人脂肪间充质干细胞来源外泌体对脓毒症小鼠肺血管内皮细胞损伤的影响及其机制

目的:探讨人脂肪间充质干细胞（ADSC）来源外泌体对脓毒症小鼠肺血管内皮细胞（PMVEC）损伤的影响及其机制。方法:采用实验研究方法。取空军军医大学第一附属医院收治的3例行腹部手术切除患者（均为女性,年龄10~25岁）遗弃的新鲜脂肪组织进行原代人ADSC的分离培养,于第5天采用倒置相差显微镜观察细胞形态。取第3代ADS...     

脂肪源性干细胞移植对顺铂诱导的小鼠急性肾损伤的影响

脂肪源性干细胞( ADSC)具有取材方便、对供体损伤小,以及少量组织即可获取大量干细胞等优点.我们的前期研究表明,ADSC可减轻肾小管上皮细胞结构的损伤,抑制细胞凋亡,而将低氧诱导因子(HIF-1α)转染ADSC后其作用更为明显.本研究观察ADSC移植对急性肾损伤小鼠模型肾功能、肾组织学等变化的影响.     

小鼠肾脏衰老过程中长链非编码RNA的差异表达

目的:分析小鼠肾脏衰老过程中长链非编码RNA（lncRNA）的差异表达情况,探索肾脏衰老的机制。方法:随机选取3、12和24月龄C57BL/6雄性小鼠各5只（体重均为25 g左右）,采用PAS、Masson、半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色方法检测小鼠肾脏病理及细胞衰老情况。高通量测序得到3组小鼠组间差异表达的lnc...     

建立小鼠腹部心脏移植模型的体会

目的:探讨小鼠腹部异位心脏移植手术的技术方法及其改进，为进行移植免疫学研究提供动物模型。方法:采用供心主动脉与受体腹主动脉、供心肺动脉与受体下腔静脉端侧吻合方法对100例小鼠进行腹部心脏移植术，同时测量相关移植部位的重要解剖结构。结果:供心主动脉直径为（1.0±0.1）mm，供心肺动脉直径为（1.3±0.2）mm;受体下腔静脉直径为（1.9±0.2）mm，腹主动脉直径为（0.9±0.1）mm，腹腔大血管平均可利用长度为（6.0±1.0）mm。建模成功率为92%。供、受体手术时间分别为（8.0±1.0）min和（40.2±3.0）min;其中动脉吻合为（9.3±1.2）min，静脉吻合为（7.8±1.7）min。结论:所建立的小鼠心脏移植模型稳定可靠，适用于移植免疫学方面的研究。     

两个部位脂肪来源干细胞的心肌细胞分化潜能比较

目的 比较心包部位和腹股沟部位脂肪组织来源干细胞（ADSC）的免疫表型和分化潜能。方法取Wistar大鼠心包组织和腹股沟脂肪，消化分离原代ADSC，分别用流式细胞技术和免疫组织化学法检测两个部位ADSC的免疫表型和心肌源性转录因子的表达，并进一步用5一氮杂胞苷分别诱导两个部位的ADSC向心肌细胞分化，分析诱导后心脏肌钙蛋白T（cTnT）的表达。结果两个部位的ADSC具有相同的免疫表型：均为CD29、CD44、CD90阳性和CD34、CIM5阴性细胞。原代心包部位的ADSC可以检测到少量cTnT阳性细胞，并有不同程度的GATA-4、Isl-1、Nkx-2．5和MEF-2c表达；而原代腹股沟部位的ADSC除了Isl-1呈弱阳性表达外，其他因子均为阴性表达。两个部位的ADSC经诱导均定向分化成心肌细胞，但心包部位的ADSC的心肌分化能力大于腹股沟部位的ADSC（53％与32％，P〈0．01）。结论不同部位的ADSC有共同的形态和免疫表型。心包部位的ADSC在转录因子和cTnT表达方面体现出较强的心肌分化潜能。     

OPG过表达的ADSC对大鼠牙槽后槽骨缺损的修复作用

目的：探究骨保护素（Osteoprotegerin,OPG）过表达的脂肪间充质干细胞（Adipose-derivedstemcell,ADSC对大鼠牙槽后槽骨缺损修复的影响。方法：选择SD雄性大鼠38只,其中6只用于获得ADSC及ADSCOPG过表达转染,鉴定转染情况并观察不同ADSC的形态、成骨分化、成脂分化及增殖能力;其中8只作为对照组,另外24只建立牙槽后槽骨缺损大鼠模型,随机分为模型组、正常ADSC组和OPG过表达的ADSC组。6周后,Micro-CT扫描观察骨缺损愈合情况;苏木素-伊红（Hematoxylin-eosin,HE）染色观察骨缺损组织病理改变;免疫组化分析组织中碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,ALP）、骨钙素（Osteocalcin,OCN）的表达;Westernblot分析组织中OPG/核因子-κB受体活化因子配体（Receptoractivatorofnuclearfactor-κBligand,RANKL）/核因子-κB受体活化因子（Receptoractivatorof nuclearfactor-κB,RANK）通路蛋白表达。结果：...     

红景天苷对睡眠剥夺老龄小鼠围手术期神经认知障碍的影响

目的:评估红景天苷对睡眠剥夺老龄小鼠围手术期神经认知障碍（perioperative neurocognitive disorders, PND）的影响。方法:清洁级健康C57BL/6小鼠48只,18月龄,体重30~35 g,采用随机数字表法分为3组（每组16只）：对照组（C组）、睡眠剥夺组（D组）和睡眠剥夺+红景天苷...     

细菌外膜囊泡肿瘤疫苗对胰腺癌小鼠肿瘤细胞增殖和CD8 + T细胞浸润的影响

目的:探讨细菌外膜囊泡（OMVs）肿瘤疫苗对胰腺癌小鼠肿瘤细胞增殖和CD8 + T细胞浸润的影响。 方法:采用实验研究方法。采用卵清蛋白（OVA）慢病毒载体质粒pLV-EF1a-hluc-P2A-mNeongreen-CMV-OVA-3Xflag-P2A-puro构建小鼠胰腺癌Pan02-OVA细...     

磁性标记脂肪干细胞修复兔退变椎间盘

目的活体监测Gd-DTPA标记的脂肪干细胞（ADSC）在退变椎间盘内的存活、迁移和转归,观察ADSC对修复及延缓退变的作用。方法将新西兰大白兔30只制成腰椎椎间盘退变模型,2周后行Gd标记的ADSC（Gd-ADSC）移植及ADSC移植,在不同时间点摄X线片、行MR扫描及病理学检查,并与移植PBS比较。结果 Gd-ADSC移植后即刻,SPIR T1WI显示椎间盘内高信号随时间推移迅速减低。与同时间点移植PBS比较,ADSC及Gd-ADSC移植兔椎间盘退变程度较轻,髓核及纤维环内均可见胞浆丰富软骨样细胞。结论 ADSC椎间盘内移植有助于修复退变椎间盘和延缓椎间盘退变;Gd-ADSC移植后1周内可通过MRI进行监测。     

db/db小鼠胰岛的分离与特征分析

目的 分离db/db小鼠胰岛,并对其特征进行检测和分析。方法 采用胶原酶V对10只db/db小鼠胰岛分离进行逆行胰管灌注和消化,用Ficoll-1077和Ficoll-1119进行胰岛的不连续密度梯度纯化,对分离的胰岛进一步进行手工挑选,并用DTZ进行胰岛和纯度鉴定,用透射电镜观察胰岛内部分泌颗粒等情况。结果 经本方法分离可得到db/db小鼠胰岛数量为（122.4±6.6）个/只,当量为（483.6±82.3）IEQ/只,与ICR小鼠胰岛分离结果差异有统计学意义（P<0.05）;db/db小鼠胰岛DTZ染色后显淡红色;胰岛大小指数为（3.96±0.64）,显著大于ICR小鼠胰岛（P<0.05）;透射电镜下显示β细胞中的胰岛素分泌颗粒减少,分泌颗粒颜色较浅。结论 采用本方法可分离得到db/db小鼠胰岛,为后续开展基于胰岛功能和特征变化的2型糖尿病患者治疗研究提供一种参考。     

12 C57BL/6J小鼠肝癌动物模型的建立

目的:建立C57BL/6J小鼠肝癌动物模型，为深入开展肝细胞癌的实验研究打下基础。方法:取90只C57BL/6J小鼠，联合采用二甲基亚硝胺（DEN）/四氯化碳（CCl4）/乙醇诱导20周，观察其肝癌的发生情况。另取10只同种小鼠作为正常对照组。RT-PCR法检测病变肝组织中AFP基因表达。结果:实验组90只小鼠共死亡8只；病理学检查发现，存活的82只小鼠中有71只发生肝癌，诱癌成功率为78.9%（71/90），肝癌小鼠的肝癌组织学类型以中、高分化为主；另11只有不同程度的药物中毒性肝炎或肝硬化（12.2%）；对照组小鼠肝脏均未发现明显异常。成癌组中的肝癌组织RT-PCR检测可见AFP基因表达，非肝癌组织及对照组于组织中无AFP表达。结论:采用DEN/CCl4/乙醇联合能诱导出C57BL/6J甲胎蛋白分泌型小鼠肝癌，诱导时间相对较短，癌变率高，部分病变肝组织中伴有肝炎、肝硬化病理学改变，是较理想的研究肝癌的实验动物模型。     

高脂饮食诱导的肥胖相关肾病C57BL/6J小鼠模型肾周脂肪炎症及机制初探

目的:通过评估高脂饮食（high-fat diet,HFD）诱导的肥胖相关肾病C57BL/6J小鼠肾周脂肪组织炎症,进一步探讨其可能机制。方法:将12只8~10周龄雄性C57BL/6J小鼠,采用简单随机抽样方法分为正常饲料饮食组（ND组, n=6）和高脂饲料饮食组（HFD组, n=6）,喂养14...     

U99194A对睡眠剥夺小鼠认知功能及海马肥大细胞活化的影响

目的:研究多巴胺受体3（dopamine receptor three, D3R）拮抗剂U99194A对睡眠剥夺（sleep deprivation, SD）小鼠认知功能及海马肥大细胞活化的影响。方法:将42只雄性C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为3组（每组14只）：对照组（Ctrl组）、睡眠剥夺组（SD组）及睡眠...     

低物质的量浓度过氧化氢预处理对小鼠骨髓间充质干细胞氧化应激性凋亡的作用及其机制

目的:探讨低物质的量浓度过氧化氢预处理对小鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）氧化应激性凋亡的作用及其机制。方法:采用实验研究方法。通过全骨髓培养法从2只2周龄雄性BALB/c小鼠中分离培养BMSC,鉴定后取第3~7代对数生长期细胞进行实验。将细胞按随机数字表法（分组方法下同）分为用相应终物质的量浓度过氧化氢处理的0 μmo...     

小鼠原位肝移植模型的建立

目的 建立稳定的小鼠原位肝移植模型。方法 采用对端吻合重建肝上下腔静脉，“双袖套法”重建门静脉和肝下下腔静脉。支架法重建胆管。结果 共施行50例小鼠原位肝移植，术后24h存活率92％（46／50），1周存活率84％（42／50），2周存活率80％（40／50）。结论 本实验中小鼠原位肝移植存活率较高，稳定可靠，易于标准化，是一种研究移植免疫的理想的动物模型。     

瘦素缺乏小鼠椎间盘退变的组织学观察

目的探讨瘦素在椎间盘退变中的可能作用。方法采用HE染色观察6月龄雄性ob/ob小鼠（瘦素缺乏小鼠）和野生型小鼠（C57BL小鼠）椎间盘的形态学;免疫组织化学检测Ⅱ型胶原、蛋白聚糖的表达;Real-time PCR检测Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原及蛋白聚糖的基因表达。结果与野生型小鼠相比,ob/ob小鼠椎间盘HE染色表现为椎间盘组织的胶原结构紊乱、髓核碎裂、椎间盘高度降低,免疫组化检测显示Ⅱ型胶原、蛋白聚糖表达减少,Real-time PCR检测显示Ⅱ型胶原、蛋白聚糖基因表达下调而Ⅹ型胶原基因表达上调,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论活体内瘦素缺乏可能加速小鼠椎间盘退变。     

海洋真菌多糖YCP对荷瘤小鼠的抗肿瘤作用

研究海洋真菌多糖YCP对小鼠移植瘤的抑瘤作用和对小鼠免疫功能的影响。采用ICR小鼠S180、Heps移植性肿瘤，C57BL／6小鼠Lewis移植性肿瘤和BALB／cA裸小鼠人肺癌A-549移植性肿瘤实验方法，检测受试药物对荷瘤小鼠的抑瘤作用，以荷瘤小鼠的血清半数溶血值（HC50）及吞噬指数K及吞噬系数α值等为指标，观察药物对荷瘤小鼠免疫功能的影响，与空白对照组相比，YCP（9，3mg／kg）静脉注射（iv）对小鼠移植瘤肝癌实体型（Heps）、肉瘤180（S180）、Lewis肺癌的肿瘤生长具有明显的抑制作用（P〈0．01）．YCP（9，3mg／kg）可显著提高S180荷瘤小鼠的吞噬指数K和血清半数溶血值HC50（P〈0．0l，P〈0．05）．YCP对ICR小鼠S180、Heps移植性肿瘤，C57BL／6小鼠Lewis移植性肿瘤具有明显的抗肿瘤活性，YCP可显著提高S180荷瘤小鼠的免疫功能。     

小鼠肝移植中两种肝动脉重建方法的比较

目的比较小鼠肝移植中两种不同肝动脉重建方法的效果。方法应用雄性C57BL/6小鼠建立小鼠肝脏移植模型,随机分为肠系膜上动脉重建组（14对）和腹主动脉重建组（16对）。手术采用异氟醚吸入麻醉。供肝经门静脉灌注4℃威斯康星大学保存液（UW液）。两组小鼠的肝动脉重建分别采用供体肠系膜上动脉或供体肾下腹主动脉与受体腹主动脉端侧吻合两种方法。移植肝血流恢复后重建肝动脉。胆管采用内支架管的方法重建。观察术后2周移植物的存活情况和肝动脉通畅与否。用组织病理学方法检查移植肝的组织形态变化,用免疫组织化学法观察肝脏再生功能。结果术中无小鼠死亡,手术成功率为100%。肠系膜上动脉重建组供体肝动脉游离时间为（12.1±2.5）min,腹主动脉重建组为（17.3±3.1）min,比较差异有统计学意义（P〈0.05）。腹主动脉重建组肝动脉吻合时间为（14.5±2.9）min,肠系膜上动脉重建组相应为（12.4±3.3）min,比较差异无统计学意义（P〉0.05）。肠系膜上动脉重建组移植物术后2周存活率为93%（1只死于吻合口血栓形成）,腹主动脉重建组为100%。肠系膜上动脉重建组术后2周肝动脉通畅率为86%,腹主动脉重建组为100%。组织病理学检查示两组的移植肝组织正常,肝脏再生反应不明显。结论小鼠肝移植中,与应用肠系膜上动脉重建比较,应用腹主动脉吻合重建肝动脉的效果更好且安全,建议首选供受体腹主动脉吻合重建小鼠肝动脉的方法。     

LncRNA-NEF通过吸附miR-21调节绝经后骨质疏松小鼠的免疫失衡和PD-1/PD-1L介导的Treg-Th17细胞平衡

目的:研究长链非编码RNA（lncRNA）NEF对绝经后骨质疏松症（PMOP）小鼠T细胞免疫功能的调节机制。方法:使用Balb/c小鼠建立去卵巢模型（OVX,模拟PMOP）（46只）,设立假手术（sham）对照组（16只）,从这两组小鼠中用随机数字表法各选6只安乐死后分离培养骨髓间充质干细胞（BMSCs）;构建NEF的...     

脂肪间充质干细胞参与鼠尾淋巴水肿阻塞区淋巴管再生的研究

目的研究脂肪间充质干细胞(Adipose derived stem cells,ADSC)能否参与鼠尾淋巴水肿阻塞区淋巴管再生,为继发性肢体淋巴水肿的治疗提供新思路。方法从GFP转基因小鼠脂肪组织提取ADSC,体外培养扩增至第2代,植入鼠尾淋巴水肿模型中,观察其是否可以参与并促进鼠尾淋巴水肿阻塞区淋巴管再生。结果鼠尾淋巴管荧光造影显示ADSC可以形成淋巴回流的通道,但实验组、对照组的水肿消退情况无明显差异。结论 ADSC可在鼠尾淋巴水肿阻塞区形成淋巴回流通道,但在改善淋巴回流方面未观察到显著作用。