蓝萼甲素对宫颈癌HeLa细胞的作用及其相关机制研究

目的观察蓝萼甲素对宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制作用,探讨其诱导凋亡的机制。方法采用体外细胞培养方法,以不同浓度蓝萼甲素作用于HeLa细胞,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞的存活率;透射电镜观察细胞的形态学变化;流式细胞仪(AnnexinV-FITC)检测细胞凋亡率的变化;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达情况。结果与对照组相比,蓝萼甲素对HeLa细胞有增殖抑制作用,呈剂量、时间依赖趋势;Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上调,Caspase-3、Caspase-9蛋白表达上调。结论蓝萼甲素对宫颈癌HeLa细胞有增殖抑制及诱导凋亡的作用,其分子机制可能与线粒体信号通路有关。     

新的微管抑制剂YB-13诱导HeLa细胞凋亡及其机制

目的研究吲哚3-草酰胺衍生物YB-13在体外试验中诱导宫颈癌细胞株(HeLa细胞)发生凋亡及其作用机制。方法采用MTT法、细胞生长曲线、细胞集落、荧光显微镜、DNAladder和流式细胞仪等方法进行凋亡检测,用RT-PCR方法检测凋亡过程中相关基因表达的变化;间接免疫荧光观察YB-13对细胞骨架的影响,观察YB-13对微管蛋白聚合和解聚。结果吲哚3-草酰胺衍生物YB-13在体外试验中对HeLa细胞的杀伤力强,荧光显微镜观察到了凋亡小体;DNAladder法检测到凋亡时DNA降解形成的梯带,流式细胞仪检测到了细胞凋亡峰,同时观察到细胞周期的变化。在凋亡过程中,凋亡相关基因bcl-2家族中bcl-2表达下调而bax表达上调;实验观察到YB-13能影响HeLa细胞的细胞骨架,并且YB-13可影响微管蛋白聚合和解聚。结论YB-13在体外试验中能诱导HeLa细胞发生凋亡,其作用机制可能与bax基因表达上调、bcl-2基因表达下调以及对微管蛋白的抑制作用有关。     

阿司匹林诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡及机制

目的:探讨阿司匹林对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用及机制。方法:体外培养HeLa细胞,分别以0.5,1.0,5.0mmol.L-1阿司匹林干预。采用Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒检测凋亡;碘化丙锭(PI)染色法检测细胞周期;Western-blot法检测NF-κB p65蛋白表达。结果:0.5,1.0,5.0mmol.L-1的阿司匹林均能使Hela细胞凋亡率明显增加,S期、G2/M期细胞比例减少,G0/G1期细胞比例显著增加,细胞中NF-κB p65蛋白表达水平明显下降,且上述作用均呈剂量依赖性。结论:阿司匹林在体外可以通过下调NF-κB p65蛋白表达,影响细胞周期,诱导Hela细胞凋亡。     

吴茱萸碱诱导人子宫颈癌HeLa细胞凋亡的机制研究

目的研究吴茱萸碱(evodiamine)诱导人子宫颈癌HeLa细胞凋亡的分子生物学机制。方法用结晶紫法和琼脂糖凝胶电泳法以及用两种caspase的蛋白酶抑制剂测定细胞凋亡过程中caspase的信号传导路径。结果吴茱萸碱可诱导HeLa细胞的细胞膜皱缩、细胞质浓集及凋亡小体的形式,并清晰可见以180 bp倍数裂解的DNA梯形电泳带的出现。抑制剂VAD-fmk(caspase家族总抑制剂)和DEVD-fmk(caspase-3抑制剂)能部分抑制HeLa细胞的凋亡。结论Evodiamine诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡;caspase cascade信号传导路径与凋亡密切相关。     

血竭素高氯酸盐诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的机制

目的研究血竭素高氯酸盐诱导HeLa细胞凋亡机制。方法MTT法测定血竭素高氯酸盐对HeLa细胞的细胞毒作用。通过显微镜，荧光染色观察细胞形态学变化，用琼脂糖凝胶电泳检测DNA片断化。用Western印迹法分析药物对蛋白质表达的影响。结果血竭素高氯酸盐明显抑制HeLa等细胞的增殖，诱导HeLa细胞调亡。Caspase-1，-3，-8，-9及家族抑制剂可明显抑制血竭素高氯酸盐诱导的凋亡。Western印迹结果显示血竭素高氯酸盐作用12 h后Bax及Bcl-X_L的表达明显改变，caspase-3，-8前体及caspase-3底物ICAD和PARP发生降解。结论血竭素高氯酸盐(60 μmol·L^-1)通过改变Bax/Bcl-X_L的表达激活caspase途径诱导HeLa细胞凋亡。     

IL-37 对宫颈癌HeLa 细胞增殖和凋亡的影响

目的　探讨炎症抑制因子IL-37 对宫颈癌HeLa 细胞株增殖和凋亡的影响。方法　将携带有目的基因IL-37 的过表达载体转染入体外培养的HeLa 细胞,用MTT 法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪测定细胞周期及凋亡率,以野生型HeLa 细胞以及转染空载体的HeLa 细胞作为阴性对照和空载体对照。结果　荧光显微镜观察结果显示IL-37 质粒成功转染HeLa 细胞。MTT 检测结果显示,转染后12 h 至96 h,转染组OD 值明显低于空载体对照组（P<0.01）,而空载体对照组和阴性对照组的OD 值无明显差异;流式细胞仪检测测结果显示,转染组细胞早期凋亡率较空载体对照组显著升高（P<0.05）,而空载体对照组和阴性对照组的早期凋亡率无显著性差异。结论　过表达IL-37 的HeLa 细胞株构建成功。IL-37 可抑制宫颈癌HeLa 的增殖并诱导其凋亡。     

积雪草甙诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡及其机制的探讨

积雪草是伞形科植物积雪草的全草,全草含积雪草甙和羟基积雪草甙等五元环三萜类化合物。积雪草自1977年被收入中国药典。积雪草甙不仅具有促进创面愈合、刺激肉芽生长、抑制瘢痕生长的作用,还可以改善记忆和抗疲劳。最近的研究还表明抗肿瘤、抗艾滋病毒逆转录酶的活性。总之,积雪草具有多种重要生物活性,是个值得开发利用的药用植物资源。     

白英水提物诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的实验研究

目的:观察白英水提物诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用,并初步探讨其分子机制。方法:常规方法制备白英水提物,体外培养人宫颈癌HeLa细胞。实验组设白英水提物12.5、25.0、50.0mg/mL3种浓度,以顺铂(25.0mg/L)为阳性对照组。采用细胞毒试验(MTT法)检测HeLa细胞抑制率,荧光显微镜观察HeLa细胞形态变化,琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯形泳带,半定量RT-PCR法检测凋亡相关基因survivin mRNA和caspase-3mRNA表达的变化。结果:白英水提物对HeLa细胞增殖有抑制作用,且呈明显的时效和量效关系,并诱导其发生凋亡,表现为细胞核固缩、染色质凝集、边聚等。琼脂糖凝胶电泳显示DNA梯形泳带,半定量RT-PCR法检测显示survivin mRNA表达下调、caspase-3mRNA表达上调。结论:白英水提物对HeLa细胞有较强的增殖抑制和诱导凋亡作用,其诱导HeLa细胞凋亡的分子机制可能与上调caspase-3基因表达、下调survivin基因表达有关。     

丹参酮Ⅱ_A对HeLa宫颈癌细胞凋亡的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA对HeLa宫颈癌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:应用MTT比色法检测不同浓度丹参酮ⅡA对HeLa宫颈癌细胞的增殖抑制,采用烟酸己可碱33258染色法观察丹参酮ⅡA对HeLa细胞凋亡的影响,并用半定量逆转录聚合酶链反应法检测用药后Bcl-2和bax基因mRNA的表达水平。结果:丹参酮ⅡA对HeLa细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性;它能促使HeLa细胞发生凋亡;用药48h后Bcl-2基因mRNA的表达水平明显降低,而bax基因的表达则无明显变化。结论:丹参酮ⅡA对HeLa细胞的增殖具有显著的抑制及诱导凋亡作用。     

三氧化二砷诱导人宫颈癌细胞凋亡及bcl-2高表达对其影响

采用脂染素（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）介导的ＤＮＡ 转染,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹, ＭＴＴ和克隆形成实验,流式细胞术和细胞凋亡原位检测法探讨Ａｓ２Ｏ３ 对人宫颈癌ＳｉＨａ 和ＨｅＬａ 细胞的生物学效应和ｂｃｌ－２ 高表达对这一效应的影响． 结果表明,Ａｓ２Ｏ３ 处理的ＳｉＨａ 和ＨｅＬａ 细胞,存活率和克隆形成能力明显降低,细胞周期的Ｇ１ 期前有低于２ 倍体的凋亡峰,细胞被阻滞在Ｇ２／Ｍ 期,有细胞凋亡时出现的ＤＮＡ 断裂． 而Ａｓ２Ｏ３ 处理的ｂｃｌ－２ 高表达的ＳｉＨａ 和ＨｅＬａ 细胞存活率和克隆形成能力增加,凋亡率减少,Ｇ２／Ｍ 期阻滞程度显著降低． 结果表明,Ａｓ２Ｏ３ 可诱导ＳｉＨａ 和ＨｅＬａ 细胞凋亡,Ｇ２／Ｍ 期阻滞可能是其诱导凋亡的原因之一;ｂｃｌ－２ 高表达可能通过减轻Ｇ２／Ｍ 期阻滞的程度而部分阻止Ａｓ２Ｏ３ 诱导的细胞凋亡．     

川芎嗪衍生物影响肝星状细胞凋亡作用及其机制研究

目的研究川芎嗪衍生物H168对大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cells,HSC)凋亡的影响及其作用机制。方法采用细胞乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒观察药物对LDH活性的影响;MTT实验检测药物对细胞增殖的影响;流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双染方法检测药物对细胞凋亡率影响;应用Western blot方法观察药物对凋亡相关细胞因子Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的影响。结果细胞毒性实验发现当H168作用终浓度低于150μmol.L-1时,不具有明显细胞毒作用;MTT实验研究发现药物浓度为10μmol.L-1和25μmol.L-1具有抑制细胞增殖的作用;流式细胞仪检测药物对细胞凋亡率的影响,发现H168具有促进HSC凋亡的作用,且呈量效关系;Western blot结果显示H168通过提高Bax/Bcl-2蛋白的比值和Caspase-3蛋白表达促进细胞凋亡。结论 H168具有促进HSC-T6凋亡的作用,这种作用的发挥主要是通过提高Bax/Bcl-2蛋白的比值和Caspase-3蛋白的表达实现的。     

白藜芦醇烟酸酯抑制人肝癌细胞HepG2增殖并诱导细胞的凋亡

目的：观察白藜芦醇的修饰物白藜芦醇烟酸酯（ResT）对人肝癌细胞HepG2生长增殖的影响及诱导凋亡的作用。方法：用不同浓度的ResT处理HepG2细胞，MTT法检测ResT对HepG2细胞生长增殖的抑制作用；应用Hochest荧光染色法观察凋亡细胞的发生；流式细胞术（FCM）检测分析细胞周期和细胞凋亡率；比色法测定Caspase-3酶活性。结果：ResT抑制HepG2细胞的增殖并呈现一定的量效和时效关系，HepG2细胞与ResT作用后出现典型的凋亡细胞形态改变，FCM分析显示大部分细胞阻滞于G1期，S期细胞比例降低。且药物作用组出现凋亡峰。药物作用12、24、48h后，细胞的凋亡率分别为8．7％、21．1％、和32.7％。显示ResT诱导的细胞凋亡作用随时间的延长而增加，同时Caspase-3酶活性显著增强。结论：ResT可抑制人肝癌细胞HepG2的生长增殖，其作用机制之一可能与阻滞细胞于G1期及诱导细胞凋亡有关。     

杨梅素诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡及凋亡通路的研究

目的研究杨梅素体外对人宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡及凋亡通路的影响。方法体外培养人宫颈癌HeLa细胞,MTT和SRB法检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡,计算机分析细胞周期;Western Blot法检测caspase-3、caspase-9和survivin含量。结果杨梅素对HeLa细胞的体外增殖具有抑制作用,并具有浓度和时间依耐性;杨梅素体外诱导HeLa细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在S期;杨梅素促进caspase-3和caspase-9蛋白表达,抑制survivin蛋白表达。结论杨梅素可抑制HeLa细胞的增殖,诱导其凋亡,其凋亡途径同时涉及细胞内途径和细胞外途径。     

Oridonin induces apoptosis of HeLa cells via altering expression of Bcl-2 ／ Bax and activating caspase-3 ／ ICAD pathway

INTRODUCTIONHerbal medicine, Donglingcao (rabdosiarubescens), has been traditionally used in China for thetreatment of various diseases such as leukemia.Oridonin (Fig 1) is a diterpenoid compound isolated fromRabdosia rubescens (hemsl). It has various pharmaco-logical and physiological effects such as anti-inflammation, anti-bacteria, anti-tumor[1-3] and has beenused for the treatment of human cancers, especiallyFig 1. Chemical structure of oridonin.esophageal carcinoma[4]. This comp…     

1,25-二羟基维生素D_3抑制K562细胞增殖及其机制

目的观察1,25二-羟基维生素D3〔1,25(OH)2D3〕对白血病细胞株K562增殖的影响并初步探讨其作用机制。方法间接免疫荧光法鉴定维生素D受体(VDR)在K562细胞的表达;四噻唑蓝法(MTT)、AO/EB、流式细胞PI单染分析细胞生长抑制率、细胞凋亡率及细胞周期;比色法检测凋亡信号蛋白———天冬酰胺特异酶切的半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性。结果①K562细胞核阳性表达VDR;②10-8mol.L-11,25(OH)2D3可明显抑制K562细胞增殖,促进凋亡,凋亡率从4.1%(对照组)增至26.5%,P<0.01;③1,25(OH)2D3作用后K562细胞的Caspase-3活性增加,P<0.05,提示细胞凋亡伴随着Caspaes-3活性升高。结论1,25(OH)2D3可明显抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制与Caspase-3活性增加相关。     

天花粉蛋白诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的分子机制研究

目的利用基因芯片技术研究天花粉蛋白对人宫颈癌HeLa细胞基因表达谱的影响,以深入探讨其作用的分子机制。方法提取药物处理前后HeLa细胞总RNA并逆转录成cDNA,在获得的cDNA上分别标记CY3和CY5两种荧光物质,然后与BiostarH-Ⅰ表达谱芯片杂交,扫描后对获得的数据用GenePixPro3·0软件分析。结果两组间存在差异性表达基因78条,其中与细胞凋亡密切相关的NOP56、TN-FSF10、CASP9、DFFB等62条基因表达上调,与细胞黏附及细胞间相互作用相关的COL9A3、MGST3、LGALS3BP等16条基因表达下调。结论天花粉蛋白可以引起HeLa细胞中多个基因的表达改变,基因芯片技术进一步揭示了其诱导HeLa细胞凋亡的作用机制。     

siRNA介导hPOT1基因表达抑制对HeLa细胞Caspase-3的影响

目的应用siRNA表达载体介导的RNA i技术,特异地抑制端粒保护蛋白POT1基因在HeLa细胞中的表达,并观察其对细胞Caspase-3活化的影响。方法利用作者课题组先前构建的含hPOT1基因特异性序列(hsDNA)的3种重组siRNA表达质粒(pmU6-shRNA1、pmU6-shRNA2和pmU6-shRNA3),由脂质体介导转染HeLa细胞,以RT-PCR和EM-SA法检测转染细胞中的hPOT1基因的表达抑制效果,并通过RT-PCR、W estern b lot和Caspase-3检测试剂盒分析Caspase-3表达和活化。结果3种pmU6-shRNA重组质粒转染HeLa细胞48 h后,细胞中hPOT1基因mRNA和蛋白质表达水平均降低,Caspase-3 mRNA表达水平基本无变化,Caspase-3酶原水平降低,而Caspase-3酶活性增高。结论siRNA表达载体介导的RNA i能有效地抑制HeLa细胞中hPOT1基因表达,hPOT1基因表达的抑制导致细胞Caspase-3活化。     

cyclin G2荧光蛋白重组质粒的构建及其对宫颈癌HeLa细胞的作用

目的 构建包含人cyclin G2基因的荧光蛋白重组质粒,探讨cyclin G2对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响.方法 运用RT-PCR和基因克隆技术构建pDsRed2-Cyclin G2重组质拉;脂质体法转染重组质粒至HeLa细胞中,荧光显微镜下观察其蛋白的表达和定位;流式细胞术检测HeLa细胞的凋亡率.结果 成功地构...