GM-CSF基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的：构建人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）基因的重组腺病毒载体，为进一步研究GM-CSF基因在肿瘤基因治疗中的应用提供实验基础。方法：采用PCR方法，从重组质粒pcDNA3．1-GM-CSF扩增出GM-CSF基因片段，通过穿梭质粒pShuttle，将带有CMV启动子的目的片段克隆入Adeno-X腺病毒DNA中，获得重组腺病毒DNA，通过脂质体转染HEK293细胞，经包装扩增后，获得重组腺病毒Adeno-X-GM-CSF，PCR鉴定，ELISA法检测表达产物。结果：含GM-CSF基因的重组腺病毒Adeno-X-GM-CSF构建成功，经PCR鉴定和DNA测序等证实了其正确性，重组腺病毒上清液中GM-CSF表达量达26ng／mL。结论：含GM-CSF基因的重组腺病毒构建成功。     

GM-CSF基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的:构建人粒细胞 巨噬细胞集落刺 激因子(GM CSF)基因的重组腺病毒载体,为进 一步研究GM CSF基因在肿瘤基因治疗中的应 用提供实验基础。方法:采用PCR方法,从重 组质粒pcDNA3.1 GM CSF扩增出GM CSF 基因片段,通过穿梭质粒pShuttle,将带有CMV 启动子的目的片段克隆入Adeno X腺病毒 DNA中,获得重组腺病毒DNA,通过脂质体转 染HEK293细胞,经包装扩增后,获得重组腺 病毒Adeno X GM CSF,PCR鉴定,ELISA法 检测表达产物。结果:含GM CSF基因的重组 腺病毒Adeno X GM CSF构建成功,经PCR鉴 定和DNA测序等证实了其正确性,重组腺病毒 上清液中GM CSF表达量达26ng/mL。结论: 含GM CSF基因的重组腺病毒构建成功。     

GM-CSF腺病毒感染骨髓细胞诱生树突状细胞的研究

树突状细胞(Dendritic cells，DC)是一类专司抗原提呈功能的免疫细胞，富含MHC-Ⅱ等免疫应答相关分子，能刺激静息的、以及经预激的T细胞产生免疫应答，因此被认为是T细胞免疫应答反应的始动者和刺激者，研究DC细胞在抗原提呈中的生化机理及其在免疫治疗中的作用等重要前提是要获得足够数量的DC细胞，但是DC细胞在组织中的含量很小，这给研究带来很大的困难。现已明确，DC细胞起源于骨髓，     

IFN-α联合GM-CSF诱导胃癌患者外周血单个核细胞分化为树突状细胞

目的： 探索干扰素-α（interferon-α,IFN-α）联合粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF）体外诱导胃癌患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）向树突状细胞（dendritic cell,DC）分化的可能性。 方法： 10 例胃癌患者PBMC分别用GM-CSF 100 ng/ml联合IFN-α 500 IU/ml（命名为IFN-α DC） 或GM-CSF 100 ng/ml联合50 ng/ml IL-4（命名为IL-4 DC）体外培养,然后用CD40L、LPS诱导DC成熟。Giemsa染色法观察IFN-α DC和IL-4 DC的形态,流式细胞术分析IFN-α DC和IL-4 DC表面CD1a、CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达情况,同种异体混合淋巴细胞反应（mixed lymphocyte reaction,MLR）检测不同的成熟DC刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力。 结果： IFN-α DC和IL-4 DC均呈现典型DC形态。IFN-α DC和IL-4 DC分别在诱导第3天和第5天时,细胞表面CD1a、CD80、CD83、CD86和HLA-DR表达达到较高水平,成熟IFN-α DC表面CD83\[（78.25±15.36）% vs （50.14±10.24）%,P<0.05\]和CD86\[（84.84±10.12）% vs （62.93±15.12）%,P<0.05\]的表达均高于成熟IL-4 DC。成熟IFN-α DC刺激异体T淋巴细胞增殖能力强于未成熟IFN-α DC（P<005）。在DC与T细胞数量比为1∶40和1∶20时,成熟IFN-α DC刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力明显强于成熟IL-4 DC\[（39.43±9.21）% vs （27.34±10.63）%,（60.31±7.86）% vs （48.63±6.25）%;均P<0.05\]。 结论： 相比常用的IL-4联合GM-CSF诱导方法,IFN-α联合GM-CSF可以在更短时间内将胃癌患者PBMC诱导成具有更强刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力的DC细胞,这可能与其表面CD83和CD86表达增高有关。     

人外周血树突状细胞的体外扩增及鉴定

树突状细胞(DC)作为抗原提呈细胞,在激发T细胞免疫应答及T细胞依赖性抗体生成中起重要作用,骨髓及外周血的CD34造血前体细胞在GM-CSF和TNF-α的作用下,可在体外分化发育,生成树突状细胞.本研究从正常人外周血分离获得单核细胞,加入100ng/ml hGM-CSF、500U/ml hIL-4,体外培养1周后,获得大量高纯度的树突状细胞,其高表达MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类分子及共刺激分子B7-1和CD40,能强烈激发同种异体T淋巴细胞增殖,培养条件以应用自体血清或胎牛血清为最佳;单独应用hGM-CSF只能生成巨噬细胞;在培养末期加入TNFα可促进DC进一步成熟.本研究为DC的深入研究与临床应用奠定了基础.     

GM-SCF与LMP2A融合基因GC2A重组腺病毒载体的构建与鉴定

目的:构建人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因与EB病毒基因LMP2A融合基因GC2A的重组腺病毒表达载体。方法:将构建的融合基因GC2A定向亚克隆至质粒pAdTrack-CMV上,经酶切及电泳检测后,PmeL酶切pAdTrack-CMV-GC2A,与质粒pAdEasy-1一起电转化E.coli.BJ5183,筛选重组菌,经PacⅠ酶切鉴定后用磷酸钙法转染QBI-293A细胞,包装成重组腺病毒vAd-GC2A,采用pAdTrack-CMV-GC2A中报告基因GFP的表达,观测其表达情况。结果:采用内切酶Bg1Ⅱ和EcoRⅤ对质粒pAdTrack-CMV-GC2A进行双酶切分析,电泳后可观察到约1 961和9 200bp的片段。重组腺病毒载体经PacⅠ酶切后观察到约33kb的DNA片段和4.5kb的DNA片段,说明pAdTrack-CMV-GC2A和pAdEasy-1的重组发生在ori和右臂区,pAd-GC2A经PacⅠ酶切线性化后,磷酸钙法转染293细胞,56h后在荧光倒置显微镜下可看到有绿色荧光出现,说明已转染成功,并能在293细胞中表达。结论:融合基因GC2A正确插入,真核表达载体vAd-GC2A成功构建,在293细胞中包装获得重组腺病毒。     

人脐血来源的树突状细胞的体外培养扩增

目的　研究人脐血来源的树突状细胞 (DCs)体外培养扩增 ,并检测其功能。方法　应用Ficoll Hypaque离心获得界面细胞 ,贴壁培养 2h ,获得单个核细胞 ,体外以重组hGM CSF( 5 0ng/ml) hIL 4( 10ng/ml) hTNF α( 5 0ng/ml)诱导培养 14天。在DCs发育过程中 ,在光镜下观察其生长情况 ,应用流式细胞仪检测DCs表型。采用MTT法检测DCs活化的T细胞对肿瘤细胞的杀伤性。结果　第 6天体外培养的DCs由贴壁状态变为悬浮毛刺状细胞 ,随着培养时间的延长 ,此类细胞数量增多 ,第 12天为形态不规则的毛刺状 ,为典型树突状细胞形态。流式细胞仪检测表明 ,成熟DCs高水平地表达HLA DR、CD 80、CD83、CD 1a、CD 11c、CD12 3。被激活的T细胞对 2种来源于不同组织的肿瘤细胞均产生了明显的杀伤性。结论　人脐血经rhGM CSF rhIL 4 hTNF α体外诱导培养 ,能诱导出DCs。     

转GM-CSF基因瘤苗联合IL-12治疗T细胞淋巴瘤的实验研究

目的　探讨用转粒细胞巨噬细胞 集落刺激因子 (GM CSF)基因瘤苗 ,联合白介素 12 (IL 12 )治疗小鼠T细胞淋巴瘤的方法。方法　将小鼠GM CSF真核表达质粒 ,用电穿孔法导入小鼠T细胞淋巴瘤细胞系RMA ,有限稀释法制备单个细胞克隆 ,经RT PCR、骨髓祖细胞增殖实验和集落形成实验 ,筛选相对高表达GM CSF的RMA克隆 ,该克隆细胞用丝裂霉素灭活后免疫小鼠 ,以诱导产生抵抗RMA肿瘤细胞再攻击的能力 ,并观察其与IL 12联合应用对淋巴瘤的治疗作用。结果　获得了高表达GM CSF的小鼠T细胞淋巴瘤克隆 ,其动物体内致瘤活性降低 ,将其用丝裂霉素灭活后作为瘤苗可使小鼠产生抗肿瘤的免疫保护力 ,与IL 12联合应用增强其抗肿瘤活性。结论　转GM CSF基因瘤苗可作为有效的抗肿瘤瘤苗 ,与IL 12联合应用较其单独应用更为有效     

74例肺癌患者GVAX治疗前后外周血树突状细胞变化及其临床意义

  目的   探讨粒-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF）基因修饰的肿瘤细胞疫苗治疗前后肺癌患者外周血中DC两个不同亚群（DC1,DC2）的比例、治疗前后比例变化与临床病理特征的相关性及对生存的影响。   方法   对74例接受GM-CSF基因修饰的肿瘤细胞疫苗（GM- CSF modified tumor cell vaccine,GVAX）治疗的肺癌患者,采用流式细胞技术检测患者治疗前后外周血DC及淋巴细胞亚群的比例,分析治疗前后DC比例的变化、治疗前后DC比例与治疗前血清标志物及免疫细胞的关系、治疗前后DC比例对肺癌患者生存的影响。   结果   接受GVAX疫苗治疗后外周血DC1与DC2比例无明显变化（P_DC1=0.786,P_DC2=0.779）;神经烯醇化酶（NSE）水平升高组中的DC亚群比例高于NSE水平正常组;治疗后DC2比例与治疗前Treg呈负相关;对于早期肺癌患者,治疗后DC2比例低于均值者的生存时间比高于均值者的生存时间明显延长。   结论   治疗后DC2比例可作为早期患者GVAX疫苗疗效及判断预后的免疫指标,其对预后的影响可能与患者外周血Treg比例有一定的相关性。      

rhG-CSF与rhGM-CSF动员人外周血单核细胞后DC疫苗数量及功能变化的比较

目的 探讨利用人外周血单核细胞制备树突状细胞（dendritic cell, DC）疫苗过程中,使用重组人粒细胞集落刺激因子（recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF）和重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（recombinant human granulocyte/macrophage colony-stimulating factor, rhGM-CSF）进行动员的临床应用可行性,并比较两者作为动员试剂的优劣。方法 对2011年8月至2013年12月中国人民解放军第81医院肿瘤生物治疗科进行DC疫苗治疗的恶性肿瘤患者134例进行随机分组,其中rhG-CSF动员者69例,rhGM-CSF动员者65例。rhG-CSF动员组在血细胞分离机采集前1天行rhG-CSF皮下注射3 μg/(kg·d),rhGM-CSF动员组在血细胞分离机采集前1天行rhGMCSF皮下注射3 μg/(kg·d)。比较两组动员前后血常规变化的差异;分析两组采集终产品中单个核细胞（mononuclear cell, MC）数量及表型,检测体外培养所得DC的数量、表型及细胞因子的表达。结果 动员后rhGM-CSF动员组单核细胞增高值高于rhG-CSF动员组（P≤0.001）,但中性粒细胞计数增高值低于rhG-CSF动员组（P≤0.001）,其余血常规项目两者差异无统计学意义。rhGMCSF动员组采集终产品中单个核细胞数量高于rhG-CSF动员组（P=0.046）,而CD14+单核细胞的比例两组差异无统计学意义。rhGM-CSF动员组最终诱导所得DC数量高于rhGCSF动员组（P=0.011）,且DC细胞表面分子HLA-DR的表达高于rhG-CSF动员组（P=0.001）,其余CD80、CD86,CD83、CD11C、CD54表达两组差异无统计学意义。两组DC细胞Th1型和Th2型细胞因子的表达差异都无统计学意义。结论 在用人外周血单核细胞制备DC疫苗的过程中,使用rhGM-CSF动员比rhG-CSF更有优势。     

重组腺病毒介导的人野生型p53、GM—CSF和B7—1基因在肝癌细胞中的表达

目的：观察腺病毒载体对肝癌细胞的转染效率及其介导的人野生型p53，GM－CSF和B7－1基因在肝癌细胞中的表达。方法：不同MOI的Ad-GFP感染肝癌细胞，48h后计算感染效率；BB－102以50MOI感染肝癌细胞，48h后免疫组化法及western blot检测p53表达，ELISA检测GM0CSF的含量，FACS测定B7－1的表达。结果MOI为50pfu/细胞时对肝癌细胞的转染效率达80％以上，目的基因均可在肝癌细胞中高效表达。结论：腺病毒载体对肝癌细胞具有较高的转染效率，目的基因均可在肝癌细胞中高效表达，为进一步研究BB－102在肝癌治疗中的应用奠定了基础。     

肿瘤特异单链抗体库的构建及肿瘤血管特异性结合抗体的体内筛选

目的:研究化疗药物依托泊苷对腺病毒载体介导的外源基因在肿瘤细胞内表达水平的影响。方法:携带外源基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的复制缺陷型腺病毒Ad5-CMV-EGFP(MOI为1或10)单独或联合终质量浓度为0.2、2、20、40、80、100和200μg/ml的依托泊苷感染体外培养的肿瘤细胞NCI-H446(人非小细胞肺癌细胞株)、A549(人肺腺癌细胞株)、SMMC-7721(人肝癌细胞株)、SGC7901(人胃癌细胞株)、SKBR-3(人乳腺癌细胞株)和BTT(小鼠膀胱移行上皮癌细胞株)后不同时间,流式细胞仪分析肿瘤细胞EGFP阳性率和平均荧光强度,Western blotting检测EGFP蛋白表达,RT-PCR和实时荧光定量PCR检测肿瘤细胞内EGFP的mRNA表达量和DNA拷贝数。结果:不同剂量的依托泊苷可不同程度地提高Ad5-CMV-EGFP在7种肿瘤细胞内的表达水平,但对EGFP阳性率无明显提高。10MOI的Ad5-CMV-EGFP联合40μg/ml依托泊苷分别感染肿瘤细胞NCI-H446、NCI-H460、A549、SMMC-7721、SGC7901、SKBR-3和BTT24h后,细胞内EGFP的荧光强度分别是单独感染的3.3、3.5、3.1、6.2、7.0、5.4和3.4倍。Ad5-CMV-EGFP联合应用依托泊苷后肿瘤细胞内EGFP蛋白表达增加2~5倍,EGFP mRNA表达量提高,但DNA拷贝数未见明显改变。结论:依托泊苷可提高腺病毒载体介导的外源基因在肿瘤细胞内的表达水平,该作用可能是在转录水平上发挥作用的。     

GM—CSF基因修饰的肿瘤细胞疫苗对荷瘤小鼠的抗肿瘤作用

目的研究GM-CSF基因修饰的肿瘤细胞作为瘤苗的可行性.方法通过逆转录病毒载体,将小鼠GM-CSF基因导入EL-4淋巴瘤细胞中,研究EL-4/GM-CSF在同系C57BL/6小鼠中的成瘤性及其诱导抗肿瘤免疫的效果.结果EL-4/GM-CSF细胞在小鼠中的成瘤性下降,50%小鼠无瘤生存.射线灭活的EL-4/GM-CSF瘤苗能有效地保护野生型肿瘤细胞的攻击,在肿瘤生长的早期对实验性荷瘤小鼠进行治疗,能延长荷瘤宿主的存活时间(33.1±1.8)与对照组EL-4/Wt(23.2±1.5天)比差异有显著性(P＜0.01).基因修饰的瘤苗作用明显增强.结论GM-CSF基因修饰的肿瘤疫苗可诱导较强的抗肿瘤免疫反应,导致肿瘤的部分根除,本实验为基因修饰的肿瘤疫苗的临床应用提出了一定的实验依据.     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因修饰的树突状细胞疫苗增强体外抗肿瘤免疫效应

Objective: The aim of the study was to investigate whether dendritic cell (DC) precursors, recruited by injection of chemokine ligand 3 (CCL3), induce enhanced anti-tumor immunity after granulocyte-macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) transfection in mice ex vivo. Methods: The 615 mice were injected with CCL3 via the tail vein. Freshly isolated B220–CD11c+ cells were cultured with cytokines. For adenoviral (Ad)-mediated gene transduction, DCs were transferred AdGM-CSF gene at different ratios of mu...     

含Egr-1启动子和Smad7基因的重组腺病毒的构建

目的 :构建含Egr 1启动子和Smad7cDNA的重组复制缺陷型腺病毒并初步验证其活性 ,为下一步的基因治疗奠定基础。方法 :以Adeno XTM表达试剂盒为基础 ,应用分子克隆技术 ,将穿梭质粒pShuttle的CMV启动子替换为Egr 1启动子 ,再将Smad7cDNA亚克隆至穿梭质粒内 ,然后与腺病毒DNA重组 ,转化大肠杆菌E .coliDH5α ,PCR鉴定正确即为pAdES。脂质体法转染HEK2 93细胞 ,包装出完整腺病毒 ,然后大量扩增测定滴度。重组腺病毒感染成纤维细胞 (3T6 ) ,经深部X线照射后通过免疫细胞化学方法检测Smad7蛋白在细胞内的表达定位。结果 :经酶切、PCR及测序鉴定证实成功构建了含Egr 1启动子和Smad7的重组复制缺陷型腺病毒pAdES。病毒滴度为 1.0× 10 11TCID50 /ml。细胞免疫化学结果显示Smad7蛋白表达定位于细胞质内。结论 :利用Adeno XTM 表达试剂盒 ,通过分子克隆体外重组技术可以方便的构建重组腺病毒载体 ,并能在HEK2 93细胞内成功包装和扩增。通过重组腺病毒可在细胞质内表达外源性Smad7蛋白     

重组腺病毒p53上调凋亡调控因子增强胶质瘤细胞对替莫唑胺敏感性的体内研究

 目的　通过体内实验探讨外源性p53上调凋亡调控因子（PUMA）对人类脑胶质瘤细胞生长的影响及其增强胶质瘤细胞对替莫唑胺（TMZ）敏感性的机制。方法　建立人类脑胶质瘤细胞株U87MG裸鼠皮下移植瘤模型,将胶质瘤裸鼠用随机区组法随机分为四组,于建模2周后,分别自腹腔注射0.9 % NaCl溶液100 μl（对照组）、2×108 pfu／100 μl Ad-PUMA（PUMA组）、TMZ 10 mg／kg（TMZ组）和2×108 pfu／100 μl Ad-PUMA + TMZ 10 mg／kg （联合组）,每组8只。治疗20 d后处死裸鼠,剖腹测量原位肿瘤体积、抑瘤率。TUNEL检测肿瘤细胞凋亡情况及计算凋亡指数（AI）。半定量RT-PCR和Western blot法检测DNA损伤修复蛋白6-氧-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（MGMT）mRNA和MGMT蛋白表达情况。结果　治疗20 d时对照组、PUMA组、TMZ组、联合组诱发肿瘤瘤体积分别为（3.68±0.09）、（2.63±0.13）、（2.13±0.07）、（0.97±0.02）cm3,四组体积进行两两比较差异有统计学意义（P均<0.05）。治疗组抑瘤率分别为28.5 %、42.1 %、73.6 %,两两比较差异有统计学意义（P均＜0.05）。TUNEL染色并计算AI：对照组（2.0±1.2）%、Ad-PUMA组（11.4±2.6） %、TMZ组（7.6±3.2）%、联合组（20.6±8.6）%,进行两两比较差异有统计学意义（P均< 0.05）。半定量RT-PCR和Western blot法检测显示MGMT mRNA和MGMT蛋白在TMZ组中表达最高,与其他三组比较差异有统计学意义（P均＜0.05）。结论　Ad-PUMA联合TMZ具有协同抑制胶质瘤生长作用,其机制可能与Ad-PUMA促进凋亡和抑制MGMT表达有关。     

重组腺病毒介导survivin基因转染树突状细胞对肾细胞癌的免疫效应

目的:研究重组腺病毒介导survivin基因转染的树突状细胞(DCs)体外诱导特异性抗肾细胞癌的免疫效应.方法:以携带survivin基因的重组腺病毒(Ad-svv)感染DCs, Western bloting检测转染DCs的survivin的表达,流式细胞术检测DCs表面分子CD83、MHCⅡ、CD80、CD86的表达,ELISA法检测DCs培养上清中IL-12 的含量;混合淋巴细胞反应(MLR)测定DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力, ELISA法检测DCs刺激淋巴细胞后上清中IFN-γ含量,MTT法检测其诱导的特异的细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)免疫效应.结果:各组Ad-svv转染DCs后均表现出成熟的DCs表型特征,均可见survivin蛋白表达;转染Ad-svv或转染空白腺病毒载体(Ad-CMV)的DCs上清中IL-12均高于对照组(P<0.01),转染Ad-svv的DCs上清中IL-12高于转染Ad-CMV-DCs组(P<0.01).MLR中,转染或未转染腺病毒的DCs均能刺激同种异体T淋巴细胞的增殖,Ad-svv-DC刺激T淋巴细胞增殖的能力最强(P<0.01);MLR后,转染或未转染重组腺病毒的DCs均能刺激T淋巴细胞IFN-γ的分泌,Ad-svv-DC组IFN-γ的分泌能力最强(P<0.01).Ad-svv-DCs组诱导的CTL对survivin表达阳性的786-0肾癌细胞的杀伤率明显高于无survivin表达的L-02肝细胞(P<0.01),Ad-CMV-DCs、空白DC对786-0肾癌细胞无杀伤作用.结论:重组腺病毒介导survivin基因转染能显著提高DCs对肾癌细胞抗原的提呈能力、激活特异性细胞毒性T淋巴细胞、诱导针对survivin的特异性抗癌免疫效应.     

不同细胞因子对DC成熟的影响及细胞穿膜肽的穿膜效率比较

目的 通过比较不同因子促进树突状细胞(Dendritic cells,DC)成熟的差别,探讨如何提高DC成熟度。进一步研究多种细胞穿膜肽(Cell penetrating peptide,CPP)的入胞效率,寻找高效的CPP负载肿瘤抗原,以提高DC靶向治疗肿瘤的效果。方法 针对体外培养的DC细胞,应用不同种类、不同浓度的DC培养因子和成熟因子分别诱导DC成熟,通过倒置显微镜观察成熟DC细胞数量、形态;流式检测成熟DC细胞表达CD80、CD83、CD86、HLA-DR的水平。免疫荧光染色观察TAT、SecPen、PanPro和Pan四种细胞穿膜肽穿膜效率的异同。结果 常量及倍量GM-CSF诱导成熟DC的数量无统计学差异(P＞0.05),CD80、CD83、CD86、HLA-DR的表达无统计学差异;应用改良方案培养的成熟DC数量明显高于采用传统IL-4+GM-CSF及IFN-γ诱导的成熟DC数量,差异具有统计学意义(P＜0.05),但是,成熟DC细胞CD80、CD83、CD86、HLA-DR等表面标记表达无统计学差异;SecPen的穿膜效率(83.3±3.0%)明显高于其他三种穿膜肽,具有统计学意义(P＜0.05)。结论 改变GM-CSF的浓度并不能提高成熟DC的数量和比例;相比传统方法,改良方法诱导的DC成熟能力比传统方法有优越性;穿膜肽可以有效进入DC细胞,但不同穿膜肽穿透细胞膜的能力有显著差异,在DC肿瘤疫苗的靶向治疗中需要谨慎选择。