蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌MCP-1

目的探讨蛋白酶激活受体1(protease-activated receptors1,PAR1)激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)分泌的影响.方法人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和/或凝血酶抑制剂水蛭素进行刺激,刺激时间为2、16 h.用ELISA方法检测上清液中的MCP-1水平.结果经过16 h的培养,PAR1激动剂SFLLR可引起浓度相关性MCP-1的释放增加,增加到300μmol/L时诱导MCP-1的释放量比基础分泌量增加了近12倍,反PAR1激动剂RLLFS不能引起MCP-1的释放增加.凝血酶也可引起浓度相关性MCP-1释放,凝血酶在浓度3 000 U/L时就可引起MCP-1释放量增加,10 000 U/L时诱导MCP-1的释放量达高峰,为基础分泌量的5倍.凝血酶抑制剂水蛭素可以抑制凝血酶对MCP-1的释放作用.时间相关曲线表明,从2 h起即可引起PAR1介导的MCP-1释放增加,16 h达高峰.结论PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌MCP-1,PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用.     

蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌白细胞介素-8

目的探讨蛋白酶激活受体1（PAR1）激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞白细胞介索-8（IL-8）分泌的影响。方法人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内，并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和／或凝血酶抑制剂水蛭索进行刺激，刺激时间为2和16h。用ELISA方法检测上清液中的IL-8水平。结果经过16h的培养，SFLLR可引起浓度相关性IL-8的释放增加，增加到300μmol/L时诱导IL-8的释放量比基础分泌量增加了近16倍，RLLFS不能引起IL-8的释放增加。凝血酶也可引起浓度相关性IL-8释放．凝血酶在浓度1kU／L时就可引起IL-8释放量增加，10kU/L时诱导IL-8释放量达高峰，为基础分泌量的7．5倍。水蛭索可以抑制凝血酶对IL-8的释放作用。时间相关曲线表明，PAR1介导的IL-8释放从2h起即可引起增加，16h达高峰。结论PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌IL-8，PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用。     

凝血酶诱导人肺成纤维细胞释放单核细胞趋化蛋白-1

目的：研究凝血酶对人肺成纤维细胞（HFL-1）释放单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的调节作用。方法：HFL-1分别培养于96孔培养板各孔内,不同浓度（0．001-300nmol／L）凝血酶诱导2、6、9、12、24h后,收集上清液并用ELISA法检测其MCP-1浓度。结果：凝血酶可诱导HFL-1释放MCP-1,其最高释放量是基础分泌量的近17倍。凝血酶诱导的HFL-1释放MCP-1呈浓度和时间相关性。结论：凝血酶可诱导HFL-1表达MCP-1。     

蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌白细胞介素-8

目的 探讨蛋白酶激活受体1(PAR1)激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞白细胞介素-8(IL-8)分泌的影响。方法 人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和/或凝血酶抑制剂水蛭素进行刺激,刺激时间为2和16h。用ELISA方法检测上清液中的IL-8水平。结果 经过16h的培养,SFLLR可引起浓度相关性IL-8的释放增加,增加到300μmol/L时诱导IL-8的释放量比基础分泌量增加了近16倍,RLLFS不能引起IL-8的释放增加。凝血酶也可引起浓度相关性IL-8释放,凝血酶在浓度1kU/L时就可引起IL-8释放量增加,10kU/L时诱导IL-8释放量达高峰,为基础分泌量的7.5倍。水蛭素可以抑制凝血酶对IL-8的释放作用。时间相关曲线表明,PAR1介导的IL-8释放从2h起即可引起增加,16h达高峰。结论 PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌IL-8,PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用。     

蛋白酶活化受体2对大鼠肝星状细胞分泌MCP-1的诱导作用

目的 探讨蛋白酶活化受体2(PAR2)对大鼠肝星状细胞(HSC)分泌单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的调控作用.方法 选用培养7d的SD大鼠HSC并接种于培养板各孔内,分别用不同浓度PAR2激动剂、活性肽、反活性肽和抑制剂刺激,ELISA法检测培养上清MCP-1水平.结果 PAR2激动剂和活性肽可引起HSC MCP-1释放增加,抑制剂可抑制HSC促MCP-1的释放作用,其反活性肽不引起MCP-1释放增加.结论 在大鼠肝纤维化炎症反应中,PAR2可促进HSC分泌MCP-1,促进炎症反应,其反活性肽和抑制剂可能具有抗炎作用.     

特发性肺纤维化病人肺成纤维细胞过度表达单核细胞趋化蛋白-1

目的研究凝血酶对正常人肺成纤维细胞（normalhuman lung fibroblasts,N-LF）和特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis,IPF）病人肺成纤维细胞（F-LF）单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响。方法 N-LF和F-LF细胞分别培养于96孔培养板内,凝血酶诱导4和24h后,收集上清液并用ELISA方法检测MCP-1蛋白水平。结果凝血酶可诱导N-LF和F-LF细胞释放MCP-1,但F-LF细胞的MCP-1分泌水平远远高于N-LF细胞。结论人肺成纤维细胞在肺纤维化过程中过度合成和释放MCP-1,凝血酶可进一步促进其过度表达MCP-1。     

PKC介导凝血酶诱导人肺成纤维细胞单核细胞趋化蛋白-1的表达

摘要：目的研究蛋白激酶C（PKC）在凝血酶诱导人肺成纤维细胞(HLF-1)单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达信号通路中的作
用。方法分别用几种不同类型的PKC抑制剂预处理HLF-1,再用凝血酶（10 nmol/L）刺激HLF-1,利用ELISA法检测上清液中
MCP-1的蛋白表达;提取细胞裂解液中总RNA并逆转录合成cDNA,利用实时荧光定量PCR检测MCP-1 mRNA表达水平。结
果广谱型PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I 和RO-31-8220 可抑制凝血酶诱导的HLF-1 MCP-1 蛋白释放及mRNA表达,而
Ca2+依赖性PKC抑制剂Gö 6976则没有抑制效果。结论非Ca2+依赖性PKC介导凝血酶诱导HLF-1释放MCP-1。
     

大鼠蛛网膜下腔出血后SCH79797对血脑屏障的保护作用

目的:蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后,血浆凝血酶含量明显增加。但是,凝血酶受体(protease-activated receptor-1,PAR-1)对血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)的影响还不清楚。本文欲探讨PAR-1抑制剂SCH79797是否对大鼠SAH后BBB具有保护作用。方法:应用SD大鼠建立SAH模型,SCH79797腹腔注射。SAH后24h,对大鼠脑水含量、神经功能等进行评估。应用Western blot和免疫印迹等方法探讨SCH79797的作用机制。结果:经SCH79797治疗的SAH大鼠脑水含量明显下降,神经功能有所恢复。PAR-1水平下降,VE-Caderin表达增加。在SAH后,PAR-1下游蛋白c-Src和PAK-1使VE-Caderin磷酸化增加,与β-arrestin-2结合增多而被内噬,而SCH79797可以减轻上述病理过程。结论:在SAH后,SCH79797可以通过抑制PAR-1活性对BBB发挥保护作用。     

探讨肺纤维化时表达单核细胞趋化蛋白-1的主要效应细胞

目的 研究凝血酶对人肺上皮细胞及正常人肺成纤维细胞释放单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的调节作用.方法 人肺支气管上皮细胞(normal human bronchial epithelial cells,NHBE)、人肺癌上皮细胞系A549及正常人肺成纤维细胞(normal human lung fibroblasts,NH-LF)分别培养于96孔或6孔板培养板内,凝血酶诱导4h和24h后,收集上清液及细胞裂解液.ELISA方法检测MCP-1蛋白水平:实时荧光定量RT-PCR技术检测MCP-1 mRNA水平.结果 凝血酶可诱导NHBE、A549及NH-LF细胞释放MCP-1,但NH-LF细胞的MCP-1释放量远远高于NHBE及A549细胞;凝血酶还可诱导NH-LF细胞mRNA表达.结论 人肺成纤维细胞可能是肺内表达MCP-1的主要来源细胞,因此在肺纤维化时可能起重要作用.     

蛋白酶激活受体2激动剂诱导上皮细胞分泌MCP-1

目的:探讨蛋白酶激活受体(PAR)-2激动剂对人上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)分泌的影响.方法:人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR-2激动剂,反PAR-2激动剂进行刺激.刺激时间为2,8和16 h.用ELISA方法检测上清液中的MCP-1水平.结果:经过16 h的培养,PAR-2激动剂SLIGKV和tc-LIGRLO均可引起浓度相关性MCP-1释放增加,tc-LIGRLO引起的最大MCP-1释放量达基础分泌量的13倍.反PAR-2激动剂对MCP-1释放的影响较小.时间相关曲线表明,PAR-2激动剂的作用从2 h开始,16 h达高峰.结论:PAR-2激动剂是高效的人肺上皮细胞MCP-1的促分泌剂.其拮抗剂有可能具有抑制呼吸道炎症的作用.     

单核细胞趋化蛋白-1在大鼠肾缺血再灌注中的表达及干预

目的：探讨单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）在大鼠肾脏缺血再灌注中的表达及其药物干预。方法：雄性Wistar大鼠60只,随机分为6组。夹闭肾动脉建立大鼠肾缺血再灌注模型,在再灌注不同时点检测肾组织MCP-1的含量、血肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）水平;光镜下观察肾脏的病理改变并进行肾小管评分;同时,观察药物洛伐他汀对上述指标变化的影响。结果：正常情况下,肾脏中MCP-1少量表达,缺血再灌注0h（单纯缺血）即可观察到肾组织中MCP-1表达升高,至4 h达到峰值,随后其水平逐渐下降。应用洛伐他汀干预后,肾组织MCP-1蛋白表达减少（P〈0.01）;血Cr、BUN比单纯缺血再灌注4 h组降低（均P〈0.05）;病理组织学肾小管评分降低（P〈0.01）。结论：缺血再灌注后肾组织中MCP-1表达升高,提示MCP-1参与肾损伤的发生;洛伐他汀可能通过减少MCP-1的表达抑制炎症反应过程,减轻肾组织损伤。     

高危或极高危原发性高血压患者外周血单核细胞趋化因子-1基因的表达

目的：探讨高危或极高危原发性高血压（EH）患者外周血单核细胞趋化因子-1（MCP-1）表达,为寻找高危或极高危EH患者的治疗手段提供理论依据。方法：运用酶联免疫吸附（ELISA）法测定高危或极高危EH患者65例（EH1组）、低或中危EH患者35例（EH2组）和30例正常对照者外周血MCP-1蛋白含量,用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测外周血单个核细胞中MCP-1 mRNA的表达。结果：与对照组比较,EH1组和EH2组外周血MCP-1蛋白含量和单个核细胞中mRNA表达均显著升高,具有统计学差异（P〈0.05orP〈0.01）;与EH2组比较,EH1组患者外周血MCP-1蛋白含量和单个核细胞中mRNA表达均显著升高,具有统计学差异（P〈0.01）。结论：外周血单个核细胞中MCP-1可能参与了高危或极高危EH的病理生理过程,外周血单个核细胞的MCP-1 mRNA表达上调可能是高危或极高危EH患者外周血MCP-1蛋白含量增高的机制之一。     

EGCG对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及炎症因子调控的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及炎症因子（MCP-1和ICAM-1）分泌的影响。方法通过体外培养的大鼠系膜细胞进行研究。设立低糖对照组（NG）和高糖组（HG、E100、E200、E400,为分别含EGCG0、100、200、400μg·L^-1,分别培养12、24、48h。CCK细胞计数法检测不同浓度EGCG作用下大鼠系膜细胞的OD值,判断细胞增殖情况。采用ELISA方法检测培养细胞上清中MCP-1和ICAM-1蛋白浓度。结果EGCG能抑制高糖时系膜细胞的增殖活性,其抑制作用呈剂量和时间依赖的方式。系膜细胞处于高糖环境时,MCP-1和ICAM-1蛋白表达上调,低浓度的EGCG对MCP-1和ICAM-1蛋白的抑制效果不明显,高浓度的EGCG能明显抑制MCP-1和ICAM-1的分泌。结论在体外高糖条件下,大鼠系膜细胞在48h内以增殖为主,一定浓度的EGCG可抑制其增殖。EGCG可在蛋白水平抑制高糖刺激的大鼠系膜细胞MCP-1和ICAM-1的分泌。