肠杆菌科细菌质粒介导喹诺酮耐药基因qnr的研究

目的 调查武汉大学人民医院分离的肠杆菌科细菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS基因的现状、基因型以及qnr基因阳性菌株所携带的广谱B内酰胺酶基因型.方法 PCR法对179株肠杆菌科细菌(129株大肠埃希菌、37株肺炎克雷伯菌和13株阴沟肠杆菌)进行qnrA、qnrB、qneS基因检测.KB纸片法检测对15种抗菌药的体外抗菌活性.琼脂平皿二倍稀释法检测阳性菌株对环丙沙星的MIC值.质粒接合试验分析qnrA、qnrB、qnrS基因的水平转移能力.对qnr阳性株,检测Ⅰ类整合酶基因及SHV-1、TEM-1、CTX-M、OXA-Ⅰ、OXA-Ⅱ、OXA-Ⅲ、DHA、EBC型β内酰胺酶基因.结果 179株肠杆菌科细菌中,共检测出含qnr基因阳性菌株25株(13.97%),包括6株(3.35%)含有qnrA基因,9株(5.02%)含有qnrB基因,10株(5.59%)含有qnrS基因.阳性株菌均对亚胺培南敏感且对多种抗生素耐药,其中2株qnrA阳性菌株和4株qnrB阳性菌株对喹诺酮类药物敏感.2株qnrA阳性菌株和4株qnrB及qnrS阳性菌株质粒接合成功.23株qnr阳性株Ⅰ类整合酶基因阳性,1株qnrB及qnrS阳性菌株Ⅰ类整合酶基因阴性,14株菌携带TEM-1型广谱β内酰胺酶基因、6株菌携带OXA-Ⅲ型广谱β内酰胺酶基因、7株菌携带EBC型AmpC酶.结论 湖北地区肠杆菌科细菌中存在qnrA、qnrB、qnrS基因的流行,qnr阳性菌株呈多重耐药,且喹诺酮类敏感菌株中有qnr基因的存在.qnr阳性菌株可携带多种广谱p内酰胺酶基因.     

基因qnr与大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药水平的相关性研究

目的 研究耐药基因qnr(qnrA,qnrB和qnrS)在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌环丙沙星敏感株与耐药株中与ESBLs阳性株和阴性株中的分布状况和比较分析.方法 从2006年全国美平耐药监测网点中收集241株非重复的大肠埃希菌(122株)和肺炎克雷伯菌(119株),用琼脂对倍稀释法测定所有菌株对药物环丙沙星、头孢他啶、头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟、头孢噻肟/克拉维酸的MIC值.采用PCR检测所有菌株的质粒介导喹诺酮耐药基因qnr.结果 在241椿筛选出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,环丙沙星的敏感率为36.9%,耐药率为61.4%.头孢噻肟的敏感率为45.2%,耐药率为39.0%.头孢他啶的敏感率为74.3%.耐药率为19.9%.ESBLs阳性株占56.8%.qnr共检出46株,总阳性率为19.1%(46/241).其中qnrA有2株(0.8%,2/241),qnrB有25株(10.4%,25/241),qnrS有19株(7.9%,19/241).一株从痰标本分离的肺炎克雷伯菌同时检出qnrB和qnrS.在肺炎克雷伯菌中,qnr共检出39株,阳性率为32.8%(39/119);在大肠埃希菌中,qnr共检出6株,阳性率为4.9%(6/122).在环丙沙星敏感菌株中,qnr基因的阳性率为13.5%(12/89);在环丙沙星耐药菌株中,qnr基因的阳性率为21.6%(32/148).经X2检验,qnr基因在环丙沙星敏感菌株与耐药菌株检出率的差异无统计学意义(X2=2.435,P＞0.05).在ESBLs阳性的菌株中,qnr的阳性率为23.4%(32/137);在ESBLs阴性菌株中,qnr的阳性率为12.5%(13/104).经X2检验,qnr基因在ESBLs阳性株与ESBLs阴性株中检出率的差异具有统计学意义(X2=4.590,P＜0.05).结论 质柱介导喹诺酮类耐药基因qnr在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中分布广泛.qnr基因与环丙沙星的耐药水平没有相关性,而与细菌是否产ESBLs有相关性.     

质粒介导喹诺酮耐药基因qnr在大肠埃希菌中流行现状及耐药特征

目的了解该院分离的大肠埃希菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA,qnrB,qnrS的流行情况及其耐药特征。方法用PCR法对129株大肠埃希菌进行qnrA,qnrB,qnrS基因检测,并用K-B纸片法检测其对15种抗菌药的体外抗菌活性,另外用琼脂平皿二倍稀释法检测阳性菌株对环丙沙星的M IC值。结果129株大肠埃希菌中,5株(3.88%)检出qnrA基因,8株(6.20%)检出qnrB基因,3株(2.33%)检出qnrS基因。阳性菌株均对亚胺培南敏感且对多种抗生素耐药,其中2株qnrA阳性菌株和3株qnrB阳性菌株对环丙沙星敏感。结论湖北地区大肠埃希菌中存在质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA,qnrB,qnrS基因的流行,qnr阳性株呈多重耐药,且敏感株中有该类基因的存在,应加强监测。     

质粒介导的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐喹诺酮类药物的研究

目的研究质粒介导的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的流行情况及其对喹诺酮类药物耐药的作用。方法采用聚合酶链反应(PCR)对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的qnr基因进行筛选,用实验证明qnr基因可以通过质粒介导并在细菌之间传递。结果在145株大肠埃希菌和125株肺炎克雷伯菌中共检出16株细菌携带qnr基因,其中12株为大肠埃希菌,4株肺炎克雷伯菌。16株qnr基因阳性菌株均为产超广谱内酰胺酶(ESBLs)菌株且呈多重耐药性。结论共检出16株细菌携带qnr基因,其阳性率为5.9%,大肠埃希菌阳性率高于肺炎克雷伯菌。qnr基因可以通过质粒介导,从供体菌接合转移至受体菌,且qnr在接合子中较稳定。     

肺炎克雷伯菌质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB和qnrS的研究

目的调查我院临床分离的产超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌中,质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB和qnrS的存在情况,为临床预防感染及合理使用抗菌药物提供依据。方法收集2007年7月至2008年12月间临床分离的产超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌57株,用PCR法检测qnrA、qnrB和qnrS基因,并对部分阳性菌株进行测序。采用E-test方法测定阳性菌株的药敏情况。结果 57株肺炎克雷伯菌中,25株(43.9%)检出qnr基因,其中3株(5.3%)含qnrA基因,21株(36.8%)含qnrB基因,20株(35.1%)含qnrS基因;3株(5.3%)qnrA、qnrB和qnrS同时阳性,13株(22.8%)qnrB和qnrS同时阳性。结论我院产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnr携带率很高,临床上应加强喹诺酮类耐药基因的检测,以避免产qnr基因菌株的感染爆发流行。     

肺炎克雷伯菌中qnr基因检测

目的了解质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnr在肺炎克雷伯菌中流行及与ESBLs及对环丙沙星耐药的相关性.方法 纸片扩散法检测药物敏感性,双纸片协同试验检测ESBLs.PCR方法检测qnr基因.结果 62株非重复的肺炎克雷伯菌中,ESBLs阳性率为75.8%(47/62),环丙沙星敏感率为45.2%(28/62),qnr总阳性率为53.2%(42/62).单纯qnrA阳性5株(8%),qnrB9株(14.5%),qnrS10株(16.1%).同时2种qnr基因阳性9株(14.5%),qnrA和qnrB基因阳性1株(1.6%),qnrA和qnrS基因3株(4.8%),qnrB和qnrS基因5株(8%).在环丙沙星耐药株和敏感株中,qnr基因的阳性率分别为58.8%(20/34)和46.7%(13/28).在ESBLs阳性菌株和阴性菌中,qnr的阳性率分别为68%(32/47)和6.6%(1/15).结论 qnr基因主要分布在产ESBLs的肺炎克雷伯菌,与环丙沙星耐药与否无相关.     

致尿路感染的大肠埃希菌耐喹诺酮类抗菌药的相关耐药基因及耐药机制

目的:调查分析致尿路感染的大肠埃希菌喹诺酮类抗菌药相关耐药基因的流行状况,并探讨其耐药机制.方法:收集丽水市中心医院2008年3月至2010年3月从临床分离的导致尿路感染的大肠埃希菌无重复菌株52株,K-B法检测其耐药性,利用PCR扩增法检测并分析大肠埃希菌质粒介导喹诺酮耐药相关的qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrR、qnrS、aac(6’)-Ib基因以及DNA解旋酶GyrA与拓扑异构酶Ⅳ基因的喹诺酮决定区域ParC,扩增产物测序后经GenBank比对确认.结果:未检测到qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrR及qnrS基因,aac(6')-Ib检出率为26.9％(14/52),经比对未发现aac(6')-Ib-cr阳性菌株;耐药菌gyrA基因喹诺酮耐药决定区氨基酸序列存在两个位点突变;36株耐药菌拓扑异构酶ⅣParC基因测序与敏感菌相比相似性89％～ 95％.结论:致尿路感染大肠埃希菌中未检测到qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrR、qnrS基因及aac(6')-Ib-cr阳性株,DNA解旋酶gyrA和ParC基因变异可能是导致我院尿路感染大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药耐药的主要原因.     

非发酵菌和环丙沙星敏感肠杆菌科细菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测

目的了解3类质粒介导的喹诺酮类耐药基因在浙江省温州地区分离的非发酵菌和环丙沙星敏感肠杆菌科细菌中的分布情况。方法收集2008年1月至2013年6月温州地区分离的非发酵菌和环丙沙星敏感肠杆菌科细菌,共600株,其中非发酵菌419株,环丙沙星敏感肠杆菌科细菌181株。采用聚合酶链反应(PCR)检测qnrA、qnrB、qnrS、aac(6)-Ib以及qepA基因,并通过DNA测序确定qnr基因型和aac(6')-Ib-cr基因变异体;通过接合转移实验研究细菌质粒介导的耐药性传递情况。结果 419株非发酵菌临床株中未检测到qnrA、qnrB、qnrS、aac(6')-Ib和qepA等耐药基因。181株环丙沙星敏感的肠杆菌科细菌临床株中未检到qepA,检到2株qnrA1阳性株,分别为1株肺炎克雷伯菌和1株大肠埃希菌;2株qnrB4阳性株,均为阴沟肠杆菌复合菌;12株检测到aac(6')-Ib,分别为6株大肠埃希菌、3株阴沟肠杆菌复合菌和3株克雷伯菌属细菌。接合转移试验中,2株qnrA1阳性株和1株qnrB4阳性株接合转移成功,12株携带aac(6')-Ib-cr基因的阳性株中4株接合转移成功。结论温州地区,质粒介导的喹诺酮类耐药基因不仅存在于环丙沙星耐药株中,而且还存在于环丙沙星敏感的肠杆菌科细菌中,可能不存在于非发酵菌中。     

从患者胆汁分离的大肠埃希菌中质粒介导的氟喹诺酮类耐药基因的检测

目的 分析浙江省衢州市开化县第二人民医院消化内科胆汁分离的大肠埃希菌的耐药特点并调查质粒介导的喹诺酮类耐药基因的分布情况和流行特点。方法 收集该院消化内科患者2011年1月至2013年6月分离的大肠埃希菌724株,均为非重复性菌株,采用全自动微生物分析仪器VITEK 2 COMPACT进行细菌鉴定及药物敏感性分析,采用聚合酶链反应 (polymerase chain reaction,PCR)分析质粒介导的氟喹诺酮类耐药基因(plasmid-mediated quinolone resistance genes, PMQR) 如qnrA、qnrB、qnrS、aac(6')-Ib-cr和qepA 基因的流行特点。结果 胆源性大肠埃希菌的构成比达18.65%(135/724),其对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率高达61.5%(83/135)和55.6%(75/135),未检出碳青霉烯类抗生素耐药菌株;PCR检测PMQR基因结果显示:135株胆源性大肠埃希菌中,121株 (89.63%) qnrA1 基因阳性,45株(33.33%) qnrB4 基因阳性,32株 (23.70%) qnrB6 基因阳性,43株(31.85%) qnrS1 基因阳性,34株(25.19%) aac(6')-Ib-cr 基因阳性菌株,未检出qepA基因;其中45株(33.33%)同时携带 qnrA1、qnrB4 基因,32株(23.70%)同时携带 qnrA1、qnrB6, 25株(18.52%)同时携带 qnrA1、qnrB4、qnrS1, 21株(15.56%)同时携带 qnrA1、qnrB4、qnrS1、acc(6')-Ib-cr, 12株(100%)同时携带 qnrA1、qnrB6、qnrS1、acc(6')-Ib-cr, 且环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率随着PMQR基因组合种类的增多而增多。结论 消化内科胆汁分离的大肠埃希菌氟喹诺酮类抗生素耐药严重,耐药基因主要以 qnrA1为主,qnrB4和qnrB6 次之,且存在多种PMQR基因组合形式,这些潜在播散的氟喹诺酮耐药基因对于临床胆道感染的治疗有很大的挑战。     

肺炎克雷伯菌中质粒介导耐喹诺酮类耐药基因qnr的流行现状及耐药特征

目的 了解肺炎克雷伯菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA,qnrB,qnrS基因的流行情况以及其耐药特征.方法 PCR法对37株肺炎克雷伯菌进行qnrA,qnrB,qnrS基因检测.K-B纸片法检测对15种抗菌药物的体外抗菌活性.琼脂平皿二倍稀释法检测阳性菌株对环丙沙星的MIC值.结果 37株肺炎克雷伯菌中,共检测出含qnr基因阳性菌株7株(18.92%),均为qnrS基因.阳性株菌均对亚胺培南敏感且对多种抗生素耐药.结论 湖北地区肺炎克雷伯菌中存在qnr基因的流行,qnr阳性菌株呈多重耐药,应加强对该类基因的监测.     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌qnrB基因的检测

目的:了解临床分离的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌株qnrB基因的存在情况及与细菌耐药的关系。方法:收集福建省福州市三家"三甲"医院临床分离的菌株,菌株药敏试验检测采用K-B法,聚合酶链反应对42株产ESBLs肺炎克雷伯菌和44株产ESBLs大肠埃希菌进行qnrB基因筛查。结果:42株产ESBLs肺炎克雷伯菌有5株检出qnrB基因,检出率为11.90%,44株产ESBLs大肠埃希菌中有7株检出qnrB基因,检出率为15.91%。检出qnrB基因的5株肺炎克雷伯菌和7株大肠埃希菌对两种喹诺酮药物均耐药。结论:在福州地区产ESBLs的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中存在qnrB基因,携带qnrB基因的12株细菌对左氟沙星和环丙沙星均耐药。     

大肠埃希菌与克雷伯菌属细菌qnr基因的检测

目的　了解我院临床分离大肠埃希菌和克雷伯菌属细菌qnr基因的存在情况。方法　用聚合酶链反 应(PCR)对227株大肠埃希菌和36株克雷伯菌属细菌进行qnr基因检测。药敏检测分别采用K B法、break point法。结果　227株大肠埃希菌和36株克雷伯菌属细菌中有6株细菌检出qnr基因(2株大肠埃希菌、1株产 酸克雷伯菌、3株肺炎克雷伯菌)。其中产酸克雷伯菌为突变株,已在基因库注册,授权号:AY675584。6株qnr 基因阳性菌株均为产超广谱β 内酰胺酶(ESBLs)且多重耐药菌株。结论　qnr基因阳性菌株有严重的多重耐药 性,我院克雷伯菌属细菌中qnr基因的携带率高于大肠埃希菌。     

大肠埃希菌与克雷伯菌属细菌qnr基因的检测

目的了解我院临床分离大肠埃希菌和克雷伯菌属细菌qnr基因的存在情况。方法用聚合酶链反应(PCR)对227株大肠埃希菌和36株克雷伯菌属细菌进行qnr基因检测。药敏检测分别采用K—B法、breakpoint法。结果227株大肠埃希菌和36株克雷伯菌属细菌中有6株细菌检出qnr基因(2株大肠埃希菌、1株产酸克雷伯菌、3株肺炎克雷伯菌)。其中产酸克雷伯菌为突变株,已在基因库注册,授权号：AY675584。6株qnr基因阳性菌株均为产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)且多重耐药菌株。结论qnr基因阳性菌株有严重的多重耐药性,我院克雷伯菌属细菌中qnr基因的携带率高于大肠埃希菌。     

大肠埃希菌对氟喹诺酮类的质粒介导耐药机制研究

目的了解近年来发现的质粒介导耐药机制在临床分离大肠埃希菌中对氟喹诺酮类耐药所起的作用。方法用MIC琼脂稀释法筛选耐左氧氟沙星大肠埃希菌;采用聚合酶链反应对qnrA、qnrS、qnrB、aac(6′)-Ib基因进行扩增,并进行PCR扩增产物直接双向测序。用接合实验了解是否存在水平传播的氟喹诺酮耐药性传播机制。结果 90株耐氟喹诺酮类大肠埃希菌中7株检出aac(6′)-Ib-cr基因,未检出qnrA、qnrS、qnrB基因。78株符合供体菌标准的大肠埃希菌中有2株接合成功,接合率2.6%。结论该地区存在质粒介导的氟喹诺酮类耐药性的水平传播。     

肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌AmpC β内酰胺酶的表型检测

目的 比较研究临床实验室对AmpCβ内酰胺酶（AmpC酶）的表型检测方法,了解对头孢西丁不敏感的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中产生hmpC酶和超广谱β内酰胺酶（ESBLs）的分布情况。方法 利用加与不加3-氨基苯酚硼酸（APB）的头孢他啶、头孢噻肟和头孢西丁纸片进行APB纸片增强试验检测肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的AmpC酶,并与Tris-EDTA纸片试验检测AmpC酶的结果进行比较。用CLSI纸片确认实验检测肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌产生的ESBLs。结果 APB纸片增强试验与Tris-EDTA纸片法检测结果完全一致。对头孢西丁不敏感的62株肺炎克雷伯菌和74株大肠埃希菌中,分别检测到产AmpC酶41株（66．1％）和33株（45．0％）。AmpC酶和ESBLs同时存在的肺炎克雷伯菌占51．6％,单产AmpC酶和单产ESBLs的肺炎克雷伯菌分别为14．5％和21．0％;而大肠埃希菌则以单产ESBLs为主,占40．5％,单产AmpC酶及同时产生AmpC酶与ESBLs的分别占20．3％和24．3％。结论 APB纸片增强试验和Tris-EDTA纸片试验操作简单,应用方便,成本低廉,均可用于临床实验室检测产AmpC酶的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌。     

对头孢吡肟敏感的疑似产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌和克雷伯菌属的分子生物学特征

目的 了解初筛试验疑似产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)但确证试验未能确认,而对头孢吡肟敏感的大肠埃希菌和克雷伯菌属中的ESBLs和质粒介导的AmpC酶.方法 纸片扩散法检测18株细菌对常用抗菌药物的敏感性;PCR及多重PCR法检测细菌中的ESBLs和质粒AmpC酶基因;质粒转移接合试验检测耐药质粒的可传递性;细菌基因间重复一致序列(ERIC)-PCR法检测供体大肠埃希菌和受体E.coli J53及其接合子的同源性;脉冲场凝胶电泳(PFGE)对11株大肠埃希菌和6株肺炎克雷伯菌进行同源性分析.结果 18株细菌均为2005年1月至12月期间上海华山医院临床分离的菌株,其中大肠埃希菌11株,肺炎克雷伯菌6株,产酸克雷伯菌1株,按常规方法对细菌进行重新鉴定和药敏试验.18株细菌经美国临床和实验室标准协会(CLSI)推荐的ESBLs初筛试验结果均为ESBLs产生可疑菌株,但确证试验未能确认;所有菌株的头孢吡肟抑菌圈直径均在18 mm以上,显示敏感.PCR检测结果显示,11株大肠埃希菌中有9株产CIT型质粒AmpC酶,DNA测序及序列比对结果证实为CMY-2型AmpC酶,未发现TEM、SHV、CTX-M、PER、VEB、SFO等广谱或ESBLs;6株肺炎克雷伯菌中有5株产DHA型质粒AmpC酶,DNA测序及序列比对结果证实为DHA-1型AmpC酶;5株产DHA-1型AmpC酶的肺炎克雷伯菌株中,4株同时伴有广谱或ESBLs:其中2株产SHV-11型广谱酶,另2株分别产CTX-M-14型ESBLs和SHV-62型ESBLs;1株产酸克雷伯菌亦单产DHA-1型AmpC酶;质粒转移接合试验结果表明,携带耐药基因的质粒可从供体菌转移至敏感细胞中;PFGE结果显示,6株肺炎克雷伯菌的谱型各不相同,而11株大肠埃希菌可分为5种谱型,其中B型包含7株细菌,这7株细菌均产生质粒介导的CMY-2型AmpC酶,并分离自外科病房,提示可能存在克隆菌株的流行传播.结论在确证试验未能确认的疑似产ESBLs中,对头孢吡肟敏感的大肠埃希菌和克雷伯菌属细菌主要产生质粒介导的AmpC酶,但尚有少数菌株同时伴有产ESBLs.对同时产生ESBLs和AmpC酶的菌株,临床微生物实验室必须报告这些菌株对头孢吡肟耐药.     

产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检测及其基因分析

目的了解临术分离菌中产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌发生率，分析其耐药表型，探讨其ESBLs基因类别。方法采用美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）推荐的纸片扩散法，对364株大肠埃希菌和71株肺炎克雷伯菌进行产ESBLs菌株初筛试验，并用双纸片确证试验和双纸片协同试验进行产ESBLs菌株确证。按照NCCLS文件标准，用Kirby-Bauer纸片扩散法进行产ESBLs株21种抗生素药敏试验。用PCR方法扩增168株ESBLs表型阳性菌中blaTEM-1、blaSHV-1、CTX-M-1组、TOHO-1组等4种基因。结果（1）大肠埃希菌和克雷伯菌中产ESBLs的检出率分别为46．7％和32．4％。（2）产ESBLs菌对青霉素类100％耐药；对第1、2代头孢菌素耐药率达85％～100％；对除头孢他定以外的第3代头孢菌素，产ESBLs大肠埃希菌耐药率为80％以上，产ESBLs肺炎克雷伯菌耐药率为65％～75％以上；产ESBLs菌对复方新诺明的耐药率为75％～85％；产ESBLs大肠埃希菌对环丙沙星耐药率为80％～90％、庆大霉素耐药率为50％～75％；产ESBLs菌对阿米卡星、头孢替坦、亚胺培南有较好的敏感性（80％～90％以上）。（3）产ES-BLs大肠埃希菌中，blaTEM-1、blasSHV-1、CTX-M-1组等3种基因扩增阳性率分别为93．9％、7．4％和53．4％。51．4％的菌株同时携带2种耐药基因，2．7％的菌株同时携带3种耐药基因。产ESBLs肺炎克雷伯菌中blatTEM-1、blaSHV-1、CTX-M-1组等3种基因扩增阳性率分别为50．0％、95．0％和20．0％。同时携带2种耐药基因的菌株占35．0%，同时携带3种耐药基因的菌株占15．0％。两种细菌中均未检出TOHO-1组基因。结论大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBLs的检出率较高，大肠埃希菌中产ESBLs菌比例有逐年上升趋势。产ESBLs菌对头孢噻肟的耐药率远高于头孢他定，且多数菌株对青霉素类，第1、2、3代头孢菌素、喹诺酮类、磺胺类、氨基糖甙类等抗生素呈多重耐药。大肠埃希菌中以TEM型和CTX-M型基因为主。肺炎克雷伯菌以SHV型基因为主，同时存在TEM型和CTX-M型基因。     

oqxAB基因在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的流行及传播

目的了解大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中oqxAB基因的流行情况和传播。方法收集72株大肠埃希菌和4u株肺炎克雷伯菌。用PCR扩增oqxAB基因,接合试验验证oqxAB是否存在于质粒上。琼脂稀释法测定环丙沙星对含oqxAB基因接合子MIC和防耐药突变浓度（MPC）。结果72株大肠埃希菌oqxA、oqxB和oqxAB基因阳性分别为15株（15／72）、4株（4／72）和7株（7／72）,49株肺炎克雷伯菌分别为4株（4／49）、1株（1／49）和34株（34／49）。大肠埃希菌环丙沙旱敏感和耐药株中oqxAB基因阳性分别为2株（2／16）和5株（5／56）,肺炎克雷伯菌分别为8株（s／14）和26株（26／35）。含与不含oqxAB基因大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对喹诺酮类抗菌药物敏感率差异无统计学意义。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌PCR扩增产物序列与GenBank中oqxAB基因登录号AB601773．1和FJ975561．1符合率均为99％。大肠埃希菌质粒接合试验中有4株接合成功,环丙沙星对接合子MIC为0．25～0．5mg／I。,较受体菌提高31～62倍。环丙沙星对接合子MPC为8～16mg／L,较受体菌353高32倍。肺炎克雷伯菌质粒接合没有成功。环丙沙星对肺炎克雷伯菌MIC≤（0.0625mg／L,无沦是否含oqxAB基因,MPC为0．25～0．5mg／L;但MIC为0．25～0．5mg／L时,无沦是否含oqxAid基因,MPC为2～16mg／L。结论oqxcAB基因存在于大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,该基因在大肠埃希菌通过质粒传播,oqxAB基因在环丙沙星耐药和敏感株中检出率差异无统计学意义,表明其介导细菌对环丙沙星是低水平耐药。含oqxAB基因的接合子在喹诺酮类压力选择下能产生高水平耐药。肺炎克雷伯菌在环丙沙星压力下产生高水平耐药与oqxAB基因无关,而与其MIC有关。     

临床可疑产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性分析

目的了解可疑产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的构成比和耐药情况,指导临床合理用药。方法对2008年7～12月住院患者各种临床标本,采用美国临床实验室标准化委员会推荐的表型筛选法分离到可疑产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,再经确认试验检测产ESBLs菌株,统计耐药分布情况。结果从248株阳性标本中共检出可疑产ESBLs菌株117株,其中大肠埃希菌38株,肺炎克雷伯菌79株;确证试验检测出产ESBLs菌82株,总检出率为33．1％,其中大肠埃希菌27株,肺炎克雷伯菌55株。确定为产ESBLs的菌株对氨苄西林、部分第3代头孢菌素的耐药率为100．0％,对磺胺类、喹诺酮类耐药率为60．0％～90．0％,对亚胺培南的耐药率为0．0％。结论产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物的耐药率明显高于非产ESBLs菌株,具有多重耐药性;而碳青霉烯类亚胺培南仍然是对产ESBLs细菌最有效的药物。     

改良的纸片表型筛选法用于AmpC酶的检测

目的 建立并评价一种检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产AmpC酶的新方法.方法 采用改良的纸片表型筛选法,以头孢西丁三维试验和多重PCR法作为对照,对临床分离的耐第三代头孢菌素的164株大肠埃希菌和40株肺炎克雷伯菌进行AmpC酶的检测.结果 164株大肠埃希菌中,改良的纸片表型筛选法检出8株产AmpC酶的阳性菌株（8/164,4.88%）,其中有2株同时产ESBLs酶;40株肺炎克雷伯菌中未检出产AmpC酶菌株,但检出2株（2/40,5.00%）诱导产AmpC酶菌株.头孢西丁三维试验在大肠埃希菌中检出AmpC酶阳性菌株8株（8/164,4.88%）,在肺炎克雷伯菌中未检出产AmpC酶株.多重PCR法检出大肠埃希菌AmpC酶耐药基因阳性9株（9/164,5.49%）,肺炎克雷伯菌阳性2株（2/40,5.00%）.结论 改良的纸片表型筛选法可用于检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产AmpC酶和诱导产酶株,并可同时检测产ESBLs酶菌株,该法操作简便、结果可靠、无需特殊仪器,可在普通临床实验室应用.