来氟米特对角质形成细胞核因子κB的影响

来氟米特（leflunomide）是一种新型的抗炎及免疫调节药物，具有独特的抗增生及抗炎作用。核因子κB（NF-κB）是一种能调节多种炎症和免疫基因表达的转录调控因子，它的表达异常与许多皮肤病有关，如银屑病，红斑狼疮，皮肤肿瘤等。本研究以良性角质形成细胞株HaGaT为研究对象，观察来氟米特对表皮细胞NF-κB及其抑制蛋白 IκB-α的影响。     

姜黄素对IL-17诱导的人表皮角质形成细胞株NF-κB活化的影响

目的探讨姜黄素对IL-17诱导的人表皮角质形成细胞株(HaCaT细胞株)核转录因子NF-κB活化的影响,为其对某些炎症性皮肤病的治疗提供一定的理论依据。方法用IL-17刺激HaCaT细胞不同时间(0h,0.5h,1h,2h),或用姜黄素不同浓度(2.5μmol/L,5μmol/L,10μmol/L)预处理1h后,加入IL-17刺激2h,应用ELISA法结合捕获探针检测各组的NF-κBp65的DNA结合活性。提取IL-17刺激后不同时间点各组以及10μmol/L浓度姜黄素预处理组核蛋白,Westernblot方法检测各组NF-κBp65蛋白的表达。结果 IL-17能够有效地增加HaCaT细胞NF-κBp65的DNA结合活性及核蛋白表达。加入姜黄素共培养后,各浓度处理组的NF-κBp65DNA结合活性均下降(P<0.01),10μmol/L姜黄素处理引起NF-κBp65的蛋白表达水平明显下降(P<0.01)。结论姜黄素能够有效抑制IL-17诱导的HaCaT细胞NF-κBp65的DNA结合活性以及核蛋白的表达,从而抑制NF-κB的活化。     

地塞米松对HaCaT细胞核因子-κB/IκB表达的影响

目的:探讨地塞米松对角质形成细胞核因子(NF)-κB活性及其抑制蛋白(IKB)α表达的调节作用.方法:采用反转录-荧光实时定量PCR和蛋白印迹试验.观察经不同浓度及不同时间的地塞米松作用下.培养的人角质形成细胞HaCaT细胞的IκBα mRNA和蛋白质的表达;用蛋白印迹试验检测NF-κB核蛋白的表达情况.结果:地塞米松可诱导HaCaT细胞IKBα的表达而抑制NF-κB核转位,此作用呈浓度依赖性效应,在36 h时作用最明显.结论:糖皮质激素通过调控人角质形成细胞NF-κB/IκB信号通路.可抑制皮损局部的炎症反应.     

3种糖皮质激素对HaCaT细胞核因子-κB/抑制蛋白IκBα调节的比较

目的:比较3种不同糖皮质激素对角质形成细胞的核因子(NF)-kB/IkBα调节效应的差异.方法:将培养的人角质形成细胞HaCaT细胞分为空白对照组、氢化可的松组、地塞米松组、倍他米松组,采用反转录(RT)-PCR和蛋白印迹试验检测各组HaCaT细胞的IkBα mRNA和蛋白质表达,用蛋白印迹试验检测NF-kB核蛋白的表达情况.结果:3种糖皮质激素均具有诱导HaCaT细胞IkBα的表达而抑制NF-kB核转位的作用,其中氢化可的松作用最弱,地塞米松与倍他米松无明显差异.结论:不同效力的糖皮质激素对角质形成细胞NF-kB/IkBα的调节效力不同.提示临床上正确选用不同效力糖皮质激素外用制剂的必要性.     

姜黄素对角质形成细胞凋亡的诱导及其机制

目的研究姜黄素在体外诱导角质形成细胞凋亡及其作用机制。方法采用MTT法测定不同浓度的姜黄素对角质形成细胞增殖的影响,流式细胞仪观察细胞凋亡情况,分光光度法检测细胞内半胱天冬蛋白酶3(Caspase-3)及半胱天冬蛋白酶9(Caspase-9)活性的改变情况。结果浓度>5μmol/L的姜黄素处理后细胞早期凋亡率显著升高(P<0.05),细胞内Caspase-3及Caspase-9的活性明显增加(P<0.05),均与姜黄素呈浓度依赖性。结论一定浓度范围的姜黄素可诱导角质形成细胞的凋亡,Caspase-3及Caspase-9活性增加可能为其诱导凋亡的重要机制之一。     

维A酸对角质形成细胞NF-κB及细胞因子的影响

目的探讨维A酸药物对角质形成细胞的影响及核因子调控机制,为药物治疗银屑病提供理论依据.方法从银屑病患者外周血分离单一核细胞(PBMCs),与角质形成细胞系HaCat混合培养,用维A酸预处理HaCat细胞,以雷公藤为对照,利用流式细胞仪分析培养体系及HaCat各自的NF-κB表达,ELISA测上清液中IL-8、ICAM-1含量.结果 银屑病患者培养体系及HaCat中NF-κB和细胞因子的水平均高于健康对照组(P＜0.01),经维A酸预处理HaCat后,可抑制核因子的表达,与雷公藤比较差异无显著性.结论维A酸可能通过下调NF-κB的活化而改善银屑病的症状,同时提示抑制NF-κB活性的药物可能有助于银屑病的治疗.     

肿瘤坏死因子与角质形成细胞

肿瘤坏死因子(ＴＮＦ)是一类由巨噬细胞和激活的淋巴细胞等分泌的细胞因子,具有广泛的生物学活性。近年来,随着对ＴＮＦ理论和临床研究的深入,发现ＴＮＦ与角质形成细胞有密切的关系;角质形成细胞可以产生ＴＮＦ,ＴＮＦ又可影响角质形成细胞的形态、功能。现综述如下。一、角质形成细胞ＴＮＦ的产生及影响因素人类正常皮肤角质形成细胞、肿瘤及一些自身免疫性疾病的角质形成细胞均能通过自分泌或旁分泌的方式产生ＴＮＦα[1],抑制正常人和银屑病皮损角质形成细胞的生长。培养的人角质形成细胞亦可表达ＴＮＦ受体(ＴＮＦ-Ｒ),对ＴＮＦ引起的…     

角质形成细胞的体外培养及NF-κB的表达

目的:检测体外培养角质形成细胞的核因子(NF-κB)的表达,以探讨NF-κB在银屑病炎症反应中的作用.方法:采用无血清培养法获得角质形成细胞,与银屑病患者外周血单一核细胞(PBMC)混合培养,利用流式细胞仪检测NF-κB表达.结果:角质形成细胞在5天可见明显的集落,10天左右可长满单层.与正常对照组相比,银屑病患者混合培养细胞较对照角质形成细胞NF-κB表达显著增高.结论:NF-κB活性增强是银屑病炎症反应的重要因素之一.     

姜黄素对IL-17诱导的人表皮角质形成细胞株CCL20表达的影响

目的探讨姜黄素对IL-17诱导的人表皮角质形成细胞株(HaCaT细胞株)CCL20表达的影响。方法用IL-17刺激HaCaT细胞,并加入不同浓度的姜黄素(2.5μmol/L,5μmol/L,10μmol/L)共培养24h。提取总RNA并收集细胞上清液,分别进行荧光定量PCR和ELISA实验,从mRNA及蛋白表达水平两方面观察姜黄素对CCL20表达的影响。结果 IL-17能够有效地诱导HaCaT细胞CCL20的表达。加入姜黄素共培养后,CCL20在mRNA及蛋白表达水平均明显下降(P均<0.05)。结论姜黄素对IL-17诱导的HaCaT细胞CCL20的表达具有明显的抑制作用,可为其对银屑病的治疗提供理论依据。     

尖锐湿疣损害中角质形成细胞凋亡与增殖细胞核抗原表达的关系

我们用ABC免疫组化技术和TUNEL原位标记法分别检测了尖锐湿疣（CA）损害中角质形成细胞增殖细胞核抗原（PCNA）的表达及细胞凋亡的变化，旨在探讨人乳头瘤病毒（HPV）引起上皮增殖的机理。一、材料与方法５１例CA标本来自我院１９９８年３月至２００１年１月存档的石蜡包埋组织，其中男２１例，女３０例，年龄１９～６０岁（平均３５．９岁），病程７d至７个月（平均５８d），全部病例均有典型的临床表现及组织病理变化。对照组１８例，其中男８例，女１０例，年龄１８～５８岁（平均３２岁），标本为手术切除的正常包皮或阴道粘膜…     

角质形成细胞的体外培养及NF—κB的表达

目的：检测体外培养角质形成细胞的核因子（NF—κB）的表达,以探讨NF—κB在银屑病炎症反应中的作用。方法：采用无血清培养法获得角质形成细胞,与银屑病患者外周血单一核细胞（PBMC）混合培养,利用流式细胞仪检测NF-κB表达。结果：角质形成细胞在5天可见明显的集落,10天左右可长满单层。与正常对照组相比,银屑病患者混合培养细胞较对照角质形成细胞NF-κB表达显著增高。结论：NF—κB活性增强是银屑病炎症反应的重要因素之一。     

白念珠菌对角质形成细胞NF-κB核移位的影响

目的观察白念珠菌(简称白念)及其菌体成分对培养人角质形成细胞核因子κB(NF-κB)表达及核移位的影响,进一步揭示白念与角质形成细胞之间相互作用的机理。方法分别采用酶解、反复冻融、超声破碎和超速离心等方法制备白念菌体成分,白念、白念菌体成分和纯甘露聚糖分别与角质形成细胞共同培养1.5h和3h后,激光共聚焦扫描显微镜(LCSM)检测细胞NF-κB的表达。结果正常培养的人角质形成细胞NF-κB主要表达于胞浆;白念、白念细胞壁提取物和纯甘露聚糖刺激细胞1.5h后NF-κB在细胞核表达明显增加,细胞浆明显减少(P<0.01),3h后又恢复到刺激前的状态;而白念培养上清液、细胞浆提取物刺激角质形成细胞后NF-κB表达无明显变化(P>0.05)。结论白念和甘露聚糖均可引起角质形成细胞NF-κB向细胞核内转移,进而活化该转录因子,调控靶基因的转录。甘露聚糖可能是白念引起NF-κB活化的重要活性成分之一。     

中波紫外线对HaCaT细胞核因子-κB和p53表达的影响

目的研究中波紫外线(UVB)对HaCaT细胞核因子-κB(NF-κB)和p53表达的影响。方法以60mJ/cm2的UVB照射HaCaT细胞后8h、16h和24h,采用real time PCR和western blot等技术检测NF-κB和p53的表达情况。结果 1与未处理组相比,UVB照射HaCaT细胞8h、16h和24h后,NF-κB mRNA水平升高程度分别为27%、32%和42%,p53 mRNA水平升高程度分别为13%、20%和28%;2未处理组HaCaT细胞NF-κB和p53蛋白的表达水平分别为0.3989±0.04802和0.3018±0.03605,UVB照射8h、16h和24h后,二者的表达均随时间延长而升高,NF-κB为0.4283±0.0195、0.5976±0.0401和0.8255±0.0214,p53为0.3925±0.0244、0.4595±0.0362和0.5811±0.0482,差异有统计学意义(P0.05)。结论 UVB可致HaCat细胞中NF-κB和p53表达水平升高。     

中波紫外线辐射对人表皮角质形成细胞核因子κB转录活性的影响

目的 探讨中波紫外线(UVB)辐射对表皮角质形成细胞核因子κB(NF-κB)转录活性的影响。方法 正常人表皮角质形成细胞取自健康儿童包皮,并培养于37℃、5%CO₂的培养箱中;以20、60和120 mJ/cm² UVB辐射培养细胞;分别提取UVB辐射0、2、24和48 h后角质形成细胞的全细胞蛋白、核蛋白和胞浆蛋白;免疫印迹方法检测分析全细胞蛋白和核蛋白的NF-κB/p65以及胞浆蛋白NF-κB抑制物(IκB-a)的动态变化;电泳迁移率变更分析(EMSA)方法检测分析NF-κB的转录活性。结果 UVB辐射可显著促进角质形成细胞总蛋白和核蛋白中NF-κB的蛋白表达(P<0.05),且表达量与辐射剂量成正比,UVB辐射后2 h即可有NF-κB的蛋白表达水平的升高。24 h后达高峰并持续高水平表达至48 h:不同剂量UVB辐射角质形成细胞后的不同时间,均可促进NF-κB转录活性:UVB辐射可显著抑制角质形成细胞胞浆IκB-a蛋白的表达(P<0.05)。结论 UVB辐射可显著促进角质形成细胞NF-κB的转录活性。     

姜黄素对小鼠黑素瘤的抑制作用及对核因子κB激活和生存素表达的影响

目的 探讨姜黄素抑制小鼠黑素瘤作用的可能机制.方法 将黑素瘤细胞株B16F10接种于小鼠右大腿外侧皮下,建立荷黑素瘤小鼠模型,于接种后第7天分别予以50和100 mg/kg姜黄素干预,以0.5 mL无血清RPMI 1640培养基腹腔注射为对照组,观察不同处理组瘤体的变化,采用免疫印迹方法检测肿瘤组织核因子κB(NF-κB)p65表达程度,应用半定量逆转录聚合酶链反应方法检测生存素mRNA的水平.结果 姜黄素治疗组小鼠瘤重均较肿瘤对照组降低,尤以50 mg/kg姜黄素组为著,抑瘤率可达55.56%(P<0.01);治疗组肿瘤组织NF-κBp65表达水平均较肿瘤对照组降低,50 mg/kg姜黄素组降低63.19%,100 mg/kg姜黄素组降低55.74%,治疗组与肿瘤对照组差异有统计学意义(P<0.01);治疗组生存素mRNA均较肿瘤对照组降低,50 mg/kg组降低51.02%,100mg/kg组降低34.69%,治疗组与肿瘤对照组差异有统计学意义(P<0.01);肿瘤组织NF-κB活性与生存素mRNA表达水平呈正相关(r=0.81,P<0.01).结论 姜黄素可能通过抑制NF-κB活化从而下调其下游生存素基因表达来抑制恶性黑素瘤的生长.     

一氧化氮对角质形成细胞增殖和凋亡的影响

目的 :　研究一氧化氮 (NO)对角质形成细胞 (KC)增殖和凋亡有何影响。方法 :　体外培养人皮肤角质形成细胞株Colo- 16 ,应用结晶紫比色法、吖叮橙染色和片段化DNA含量测定 ,观察Colo- 16细胞在不同浓度的NO供体 (硝普盐 ,SNP)作用下 ,其增殖活性和凋亡情况。结果 :　较低浓度的SNP( 10 μmol L～2 0 0 μmol L)能促进Colo- 16KC增殖 ,对其凋亡无影响 ;高浓度SNP抑制Colo - 16KC增殖 ,促进其凋亡。结论 :　SNP对Colo- 16KC具有双向性影响。本结果支持皮肤中合成的NO对KC具有调节作用 ,但有赖于局部的NO浓度     

中波紫外线对角质形成细胞NF-κB p65及其抑制因子IκBα表达的影响北大核心CSCD

目的 探讨不同剂量中波紫外线（UVB）照射对体外培养的人皮肤角质形成细胞NF-κB p65及其抑制因子IκBα表达的调控效应.方法 4.5、10及50 mJ/cm2UVB照射人角质形成细胞系及人原代角质形成细胞,设置未经照射的对照组,在照射后4h使用Western印迹法测定细胞总蛋白中IκBα及NF-κB p65的表达水平.并对人原代角质形成细胞进行50 mJ/cm2UVB照射,照射后继续培养2、4、8、12h,分别测定4个时间点IκBα及NF-κB p65的表达水平.蛋白条带密度分析使用Quantity One（R）4.6.8软件,分别计算IKKβ、IκBα、NF-κB p65以及磷酸化IKKα/β、IκBα、NF-κB p65和β肌动蛋白条带吸光度和面积的乘积,再分别计算IKKβ、IκBα和NF-κB p65与β肌动蛋白的比值,取3次实验结果.结果 4.5和10 mJ/cm2 UVB照射后4h,相对于对照组细胞,人角质形成细胞系及人原代角质形成细胞总蛋白中IKKβ、IκBα、NF-κB p65表达水平均无明显变化（P＞ 0.05）;50 mJ/cm2 UVB照射后4h,细胞系及原代角质形成细胞中IKKβ表达水平均无明显变化（P＞0.05）;原代角质形成细胞IκBα表达水平（0.173±0.055）较对照组细胞（0.462±0.142）显著降低（t=5.64,P＜ 0.05）,NF-κB p65表达水平（0.076±0.030）也较对照组细胞（0.120±0.034）降低（t=5.40,P＜0.05）;角质形成细胞IκBα表达水平（0.160±0.046）较对照组细胞（0.398±0.136）轻度下调（t=4.37,P＜0.05）,NF-κB p65的表达水平无明显变化（P＞0.05）.50 mJ/cm2 UVB照射原代角质形成细胞后2h,IκBα表达水平（0.140±0.034）相对于对照组细胞（0.208±0.031）开始下调（t=17.55,P＜ 0.05）,并随照射后时间延长下调效应更为显著;NF-κB p65的表达水平在2h和4h时较对照细胞无明显变化（P＞0.05）,8h时（1.162±0.345）较对照细胞（1.235±0.349）表达水平下调（t=36.67,P＜0.05）,12 h时（1.061±0.246）较对照细胞（1.390±0.226）仍下调（t=8.71,P＜0.05）,随着时间的推进下调效应无明显改变;磷酸化IKKα/β（ser176/180）、IKKβ、磷酸化IκBα（ser32）、磷酸化NF-κB p65（ser536）表达量均无明显改变（P＞0.05）.结论 高剂量（50 mJ/cm2）UVB照射可显著抑制人原代角质形成细胞IκBα表达,同时轻度抑制NF-κB p65蛋白的表达,提示可能存在UVB照射人原代角质形成细胞引起NF-κB p65活化的另一种通路.     

维A酸对角质形成细胞NF-кB及细胞因子的影响

目的探讨维A酸药物对角质形成细胞的影响及核因子调控机制,为药物治疗银屑病提供理论依据。方法从银屑病患者外周血分离单一核细胞(PBMCs),与角质形成细胞系HaCat混合培养,用维A酸预处理HaCat细胞,以雷公藤为对照,利用流式细胞仪分析培养体系及HaCat各自的NFкB表达,ELISA测上清液中IL8、ICAM1含量。结果银屑病患者培养体系及HaCat中NFкB和细胞因子的水平均高于健康对照组(P<0.01),经维A酸预处理HaCat后,可抑制核因子的表达,与雷公藤比较差异无显著性。结论维A酸可能通过下调NFкB的活化而改善银屑病的症状,同时提示抑制NFкB活性的药物可能有助于银屑病的治疗。     

角质形成细胞生长因子对HaCaT细胞增殖的影响

目的:研究角质形成细胞生长因子(KGF)对HaCaT细胞增殖的影响,探讨KGF与银屑病表皮过度增殖的关系。方法:利用HaCaT细胞体外培养,采用KGF为增殖诱导剂,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测不同浓度的KGF对HaCaT细胞增殖率的影响;检测KGF对细胞生长曲线及细胞集落形成的影响。结果:MTT实验表明,KGF可刺激HaCaT细胞增殖,刺激作用呈浓度依赖性(r=0.981,P<0.05);10 ng/mL KGF作用下HaCaT细胞的生长速度较对照组明显加快(P<0.05),集落形成率较对照组增加(P<0.05),且细胞呈明显的增殖形态,形成的集落较大,集落内细胞多呈星状,胞内染色质丰富。结论:KGF具有显著的促HaCaT细胞增殖作用,银屑病皮损区域KGF表达增加可能是引起表皮过度增殖的重要致病因子。     

角质形成细胞生长因子与银屑病的关系

角质形成细胞生长因子是近年来发现的有着重要生物学功能的生长因子 ,它属于成纤维细胞生长因子家族 ,由成纤维细胞产生。角质形成细胞生长因子可刺激角质形成细胞的增生、分化、移行 ,促进上皮细胞的再生、增厚 ,对银屑病的发病机制及其治疗可能有一定的启示。本文就角质形成细胞生长因子的生物学功能及其与角质形成细胞及银屑病的关系做一综述。