川芎嗪对高糖诱导后人腹膜间皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的研究川芎嗪对体外培养的人腹膜间皮细胞在高糖刺激下血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法体外培养人腹膜间皮细胞,分为5组(每组设3个样本):正常对照组(完全培养液)、高糖对照组(2.5%葡萄糖)和高糖(2.5%葡萄糖)加川芎嗪(浓度依次为10,20,40 mg/L)组。采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞内VEGF mRNA的表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清液中VEGF的蛋白质水平,用二喹啉甲酸蛋白检测法测定细胞中蛋白质含量,用以校正ELISA结果。结果川芎嗪能显著降低高糖所致的人腹膜间皮细胞VEGF的表达(P<0.01);两者在蛋白质和基因水平均呈量效关系。结论川芎嗪可以减少高糖刺激下人腹膜间皮细胞VEGF的表达,从而达到延缓腹透相关性腹膜纤维化的发生和发展。     

辛伐他汀对高糖致人腹膜间皮细胞Ⅰ型胶原、MMP-1和TIMP-1分泌与表达的影响

目的研究辛伐他汀对体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMCs)在高糖刺激下主要细胞外基质Ⅰ型胶原,及其降解酶系基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)分泌与表达的影响。方法胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞进行原代培养并传代;待细胞同步后,经2.5%高糖和不同浓度的辛伐他汀干预48 h。半定量RT-PCR检测细胞内Ⅰ型胶原、MMP-1和TIMP-1 mRNA表达情况;ELISA方法检测细胞上清液中Ⅰ型胶原、MMP-1和TIMP-1的蛋白质水平。结果辛伐他汀显著下调高糖致HPMCsⅠ型胶原和TIMP-1表达,且在蛋白质和基因水平均呈剂量依赖关系(P<0.01);同时,高剂量的辛伐他汀能显著增加高糖环境下MMP-1蛋白质含量(P<0.01),并上调MMP-1 mRNA表达(P<0.01)。结论辛伐他汀能减少HPMCs高糖刺激下Ⅰ型胶原的合成,并通过调节MMP-1/TIMP-1的平衡,促进Ⅰ型胶原降解,从而减少细胞外基质的沉积。     

脂联素对高糖环境下人心肌细胞增殖及VEGF表达的影响

目的通过体外高糖培养人心肌细胞(HCM)及运用脂联素(ADPN)干预以探讨HCM增殖及VEGF表达的影响,以揭示脂联素对高糖环境中的心肌细胞的可能保护机制。方法将HCM分为正常对照组(5.5mmol/L葡萄糖)、高糖组(30.0mmol/L葡萄糖)、脂联素组(30.0mmol/L+2.5μg/mLADPN),分别培养24h、48h、72h,运用MTT测定HCM的增殖情况;通过实时荧光定量PCR(real time PCR)技术测定在脂联素干预和高糖作用下相应时间HCM中VEGF mRNA的含量。结果①高糖组抑制细胞增殖,加入脂联素后促进细胞增殖,且呈时间依赖性;②VEGF mRNA在高糖组表达较高,加入生理浓度脂联素对于VEGF mRNA表达有抑制作用,并随时间的延长VEGF表达逐渐减少。各时间段脂联素组和高糖组相比,VEGF的表达有统计学差异,亦呈时间依赖性。结论脂联素可以促进HCM增殖,对高糖环境下心肌细胞有保护作用。     

氟伐他汀对高糖诱导人足细胞血管内皮生长因子表达的影响及机制

目的探讨氟伐他汀对高糖诱导的人足细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及机制。方法体外培养人足细胞,随机分为A组(正常糖组)、B组(高糖组)、C组(高糖+氟伐他汀10-7mol/L组)、D组(高糖+氟伐他汀10-6mol/L组)、E组(高糖+氟伐他汀10-5mol/L组)和F组[高糖+胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059组]。用Western blot检测VEGF和磷酸化ERK1/2(pERK1/2)蛋白表达。结果 B组VEGF、pERK1/2表达较A组明显升高,并呈时间依赖性(P<0.05)。F组VEGF、pERK1/2表达较B组显著降低(P<0.01)。与B组比较,C、D、E组VEGF及pERK1/2表达亦明显减少,并呈浓度依赖性(P<0.05)。结论高糖刺激体外培养人足细胞VEGF表达增加,氟伐他汀可减少高糖诱导的VEGF表达,其机制可能与氟伐他汀抑制ERK信号通路有关。     

水飞蓟宾对高糖诱导人足细胞中VEGF表达的影响

目的 探讨水飞蓟宾对高糖诱导的体外培养人足细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 体外培养的人足细胞分为7组:正常糖(NG,葡萄糖5.5 mmol/L)组、甘露醇对照(MN,甘露醇24.5mmol/L+葡萄糖5.5mmol/L)组、高糖(HG,葡萄糖30mmol/L)组、HG+低浓度水飞蓟宾(HG+LS,水飞蓟宾5 μg/ml)组、HG+中浓度水飞蓟宾(HG+MS,水飞蓟宾10μg/ml)组、HG+高浓度水飞蓟宾(HG+HS,水飞蓟宾20μg/ml)组、HG+二甲亚砜(HG+D,DMSO 1 mg/ml)组.各作用48 h后,RT-PCR半定量法及Western印迹法检测足细胞VEGF mRNA及蛋白表达水平.结果 体外培养人足细胞表达基础水平的VEGF,HG刺激48 h后足细胞VEGF基冈和蛋白表达均显著增加(P＜0.05);与HG组比较,加用5～20μg/ml水飞蓟宾均可抑制HG所诱导的VEGF基因和蛋白表达(P＜0.05),并呈剂量依赖性.结论 HG可使足细胞表达VEGF增加,水飞蓟宾可通过抑制HG诱导足细胞产生过多VEGF而具有潜在保护足细胞和防治糖尿病肾病的作用.     

吡格列酮对高糖环境中大鼠腹膜间皮细胞氧化应激及单核细胞趋化蛋白1表达的影响

目的 观察吡格列酮(降血糖药)对高糖培养条件下大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs)活性氧及单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA、蛋白表达的影响.方法 用胰蛋白酶消化法分离培养大鼠腹膜间皮细胞;采用活性氧捕获剂双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)孵育细胞;通过流式细胞仪检测细胞内的荧光强度,测得细胞内活性氧(ROS)水平;分别用RT-PCR和ELISA法检测MCP-1 mRNA及蛋白含量.结果 正常组和甘露醇组比较,ROS水平和MCP-1表达差异无统计学意义,高糖组ROS水平较正常组明显增高(P＜0.01);采用吡格列酮和乙酰半胱氨酸干预后,ROS水平显著降低(P＜0.01);高糖组MCP-1mRNA及蛋白表达显著高于正常组(P＜0.01);而小剂量吡格列酮干预组和乙酰半胱氨酸组的MCP-1 mRNA及蛋白表达显著低于高糖组(P＜0.01);大剂量较小剂量吡格列酮干预组的ROS和MCP-1水平进一步降低.结论 吡格列酮通过抑制氧化应激而降低高糖所诱导的MCP-1表达,这可能是吡格列酮保护腹膜功能的作用机制之一.     

氟伐他汀对高糖大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子β1的影响

目的观察高糖大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)转化生长因子β1(TGF-β1)的变化以及氟伐他汀对其影响。方法体外培养HBZY-1细胞,将其分成以下几组:正常组、高糖组、甘露醇对照组、3个浓度氟伐他汀组。24 h后进行细胞形态观察,MTT法测定并计算细胞存活率和抑制率。RT-PCR法测定各组TGF-β1 mRNA的表达。Western blot法、免疫细胞化学法测定各组TGF-β1蛋白表达及分布。结果与正常组相比,HBZY-1细胞在高糖刺激下,TGF-β1 mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.05)。与高糖组相比,氟伐他汀组TGF-β1 mRNA及蛋白表达明显减少(P<0.05)。结论高糖环境可促使HBZY-1细胞TGF-β1异常表达;而氟伐他汀可阻抑高糖对HBZY-1细胞TGF-β1的活化而发挥肾脏保护作用。     

rhEPO对高糖状态下大鼠Müller细胞凋亡及对Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(recombinant hu-man erythropoietin,rhEPO)对高浓度葡萄糖作用下体外培养大鼠视网膜Müller细胞凋亡的保护作用及对Bcl-2和Bax表达的影响。方法提取大鼠视网膜神经细胞及胶质细胞进行混合培养,反复胰酶消化法提纯Müller细胞,随机分为空白组,高糖组及不同浓度rhEPO干预组,培养48 h后应用TUNEL法检测细胞凋亡情况,酶联免疫吸附法检测各组细胞上清液中Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果 TUNEL法检测显示空白组见少量凋亡阳性细胞,高糖组阳性细胞明显增多(P<0.05),各rhEPO干预组同高糖组相比凋亡细胞明显减少(P<0.05)。酶联免疫吸附法见高糖组Bcl-2蛋白的表达降低而Bax蛋白表达增高,与对照组相比活性下降,而各浓度rhEPO干预组与高糖组相比细胞活力明显增强,Bcl-2蛋白的表达增加(P<0.05),Bax蛋白的表达降低(P<0.05)。结论高糖能够引发大鼠视网膜Müller细胞发生凋亡,而rhEPO能减少体外培养高浓度葡萄糖状态下大鼠视网膜Müller细胞的凋亡,并能明显增强Bcl-2蛋白的表达,降低Bax蛋白的表达。提示上调Bcl-2及下调Bax蛋白的表达可能是rhEPO对视网膜Müller细胞抗凋亡保护作用的机制之一。     

柚皮素对体外糖尿病视网膜新生血管形成的抑制作用及机制

目的 观察柚皮素对体外高糖诱导的视网膜血管生成过程的影响及机制.方法 将猴视网膜血管内皮细胞(RF/6A)采用随机数字表法分为对照组、高糖组、高糖+柚皮素组,对照组在常规培养基中培养,高糖组在培养基中加入30 mmol/L D-葡萄糖,高糖+柚皮素组在培养基中加入30 mmol/L D-葡萄糖及3 mg/L柚皮素.培养24 h后,分别采用cck-8、Transwell和Matrigel实验检测细胞增殖、迁移及管腔形成.采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达.结果 高糖组细胞增殖率(72.08±2.12)％比对照组(99.43±0.67)％减小,高糖+柚皮素组(90.54±1.47)％明显高于高糖组;细胞迁移数和管腔形成比较,高糖组明显高于对照组,高糖+柚皮素组显低于高糖组;Western blotting结果表明高糖组细胞LC3-Ⅱ的表达明显高于对照组,高糖+柚皮素组细胞的表达明显低于高糖组;高糖组细胞p-mTOR的表达明显低于对照组,高糖+柚皮素组细胞的表达明显高于高糖组.结论 柚皮素可通过抑制细胞自噬在体外抑制糖尿病视网膜新生血管形成.     

体内外高糖对血管生成素样蛋白3表达的影响

摘要 目的 观察人体血液中葡萄糖浓度对血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)蛋白质表达的影响,以及体外高浓度葡萄糖对正常人肝细胞株（L02）ANGPTL3 mRNA及蛋白质表达的影响,探讨ANGPTL3与糖尿病发生的关系。方法 以人血清和L02细胞作为研究对象。从临床采集健康人（对照组）、高血糖患者（实验组）空腹血清各10例,各组男女比例均为5：5。用ELISA法测定血清ANGPTL3蛋白质浓度、全自动生化仪测定血糖浓度。将L02细胞细胞置于含5.6 mmol/L,7.1 mmol/L,11.2 mmol/L,20.0 mmol/L葡萄糖的培养基中培养,以葡萄糖浓度5.6 mmol/L为对照组,用RT-PCR方法检测L02细胞ANGPTL3的mRNA表达量,并用Western Blot方法检测其蛋白质表达量。结果 高血糖组血清ANGPTL3蛋白质含量较健康组明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。体外培养基中高糖可以促进L02细胞ANGPTL3基因和蛋白质表达,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）;结论 体内外高糖环境均可以上调ANGPTL3的表达。ANGPTL3高表达可能与糖尿病发生存在一定关联。     

The effect of high glucose-based peritoneal dialysis fluids on thioredoxin-interacting protein expression in human peritoneal mesothelial cells

BackgroundIt has been demonstrated that thioredoxin-interacting protein (TXNIP) interacted with NACHT, LRR and PYD domains-containing protein 3 (NLRP3) and participated in the NLRP3 inflammasome activation. Our previous study has demonstrated that in human peritoneal mesothelial cells (HPMCs), exposure to high glucose-based peritoneal dialysis (PD) solutions induced mitochondrial reactive oxygen species (ROS) production, activation of NLRP3 inflammasome and IL-1β expression. This study aimed to investigate the effect of high glucose-based PD fluids on the TXNIP expression and the underlying mechanisms by which TXNIP-NLRP3 interaction mediates the inflammatory injury to HPMCs in high glucose-based PD fluids conditions.MethodsTXNIP gene and protein expression was detected by real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) and immunoblot. Immunoprecipitation was used to evaluate the interaction between TRX1 and TXNIP, TXNIP and NLRP3. ROS production and IL-1β expression was examined by flow cytometry and immunoblot and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) respectively.ResultsIt was identified that high glucose-based PD solutions enhance the level of TXNIP gene and protein in cultured HPMCs and a rat-based PD model. We also found that ROS generation induced by high glucose-based PD solutions disrupts the TRX1-TXNIP association, while promoting the binding of TXNIP to NLRP3 in HPMCs. Furthermore, the application of a ROS inhibitor (APDC) to HPMCs blocked the high glucose-based PD solution-induced TXNIP-NLRP3 binding, in addition to ROS production and IL-1β expression.ConclusionThe results of the present study revealed a novel mechanism underlying high glucose-containing PD-mediated peritoneal inflammatory injury, supporting the attenuation of ROS generation as a potential therapeutic strategy to alleviate such pathology.     

灯盏花素对高糖环境肾系膜细胞c-fos、c-jun蛋白表达的影响

目的　观察高葡萄糖环境中 ,蛋白激酶C(PKC)抑制剂灯盏花素对肾小球系膜细胞 (GMC)c fos、c jun蛋白表达和Ⅳ型胶原 (C Ⅳ )合成的影响 ,探索糖尿病肾病防治的新途径。方法　原代培养大鼠GMC ,分别置于正常葡萄糖 (对照组 )、高葡萄糖 (高糖组 )和高葡萄糖加灯盏花素 (高糖加灯盏花素组 )环境中 ,观察干预 2 4h、4 8h和 1wk后GMCc fos、c jun蛋白表达、C Ⅳ合成和PKC活性的变化。结果　与对照组比较 ,高糖组干预 2 4h后c fos、c jun蛋白表达同时明显增高 ,4 8h后c fos开始下降 ,而c jun 1wk后仍保持高水平 ,高糖组C Ⅳ合成 1wk后增加 ,各观察时点PKC活性均较对照组明显增高 ;而高糖加灯盏花素组各时点c fos、c jun蛋白表达、C Ⅳ合成和PKC活性均低于高糖组。结论　高葡萄糖可促使GMC中c fos、c jun蛋白表达和C Ⅳ合成增加 ,此可能为PKC活化所介导 ,灯盏花素可通过抑制PKC活化而有效阻止高葡萄糖引起的上述变化。     

脂联素对高糖环境下人视网膜色素上皮细胞分泌VEGF及PEDF的影响

目的研究脂联素对高糖环境下人视网膜色素上皮（hRPE）细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）和色素上皮衍生因子（PEDF）的影响。方法hRPE细胞分为3组：①正常对照组;②高糖组;③高糖＋不同浓度的脂联素组（2.5,5,10,20μg/ml）,分别在48h后,用ELISA法测定上清液中VEGF及PEDF的含量。结果与正常对照组相比,高糖组VEGF水平明显升高,PEDF水平明显下降,加入2.5μg/ml脂联素对VEGF及PEDF水平影响不大,脂联素浓度达到5～20μg/ml时和高糖组相比,结果相反,VEGF水平显著降低、PEDF水平显著升高,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论5～20μg/ml脂联素可以使hRPE细胞VEGF分泌减少和PEDF分泌增多。提示脂联素可以纠正高糖诱导的hRPE细胞功能紊乱,通过调节VEGF与PEDF的平衡来抑制糖尿病视网膜病变（DR）中病理性新生血管的形成。     

肾康注射液抑制体外培养小鼠腹膜间皮细胞中TNF-α、 TGF-β1、 VEGF、 CTGF的释放

摘要： 目的 探讨肾康注射液对体外培养的小鼠腹膜间皮细胞 （PMCs） 的肿瘤坏死因子 （TNF） -α、 转化生长因子（TGF） -β1、 血管内皮生长因子 （VEGF）、 结缔组织生长因子 （CTGF） 等细胞因子水平的影响。方法 小鼠PMCs经传代培养及鉴定后, 分为空白对照组 （A组, DMEM）; 阳性对照组 （B组, DMEM+ 140 mmol/L葡萄糖）; 低 （C组）、 中 （D 组）、 高 （E组） 剂量肾康干预组 （B组培养液+含体积比为1%、 2%、 4%肾康注射液）。培养24 h后分别收集细胞和培养上清液, 采用酶联免疫吸附试验检测培养上清液中TNF-α、 TGF-β1、 VEGF、 CTGF水平, Real-time RT-PCR检测 PMCs中TNF-α、 TGF-β1、 VEGF、 CTGF的mRNA转录水平。结果 与A组比较, B组TNF-α、 TGF-β1、 VEGF、 CTGF 浓度及mRNA表达水平均明显上升 （P＜0.05）; 与B组比较, 加入肾康注射液后, C、 D、 E组培养上清液中由高糖诱导的TNF-α、 TGF-β1、 VEGF、 CTGF浓度及相应mRNA水平均出现不同程度下降 （P＜0.05）, 并呈现一定的剂量依赖性。结论 一定浓度的肾康注射液可抑制高糖诱导的小鼠PMCs中TNF-α、 TGF-β1、 VEGF、 CTGF的表达和转录。     

川芎嗪对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖的影响

目的 观察川芎嗪对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞（HRCECs）增殖的影响。方法 将HRCECs细胞分为对照（生理盐水）组、模型（25 mmol/L葡萄糖）组和川芎嗪低、中、高浓度（50、100、200 μmol/L）组,培养48 h后,MTT细胞毒实验检测细胞增殖变化,流式细胞技术检测细胞周期,ELISA法检测血管内皮生长因子（VEGF）表达。结果 与对照组比较,高糖对HRCECs细胞增殖、分裂（M）期比例、上清VEGF浓度均具有显著促进作用（P<0.05、0.01）;与模型组比较,低、中、高浓度川芎嗪对高糖诱导的HRCECs细胞增殖、分裂（M）期比例、上清VEGF浓度均发挥显著抑制作用（P<0.05、0.01）,且呈浓度相关性。结论 川芎嗪可能通过抑制高糖诱导的HRCECs细胞VEGF高表达,阻滞细胞周期,发挥抑制HRCECs细胞增殖的作用。     

扶肾方对尿毒症腹膜透析大鼠腹膜超滤功能及VEGF-Notch信号通路的影响

目的探讨扶肾方对尿毒症腹膜透析大鼠的腹膜超滤功能及腹膜组织Notch1、delta-样配体4(Dll4)、Notch胞内域(NICD)、Hes1、血管内皮生长因子(VEGF)及血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)的影响。方法采用随机数字表法将50只雄性SD大鼠分为正常组、模型组、扶肾方低剂量组(模型+扶肾方324 g/L灌胃)、扶肾方高剂量组(模型+扶肾方648 g/L灌胃)和塞来昔布组(模型+塞来昔布1.8 g/L灌胃),每组10只。规律腹腔注射腹膜透析液4周,行腹膜平衡实验计算超滤量后处死大鼠,取腹膜组织,HE染色观察腹膜形态学变化,采用实时荧光定量PCR(q PCR)和蛋白印迹法检测Notch1、Dll4、NICD、Hes1、VEGF、VEGFR-2的mRNA和蛋白表达,蛋白印迹法检测p-VEGFR-2的蛋白水平。结果模型组、扶肾方低剂量组、扶肾方高剂量组及塞来昔布组大鼠腹膜超滤量明显低于正常组,扶肾方高剂量组与塞来昔布组超滤量高于模型组和扶肾方低剂量组,塞来昔布组超滤量低于扶肾方高剂量组(P<0.05)。腹膜HE染色显示,扶肾方低剂量组与高剂量组大鼠腹膜新生血管较模...