新型维甲酸衍生物诱导NB4细胞分化的初步研究

目的:本研究探讨10种新型维甲酸衍生物对白血病细胞株NB4的抑制增殖和诱导分化活性。方法:维甲酸类衍生物作用于NB4细胞后,通过MTT法检测细胞的增殖。瑞氏染色法在倒置相差显微镜下观察加药处理前后细胞形态学变化。NBT还原实验法分析细胞的分化指标。FCM检测分析细胞周期和细胞表面分化抗原变化。结果:维甲酸衍生物作用3 d后,抑制细胞增殖作用呈剂量依赖效应。10种维甲酸衍生物(10-5mol/L)的诱导分化活性表现在油镜下观察NB4细胞向粒系分化成熟的改变,NBT阳性细胞率增加,细胞表面分化抗原CD11b表达量增加,CD13表达则减少。通过对细胞周期的分析,发现G0/G1期细胞表达量增加,呈G1期阻滞。结论:维甲酸衍生物2a-03,4a-02和5a-02显示有较强的诱导NB4细胞分化的活性。     

全反式维甲酸对小细胞肺癌细胞的分化诱导作用研究

目的探讨全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)对小细胞肺癌细胞的分化诱导作用。方法选择NCI-H446细胞株MTT法检测细胞体外增殖能力,电镜下观察形态,流式细胞仪进行细胞周期分析。RT-PCR法分析维甲酸受体亚型基因。结果全反式维甲酸诱导小细胞肺癌NCI-H446细胞株,细胞增殖能力下降,凋亡增加,更多的细胞被阻止于G1/G0期。结论全反式维甲酸诱导分化能有效抑制小细胞肺癌NCI-H446细胞株的增殖,促进凋亡。     

维胺酯和维胺酸对人早幼粒白血病细胞(HL-60)的分化诱导作用

本文研究了新维甲酸衙生物——维胺酯(RⅠ)和维胺酸(RⅡ)对人早幼粒白血病细胞(HL-60)的分化诱导作用,并与维甲酸(RA)和二甲基亚砜(DMSO)进行了比较。HL-60细胞经RⅠ和RⅡ处理后,细胞对NBT染料还原能力增强,细胞表面出现C₃补体受体等中性粒细胞的分化特征,但作用比RA弱。DMSO诱导上述分化性状出现时间不同,提示维甲酸类药物与DMSO诱导分化的机制可能不同。上述药物均可使HL-60细胞形态按粒系途径向较成熟的方向发展,但变化出现较晚。     

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯诱导神经母细胞瘤SH-SY5Y分化的研究

目的 该实验探讨一种新型的维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-Trifluoromethyl-Phenyl Reti-nate,ATPR)对神经母细胞瘤SH-SY5Y体外增殖及分化的作用.方法 不同浓度的ATPR作用SH-SY5Y细胞后,用MTT法检测细胞增殖状况;吉姆萨染色法于倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化;免疫细胞化学法检测神经元特异性分化标志物——神经元特异性烯醇化酶(NSE);流式细胞仪测定细胞周期的变化;采用RT-PCR检测ATPR作用后RARβ mRNA的表达情况.结果 ATPR呈浓度依赖性抑制SH-SY5Y细胞增殖;倒置显微镜下观察细胞形态趋于成熟分化;NSE水平上升;细胞S期表达减少,G0/G1期表达量有所上升,细胞周期进程受到影响.维甲酸受体RARβ表达量增加.结论 ATPR对SH-SY5Y 细胞具有抑制增殖和一定的诱导分化作用,其作用机制可能与上调RARβ mRNA表达水平有关.     

内源性上调pp-GalNAc-T4基因表达抑制全反式维甲酸诱导NB4白血病细胞分化的机制研究

目的上调PP—GalNAc—T4基因表达抑制全反式维甲酸诱导的NB4白血病细胞分化的机制探讨。方法用全反式维甲酸处理NB4白血病细胞和转染了PP—GalNAc—T4基因的NB4细胞及转染了空载体的NB4细胞,用实时PCR观察这三组细胞的PML—RARα基因表达情况。结果用全反式维甲酸处理转染了pp—GalNAc—T4基因的NB4细胞（NB4-T4细胞株）后,癌蛋白PML—RARα基因表达在NB4一T4细胞株,明显高于未转染PP—GalNAc—T4基因的NB4细胞和转染空载体的NB4细胞（P〈0．01）。结论内源性上调pp—GalNAc—T4后,接着用全反式维甲酸诱导NB4-T4细胞。NB4-T4细胞中PML—RARα基因表达升高,而且NB4-T4细胞没有分化。这些提示,PP—GalNAc—T4可以抑制全反式维甲酸诱导的NB4细胞的分化作用,可能和癌蛋白PML—RARα有关。     

9-顺-维甲酸对肺癌细胞周期及周期因子表达的影响

目的探讨9-顺-维甲酸对肺癌细胞周期及周期因子cyclin D1和cdk4表达的影响。方法用9-顺-维甲酸处理细胞24 h后,在观察细胞生长、流式细胞仪分析细胞周期的基础上,用RT-PCR方法分析细胞周期因子cyclin D1和cdk4表达的变化。结果9-顺-维甲酸作用于肺癌细胞24 h以后,细胞增殖减慢,G₀/G₁期细胞明显增多,S期细胞减少;PG,SPC-A1和L78细胞的cyclin D1表达下降显著;PG,A549和L78细胞的cdk4表达下降显著。结论9-顺-维甲酸可以显著地抑制肺癌细胞增殖和肺癌细胞周期因子cyclin D1和cdk4的表达。     

消癌平注射液对白血病细胞NB4作用的初步研究

目的研究消癌平注射液对白血病细胞株NB4的效应并初步探讨其机制。方法采用台盼兰染色法检测消癌平注射液对白血病细胞株NB4细胞增殖和活力的影响。流式细胞术分析消癌平注射液对NB4细胞周期和细胞表面分化抗原CD11b表达的影响。NBT还原实验检测对NB4细胞分化的影响。免疫印迹方法检测对细胞周期和凋亡相关蛋白的影响。结果消癌平注射液能以时间和剂量依赖方式抑制白血病细胞NB4增殖。诱导NB4细胞发生G0/G1期阻滞,增加P21蛋白质的水平,但不改变P27的表达。对细胞凋亡相关蛋白质的PARP水平没有影响。消癌平注射液能增加NB4细胞表面抗原CD11b的表达,增加NBT阳性细胞数,诱导NB4细胞分化。结论消癌平注射液能通过诱导细胞周期阻滞和细胞分化抑制NB4细胞增殖。     

大豆甙元(S86019)与乳香有效成分Bc-4或阿糖胞苷对HL-60细胞分化的联合诱导

大豆甙元($86019)单独处理HL-60细胞,对细胞生长诱导分化作用较弱,NBT阳性细胞数低于10%。当S86019与乳香有效成分Bc-4联合应用时,对HL-60细胞的生长有明显抑制,并有明显的分化诱导;S86019与Bc-4或Ara-c联合应用,对细胞的增殖有较强的抑制和分化诱导作用。S86019与Bc-4联合应用4d,NBT阳性细胞达80%,75%细胞获得吞噬乳胶颗粒能力,90%细胞向成熟粒细胞方向分化;S86019与Ara-c联合应用4d,NBT阳性反应细胞达70%,82%细胞获得吞噬能力,90%细胞形态发生分化。S86019与Bc-4或Ara-c联合用药4d,可明显阻断细胞由G1期向s期移行,G1期细胞数明显增加。     

全反式维甲酸诱导人急性早幼粒白血病HL-60细胞分化的机制

目的研究全反式维甲酸诱导人急性早幼粒白血病HL-60细胞分化机制。方法用流式细胞仪分析维甲酸对HL-60细胞周期变化的影响，用自制的含9 984个已知基因和EST的高密度基因芯片检测HL-60细胞在维甲酸诱导作用下不同时期的基因表达变化。结果HL-60细胞在1 μmol·L^-1维甲酸持续作用2,4和6 d时,流式细胞仪结果显示48%～73%细胞阻断在G0/G1期;基因表达谱分析发现,黏附分子、组织重建蛋白、转运蛋白、核蛋白体蛋白和涉及氧化酶激活途径的基因表达明显升高。结论基因表达谱的研究结果表明,维甲酸作用HL-60细胞与氧化酶激活途径及组织重建蛋白的表达相关联,并揭示了一些已知和未知功能的基因在HL-60细胞分化与细胞凋亡过程中的作用。     

新型维甲酸衍生物ATPR对肿瘤细胞株SKOV3增殖及分化的影响

目的：探讨新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯（4-amino-2-trifluorometh—yl—phenylretinate,ATPR）对卵巢癌SKOV3细胞的增殖及分化作用。方法：ATPR作用于细胞株SKOV3后,MTT法检测细胞的增殖;吉姆萨染色法在倒置相差显微镜下观察加药处理前后细胞形态学变化;ELISA法检测卵巢癌标志物糖链抗原125（CAl25）;流式细胞术检测细胞周期的变化情况。结果：ATPR呈浓度依赖性抑制SK—OV3细胞增殖,明显抑制作用出现在药物作用48h,但在72h后则更显著;倒置显微镜下观察发现细胞形态学趋于成熟分化;SKOV3中CAl25水平下降;流式细胞仪测定G0／G1期细胞表达量增加,S期细胞表达量减少,细胞周期进程受影响,细胞阻滞在G0／G1期。结论：ATPR对SKOV3细胞具有抑制增殖和-定的诱导分化作用。     

4′,5′,7-三羟基异黄酮对NB4人急性早幼粒白血病细胞生长和分化的影响

目的：研究4′,5′,7-三羟基异黄酮（genistein）对NB4白血病细胞生长和分化的影响,揭示其诱导细胞凋亡作用。方法：分别用NBT还原力分析、DNA电泳分析观察药物诱导分化和凋亡作用;Northern杂交分析和质粒DNA断裂分析检测bcl-2基因表达和DNA拓扑异构酶II活性。结果：Genistein可明显抑制NB4细胞生长,并致细胞大量死亡。在浓度高于40 μmol.L^-1时,可诱导典型的凋亡形态,同时,细胞bcl-2基因表达受到抑制。Genistein可促进DNA拓扑异构酶II介导的DNA断裂, 但诱导NB4细胞分化作用较弱。结论：Genistein通过诱导细胞凋亡来杀伤和抑制NB4细胞的生长,其机制与抑制DNA拓扑异构酶II活性有关。     

Andrographolide inhibits growth of acute promyelocytic leukaemia cells by inducing retinoic acid receptor‐independent cell differentiation and apoptosis

Objectives The growth inhibiting potential of andrographolide was evaluated in three acute promyelocytic leukaemia cell line models (HL‐60, NB4 and all‐trans retinoic acid (ATRA)‐resistant NB4‐R2). Methods In elucidating the mechanisms of growth inhibition, a special emphasis was placed on assessing the induction of differentiation and apoptosis by andrographolide in the primary acute promyelocytic leukaemia NB4 cells. Key findings The compound was 2‐ and 3‐fold more active in inhibiting the growth of HL‐60 and NB4‐R2 cells compared with NB4 cells, respectively. At IC50 (concentration at which growth of 50% of the cells (compared with medium only treated control cells) is inhibited; 4.5 μM) the compound exhibited strong cell‐differentiating activity in NB4 cells, similar to ATRA (IC50 1.5 μM). In the presence of a pure retinoic acid receptor antagonist AGN193109, the growth inhibition of NB4 cells by ATRA was reversed, whereas the activity of andrographolide was not affected. This clearly suggested that andrographolide's cell differentiating activity to induce growth inhibition of NB4 cells most likely occurred via a retinoic acid receptor‐independent pathway. At higher concentration (2 × IC50), andrographolide was an efficient inducer of apoptosis in NB4 cells. Conclusions Taken together, these results suggest andrographolide and its derivatives, apparently with a novel cell differentiating mechanism and with ability to induce apoptosis, might be beneficial in the treatment of primary and ATRA‐resistant acute promyelocytic leukaemia.     

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对MCF-7细胞增殖和分化的影响及其机制研究

目的研究4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-ami-no-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和分化的作用及其可能机制。方法不同浓度的ATPR作用MCF-7细胞后,绘制细胞生长曲线,分析细胞增殖情况;瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞形态学改变;酶联免疫法(ELISA法)检测粘蛋白(mucin 1,MUC-1)活性;RT-PCR法检测维甲酸受体(RARα、RARβ、RARγ)、维甲酸受体诱导基因1(RRIG1)、雌激素受体(ERα、ERβ)mRNA的表达;Western blot法检测RARα、RARβ、RARγ蛋白的表达。结果 ATPR明显抑制MCF-7细胞增殖,且随浓度和时间增加而逐渐增强;镜下观察ATPR作用72 h后MCF-7细胞形态趋向正常细胞分化;ELISA结果显示ATPR明显降低MCF-7细胞培养上清MUC-1浓度(P<0.05);ATPR作用MCF-7细胞72 h后,RARβ、RRIG1、ERβ表达增强(P<0.05),RARγ表达下调(P<0.05),RARα和ERα表达则无明显变化。结论 ATPR可明显抑制MCF-7细胞增殖并诱导其分化程度增高,其机制可能与调节维甲酸受体和雌激素受体平衡,并上调RRIG1表达有关。     

全反式维甲酸诱导小鼠间充质干细胞C3H10T1/2表达碱性磷酸酶

目的分析全反式维甲酸对小鼠间充质干细胞C3H10T1/2表达碱性磷酸酶的影响。方法全反式维甲酸（10-6M）、维甲酸核受体RAR的激动剂Ch55与MAPK信号通路的阻滞剂处理C3H10T1/2细胞,钙钴染色检测碱性磷酸酶活性,定量RT-PCR方法检测量效关系以及时相分布;采用萤光素酶报告基因检测碱性磷酸酶的启动子是否接受维甲酸的调控。结果维甲酸处理C3H10T1/2细胞24h即能够明显上调ALP的活性,具有明显的剂量依赖特性,与RAR有关,无MAPK信号通路的参与,在其转录起始位点上游-512bp的范围内检测到核受体RAR的调控位点。结论维甲酸能够通过核受体RAR直接上调碱性磷酸酶的转录水平。     

Different mRNA expression profiling of nuclear retinoid,thyroid, estrogen and PPARgamma receptors,their coregulators and selected genes in rat liver and spleen in response to short-term in vivo administration of 13-cis retinoic acid

Retinoic acids (RAs) and also their analogs (synthetic retinoids and rexinoids) have been regarded as major therapeutic and/or chemopreventive agents and can regulate a number of diverse processes—such as immune system, hormonal systems. In this work we describe different effects of short-term treatment of Wistar male rats with 13-cis retinoic acid on the regulation of retinoic acid receptors (RARs), retinoid-X receptors (RXRs), thyroid hormone receptors (TRs), ERs, 5′-DI, EGFR and erb-B2/neu genes in liver and/or spleen. Using RT-PCR analysis we have found that administration of 13-cis retinoic acid enhanced expression of RARβ and PPARγ mRNA, and decreased expression of RARα, RARγ, RXRβ and TRβ mRNA in liver. On the other hand, in spleen this treatment resulted in decreased expression of RARα, RARβ, RARγ, TRα and ERβ mRNA. Our findings indicate distinct modulation of various signal pathways by short-term administration of 13cRA, which also differ in spleen when compared to liver. We suggest that even a short-term treatment of rats with 13cRA may affect a reasonable number of steps in retinoid signaling pathways, a number of which might be very likely extended by long-term treatment of mammals by 13-cis retinoic acid.     

维甲酸受体功能及其在肿瘤治疗中的应用

目的对维甲酸受体功能、分子机制及其在肿瘤治疗中的应用进行综述,为以维甲酸受体为靶点的肿瘤治疗和新药研发提供参考。方法检索近年来国内外有关维甲酸受体的研究文献,针对其功能、分子机制以及肿瘤治疗方面的应用,进行分析和总结。结果维甲酸受体通过转录调节、翻译调节和磷酸化调节与其他多条信号通路相互联系、共同调节。维甲酸受体在肿瘤治疗中起到非常重要的作用,维甲酸类似物在诱导多种肿瘤细胞分化、逆转肿瘤细胞的恶性表型方面效果显著。结论维甲酸受体的调节过程极为复杂,因此在肿瘤发生发展及治疗中的作用还有待进一步的研究。