荷丹片对动脉粥样硬化ApoE(-/-)小鼠血清IL-1β和TNF-α表达的影响

目的观察荷丹片对载脂蛋白E基因敲除[ApoE(-/-)]小鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,探讨荷丹片防治动脉粥样硬化(AS)的可能机制。方法 48只8周龄ApoE(-/-)小鼠分为正常对照组(12只,给予普通饲料室温饲养),高脂饲料复合气候箱干预组(36只)。喂养12周后,成功复制ApoE(-/-)小鼠动脉粥样硬化秽浊痰阻证模型后,分为3组:模型组、荷丹片组、阿托伐他汀组。12周后处死各组小鼠,采集标本,HE染色光镜下观察主动脉病理学变化,并测定斑块面积(PA)与管腔面积(LA)之比;酶联免疫双抗夹心(ELISA)法检测血清中IL-1β和TNF-α含量。结果模型组主动脉PA/LA比值大于正常对照组(P0.01),荷丹片组、阿托伐他汀组PA/LA比值则小于模型组(均P0.01),荷丹片与阿托伐他汀组比较,差异无统计学意义(P0.05)。模型组血清中IL-1β和TNF-α表达水平均高于正常对照组(均P0.01),荷丹片组、阿托伐他汀组血清中IL-1β和TNF-α表达水平均低于模型组(均P0.01),荷丹片组与阿托伐他汀组比较,差异均无统计学意义(均P0.05)。结论荷丹片具有防治AS的作用,其机制可能与其降低炎症因子IL-1β和TNF-α的表达,抑制炎症反应有关。     

黄芪甲苷调控MAP3K8介导的细胞焦亡及巨噬细胞极化交互作用防治动脉粥样硬化的机制

目的：探讨MAP3K8介导的细胞焦亡及巨噬细胞极化的交互作用在动脉粥样硬化（AS）中的作用及黄芪甲苷干预作用。方法：10只C57BL/6J小鼠为正常组,普通饲料饲养,40只APOE基因敲除小鼠给予高脂饲料喂养复制AS模型,并随机分成模型组,黄芪甲苷低、高剂量组（低、高剂量组）及MAP3K8抑制剂组（抑制剂组）,每组10只。喂养12周后,各组小鼠分别给予对应的药物进行干预,4周后戊巴比妥钠麻醉小鼠后,剥离主动脉组织,采用HE法观察主动脉形态学变化,扫描电镜法观察主动脉细胞焦亡情况,Western Blot及RT-PCR法检测小鼠主动脉巨噬细胞焦亡及极化相关蛋白及mRNA表达情况。结果：与正常组比较,模型组小鼠主动脉斑块明显,肌层结构紊乱,细胞焦亡水平显著升高,MAP3K8、p-NF-κB p65、p-JNK、NLRP3、ASC、AIM2、IL-18、IL-1β、Caspase-1、Gasdermin D(GSDMD)蛋白表达水平及TNF-α、MIP1α、IL-18、IL-1β、STAT1 mRNA表达水平显著升高（P<0.01）,TGF-β、IL-4、IL-10、Arg-1、STA...     

基于NLRP3炎症小体介导的巨噬细胞焦亡探究黄芩-黄连对动脉粥样硬化的干预机制

目的：探究黄芩-黄连(SRCR)对动脉粥样硬化(AS)小鼠的治疗作用及通过NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体对斑块内巨噬细胞焦亡的影响。方法：载脂蛋白敲除(Apo E^-/-)小鼠通过高脂饲料喂养构建AS模型,随机分为模型组、立普妥组(5 mg·kg^-1)、SRCR低、中、高剂量组(1.95、3.9、7.8 g·kg^-1),正常C57BL/6J小鼠作为正常组。给药8周后,苏木素-伊红(HE)染色观察主动脉斑块病理情况;油红O染色观察主动脉斑块中脂质含量;检测小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;免疫荧光双染检测小鼠主动脉根部斑块组织中小鼠含生长因子样模体黏液样激素样受体(EMR1/F4/80)/NLRP3与F4/80/gasdermin D(GSDMD)共定位表达情况;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测N...     

搜风祛痰中药对动脉粥样硬化ApoE基因敲除小鼠IL-1β及IL-18的影响

目的 探究搜风祛痰中药对动脉粥样硬化的治疗机制。方法 将完成造模程序的ApoE基因敲除小鼠随机分为5大组别,包括模型组,中药低、中、高剂量组和西药组;空白对照组选用C57BL/6小鼠。对照组和模型组予生理盐水灌胃,中药组和西药组分别予不同剂量的搜风祛痰中药及阿托伐他汀干预。HE染色观察斑块面积,Western Blot法检测IL-1β及IL-18水平。结果 模型组较对照组斑块面积增大,且IL-1β以及IL-18指标均有一定的提高(P<0.05);中药各组及西药组较模型组斑块面积缩小,且IL-1β以及IL-18指标均有一定的降低(P<0.05);中药高剂量组与西药组IL-1β及IL-18指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论搜风祛痰中药可以实现IL-1β及IL-18的下调效果,缩小斑块面积,这或许为其治疗动脉粥样硬化的机制之一。     

四妙勇安汤对动脉粥样硬化巨噬细胞泡沫化的影响

目的 探讨四妙勇安汤对于载脂蛋白E敲除（ApoE-/-）小鼠动脉粥样硬化（AS）病变及J774A.1小鼠单核巨噬细胞泡沫化的影响。方法 将30只ApoE-/-小鼠按随机数字表法分为模型组、阿托伐他汀组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组6只，给予西方饮食饲料喂养8周后，连续给药8周。阿托伐他汀组给予3.64×10-5 g/d阿托伐他汀（蒸馏水溶解）灌胃，低、中、高剂量组分别给予四妙勇安汤0.164、0.328、0.655 g/d灌胃；另将6只C57BL/6J小鼠作为对照组，给予普通饮食喂养16周，对照组和模型组每日予相同体积的蒸馏水灌胃。采用Movat法观察小鼠主动脉窦形态改变及泡沫细胞含量；免疫荧光染色观察主动脉窦F4/80表达情况。制备四妙勇安汤含药血清，CCK-8法筛选给药浓度；建立氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的单核巨噬细胞株J774A.1泡沫化模型，分为模型组、四妙勇安汤组，另设对照组；采用油红O染色检测细胞脂质吸收；Western Blot法检测各组细胞清道夫受体分子蛋白表达水平。结果 动物实验证明：与对照组比较，模型组主动脉窦病理形态改变明显，斑块内泡沫细胞含量和F...     

新活络效灵丹对ApoE基因敲除早期动脉粥样硬化小鼠TGF-β的影响

目的:观察新活络效灵丹对ApoE基因敲除小鼠AS早期斑块的病理形态学改变及转化生长因子-β(TGF-β)表达的影响,探讨新活络效灵丹抗AS早期斑块的可能机制。方法:采用高脂饲料喂养ApoE基因敲除小鼠建立AS模型,将45只小鼠随机分为模型组、西药组、中药组,另将C57BL/6J小鼠10只设为空白对照组。在造模的同时即给予药物干预,空白对照组不予处理,模型组予以生理盐水0.3 m L/d,中药组给予新活络效灵丹9.67 g/(kg·d),西药组给予阿托伐他汀钙片3.33 mg/(kg·d),均每日灌胃1次,连续给药13周。取主动脉根部,HE染色进行病理观察,采用RT-PCR技术检测各组TGF-βmRNA的表达水平。结果:模型组主动脉内形成明显的AS斑块,并出现脂质核心,泡沫细胞增多,大量的巨噬细胞的浸润;西药组管壁可见AS斑块,斑块面积明显小于模型组;中药组斑块面积显著减少,部分内膜较为光滑。模型组小鼠主动脉组织中TGF-βmRNA表达水平明显低于空白对照组(P0.01);西药组、中药组小鼠主动脉组织中TGF-βmRNA表达水平明显高于模型对照组(P0.05或P0.01),而中药组小鼠主动脉组织中TGF-βmRNA表达水平高于西药组,但2组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:新活络效灵丹在一定程度上可通过上调保护性因子TGF-β以抑制免疫炎性反应,发挥抗动脉粥样硬化的作用,可能是其防治AS早期斑块的形成机制之一。     

"清心通脉饮"对动脉粥样硬化兔模型相关炎症因子的影响研究

目的:观察清心通脉饮对动脉粥样硬化(AS)兔模型的治疗作用,并探索其可能的机制。方法:新西兰兔采用股动脉球囊扩张术建立AS模型,造模成功后随机分为模型组、阿托伐他汀组和清心通脉饮低、中、高剂量[3.33,6.66,13.32g/(kg·d)]组,每组10只,另取10只兔作为正常组。各组均灌胃给予相应药物或生理盐水,每日1次,连续4周。末次给药后麻醉采血,全自动生化分析仪检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量,酶联免疫吸附测定(Elisa)法检测血清C反应蛋白(CRP)、白介素-1(IL-1)、干扰素-β(IFN-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。取腹主动脉,苏木精-伊红染色法(HE)观察腹主动脉病理学变化,蛋白免疫印迹法(WB)检测腹主动脉组织中p38丝裂原活化蛋白酶(p38MAPK)、核转录因子kappaBp65(NF-κBp65)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、调节蛋白激酶(ERK)蛋白及磷酸化p38MAPK、NF-κBp65、JNK、ERK(p-p38MAPK、p-NF-κBp65、p-JNK、p-ERK)蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组兔血脂水平和TNF-α、IL-1、CRP、IFN-β含量均显著升高(P0.01),腹主动脉p-p38MAPK、p-NF-κB、p-JNK、p-ERK蛋白表达明显升高(P0.01)。与模型组比较,清心通脉饮中、高剂量组和阿托伐他汀组血清TC、TG、LDL-C水平明显降低(P0.01,P0.05);清心通脉饮高剂量组和阿托伐他汀组HDL-C水平明显升高(P0.01,P0.05);清心通脉饮各剂量组和阿托伐他汀组TNF-α、IL-1、CRP、IFN-β含量明显降低(P0.01),腹主动脉p-p38MAPK、p-NF-κBp65、p-JNK、p-ERK蛋白表达明显降低(P0.01,P0.05)。模型组腹主动脉内膜破坏,结缔组织增生,泡沫细胞形成,纤维斑块钙化,坏死;清心通脉饮高剂量组和阿托伐他汀组动脉壁规整,平滑,未见明显脂质沉积,动脉内皮增生不明显。结论:清心通脉饮可改善动脉粥样硬化进展,其治疗动脉粥样硬化的机制可能与调节血脂代谢,下调p-p38MAPK、p-NF-κBp65、p-JNk、p-ERK蛋白表达,抑制炎症反应,降低炎症因子的表达有关。     

基于焦亡通路NLRP3/Caspase-1探讨降脂消斑片防治动脉粥样硬化机制

目的：观察降脂消斑片对高脂饮食（High-Fat Diet,HFD）诱导的动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）小鼠的白细胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）、白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)、肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α）蛋白表达的影响及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nucleotide-Binding Oligomerization Domain-like Receptor Protein 3,NLRP3)/半胱天冬酶1(Cysteinyl Aspartate Specific Proteinase 1,Caspase-1)通路活化的影响,探讨降脂消斑片抑制细胞焦亡的作用机制,为防治AS提供新思路。方法：将实验小鼠分为空白组、模型组、阿托伐他汀组、降脂消斑片给药组（中、高、低剂量组）。除空白组外,其余5组均通过HFD建立小鼠AS模型,6周后检测小鼠主动脉建模情况,预防性给与相应处理因素6周,12周后采用全自动生化仪检测血清总胆固醇（Total Cholesterol,...     

黄连解毒汤调控apoE~(-/-)小鼠粒细胞释放中性粒细胞捕捉网的研究

目的:观察黄连解毒汤对高脂饮食导致的apoE基因敲除(apoE~(-/-))小鼠血浆中性粒细胞捕捉网(NETs)水平及其血管动脉粥样硬化(AS)斑块形成的影响。方法:8周龄雌性apoE~(-/-)小鼠给予高脂饮食,治疗组同时给予黄连解毒汤干预。4周后,常规检测血脂水平,PicoGreen法定量检测血浆中NETs cfDNA的含量,流式细胞仪检测外周血粒细胞、淋巴细胞比例及中性粒细胞/淋细胞(NLR),干预18周后病理检测主动脉血管斑块形成情况。结果:高脂饮食导致apoE~(-/-)小鼠血浆TC和LDL水平升高,血浆NETs cfDNA水平升高,外周血粒细胞比例升高,淋巴细胞比例降低,NLR显著升高。黄连解毒汤和阿托伐他汀干预4周,血脂水平没有明显改变,但NETs cfDNA显著降低,NLR降低。干预18周,高脂导致apoE~(-/-)小鼠主动脉血管斑块数量增多、面积增大,黄连解毒汤和阿托伐他汀减少AS斑块面积。结论:高脂饮食导致apoE~(-/-)小鼠血脂和机体免疫应答水平增高,促进主动脉血管AS斑块形成。黄连解毒汤干预通过调控粒细胞免疫,降低NETs表达,减少高脂引发的免疫损伤,抑制AS斑块形成。     

基于NF-κB/NLRP3/Caspase-1通路介导的巨噬细胞焦亡探究葛根芩连汤对动脉粥样硬化易损斑块的干预机制

目的 探究葛根芩连汤（GQL）通过调控核转录因子（NF）-κB/NOD样受体蛋白3（NLRP3）/胱天蛋白酶（Caspase）-1通路介导的巨噬细胞焦亡对动脉粥样硬化（AS）易损斑块的作用。方法 12只正常C57BL/6CNC小鼠作为空白组，60只同品系的载脂蛋白E基因敲除（ApoE^-/-）小鼠随机分为5组，即模型组、葛根芩连汤低、中、高剂量组（GQL-D、Z、G组）、立普妥组，以高脂饲料喂养造模。空白组、模型组予等体积无菌蒸馏水灌胃；GQL-D、Z、G、立普妥组分别予对应浓度的药物灌胃8周。苏木素-伊红（HE）染色观测主动脉区域斑块情况，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）水平，ELISA检测巨噬细胞甘露糖受体（MMR/CD206）/凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、CD206/NLRP3蛋白表达水平，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组小鼠gasdermin D蛋白C端（C-terminal GSDMD）、gasdermin D蛋白N端（N-terminal GSDMD）、NLRP3、含胱天蛋白酶-1前体（pro-Caspase-1）和NF-κB p65蛋白表达水平。结果 与空白组比较，模型小鼠AS病变程度严重，血清IL-1β、IL-18、组织ASC、NLRP3、C-terminal GSDMD、N-terminal GSDMD、pro-Caspase-1和NF-κB p65表达水平明显升高（P<0.05），CD206水平明显下降（P<0.05）；与模型组比较，给药各组小鼠主动脉壁AS病变程度有所减轻，血清IL-1β、IL-18、组织ASC、NLRP3、C-terminal GSDMD、N-terminal GSDMD、pro-Caspase-1和NF-κB p65表达水平有不同程度下降，CD206水平不同程度上升，部分组结果差异有统计学意义（P<0.05）。结论 GQL对AS易损斑块的干预作用可能是通过调控NF-κB/NLRP3/Caspase-1通路，减轻其介导的巨噬细胞焦亡来实现的。     

稳斑汤对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3表达的影响

目的:观察稳斑汤对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3表达的影响。方法:选取6～8周ApoE基因敲除小鼠建立动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块模型,随机分为空白对照组,模型组,他汀组,稳斑汤低、中、高剂量组。空白对照组和模型组分别予以生理盐水灌胃,西药组及稳斑汤低、中、高剂量组分别予以阿托伐他汀及不同剂量稳斑汤干预。取小鼠主动脉组织HE染色进行病理学观察,并采用蛋白质印迹法(免疫印迹试验)检测Bax、Bcl-2和Caspase-3的蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,模型组的Bcl-2蛋白表达水平均降低(P0.05),Bax、Caspase-3蛋白表达水平均升高(P0.05);与模型组比较,稳斑汤不同剂量组Bcl-2的蛋白表达水平均升高(P0.05),Caspase-3、Bax的蛋白表达水平均降低(P0.05);与他汀组比较,稳斑汤高剂量组Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白表达水平无明显差异(P0.05)。光镜下观察稳斑汤各剂量组和他汀组斑块面积均小于模型组。结论:稳斑汤可能通过下调ApoE基因敲除小鼠AS不稳定斑块凋亡相关蛋白Caspase-3和Bax的表达,上调其Bcl-2的表达来干预AS不稳定斑块的形成及破裂。     

通脉降浊汤对慢性心理应激动脉粥样硬化小鼠炎性反应及NLRP3表达的影响

目的 探讨通脉降浊汤(即加味大柴胡汤)对心理刺激下动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)小鼠炎症反应及NLRP3表达的影响。方法 应用随机数字法将ApoE^-/-小鼠分为AS组、AS+CUMS组、治疗组和阳性药物对照组,每组10只,选取高脂饲料喂饲法进行动脉粥样硬化造模,同时给予慢性不可预知温和刺激干预(CUMS)。正常对照组选用C57BL/6N型小鼠,给予普通饲料喂养。治疗组给予通脉降浊汤,阳性药物对照组给予辛伐他汀片和圣·约翰草提取物片,其余各组给予等量氯化钠溶液灌胃8周。通过HE染色法观察小鼠主动脉内膜的形态学改变,采用ELISA法检测小鼠血浆肾上腺皮质酮及炎性因子IL-1β、IL-18含量,并应用Western blot法检测小鼠主动脉NLRP3蛋白表达,rt-PCR法检测其mRNA含量变化。结果 与正常对照组比较,AS组与AS+CUMS组可见AS斑块形成,且AS+CUMS组可见大量脂质和泡沫细胞堆积;与AS组比较,AS+CUMS组血浆CORT、IL-1β、IL-18含量均升高(P<0.01),主动脉NLRP3蛋白及mRNA表达增多(P...     

清痰化瘀饮对新西兰大白兔动脉粥样硬化斑块的影响

目的通过实验证实清痰化瘀饮联合阿托伐他汀可以减少及稳定兔动脉粥样硬化斑块。方法 24只新西兰大白兔随机分为4组:空白对照组予普通兔饲料,模型对照组、阿托伐他汀治疗组、清痰化瘀饮联合阿托伐他汀治疗组予高脂饲料。12周后从各组随机取出一只处死,与空白组对照,肉眼观察后三组主动脉内膜均有AS斑块形成,确认造模成功。继续高脂饲料喂养后三组,模型对照组每日给予等量生理盐水,阿托伐他汀治疗组和联合治疗组每日一次灌胃给药8周。以图像分析系统对染色切片进行分析,每组随机选取3张切片,每张切片随机挑选4个高倍镜(×400)视野,计算MCP-1、MMP-9的阳性细胞表达面积所占百分比。结果与空白组比较,其余三组的MCP-1、MMP-9阳性细胞表达面积均有显著升高(P0.01);与模型对照组比较,两治疗组MCP-1、MMP-9阳性细胞表达面积均显著降低(P0.05);两个治疗组比较,联合治疗组MCP-1、MMP-9阳性细胞表达面积均显著降低(P0.01)。结论清痰化瘀饮联合阿托伐他汀能显著减少及稳定新西兰大白兔动脉粥样硬化斑块,且疗效优于单纯使用西药。     

天香丹对动脉粥样硬化秽浊痰阻证 ApoE（－/－） 小鼠血清炎性细胞因子及NF-κB p65信号通路的影响

目的观察天香丹对动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）秽浊痰阻证载脂蛋白E基因敲除 ［apolipoprotein E gene knock-out,ApoE（－/－） ］ 小鼠血清中炎性细胞因子白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）以及主动脉组织中核因子-κB p65（NF-κB p65）信号通路的影响,探讨天香丹防治AS的可能机制。方法48只8周龄ApoE（－/－） 小鼠分为正常对照组（12只,给予普通饲料室温饲养）,高脂饲料复合气候箱干预组（36只）。喂养12周后,成功复制ApoE（－/－） 小鼠AS秽浊痰阻证模型后,分为3组：模型组、天香丹组、阿托伐他汀组。12周后处死各组小鼠,采用酶联免疫双抗夹心（ELISA）法检测血清中IL-1β和TNF-α含量;蛋白免疫印迹（Western blot）法检测主动脉组织中NF-κB p65蛋白表达水平。结果模型组IL-1β、TNF-α浓度高于正常对照组（P<0.01）,天香丹组、阿托伐他汀组IL-1β、TNF-α浓度低于模型组（P<0.01）;天香丹组与阿托伐他汀组比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;此外,模型组主动脉组织中NF-κB p65蛋白磷酸化水平高于正常对照组（P<0.01）,天香丹组、阿托伐他汀组NF-κB p65蛋白磷酸化水平均低于模型组（P<0.01）;天香丹组与阿托伐他汀组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论天香丹能够防治AS,其机制可能与抑制NF-κB p65信号通路的活性,下调炎性细胞因子IL-1β、TNF-α表达水平,进而抑制炎症反应有关。     

稳斑汤对ApoE基因敲除小鼠AS不稳定斑块凋亡相关基因Caspase-3表达的影响

目的观察稳斑汤对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块凋亡相关基因半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法利用6～8周龄ApoE基因敲除小鼠建立动脉粥样硬化不稳定斑块模型,并随机分为空白对照组,模型组,稳斑汤低、中、高剂量组,他汀组。空白对照组及模型组均给予0.9%氯化钠溶液灌胃,稳斑汤低、中、高剂量组及他汀组分别给予不同剂量稳斑汤及阿托伐他汀钙片干预。采用HE染色进行主动脉组织病理学观察,利用反转录PCR法检测Caspase-3 m RNA水平。结果与空白对照组比较,模型组Caspase-3 mRNA表达水平均升高(P 0.05);与模型组比较,稳斑汤中、高剂量组Caspase-3 m RNA表达水平均降低(P 0.05);与他汀组比较,稳斑汤中、高剂量组Caspase-3 m RNA表达水平无明显差异(P 0.05)。镜下观察斑块面积,模型组小于稳斑汤各剂量组和他汀组。结论稳斑汤可能通过下调ApoE基因敲除小鼠AS不稳定斑块凋亡相关基因Caspase-3的表达来干预动脉粥样硬化不稳定斑块的形成及破裂。     

田蓟苷对高脂饮食ApoE~(-/-)小鼠抗动脉粥样硬化活性及作用机制

目的探讨田蓟苷对高脂饮食ApoE~(-/-)小鼠抗动脉粥样硬化活性及作用机制研究。方法将ApoE~(-/-)小鼠60只随机分为普通饮食组,高脂饮食组,田蓟苷低、中、高剂量组(40、120、200 mg/kg)和阿托伐他汀给药组(15 mg/kg),1次/d,连续给药12周后,收集小鼠血清,检测其中TC(总胆固醇)、TG(甘油三酯)、HDL-C(高密度脂蛋白胆固醇)、LDL-C(低密度脂蛋白胆固醇)、ALT(谷丙转氨酶)、AST(谷草转氨酶)、TBA(总胆汁酸)和FBG(空腹血糖)水平。通过油红O染色对各组小鼠主动脉进行染色,并计算主动脉斑块面积占总血管面积之比。采用Western blot检测各组小鼠肝脏组织中PI3K(磷脂酰肌醇3-激酶)、p-PI3K、AKT(蛋白激酶B)、p-AKT、SREBP-2(固醇调节元件结合蛋白2)、LDLR(低密度脂蛋白受体)蛋白表达。结果与普通饮食组比较,高脂饮食组ApoE~(-/-)小鼠血清中TC、TG、LDL-C和FBG水平均升高,而HDL-C和TBA水平降低,差异具有统计学意义(P0.05,P0.01)。与高脂饮食组比较,田蓟苷高剂量组和阿托伐他汀组ApoE~(-/-)小鼠血清TC水平降低,田蓟苷高剂量组血清TG水平降低,田蓟苷低、中、高剂量组和阿托伐他汀组血清LDL-C水平均降低、主动脉斑块的沉积减少,田蓟苷高剂量组和阿托伐他汀给药组小鼠肝脏组织中p-PI3K、p-AKT、SREBP-2和LDLR蛋白表达升高,差异具有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论田蓟苷可降低高脂饮食ApoE~(-/-)小鼠血脂代谢水平,减少主动脉斑块沉积,可能与调节肝脏中SREBP-2和LDLR蛋白表达有关,从而发挥抗动脉粥样硬化的作用。     

清痰化瘀饮对新西兰大白兔动脉粥样硬化炎性因子的影响

目的通过实验证实清痰化瘀饮联合阿托伐他汀可以改善兔动脉粥样硬化的炎症反应。方法24只新西兰大白兔随机分为4组：空白对照组,模型对照组,阿托伐他汀治疗组,清痰化瘀饮联合阿托伐他汀治疗组。空白组予普通兔饲料,其余3组予高脂饲料。12周后各组取外颈静脉血8ml。继续高脂饲料喂养后三组,模型对照组每日给予等量生理盐水,阿托伐他汀治疗组和清痰化瘀饮联合阿托伐他汀治疗组每日一次灌胃给药8周。再次取血8ml。测定Fg、Hs-CRP、IL-18三个炎性因子指标,与治疗前进行对比分析。结果治疗前与空白组比较,其余三组Fg、Hs-CRP、IL-18均有显著升高（P〈0．01）;治疗后组内比较,两治疗组3种炎性因子指标均显著降低（P〈0．05）;治疗后组间比较,与模型对照组比较,两个治疗组的3种炎性因子指标均显著降低（P〈0．01）;两个治疗组比较,清痰化瘀饮联合阿托伐他汀治疗组在降低3种炎性因子指标方面,疗效优于阿托伐他汀治疗组（P〈0．05）。结论清痰化瘀饮联合阿托伐他汀能显著降低动脉粥样硬化新西兰大白兔Fg、Hs-CRP、IL-18三种炎性因子水平,且疗效优于单纯使用西药。     

基于PI3K/Akt/mTOR通路探讨补肾抗衰片介导自噬调控动脉粥样硬化的机制

目的观察补肾抗衰片对动脉粥样硬化(AS)和巨噬细胞自噬的影响并探讨其分子机制。方法采用单纯高脂饮食喂养法建立AS兔模型。于4周末,24只兔随机分为对照组、模型组、补肾抗衰片[1g/(kg·d)]组及阿托伐他汀[5mg/(kg·d)]组,每组6只,干预8周。检测血清TC、TG、LDL-C和HDL-C的水平;油红O染色观察动脉粥样硬化斑块形成情况,HE染色观察血管内膜病理变化,计算内膜增生面积与中膜面积的比值;检测LC3Ⅱ蛋白、Beclin-1蛋白表达水平。建立氧化低密度脂蛋白(100μg/mL)诱导的巨噬细胞株RAW264.7自噬模型,分为模型组、补肾抗衰片组(10%含药血清)和雷帕霉素(10nmol/L)组,另设正常对照组。Western blot技术检测各组细胞LC3Ⅱ、p62、PI3K、p-Akt、p-mTOR的蛋白表达水平。结果在体研究结果显示,与模型组比较,阿托伐他汀组血清TC、TG、LDL-C水平降低(P0.01),HDL-C水平升高(P0.01);阿托伐他汀组和补肾抗衰片组主动脉内中膜面积比值降低(P0.05,P0.01),主动脉LC3Ⅱ阳性面积百分比、Beclin-1蛋白的表达升高(P0.05,P0.01)。体外研究结果显示,与模型组比较,补肾抗衰片组和雷帕霉素组细胞LC3Ⅱ/Ⅰ表达水平升高(P0.01),p62、PI3K、p-Akt、p-mTOR表达降低(P0.01)。结论补肾抗衰片能减轻AS病变程度,上调自噬水平,其机制可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,促进巨噬细胞自噬相关。     

疏肝温胆汤对动脉粥样硬化家兔LXRα，NF-кB及内皮功能的影响

目的:基于肝X受体α/核转录因子-κB(LXRα/NF-κB)通路探讨疏肝温胆汤对家兔动脉粥样硬化的作用及机制。方法:采用小牛血清白蛋白免疫损伤、高脂饲养和束缚情志应激的方法建立肝郁型的新西兰兔动脉粥样硬化模型。随机分为6组,分别为正常组,模型组,阿托伐他汀组,疏肝温胆汤低、中、高剂量组(2. 18,6. 54,19. 62 g·kg~(-1)·d~(-1))。造模成功后,分别给予阿托伐他汀、疏肝温胆汤低、中、高剂量灌胃,正常组和模型组均予同浓度生理盐水灌胃。连续灌胃6周。给药结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色法检测各组主动脉的病理变化;分别采用酶法、硝酸还原酶法和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组血清中总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)的水平;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测主动脉组织中C反应蛋白(CRP),白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9) mRNA的表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测主动脉组织的LXRα/NF-κB信号通路蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组血管腔明显狭窄,粥样斑块形成明显,可见大量的细胞内泡沫样改变,而阿托伐他汀组和疏肝温胆汤高、中、低剂量组的血管狭窄、粥样斑块及泡沫样改变的程度均较模型组低。与正常组比较,模型组的TG,TC和LDL-C升高(P 0. 05),HDL降低(P 0. 05),血清中NO明显降低(P 0. 05),ET-1明显升高(P 0. 05),hs-CRP,IL-1β,IL-6和MMP-9的表达均明显升高(P 0. 05),LXRα的蛋白表达明显降低(P 0. 05),NF-κB的蛋白表达明显升高(P 0. 05);与模型组比较,阿托伐他汀及疏肝温胆汤低、中、高剂量组的TG,TC和LDL-C含量明显降低(P 0. 05),阿托伐他汀组和疏肝温胆汤高剂量组血清中NO明显升高(P 0. 05),ET-1明显降低(P 0. 05),阿托伐他汀组及疏肝温胆汤低、中、高剂量组中CRP,IL-1β,IL-6和MMP-9的表达量均降低(P 0. 05),阿托伐他汀组、疏肝温胆汤各剂量组中LXRα的蛋白表达量均升高(P 0. 05),NF-κB的蛋白表达均明显降低(P 0. 05)。结论:疏肝温胆汤通过调控LXRα/NF-κB信号通路改善血管内皮细胞功能和动脉粥样斑块的稳定性,从而发挥抗动脉粥样硬化效应。     

隔药饼灸对动脉粥样硬化兔主动脉内皮细胞PPARγ蛋白及斑块中MMP-9 mRNA表达的影响

目的:观察隔药饼灸对动脉粥样硬化(AS)兔主动脉内皮细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)蛋白及斑块中基质金属蛋白酶-9 mRNA(MMP-9 mRNA)表达的变化,探讨隔药饼灸对兔AS的形成及斑块稳定性的影响。方法:将50只新西兰大耳白兔,通过高脂饲料喂养及免疫损伤法建立兔AS模型,随机分为空白组、模型组、直接灸组、隔药饼灸组和阿托伐他汀组,每组10只,治疗16周后用免疫组化法检测AS兔主动脉内皮细胞中PPARγ的蛋白表达;原位杂交法检测斑块中MMP-9 mRNA的表达。结果:隔药饼灸组、直接灸组和阿托伐他汀组PPARγ的蛋白表达和MMP-9 mRNA的表达均明显低于模型组(P<0.01,P<0.05);隔药饼灸组和阿托伐他汀组动脉粥样硬化斑块中MMP-9 mRNA的表达明显低于直接灸组(P<0.05,P<0.01),隔药饼灸组和阿托伐他汀组比较差异无统计学意义。结论:隔药饼灸可通过激活AS兔主动脉内皮细胞PPARγ的蛋白表达和抑制斑块中MMP-9 mRNA的表达,起到干预AS形成和稳定AS斑块的作用。