小檗胺诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡及其机制

目的探讨小檗胺体外诱导雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡的作用及其机制。方法噻唑蓝（MTT）法检测10、20、30和40mg／L小檗胺作用于PC-3细胞24、48、72h的吸光度（A）值；流式细胞仪检测小檗胺作用后细胞凋亡率及细胞周期的变化；透射电镜观察细胞凋亡形态；免疫细胞化学法检测小檗胺作用后bcl-2、bax和Survivin表达变化。结果各浓度组小檗胺作用48h。细胞抑制率分别为（13．60±1．49）％、（31．79±2．31）％、（54．16±3．09）％和（63．72±2．46）％，与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。小檗胺对PC-3细胞的抑制作用呈时间-浓度依赖性；40mg／L小檗胺作用24、48、72h，细胞凋亡率分别为（31．44±3．27）％、（50．32±4．03）％和（63．46±3．75）％，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。随小檗胺浓度的增高，凋亡率随之升高，细胞周期呈现G0／G1期、S期细胞比例增多，G2／M期细胞比例减少趋势；电镜扫描可见典型的“凋亡小体”；40mg／L小檗胺作用72h，PC-3细胞中bax的表达增加、Survivin表达减少（P〈0．05），而bcl-2的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论小檗胺通过诱导细胞凋亡和影响细胞周期的方式抑制PC-3细胞的增殖，并具有时间和浓度依赖性；诱导凋亡的机制可能是通过下调Survivin、上调bax蛋白的表达来实现。     

细胞凋亡与前列腺癌

前列腺癌的发生除了与多种癌基因,抑癌基因的激活和表达有关以外,细胞凋亡过程的抑制也是其形成的重要机制,本文从细胞凋亡的概念,特征和有关机制及调控等方面进行综述。并探讨细胞凋亡在前列腺癌发生,发展中的作用及相关机理。     

Smac基因诱导前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的：观察Smac基因对前列腺癌细胞凋亡的影响。方法：前列腺癌细胞株（PC-3）在含小牛血清的DMEM-F12培养基中培养、传代。通过脂质体介导将Smac基因导入前列腺癌细胞株，通过RT-PCR法检测SmacmRNA的表达，同时用SABC免疫组化法分析Smac的表达。采用细胞计数法检测细胞生长抑制率，流式细胞仪观察细胞凋亡情况。结果：转染Smac基因后，RT-PCR可检测出Smac的特异条带，SABC结果转染组Smae蛋白表达显著性增强，前列腺癌细胞的生长明显受抑制（P〈0．05）。细胞周期分析可见凋亡峰，凋亡率35．2％。结论：转入Smac基因可显著促进前列腺癌细胞细胞的凋亡。     

黄酮类化合物对前列腺癌细胞的凋亡诱导作用

黄酮类化合物是广泛存在于植物中的一类多酚类化合物,具有广泛的生物活性,近年来研究发现其在抗肿瘤方面具有显著疗效,主要表现在抗细胞增殖、诱导细胞凋亡、干预细胞信号转导和增强抑癌基因活性及抑制癌基因表达等方面。本文就黄酮类化合物诱导前列腺癌细胞凋亡的作用机制进行综述。     

多沙唑嗪诱导前列腺癌细胞的凋亡

丛生蛋白是一种与凋亡有关的多功能糖蛋白，可以诱导多种细胞发生凋亡。为了研究经25lμmol／L多沙唑嗪处理的雄激素非依赖性前列腺癌细胞（PC-3）中，丛生蛋白的表达水平与PC-3细胞凋亡之间的关系，Youm等进行了一项研究，研究者应用DNA碎裂片段，逆转录聚合酶链反应，末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）来评估细胞凋亡的程度和丛生蛋白mRNA及蛋白质的基因时空表达。     

鱼藤素诱导人前列腺癌细胞凋亡及其机制研究

目的 观察鱼藤素对于激素抵抗型前列腺癌(HRPC)细胞PC3和DU145增殖、细胞周期和凋亡的影响并探讨其机制.方法 设阴性对照组(有细胞但不加药),空白对照组(无细胞仅有培养液),阳性对照组(渥曼青霉素100 nmoL/L),及鱼藤素分别10、100、1 ìmol/L共6组.CCK-8法进行细胞毒性实验,检测细胞生长抑制率.流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Westem-blot检测Akt、MAPK及其磷酸化蛋白表达,探讨药物作用机制.结果 10 nmol/L～1 ìmol/L鱼藤素对PC3细胞均有生长抑制作用,呈现明显的时间、浓度依赖性,对DU145细胞则无此作用.鱼藤素使PC3细胞出现G2/M期阻滞现象并引起浓度依赖性的凋亡,而未改变DU145细胞的周期分布也不能诱导其凋亡.鱼藤素能够阻断P13K/AKT通路而对MAPK通路无影响.结论 鱼藤素通过阻断PI3K/AKT通路实现抑制PC3细胞增殖、诱导凋亡的作用.两株细胞间实验结果 的差异是因为其PI3K/AKT通路活化状态的差异造成的.     

染料木黄酮诱导前列腺癌DU-145细胞凋亡的研究

【摘要】〓目的〓探讨染料木黄酮诱导前列腺癌细胞系DU-145细胞凋亡的作用。方法〓在Caspase抑制剂Z-VAD存在或不存在的情况下,以染料木黄酮作用于前列腺癌DU-145细胞,采用MTT法检测细胞存活率、Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡、PI染色法流式细胞术检测细胞周期、JC-1染色法流式细胞术测定细胞线粒体膜电位(△ψm),比色检测试剂盒测定caspase-8活性。结果〓染料木黄酮能明显降低前列腺癌DU-145细胞的存活率、诱导癌细胞凋亡、降低△ψm及提高caspase-8活性(全部P<0.05)。Z-VAD能够逆转Gen抗前列腺癌的效应。结论〓染料木黄酮使细胞阻滞于G0和G1,分别通过凋亡信号通路的外源性和内源性途径,诱导前列腺癌细胞凋亡。     

姜黄素对雄激素依赖性前列腺癌细胞的诱导凋亡作用

目的:探讨姜黄素对雄激素依赖性前列腺癌细胞株(LNCaP)的诱导凋亡作用。方法:分别用10、25、50、75、100μmol/L浓度的姜黄素作用于LNCaP细胞,5、12、24 h后MTT法检测细胞生长活性;24 h后流式细胞仪测定细胞周期及细胞凋亡的变化,透射电镜观察细胞超微结构变化;5 h后W estern印迹法检测细胞内IκBα的表达。结果:姜黄素能显著抑制LNCaP细胞的生长,呈剂量与时间依赖性,不同浓度姜黄素组之间与不同作用时间组之间的差异均有显著性意义(P均<0.05)。姜黄素诱导LNCaP细胞出现剂量依赖性G2/M期阻滞(P<0.01),各浓度组凋亡细胞比例均显著高于空白对照组(P均<0.05),差异有显著性意义;姜黄素作用24 h后LNCaP细胞出现凋亡的形态学改变;不同浓度姜黄素作用后,LNCaP细胞内IκBα的表达无变化。结论:姜黄素能显著抑制LNCaP细胞的体外生长,并促进其凋亡。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导前列腺癌细胞凋亡的研究

目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对前列腺癌细胞的凋亡诱导作用。方法 10μg/L-100μg/L的TRAIL处理培养的PC-3M细胞4～24h后，采用Annexin-V荧光染色、透射电镜、原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡；流式细胞术和MTT比色检测凋亡率、细胞生长抑制率与TRAIL的时间、浓度依赖关系。结果10μg/L～100μg/L TRAIL作用4～24h，肿瘤细胞出现典型的凋亡形态学改变，随着TRAIL浓度的增加或药物作用时间的延长，肿瘤细胞凋亡率也增加，为13．8％～79．6％，同时细胞生长抑制率出现明显增加，药物作用8h为7．5％～37．9％，12h为16．7％～87．9％，24h为39．7％～97．6％。结论 TRAIL能够迅速和显著地诱导PC-3M细胞凋亡，可能成为晚期前列腺癌治疗的新方法。     

去雄激素协同辐射诱导前列腺癌细胞凋亡及凋亡通路基因的表达

目的 研究辐射和去雄激素对前列腺癌细胞凋亡通路基因表达的影响，探讨其协同诱导凋亡的机制。方法 辐射与去雄激素作用前列腺癌细胞LNCaP，MTT实验和凋亡细胞染色分别评价细胞毒性和诱导凋亡作用。收集细胞提取总RNA并合成cDNA探针，在凋亡通路特异基因cDNA膜上进行杂交反应检测基因mRNA表达，并以RT-PCR确认有关基因mRNA表达。结果 辐射与去雄激素可协同诱导前列腺癌细胞凋亡。辐射使DFFA、LTbR、mdm2、Myd88、TNFRSF8Ⅱ、TNFRSF14和TNFSF4基因mRNA表达上调，使Survivin和Bar基因mRNA表达下调。去雄激素使Mcl-1、TNFRSF14、MyD88和TNFSF4基因mRNA表达上调，使Bar、Survivin和TRAIL—R3基因mRNA表达下调。结论 去雄激素和辐射对前列腺癌细胞凋亡通路基因的表达改变不同，这与两者协同诱导凋亡作用有关。     

冬凌草甲素诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡及机制

目的 探讨冬凌草甲素体外诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡和细胞周期阻滞的作用及其机制.方法 10～80 μmol/L冬凌草甲素分别处理SGC-7901细胞后,CCK8法检测冬凌草甲素体外对SGC-7901细胞抑制生长的作用;用流式细胞仪分别观察冬凌草甲素诱导凋亡及细胞周期阻滞.Western blot测定凋亡相关蛋白的表达.结果 冬凌草甲素对SGC-7901细胞有明显的生长抑制作用,并随着药物浓度的增加(10～80 μmol/L)而逐渐增强,呈浓度、时间依赖关系.此外,流式细胞术检测发现,冬凌草甲素浓度为0、10、40、60、80 μmol/L,作用24 h后,G_2/M期细胞数分别是(9.90±1.17)%、(9.94±0.27)%、(11.76±0.16)%、(15.64±1.48)%和(22.59±1.01)%;而S期细胞比例分别为(31.79±1.03)%、(30.90±0.47)%、(29.25±0.80)%、(21.46±1.61)%、(18.81±0.61)%,冬凌草甲素能够使得SGC-7901细胞周期呈剂量依赖性阻滞于G_2/M期;冬凌草甲素浓度为80 μmol/L,作用12、24 h后,凋亡率分别为(12.78±1.54)%、(20.62±2.39)%,明显高于对照组的(9.92±0.56)%,其能使SGC-7901细胞发生凋亡.随着冬凌草甲素作用时间延长,SGC-7901细胞的bel-2蛋白表达逐渐减弱,前体Caapase-3被激活.结论 冬凌草甲素能够诱导SGC-7901细胞产生凋亡,并使细胞周期阻滞在G_2/M期.其凋亡机制可能与下调bcl-2蛋白表达及Caspase-3的激活相关.     

Survivin基因在胆管癌组织中的表达及其与bcl-2和bax相关性

目的 探讨Survivin基因在胆管癌组织中的表达以及与bel-2和bax基因表达的相关性.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Survivin mRNA在64例胆管癌,22例癌旁组织及10例正常胆管组织中的表达,免疫组织化学方法测定胆管癌组织中bcl-2和bax蛋白的表达.结果 胆管癌组织中Survivin基因阳性表达率65.6%(42/64),显著高于其在癌旁组织(9.1%,P<0.01)和正常胆管(0%,P<0.01)中的表达;Survivin基因表达与胆管癌的性别、年龄、部位、分化程度、临床分期及淋巴结转移无明显相关(P>0.05).bcl-2和bax在胆管癌组织中的表达率分别为56.3%(36/64)N45.3%(29/64),Survivin基因表达与bcl-2表达正相关(r=0.404,P<0.01),与bax表达负相关(r=-0.373,P<0.01).结论 Survivin基因在胆管癌的发生、发展过程中可能起重要作用;Survivin有可能成为胆管癌基因治疗的新靶点;在胆管癌的发展中,Survivin与bel-2和bax分别起协同和拮抗作用.     

Apoptosis in prostate cancer: Bax correlation with stage

BACKGROUND: Dysregulation of apoptosis may contribute to the process of prostate tumorigenesis by reducing the rate of cell death. Bcl-2 and bax are important molecules involved in the regulation of apoptosis. The aim of the present study is to examine apoptosis and related regulatory molecular markers in a group of Iranian patients with prostate cancer. METHODS: Paraffin-embedded tissues from 50 patients of prostate carcinoma were examined for the expression of bcl-2 antiapoptotic and bax proapoptotic markers and also proliferation marker, Ki-67, by immunohistochemistry. Detection of apoptotic cells was performed using TUNEL method. Correlation between apoptotic index, proliferation index and bcl-2 and bax expression with stage, pathological grade and Gleason score was determined. RESULTS: Apoptosis was detected in 12% of prostate cancers. No correlation was observed between apoptosis and differentiation status of carcinoma. Bcl-2 expression was detected in 21 of samples. A significant correlation between bcl-2 expression and Ki-67 staining index (r = 0.349, P = 0.012) was observed. High bax protein expression was shown in our study. We found a significant correlation between bax expression and stage of carcinoma (r = 0.388, P = 0.031), but not with the apoptosis index, suggesting the presence of a non-functional bax protein or the role of other proapoptotic molecules. CONCLUSION: The patients in the present study showed a different pattern of apoptosis positivity compared to other reports. Bax expression may be a useful marker for prognosis of prostate cancer.     

丙戊酸钠诱导胃癌细胞凋亡及其机制

目的观察丙戊酸钠（VPA）对胃癌细胞系BGC-823的生长抑制及诱导凋亡作用．并通过检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase3、caspase8、caspase9）的活性和蛋白表达变化探讨VPA诱导凋亡的可能机制。方法M1Tr法检测细胞生长抑制、Annexin V／PI双染检测细胞凋亡、间接免疫荧光法分析caspase3、caspase8、caspase9蛋白变化，分光光度法检测caspase3、caspase8、caspase9活性改变。结果VPA0．75～4．00mmol／L干预BGC-823细胞24h和48h后，细胞生长被明显抑制，细胞凋亡率显著增加[VPA0．75mmol／L，24h时细胞凋亡率为（7．2±0．5）％，48h时为（9．2±1．0）％；VPA4．00mmol／L，24h时为（16．7±2．2）％，48h时为（20．4±1．6）％]，与对照组[24h时细胞凋亡率为（4．9±0．2）％，48h时为（5．1±0．8）％]比较．差异有统计学意义（P〈0．001），并呈时间、剂量依赖趋势；caspase3、caspase9蛋白表达被明显上调．活性升高．与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．001）。caspase8活性及蛋白表达在VPA作用24h后未见明显改变，48h后仅轻度增加。结论VPA可明显抑制胃癌细胞的生长并诱导其凋亡，而且该作用主要通过激活caspase9介导的内源性凋亡途径实现；caspase8介导的外源性细胞凋亡途径未参与或仅部分参与了该诱导过程。     

神经酰胺对人膀胱癌细胞凋亡诱导作用及其机制

目的 探讨神经酰胺（cer）对人膀胱癌细胞的凋亡诱导作用及其机制。方法 不同浓度C2-神经酰胺（C2-cer）作用于膀胱癌T24细胞，噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活率，吖啶橙（AO）荧光染色、流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡，并对半胱天冬酶（Caspase）-3活性、bcl-2蛋白含量和细胞色素C在细胞内的分布变化进行检测。结果 T24细胞存活率与C2-cer浓度呈负相关（r=-0．973，P＜0．01）。对照组和5、10、20、40μmol／L的C2-cer处理组凋亡率分别为2．95％、9．18％、14．23％、29．12％、48．46％，C2-cer处理组凋亡率显著高于对照组（P＜0．01）。Caspase-3活性随C2-cer浓度增加而增加，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。在C2-cer作用下，T24细胞内bcl-2蛋白含量下降，细胞色素C向细胞质释放。结论 降低bcl-2蛋白表达水平，从而促进线粒体细胞色素C释放和Caspase-3激活可能是C2-cer诱导膀胱癌细胞凋亡的重要机制。     

PFKFB3基因在前列腺癌中的表达及其对前列腺癌细胞糖酵解及生长的影响

目的探讨6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3（PFKFB3）基因在前列腺癌中的表达及其对前列腺癌细胞糖酵解及生长的影响。 方法收集我院病理科前列腺增生和前列腺癌蜡块组织,应用免疫组化技术检测PFKFB3的表达水平。通过荧光定量PCR和Western blot实验检测正常前列腺上皮细胞（RWPE-1）和四种前列腺癌细胞系（PC3、LNCaP、DU145、C4-2）中PFKFB3的表达。应用RNA干扰技术敲低PFKFB3表达,采用细胞糖酵解试剂盒、CCK-8和克隆形成实验检测PFKFB3对前列腺癌细胞的糖酵解和增殖活性的影响。 结果与前列腺增生组织相比,前列腺癌组织中的PFKFB3表达量明显增高[（59.7±0.25） vs （3.08±0.16）,P<0.05],且病理Gleason评分越高,PFKFB3表达量也越高。同样PFKFB3在不同前列腺癌细胞系中均明显高表达。抑制PFKFB3基因表达后,前列腺癌细胞的糖酵解和增殖能力显著降低。 结论PFKFB3基因在前列腺癌恶性进展中表达上调,促进肿瘤细胞的糖酵解和增殖,靶向PFKFB3可能为前列腺癌分子诊断和治疗提供潜在的应用价值。     

人参二醇组皂苷对人前列腺癌DU145细胞增殖与凋亡的影响

目的 观察人参二醇组皂苷(panoxadiol saponin PDS)体外对DU145前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用MTT比色法检测不同浓度PDS对DU145细胞增殖活力的影响.吖啶橙染色观察PDS诱导细胞凋亡情况;流式细胞仪分析细胞周期及凋亡,并计算细胞平均凋亡率;细胞免疫化学和Western blot技术观察细胞内激活的caspase3的表达.结果 经中(100mg/L)、高(200mg/L)剂量的PDS处理后,DU145细胞生长受到不同程度抑制,且呈现剂量依赖性;吖啶橙荧光染色可见经中、高剂量PDS处理后的细胞呈明显凋亡形态,并随药物剂量增加,凋亡细胞数增多;流式细胞术结果显示,PDS可明显提高细胞的凋亡率,呈剂量依赖关系;免疫细胞化学染色和Western blot结果,随着PDS剂量增加,细胞内激活的caspase3的表达上调.结论 PDS体外对DU145细胞增殖具有明显的抑制作用,其机制可能与诱导细胞凋亡有关.     

Antitumor activity and downregulation of pro-angiogenic molecules in human prostate cancer cells by a novel thiazolidione compound

BACKGROUND: Current treatments for prostate cancer are effective in many patients with locally advanced disease, but many of these patients eventually have recurrence. It is therefore important to develop alternative therapeutic agents with improved efficacy and tolerability. We recently identified a synthetic thiazolidin compound, 5-(2,4-dihydroxybenzylidene)-2-(phenylimino)-1,3-thiazolidione (DBPT), that induces apoptosis in human colon cancer cells, independent of p53 and P-glycoprotein status. Here, we investigated the antitumor properties and mechanisms of action of this compound in human prostate cancer cell lines. METHODS: The effect of DBPT on cell-cycle progression and apoptosis in LNCaP and DU145 cells was examined by flow cytometry and Western blotting. The effect of DBPT on pro-angiogenic molecules was analyzed by Western blotting and by an enzyme-linked immunosorbent assay. RESULTS: DBPT inhibited the growth of LNCaP and DU145 cells with 50% inhibitory concentrations ranging from 1.6 to 5.9 microM. Treating LNCaP and DU145 cells with DBPT led to a time-dependent cell-cycle arrest in the G(2)/M phase and increased levels of G(2)/M checkpoint proteins, such as cyclin B1, cdc25C, phosphorylated histone H(3), and MPM-2. DBPT induced the phosphorylation of Bcl-xL and Bim, and induced apoptosis, as evidenced by cleavage of caspase and poly (ADP-ribose) polymerase. DBPT also effectively induced apoptosis in Bcl-2-overexpressing DU145 cells. Furthermore, DBPT decreased hypoxia-inducible factor 1 alpha and vascular endothelial growth factor expression in LNCaP cells under both normoxia and hypoxia. CONCLUSIONS: DBPT can suppress proliferation, induce apoptosis, and down regulate pro-angiogenic molecules in prostate cancer cells, and might be useful in treating prostate cancer.     

Induction of anoikis by doxazosin in prostate cancer cells is associated with activation of caspase-3 and a reduction of focal adhesion kinase

The quinazoline family of ₁-blockers (prazosin, doxazosin, and terazosin) induce apoptosis of prostate cells through an ₁-adrenoceptor–independent mechanism. The objective of this study was to gain insight into the non-adrenergic, apoptotic mechanism of action of doxazosin in the prostate and the induction of anoikis by doxazosin. Primary cultures of benign prostate stromal and epithelial cells and the LNCaP (androgen sensitive) and PC-3 (androgen insensitive) prostate carcinoma cell lines were treated with doxazosin (0–50 M). The effects of doxazosin on cell morphology, caspase-3 activity, and the expression levels of focal adhesion kinase (FAK) and integrin-linked kinase (ILK) were examined. Doxazosin induced changes in morphology consistent with anoikis in both benign and cancerous prostatic cells and increased caspase-3 activity. The effects were similar comparing benign cells (which express ₁-adrenoceptors ) and cancer cells (which do not express ₁-adrenoceptors ), but were more robust in benign cells. Norepinephrine had no effect on doxazosin-induced cell morphology or caspase-3 activity. Treatment of PC-3 cells with doxazosin significantly reduced the protein levels of FAK but did not significantly affect the levels of ILK. These findings suggest that doxazosin induces apoptosis and anoikis of prostate cancer cells by a mechanism of action that is ₁-adrenoceptor independent. The apoptosis of cancer cells induced by doxazosin counteracts cell proliferation and may have the potential of retarding or reversing prostate cancer cell growth.     

c-myc靶向小干扰RNA诱导乳腺癌细胞凋亡的作用

目的构建小干扰RNA(siRNA)表达载体,体外观察其诱导乳腺癌细胞凋亡效应。方法基因克隆技术构建人cmyc癌基因特异性siRNA表达载体,体外转染MCF7,48h后检测c-myc癌基因表达状况并观察MCF7凋亡诱导效应。结果(1)成功构建siRNA表体载体:pEGFP-C1/U61、pEGFP-C1/U62和pEGFP-C1/U63;(2)siRNA表达载体转染MCF748h后,pEGFP-C1/U62组显著抑制胞内c-myc表达(80%);(3)转染24h和48h后,pEGFP-C1/U62组凋亡率分别为11.01%和21.30%,明显高于对照组(P<0.01)。结论构建的cmyc靶向siRNA表达载体能显著下调cmyc在MCF7中的过表达,诱导乳腺癌细胞株MCF7凋亡。