神经干细胞移植对老年痴呆模型鼠基底前脑胆碱能神经元和学习记忆能力的影响

目的:探讨神经干细胞移植对老年性痴呆模型鼠基底前脑胆碱能神经元及学习记忆能力的影响.方法:利用无血清培养技术获得新生SD鼠的基底前脑神经干细胞,切断SD大鼠左侧穹隆海马伞,基底前脑注射神经干细胞.4周后行Y迷宫测试学习记忆能力,免疫组化结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑胆碱能神经元变化.结果:损伤组损伤侧的内侧隔核(MS)和斜角带核(VDB)的NGFR阳性神经元大量减少,分别减少59.7%和5 1.4%.NSC移植组损伤侧的NGFR阳性神经元得到补充和保护,MS和VDB细胞数分别下降22.0%和26.1%.同时,NSC移植组损伤侧MS的NGFR阳性神经元的面积、周长显著增大(P＜0.01),灰度显著增加(P＜0.01);损伤侧VDB的NGFR阳性神经元的面积明显增大且灰度明显增加(P＜0.05),周长显著增大(P＜0.01).Y迷宫测试结果显示,NSC移植组大鼠的空间学习能力得到明显改善(P＜0.05),记忆能力得到显著提高(P＜0.01),基底前脑NGFR阳性细胞数与大鼠的空间学习记忆能力呈正相关.结论:神经干细胞移植对老年性痴呆模型鼠基底前脑胆碱能神经元有明显的补充和保护作用,同时大鼠的学习记忆能力得到明显的改善.     

神经干细胞移植对注射192-IgG-saporin致AD动物模型鼠基底前脑ChAT阳性神经元的影响

目的探讨神经干细胞(NSCs)移植对注射192-IgG-saporin致老年性痴呆动物模型鼠基底前脑ChAT阳性神经元的影响。方法将24只成年SD大鼠随机分为正常组、模型组和移植组,每组8只。模型组:左侧侧脑室注射免疫毒素192-IgG-saporin2.5μg/5μL,建立192-IgG-saporin致老年性痴呆动物模型;移植组:动物模型建立后,于基底前脑行神经干细胞移植,4周后行免疫组织化学染色,结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑ChAT阳性神经元数量和形态学参数的变化。结果模型组注射192-IgG-saporin后1个月,观察到注射侧基底前脑内侧隔核(MS)和斜角带垂直支(VDB)ChAT阳性神经元明显减少,分别为正常组的9.70%和14.10%(与正常组相比,P<0.01);移植组ChAT阳性神经元恢复到正常组的71.51%和73.52%(与模型组相比,P<0.01)。细胞形态学参数提示,移植组ChAT阳性神经元中含有大小不等的未成熟细胞。结论神经干细胞移植对192-IgG-saporin致痴呆模型鼠基底前脑ChAT阳性神经元有明显补充和保护作用。     

免疫毒素192-IgG-saporin侧脑室注射建立阿尔茨海默病动物模型的实验研究

目的建立大鼠阿尔茨海默病(Alzheimer′sdisease,AD)动物模型,并观察其学习记忆能力及基底前脑胆碱能神经元改变。方法采用SD大鼠侧脑室注射192-IgG-saporin(2.5μg/5μl),21d后行Y迷宫检测,28d后处死大鼠,免疫组化观察基底前脑神经生长因子受体(NGFR)阳性神经元细胞数的变化。结果Y迷宫检测显示模型组大鼠的学习次数、记忆能力(107.38±9.34、3.75±0.71)较正常组明显下降(P<0.01)。免疫组化显示模型组损伤侧在内侧隔核(MS)和斜角带垂直支(VDB)的NGFR阳性神经元细胞数(7.50±1.77、15.00±2.27)与正常组对应侧比较分别减少81.96%和84.23%(P<0.01),MS和VDB的NGFR阳性神经元面积和周长降低(P<0.05),灰度值升高(P<0.05)。结论免疫毒素192-IgG-saporin侧脑室注射可以模拟AD行为学改变和部分病理学特征。     

Neurturin和NGF联合应用对AD模型鼠基底前脑NGFR阳性神经元的保护作用

本研究目的是探讨neurturin和神经生长因子(NGF)联合应用对穹窿-海马伞(FF)切断后基底前脑胆碱能神经元的保护作用。将这两种因子联合注射到FF切断的大鼠侧脑室,注射一个月后,取脑进行免疫组化结合图像分析方法对内侧隔核(MS)和斜角带核垂直支(VDB)的神经生长因子受体(NGFR)阳性神经元存活情况进行比较分析。结果表明:FF切断一个月后,损伤组损伤侧MS和VDB的NGFR阳性神经元大量减少(分别减少64.8％和51.4％),MS和VDB的NGFR阳性细胞的面积和周长显著降低(P<0.01),OD值显著增高(P<0.01);NGF组损伤侧NGFR阳性神经元受到保护,NGFR阳性经元数显著高于损伤组损伤侧(P<0.01);联合组损伤侧NGFR阳性神经元也受到保护(MS和VDB细胞数分别只下降7.3％和15.4％),与损伤组损伤侧比较NGFR阳性细胞数增加了57.4％和36.0％(P<0.01),也明显高于NGF组(P<0.05);细胞形态学参数明显改善(P<0.05),细胞膜受体含量显著提高(P<0.05)。结果提示,neurturin和NGF联合应用和NGF单独应用均能不同程度地保护基底前脑胆碱能神经元,联合应用效果更佳。     

NSCs移植对AD鼠基底前脑胆碱能神经元和学习记忆能力的影响

目的:探讨神经干细胞(NSCs)移植对侧脑室注射192-IgG-saporin致老年性痴呆(AD)动物模型的治疗作用。方法:24只SD大鼠随机分为正常组,模型组和移植组,每组8只。左侧侧脑室注射192-IgG-saporin5μ(l0.5μg/μl),建立AD动物模型,基底前脑行NSCs移植,Y-迷宫行为检测,NADPH-d组织化学法染色,结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑NOS阳性神经元数目和形态学参数的变化。结果:侧脑室注射192-IgG-saporin1个月,损伤侧基底前脑内侧隔核(MS)和斜角带垂直支(VDB)一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元数明显减少,分别减少到正常组的22.43%和28.36%(与正常组相比P<0.01)。移植组NOS阳性神经元数恢复到正常组的70.22%和74.88%(与模型组相比P<0.01)。细胞形态学参数提示,移植组NOS阳性神经元中含有大小不等的未成熟细胞。大鼠的学习记忆能力与基底前脑NOS阳性细胞数呈正相关。结论:NSCs移植对注射192-IgG-saporin致AD鼠基底前脑胆碱能神经元有明显补充和保护作用,可改善大鼠的学习记忆能力。     

神经干细胞与脑源性神经营养因子联合治疗对老年性痴呆鼠基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元的影响

目的探讨神经干细胞（NSCs）与脑源性神经营养因子（BDNF）联合应用对老年性痴呆鼠基底前脑一氧化氮合酶（NOS）阳性神经元的影响.方法切断成年SD大鼠左侧穹窿海马伞（FF）,基底前脑行神经干细胞移植,同时持续侧脑室注射BDNF,4周后行组织化学染色结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑NOS阳性神经元数量和形态学参数的变化.结果损伤后1个月,损伤侧基底前脑内侧隔核（MS）和斜角带垂直支（VDB）内可观察到NOS阳性神经元明显减少,分别为正常组的35.5%和55.8%,（与正常组相比P＜0.01）;移植组NOS阳性神经元数恢复到正常组的74.7%和95.7%,（与损伤组相比P＜0.01）;联合组NOS阳性神经元数达到正常组的115.2%和151.3%,（与移植组相比P＜0.05及P＜0.01）.细胞形态学参数提示,移植组NOS阳性神经元中含部分中等大小的未成熟细胞;联合组中该中等大小的细胞更多.结论神经干细胞移植与BDNF联合治疗,对AD模型鼠基底前脑MS、VDB的NOS阳性神经元有明显的补充和保护作用,并且联合治疗效果比单纯神经干细胞移植效果更佳.     

侧脑室注射192-IgG-saporin致痴呆动物模型的实验研究

建立老年性痴呆模型大鼠,并观察其学习记忆能力及基底前脑胆碱能神经元数目的变化。在成年SD大鼠左侧侧脑室注射免疫毒素192-IgG-saporin(2.5μg/5μl),3周后行Y迷宫检测其学习和记忆能力;4周后处死大鼠,采用免疫组化结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑ChAT阳性神经元数目的变化。结果显示:模型组大鼠的学习记忆能力与正常组相比明显下降(P<0.01);模型组基底前脑的内侧隔核(MS)和斜角带垂直部(VDB)胆碱能神经元数目分别减少至正常组的9.70%和14.09%,与正常组相比均明显下降(P<0.01);学习、记忆能力与基底前脑胆碱能神经元数目密切相关。上述结果表明应用192-IgG-saporin免疫毒素能成功建立AD大鼠动物模型,该模型可用于抗痴呆药物的筛选及药效的评价。     

免疫毒素192-IgG-saporin致痴呆动物基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元的变化

目的:建立侧脑室注射免疫毒素192-IgG-saporin致痴呆动物模型,观察其学习记忆能力和基底前脑一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元的变化。方法:侧脑室注射免疫毒素192-IgG-saporin,行Y迷宫检测,采用NADPH-d组织化学法染色,结合图像分析技术观察大鼠基底前脑NOS阳性神经元数目和形态学参数的变化。结果:模型组大鼠的学习、记忆能力较正常组明显下降。模型组基底前脑内侧隔核(MS)和斜角带垂直支(VDB)NOS阳性神经元数分别减少到正常组的21.62%和17.70%;细胞周长和面积降低,灰度值升高,均有显著性差异。结论:应用192-IgG-saporin免疫毒素可使基底前脑NOS阳性神经元明显减少。     

银杏叶提取物改善AD模型鼠学习记忆功能的作用

目的 :研究银杏叶提取物 (EGb)对早老性痴呆 (AD)模型鼠学习记忆等认知功能的影响和对基底前脑隔区胆碱能神经元的保护作用。方法 :大鼠随机分成预防组、治疗组和对照组。各组切割右侧海马伞后分别用EGb(预防组及治疗组 )和蒸馏水 (对照组 )灌胃连续 6周。其中预防组在手术前先用EGb灌胃 2周。各组在术后次日及灌胃 6周后进行行为学检测。脑切片经Nissl、NOS组织化学和ChAT免疫组织化学染色 ,观察损伤侧内侧隔核和斜角带垂直支中NOS和ChAT阳性神经元的变化 ,并对ChAT阳性神经元作图像分析。数据分别用方差分析、SNK检验及 χ2 检验作统计学处理。结果 :行为学检测证实 ,EGb用药组AD模式鼠的学习记忆等认知功能较对照组明显改善 ,其中预防组效果又较治疗组为好 ;形态学检测证实 ,EGb用药组AD模式鼠损伤侧内侧隔核和斜角带垂直支中NOS、ChAT阳性神经元数目及ChAT阳性神经元的面积和周径等均优于对照组 ,预防组结果又优于治疗组。结论 :EGb对AD模型鼠学习记忆等认知功能障碍有一定的改善作用 ,这一作用是通过保护基底前脑隔区胆碱能神经元而实现的 ,其中预防效果比治疗效果更优     

NGF/GDNF基因修饰神经干细胞移植对AD模型鼠前脑胆碱能神经元的保护作用

目的　观察NGF GDNF基因修饰神经干细胞 (NSC)单独和联合移植对穹窿海马伞 (FF)切断后胆碱能神经元的保护作用。　方法　将两种基因修饰的NSC单独和联合移植入FF切断的大鼠侧脑室。移植后 3周取脑行ChAT免疫组织化学染色 ,用Student NewmanKaels方法对内侧隔核 (MS)和斜角带垂直支 (VDB)的ChAT阳性细胞数 (损伤侧与正常侧的百分比 )进行计数分析。　结果　NGF组伤侧MS的ChAT阳性神经元数为 81% ,明显高于损伤组 (34% )、NSC组 (36 % )和GDNF组 (5 0 % ) ,P <0 0 1;NGF GDNF组为 6 8% ,明显高于损伤组和NSC组 (P <0 0 1) ,亦高于GDNF组 (P <0 0 5 ) ;GDNF组与损伤组和NSC组相比 ,有统计学意义 (P <0 0 5 )。NGF组和NGF GD NF组伤侧VDB的ChAT阳性神经元数分别为 80 %和 72 % ,明显高于损伤组 (5 6 % )和NSC组 (5 2 % ) ,P <0 0 1,亦高于GDNF组 (5 9% ) ,P <0 0 5 ;GDNF组与损害组和NSC组相比无明显差异 (P >0 0 5 )。　结论　NGF GDNF基因修饰NSC单独和联合移植均能不同程度地保护损伤的ChAT阳性神经元 ,NGF组和NGF GDNF组作用较大 ,GDNF组作用较小。     

Recombinant human NGF-loaded microspheres promote survival of basal forebrain cholinergic neurons and improve memory impairments of spatial learning in the rat model of Alzheimer's disease with fimbria-fornix lesion

Neurotrophic factors are used for the experimental treatment of neurological disorders, such as Alzheimer's disease. However, delivery of the neurotrophic factors into the brain remains a big challenge. Recombinant human nerve growth factor (NGF)-loaded microspheres were fabricated and characterized in vitro and in vivo in our previous study. The present study was to assess the therapeutic benefit of rhNGF-loaded microspheres in treating the rat model of Alzheimer's disease with fimbria-fornix lesion. Recombinant human NGF-loaded microspheres were implanted into the basal forebrain of the rats with fimbria-fornix lesion. Four weeks after implantation in the basal forebrain, immunohistochemical analysis showed that rhNGF-loaded microspheres had a significant effect on the survival of axotomized cholinergic neurons in the medial septum (MS) and vertical diagonal branch (VDB) (p < 0.05). Y-maze tests showed rhNGF-loaded microspheres can significantly improve the ability of spatial learning and memory of the rats with fimbria-fornix lesion (p < 0.05). These results indicate that rhNGF-loaded microspheres are an effective means for the treatment of Alzheimer's disease.     

神经生长因子（NGF）对基底前脑NGF－受体阳性神经元损伤后的保护作用

切断老年鼠（２４月龄）左侧穹窿海马伞，造成隔海马胆碱能系统损伤模型。用免疫组化方法分析脑室注射ＮＧＦ对基底前脑神经生长因子受体（ＮＧＦ－Ｒ）阳性神经元损伤的影响、实验证明损伤一个月后，损伤对照组损伤例内侧隔核和斜角带核垂直支ＮＧＦ－Ｒ阳性神经元数量分别减少了５９．４％和３７．２４％，残存的神经元发生萎缩及表面受体含量增加。ＮＧＦ治疗组，损伤侧的内侧隔核和斜角带核垂直支的ＮＧＦ－Ｒ阳性神经元数量只减少４．４７％和２．３６％，细胞形态学参数及受体灰度值都类似于正常。提示ＮＧＦ对基底前脑ＮＧＦ－Ｒ阳性神经元损伤后有较好的保护作用。     

Nerve growth factor prevents cell death and induces hypertrophy of basal forebrain cholinergic neurons in rats withdrawn from prolonged ethanol intake

We have previously reported that the hippocampal cholinergic fiber network is severely damaged in animals withdrawn from ethanol, and that a remarkable recovery in fiber density occurs following hippocampal grafting, a finding that we suggested to be underpinned by the graft production of neurotrophic factors, which are known to be decreased after ethanol exposure. It is widely accepted that nerve growth factor (NGF) signals the neurons of the brain cholinergic system, including those of the medial septum/vertical limb of the diagonal band of Broca (MS/VDB) nuclei, from which the septohippocampal projection arises. Because neurons in these nuclei are vulnerable to ethanol consumption and withdrawal we thought of interest to investigate, in withdrawn rats previously submitted to a prolonged period of ethanol intake, the effects of intraventricular delivery of NGF upon the MS/VDB cholinergic neurons. Stereological methods were applied to estimate neuron numbers and neuronal volumes in choline acetyltransferase (ChAT)-immunostained and Nissl-stained material. We have found that in ethanol-fed rats there was a significant reduction in the total number of Nissl-stained and cholinergic neurons in the MS/VDB, and that the suppression of ethanol intake further decreased neuron numbers. In addition, the somatic size of ChAT-IR neurons was reduced by ethanol intake, and withdrawal further aggravated neuronal atrophy. NGF treatment prevented the withdrawal-associated loss, and induced hypertrophy, of cholinergic neurons.These findings show that exogenous NGF protects the phenotype and prevents the withdrawal-induced degeneration of cholinergic neurons in the MS/VDB. These effects might be due to the trophic action of NGF upon the basal forebrain cholinergic neurons, including the hippocampal fiber network that conveys this neurotrophin retrogradely to the MS/VDB, and/or upon their targets, that is, the hippocampal formation neurons.     

穹窿海马伞损伤对前脑NOS阳性神经元的影响

本研究用NADPH－d组织化学方法，对成年大鼠一侧穹窿海马个切断后前脑NOS阳性神经元的变化进行了计量学分析。结果表明：损伤1周后，损伤侧内侧隔核和斜角带垂直支的NOS阳性神经元数分别减少到71．79％和85．86％，细胞面积缩小到86．34％和92．71％，细胞灰度值增大到111．86％和120．37％；损伤后2周，损伤侧内侧隔核和斜角带垂直支的NOS阳性神经元数量持续下降，分别减少到63．95％和73．56％，细胞面积缩小到61．78％和89．77％，灰度值增大到116．78％和128．96％；损伤后3、4周，损伤侧两核的NOS阳性神经元的变化和第2周时类似，数值保持在较稳定的水平。提示受损的前脑NOS阳性神经元发生退变。