组细胞中获表达，细胞生长曲线显示ｐ５３的导入使ＳＫＯＶ３细胞生长受到明显抑制，Ｃ组平均细胞集落数（１８．６±１．８个）少于Ａ组（２４．３±２．２个）和Ｂ组（２２．７±２．６），差异有显著性（Ｐ（005）。ＭＴＴ法检测C组细胞活力明显低于Ａ、Ｂ组。Ｃ组细胞Ｇ０～Ｇ１期百分比（５７．７９％）及凋亡细胞百分比（13．９1％）均高于Ｂ组（４６．０２％、２．０８％）和Ａ组（４３．６２％、０）。结论：ｗｔ－ｐ５３基因可介导ＳＫＯＶ３细胞Ｇ１期停滞和细胞凋亡，抑制细胞体外生长。     

阿霉素诱导人卵巢癌细胞凋亡和周期特异性的实验研究

目的 :探讨阿霉素诱导卵巢癌细胞凋亡的规律。方法 :以不同浓度的阿霉素作用于人卵巢癌细胞株SKOV3,用光镜、电镜、TUNEL法和DNA凝胶电泳法检测确定细胞凋亡 ,以流式细胞仪定量分析凋亡和细胞周期特异性。结果 :大剂量 ( 2 5～10 0 μg/ml)长时间 ( 3～ 72h)的阿霉素作用可引起卵巢癌细胞坏死和凋亡 ,较小剂量( 0 .5μg/ml)的阿霉素连续作用 2 4、4 8、72h ,诱导细胞凋亡发生率分别为 4 0 .0 1%、65.38%和 77.65% ,并使细胞发生G1期阻滞。结论 :阿霉素能导致卵巢癌细胞DNA损伤 ,发生G1期阻滞并诱导凋亡是其抗肿瘤的机制之一。