中波紫外诱导表皮细胞凋亡机制研究进展

中波紫外线作为日光紫外线的组成部分，可在表皮细胞引起多种生物学效应，也是诱导细胞凋亡的一种有效的刺激因子，其发生机制与多种因素有关，包括p53、bcl-2等基因表达的改变，p38丝裂原激活蛋白激酶、c-jun N-末端蛋白激酶、蛋白激酶C、白介素-1β转换酶等蛋白酶的激活吧及多种因子和抗氧化物的产生等。这种过程在角质形成细胞、黑素细胞、郎格汉斯细胞均可发生，在防止皮肤肿瘤发生中起着一定作用，与诱导皮肤局部免疫抑制也有密切关系。     

表皮细胞凋亡的动力学,形态学和生物化学变化

表皮细胞凋亡的动力学、形态学和生物化学变化徐丽敏①＊综述陈学荣①审校细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）是维持组织器官形态大小，更新、修复平衡的一种生理现象，也是打破该平衡的病理表现。皮肤表皮是更新修复较快的组织，通过角朊细胞凋亡，演变成角质蛋白脱落至外界...     

中波紫外线诱导表皮细胞凋亡机制研究进展

中波紫外线作为日光紫外线的组成部分,可在表皮细胞引起多种生物学效应,也是诱导细胞凋亡的一种有效刺激因子,其发生机制与多种因素有关,包括p53、bcl-2等基因表达的改变,p38丝裂原激活蛋白激酶、c-jun N-末端蛋白激酶、蛋白激酶C、白介素-1β转换酶等蛋白激酶的激活以及多种因子和抗氧化物的产生等.这种过程在角质形成细胞、黑素细胞、郎格汉斯细胞均可发生,在防止皮肤肿瘤发生中起着一定作用,与诱导皮肤局部免疫抑制也有着密切关系.     

白藜芦醇对中波紫外线照射的人角质形成细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:探讨白藜芦醇对中波紫外线（UVB）照射后人原代角质形成细胞（HEK）凋亡和细胞周期的影响。方法:0、25、50、100、150和200 μmol/L白藜芦醇处理人原代角质形成细胞12 h,分别采用CCK-8、BrdU和LDH法检测白藜芦醇对细胞增殖活性和死亡的影响。分别采用50 mJ/cm 2 UVB...     

干扰素α－2b对尖锐湿疣患者皮损表皮细胞凋亡和增殖的影响

为了探讨干扰素 (INF)对尖锐湿疣患者皮损细胞凋亡与增殖的影响,我们采用原位特异性 DNA片段标记法 (TUNEL)观察了细胞凋亡,并用免疫组化法检测了与增殖有关的 Ki－ 67基因产物的表达。 一、材料和方法 1.研究对象及治疗方法：尖锐湿疣患者 18例,男 5例,女 13例;年龄 21～ 60岁;病程 15～ 90 d。治疗前取疣体活检。于疣体下局部注射 INFα－ 2b 300万 U,日 1次,共 10次。治疗结束后,立即取注射部位的疣体为疗后对照标本。对照标本 5份,为外科手术去除的生殖器部位正常皮肤。 2.实验方法： TUNEL原位末端标记试剂盒 (I…     

中波紫外线照射对人角朊细胞表达Ro／SSA抗原的影响

为了探讨紫外线诱发和加重皮肤红斑狼疮的机理，利用体外培养的人角朊细胞，通过间接免疫荧光法检测ＵＶＢ照射对角朊细胞表达Ｒｏ／ＳＳＡ抗原的影响。结果表明：角朊细胞在接受不同剂量ＵＶＢ（５０ｍＪ／ｃｍ２，１００ｍＪ／ｃｍ２，２００ｍＪ／ｃｍ２）照射后细胞膜出现Ｒｏ／ＳＳＡ抗原表达，并与ＵＶＢ剂量有相关性，２００ｍＪ／ｃｍ２的ＵＶＢ照射可使１０．７％的角朊细胞膜表达Ｒｏ／ＳＳＡ抗原。角朊细胞若先与１０－５ｍｏｌ／Ｌ１７－β－雌二醇孵育４８小时再接受ＵＶＢ照射（２００ｍＪ／ｃｍ２），结果较单纯接受相同剂量ＵＶＢ照射的角朊细胞更易表达Ｒｏ／ＳＳＡ抗原，提示ＵＶＢ和雌激素对角朊细胞表达Ｒｏ／ＳＳＡ抗原有协同作用。基于上述结果，推测ＵＶＢ诱发的角朊细胞膜表达Ｒｏ／ＳＳＡ抗原是诱发和加重光敏性红斑狼疮损害的一个重要因素     

龙胆草对HaCaT细胞增殖和凋亡及表皮生长因子受体磷酸化的影响

【摘要】 目的 探讨龙胆草提取物对表皮生长因子（EGF）刺激后HaCaT细胞增殖和凋亡及表皮生长因子受体（EGFR）磷酸化的影响。 方法 取0 ~ 50 g/L龙胆草提取物作用于EGF刺激后的HaCaT细胞24 h,噻唑蓝法检测细胞增殖率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western印迹法检测磷酸化EGFR。 结果 龙胆草提取物浓度依赖性地抑制EGF刺激后HaCaT细胞的增殖（r = -0.991,P < 0.01）,促进EGF刺激后HaCaT细胞的凋亡（r = 0.996,P < 0.05）。同时,龙胆草提取物使EGF刺激后的HaCaT细胞EGFR的磷酸化水平降低,该作用随着药物浓度的增加而增加。 结论 龙胆草可能通过降低EGFR的磷酸化,阻断相关细胞内信号通路来抑制角质形成细胞的过度增殖并促进细胞的凋亡。     

阿维A对人表皮鳞状细胞癌A431细胞株生长及凋亡的影响

目的 研究阿维A对上皮鳞状细胞癌(鳞癌)细胞生长的影响及其诱导凋亡作用。方法 以体外培养的人表皮鳞癌细胞A431细胞和角质形成细胞HaCaT细胞为研究对象,用MTT法观察阿维A对A431细胞和HaCaT细胞的生长抑制作用,用光镜和电镜观察细胞形态,流式细胞仪检测凋亡峰的出现,Annexin-V染色证实凋亡的发生。结果 随着阿维A作用时间的延长及剂量的增加,对A431细胞增殖的抑制作用增加。同样浓度和同样作用时间的阿维A对A431细胞增殖的抑制率高于对HaCaT细胞的抑制率。光镜和电镜观察显示随阿维A作用时间延长,A431凋亡细胞增多。流式细胞仪检测显示随阿维A作用时间的延长,亚G1期凋亡峰明显增加,Annexin-V染色阳性细胞数增多。结论 阿维A具有抗上皮鳞癌细胞生长及诱导上皮鳞癌细胞凋亡作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对紫外线辐射后小鼠表皮细胞凋亡的影响

目的：观察表没食子儿茶素没食子酸酯[（-）-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]脂质体对急、慢性中波紫外线（UVB）辐射后BALB／c小鼠表皮细胞凋亡的影响。方法：EGCG脂质体局部外用于BALB／c小鼠背部皮肤,将小鼠分为5组,分别给予中波紫外线180mJ／cm^2照射1次为急性损伤组：30mJ／cm^2每天照射1次,持续30d,为慢性损伤组。采用末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测小鼠表皮中的凋亡细胞。结果：急性损伤组中接受UVB照射的小鼠表皮中大部分细胞发生凋亡,EGCG脂质体未表现出对表皮细胞凋亡的影响;慢性损伤组中照光加药组的凋亡细胞多于其他组,EGCG脂质体表现为促凋亡作用（P〈0．05）。结论：EGCG脂质体不影响急性大剂量UVB辐射所致的表皮细胞凋亡;对慢性低剂量UVB辐射有促凋亡作用。     

他扎罗汀和NB-UVB对角质形成细胞他扎罗汀诱导基因1 mRNA的影响

目的研究他扎罗汀和窄谱中波紫外线(NB-UVB)对培养的正常人角质形成细胞他扎罗汀诱导基因1(TIG1)mRNA表达的影响。方法用10-7~10-6mol/L他扎罗汀和/或50~100mJ/cm2NB-UVB处理培养的正常人角质形成细胞24h后,用普通RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR法检测角质形成细胞TIG1mRNA水平的改变。结果正常人角质形成细胞可表达少量的TIG1mRNA,10-7mol/L和10-6mol/L他扎罗汀单独处理角质形成细胞24h后,TIG1mRNA的水平升高;50mJ/cm2和100mJ/cm2NB-UVB单独照射角质形成细胞24h后,TIG1 mRNA的水平无明显变化;二者联合作用时,TIG1mRNA的水平明显升高,且高于二者单独处理时的水平(P<0.01)。结论他扎罗汀和NB-UVB联合作用时可能通过协同上调TIG1的表达而发挥二者对角质形成细胞功能的调节作用。     

白藜芦醇对UVB照射的人皮肤成纤维细胞MMP-1水平及细胞凋亡的影响

目的初步探寻红葡萄酒中主要活性成分白藜芦醇对紫外线照射皮肤保护作用的可能机制。方法白藜芦醇对UVB照射的人皮肤成纤维细胞基质金属蛋白酶(MMP)-1水平及细胞凋亡的影响。将培养的人皮肤成纤维细胞分为5组,A组:无UVB照射无干预组,B组:UVB照射无干预组,C组:UVB照射1μmol/L白藜芦醇干预组,D组:UVB照射10μmol/L白藜芦醇干预组,E组:UVB照射100μmol/L白藜芦醇干预组。UVB照射剂量均为30mJ/cm2。用免疫组织化学方法分别检测5组细胞中MMP-1水平,用磷脂酰丝氨酸外翻分析(AnnexinV法)检测细胞凋亡率。结果 A～E组5组细胞MMP-1阳性细胞评分及凋亡率差异均有统计学意义(P均<0.05)。A组评分及凋亡率均明显低于B组,两组比较差异有统计学意义(P均<0.05),B组与C,D,E组评分及凋亡率比较差异均有统计学意义(P均<0.05),C～E组3组评分及凋亡率比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论白藜芦醇可以抑制UVB照射诱导的人皮肤成纤维细胞MMP-1水平的升高,并可减少细胞因UVB照射引起的凋亡,白藜芦醇可能通过此机制对紫外线照射皮肤起到保护作用。     

结合珠蛋白在正常人表皮细胞及HaCaT细胞中的表达

目的 检测正常人表皮细胞及HaCaT细胞中结合珠蛋白(Hp)mRNA及蛋白的表达。方法 用原位杂交及RT-PCR法检测正常人表皮细胞及HacaT细胞中Hp mRNA的表达，用免疫组化法检测正常人表皮中Hp的表达；用免疫组化法及蛋白质免疫印迹法检测HaCaT细胞中Hp的表达。结果 在正常人表皮角质形成细胞(KC)及HaCaT细胞中Hp mRNA表达阳性；正常人表皮朗格汉斯细胞(LC)中Hp mRNA表达阴性；正常人表皮内可见Hp阳性的树突状细胞。用免疫组化法在每个HaCaT细胞胞质中未见明显Hp染色，但用蛋白质免疫印迹法在HacaT细胞中检测到Hp蛋白。结论 正常人KC及HaCaT细胞有合成Hp能力，正常人表皮LC无合成Hp的能力，在HaCaT细胞中有少量Hp表达。     

The Effects of Sunscreens on UVB Erythema and Langerhans Cell Depression

Langerhans cells (LCs) are epidermal antigen-presenting cells capable of initiating a specific T lymphocyte-mediated immune response. It is a well known fact that ultraviolet light B (UVB) suppresses LC number and function. In this study, we confirmed that the sunscreens CITY BLOCK, and TOTAL SUN SHIELD 28 (Clinique Laboratories Tokyo, Japan) protected the epidermis against the depletion of LC number. We also investigated whether or not sunscreens could provide LC protection from ultraviolet ray (UVR) damage other than the prevention of the decrease in the total number of cells. Our data showed that the LC population was depressed after irradiation by 100 mJ/cm² or 10 mJ/cm² of UVB, but recovered to within normal levels after 16 days. Both sunscreens provided protection against erythema and LC depression due to UVB irradiation. However, despite the fact that these sunscreens had completely suppressed UVB erythema, shrinkage of LC dendrites was seen. Apparently, sunscreens prevent UVB erythema, but do not protect against functional changes in LC due to UVB. Recently, it has been reported that sunscreens are less effective in protecting against systemic immunosuppression that against inflammation. The shrinkage of LC dendrites despite sunscreen application may help explain this discrepancy.     

中波紫外线对人真皮成纤维细胞中长链非编码RNA表达的影响

目的 对中波紫外线(ultraviolet rays B,UVB)照射后人真皮成纤维细胞(human dermal fibroblasts,HDFs)中差异表达的长链非编码RNA(long non-ucoding RNAs,LncRNA)进行筛选和功能分析.方法 将处于对数生长期8～11代的HDFs分为对照组和UVB ...     

中波紫外线对人角质形成细胞iNOS的作用

目的观察中波紫外线(UVB)照射对体外培养正常人角质形成细胞(HKC)中诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的作用,探讨紫外线引起皮肤细胞急性损伤的发病机制。方法体外培养HKC,用免疫荧光染色和蛋白印迹技术检测照射后不同时间细胞内iNOS的水平。结果HKC经UVB照射后,免疫荧光法检测到细胞膜胞浆侧有iNOS,蛋白印迹法检测到细胞提取总蛋白中分子量为130kDa的蛋白条带可以被抗iNOS多克隆抗体所识别,二者结果相符合。结论UVB照射可诱导体外培养的HKC在胞浆内产生iNOS,iNOS蛋白的表达可能与紫外线引起的皮肤急性炎症反应有关。     

Immunohistochemical Localization of Nitric Oxide Synthase in Normal Human Skin: Expression of Endothelial-type and Inducible-type Nitric Oxide Synthase in Keratinocytes

Nitric oxide (NO) is a critical mediator of various biological functions. NO is generated from L-arginine by nitric oxide synthase (NOS), which has three isoforms; endothelial-type NOS (eNOS) and brain-type NOS (bNOS) are constitutive enzymes, and inducible-type NOS (iNOS) is expressed after stimulation. We investigated the expression of NOS in normal human skin by an immunohistochemical technique and western blotting analysis. In human skin, epidermal keratinocytes and the outer root sheath were labeled with not only eNOS antibody but also with iNOS antibody. Both eNOS and iNOS protein in epidermal keratinocytes were confirmed by western blotting. eNOS immunoreactivity was observed in endothelial cells, fibroblasts, the arrector pili muscle, apocrine secretory gland, eccrine coiled duct, and eccrine secretory gland. bNOS immunoreactivity was observed in mast cells. No staining with anti-bNOS antibody was observed in any other cell type. Our present findings suggest that epidermal keratinocytes in normal human skin contain both eNOS and iNOS.     

Effects of UVB on fascin expression in dendritic cells and Langerhans cells

BACKGROUND: Fascin is an actin-binding protein that regulates the rearrangement of cytoskeletal elements and their interactions with the cell membrane. Previous studies have indicated that fascin expression is enhanced in DC upon maturation and plays a critical role in T cell activation. Ultraviolet irradiation exerts immunosuppressive effects. OBJECTIVE: We examined the effects of UVB irradiation on the interaction of DC/LC with T cells through fascin. METHOD: Murine bone marrow-derived DC (BM-DC) were induced by recombinant murine GM-CSF and LPS, and UVB irradiation was applied prior to supplementation with LPS. I-A(+) cells (Langerhans cells (LC)) in the epidermal cell suspensions were exposed to UVB irradiation at the beginning of the 24-h culture. BM-DC and LC were analysed by immunohistochemical staining and flow cytometric analyses. To evaluate the effects of UVB irradiation on DC-T cell binding, we examined the clustering of BM-DC with allogeneic CD4(+) T cells under a confocal microscope. RESULTS: Fascin expression in BM-DC and LC was decreased by UVB irradiation. Furthermore, UVB irradiation reduced the ability of BM-DC to cluster with allogeneic CD4(+) T cells. Polarization of fascin and filamentous actin (F-actin) at the point of contact of BM-DC with T cells was also disturbed by UVB irradiation. CONCLUSION: These results suggest that the suppression of fascin expression by UVB irradiation down-regulates the rearrangement of the cytoskeleton and, thereby, antigen presentation in DC/LC.     

亚砷酸对角质形成细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究亚砷酸对不同角质形成细胞增殖及凋亡的影响。方法：以体外培养的角质形成细胞株为对象，不同浓度的亚砷酸处理细胞后，用MTT比色分析法反映细胞增殖变化，用光镜和电镜观察细胞形态，流式细胞仪测定细胞周期分布及凋亡峰的出现，Annexin-V染色荧光照相证实凋亡的发生。结果：0.5-10μmol/L亚砷酸对良性角质形成细胞株HaCaT细胞有明显抑制作用，并呈时间和剂量依赖关系，而该浓度砷剂对A431细胞无明显影响。光镜及HE染色后观察均显示随浓度升高、时间延长，凋亡细胞增多。高于上述范围HaCaT细胞变性死亡增多，流式细胞仪检测细胞周期分布变化，G2M期细胞比例及亚G1期凋亡明显升高，Annexin-V法显示有绿色荧光的阳性细胞。而A431细胞无明显形态和细胞周期分布变化。结论：一定浓度的亚砷酸可抑制HaCaT细胞增殖，并具有诱导凋亡作用，对皮肤鳞状细胞癌A431细胞无明显影响，提示良性表皮角质形成细胞株HaCaT对亚砷酸的处理比鳞状细胞癌A431细胞株更敏感。