用柱切换HPLC法测定大鼠、狗及人血浆中的氢氯噻嗪

已有的 HPLC 测定生物液体中氢氯噻嗪(Ⅰ)浓度的方法大多需繁琐的样品处理步骤,采用本文方法,血浆样品可直接注入色谱系统作全自动分析。溶液的制备分别配制1.0mg/ml 的(Ⅰ)和内标氢氟噻嗪(Ⅱ)的甲醇溶液作为贮备液,于-20℃保存。将(Ⅰ)的贮备液用10mmol/L 的磷酸盐缓冲液(pH7.2)稀释至100μg/ml,并以空白血浆(先离心去微粒)进一步稀释制得血浆标准液。以相同缓冲液稀释内标液至1500ng/ml。血浆样品室温解冻后离心(3000rpm,10min)去微粒,将150μl 血浆标准液或样品液与150μl 内标液混合,采用自动进样器将100～200μl 混合液注入 HPLC 仪。色谱系统包括提取柱(两个串联的Guard-Pak C_(18)柱,柱长0.4cm)和串联Guard-Pak C_(18)保护柱的分析柱(HypersilODS,5μm,4.6×250mm),分别联于六孔     

一种新的HPLC法测定肾损伤病人血中万古霉素

万古霉素系糖肽类抗生素,临床上用于耐青霉素金葡菌所致感染。本品在肾脏功能损伤病人中血清半衰期延长,由于受体温影响,导致晶状降解产物CDP-1蓄积。在此介绍一种同时测定万古霉素和CDP-1含量的HPLC法。试剂将盐酸万古霉素贮备液加到冷藏血清中,制备5、10、20和50μg/ml万古霉素标准液。将新鲜配制盐酸CDP-1碳酸氢钠缓冲液(0.05mol/L,pHg.0)的贮备液加到冷藏血清中,制备1、2、5和10μg/mlCDP-1标准液。用水配制0.4mg/ml维生素B_(12)内标液。各标准液于-20℃贮存。仪器采用Beckman Gold HPLC系统。色谱分析采用十八硅烷柱,粒度5μm。也可使用ODS反相C_(18)柱(4.6mm×22cm)。色谱条件万古霉素和内标B_(12)的检测波长分别为235nm和360nm。采用梯度洗脱的     

用改进的HPLC法同时测定人体血清中的卤泛曲林和去丁基卤泛曲林

曾有报道用 HPLC 同时测定人血清中的卤泛曲林(HAL)和去丁基卤泛曲林(BHAL),但分析时间长,内源性物质与BHAL 几乎同时出峰,对测定有干扰。本文报道的方法迅速、分辨率更高。实验采用 757 可变波长 UV-VIS 检测器。Ultrasphere C_8 柱(5μm,25cm×4.6mm)。内标为2,4-二氯-9-(2-二氯基-1-羟基)乙基-6-三氟甲基菲盐酸盐。流动相为乙腈∶水(75∶25,v/v)与0.2%(w/v)十二烷基硫酸钠和0.2%(v/v)冰醋酸。在含0.5ml 血清的试管中,加入内标50μl(游离碱4μg/ml),乙腈1ml,沉淀出蛋白质,涡流混合20s,1200g 离心10min,将上清液移至 C_8-键合洗脱柱,用真空仪抽入柱体,脂乙腈洗柱后,药物被1.0ml 混合液[1.0mol/L 盐酸∶乙腈,1∶9(v/v)]洗脱下。用硅试管收集洗脱液,洗脱液中加入NH_4OH 1.0ml,CH_2Cl_2 6.0ml,旋转器上旋转25min,1000g 离心5min,分出有机相,在40℃通氮下挥发至干,践留物用150μl 流动相溶解,取25μl 注入 HPLC 柱。     

反相离子对HPLC法测定人血浆中的氟喹诺酮类药物

本文建立了用反相离子对 HPLC 法测定血浆中三种氟喹诺酮类广谱抗生素药物——诺氟沙星(Ⅰ)、阿米氟沙星(amifloxacin,Ⅱ)和依诺沙星(Ⅲ)的方法。样品制备取血浆样品1ml,加50μl 内标液(吡哌酸,50μg/ml),稍加涡旋后,再加50μl 高氯酸(60％,w/v),并同时涡旋30s,离心(10000×g)10min,取上清液20μl 注入色谱柱中进行测定。色谱条件不锈钢柱(100×2mm,id)匀浆填充5μm 的 ODS Hypersil 作为固定相;流动相为乙腈/水(25:75),其中含10mmol/L Na_2HPO_4、10mmol/L 十二烷基硫酸钠和5mmol/L 溴化四丁基铵,以磷酸调 pH 值至2.0;流速0.5ml/min;荧光检测280nm/418nm。     

紫外检测HPLC法测定尿中氢可的松和可的松

取Sep-Pak 样品制备柱(5μmC_(18)键合硅胶柱;5μm-ODS 预柱,依次通过CH_3OH 2ml、H_2O5ml 和含4μg 内标6α-甲基泼尼龙(Ⅲ)的尿样晶20ml,以0.1mol/l(NH_4)_2CO_3溶液5ml 洗涤。再以含10mmol/l(NH_4)_2CO_3的CH_3CN-H_2O(18:82,v/v,流     

用高效液相层析法定量测定炔雌醇固体制剂

本文介绍用反相高效液相层析系统,定量测定固体制剂的炔雌醇。此法快速,重现性好,回收率97.3～101.5％,相对标准偏差0.4～2.2％。实验条件:Waters6000 A型层析仪,恒流量泵,Waters710 A型自动注射器,氙灯源萤光检测仪(激发λ=280nm、发射λ’=330nm),不锈钢柱(25cm×4.6mm内径)10μm,C-8 hydrocarbon,流动相0.05MKH_2PO_4:甲醇(2:3),流速2.0ml/min,进样量50μl,内标液邻苯二酚1.0μg/ml(流动相),标准液为炔雌醇-甲醇稀释液(25mg-100ml,吸5ml加甲醇50ml稀释)5:50,取稀释液2.00ml,加内标液5.00ml、     

血浆中美托洛尔的快速手性分离

本文建立了血浆中美托洛尔(Ⅰ)的直接手性分离方法。色谱条件采用Chiralcel OD分析柱(250×4.6 mm,id),RCSS硅胶预柱,流动相为异丙醇-正己烧-二乙胺(25:75:0.05,v/v),流速1.0 ml/min,荧光检测225 nm/295 nm。样品制备于每份0.5～1.0 ml血浆中加入100μl 1mol/L NaOH,涡旋10s,加正己烧3ml,振摇10min,离心(2000g,10min),水层于CO_2和甲醇混合液中冷冻,有机层于60℃挥去溶剂,残渣用50μl外标(S-烯丙洛尔)溶液(2μg/ml;溶剂为正己烷-异丙醇,5:1,v/v) 溶解,涡旋15s,进样     

二硝基氟苯比色法测定新霉素

硫酸新霉素的主成分为新霉素B、C及很少量降解产物新霉素A,本文报道一种新的比定法,以2,4-二硝基氟苯(DNFB)为显色剂,对其滴眼剂进行含量测定,具快速,简便、准确等特点。标准曲线取硫酸新霉素适量,以0.02M硼酸缓冲液(pH9.0)配制浓度10-55μg/ml(间隔5μg/ml)系列标准液。各精密吸取5ml,置20ml试管中,精密加入0.25%DNFB甲醇液2ml(新鲜配制),室温放置50′后,再精密加入1.0mol/L盐酸1.5ml,摇匀。在波长365nm     

用HPLC法测定胶囊中的5-氟胞嘧啶

5-氟胞嘧啶是一种抗真菌药,目前只能制成胶囊剂,美国药典1990版采用 UV 法在波长285nm 处测其含量,其代谢产物氟尿嘧啶干扰其测定,其他的方法较繁琐且昂贵,本文报告建立一种不需要反离子的稳定的、常温下进行测定的 HPLC 法。色谱柱为 Med.Pharme×C_(18)柱(25cm×4.6mm,id),流动相为0.05mol/LKH_2PO_4缓冲液(pH 4.5),流速1.0ml/min,检测波长300nm,纸速30.5cm/h,室温。溶液配制:5-氟胞嘧啶和5-氟尿嘧啶各100.0mg 溶于足量水中,制得100.0ml 储备液,取5-氨基尿嘧啶20mg 溶于水中制成500ml 内标液。储备液和内标液需每天配制,按需要稀释。测定及计算:精称10个胶囊,取标示量为100mg 5-氟胞嘧啶的粉末混于80ml 水中,振荡3～4min,加水至100.0ml,过滤,弃去前20ml 滤液,收集续滤液备用。取续滤液2.5ml 与7.5ml 5-氨基尿嘧啶混合,加水至25.0ml。取25μl 进样分析。加入已知量标准液作比较,待测药物与内标峰高比为(R_(ph))_α,标准品与内标峰高比为(R_(ph)_s,则样     

HPLC和UV-分光光度法测定片剂中的醋酸氟卡尼

醋酸氟卡尼(flecainideacetate)是抗心律失常药,本文介绍用新的和有选择性的HPLC和UV-分光光度法测定片剂中的氟卡尼。方法快速、简单、准确。用甲醇为抽提剂,样品在LichrosorbRP-18柱上层析。流动相为乙腈/磷酸盐缓冲剂pH2.9/甲醇(3∶1∶6,v/v/v),胺碘酮(amiodarone)为内标(IS),UV检定在254nm,HPLC法,浓度在4～20μg·mL-1时呈直线,平均回收率为99.27%,平均SD为1.32,UV分光光度法的平均回收率为100.68%,平均SD为0.93。回归方程为y=1.665x-0.0005,y为氟卡尼对IS的峰高比,x为每50μL中μg药物浓度,r=0.999。试剂和仪器　醋酸氟卡…     

用HPLC法测定原料药和制剂中的替马氟沙星、沙拉氟沙星和双氟沙星

本文建立了用 HPLC 法测定原料药和制剂中三种氟喹诺酮类合成广谱抗生素——替马氟沙星(temafloxacin)、沙拉氟沙星(sarafloxacin)和双氟沙星(difloxacin)含量的方法。色谱条件 Nucleosil C_(18)柱(5μm,4.6mm×15cm),流动相为缓冲溶液,(0.02mol/L 柠檬酸-0.02mol/L 柠檬酸钠,高氯酸调 pH 至2.4):乙腈(65:35,v/v),流速1.0ml/min,检测波长280nm,进样量50μl。以对-硝基苯乙酮为内标,一点校正法定量。、样品溶液的制备原料药:将三种药分别溶于乙腈/水(1:1),制成1.2 mg/ml(游离碱浓度)的储备液,再用乙腈/水(1:1)怖释至约12弘g/ml,并加入内标使其浓度约为14腭/ml。同法制备参比标准溶液。片剂及胶囊:取片剂20片研磨或胶囊20粒的内容物混合,取样(相当于100 mg药物)用乙腈/水(1:’1)提取并稀释至100 ml,待赋形剂沉降后,按原料药项下稀释制备。羟丙基甲基纤维     

测定脑区5-羟色胺的简易方法

目前测定脑和血液中5-羟色胺(5-HT)含量所采用的方法操作复杂、耗时且需昂贵的设备。本文利用Amberlite树脂浓缩和纯化5-HT,以0.15MHCl洗脱后直接测定其自然荧光。5-HT贮存液:11.5mg 5-HT硫酸肌苷盐溶于500ml水中,配成10μg/ml(碱基)。标准工作溶液浓度范围稀释成10～160ng/ml。吸附溶液:4ml 2MHCl,50mgEDTA-2Na,6ml 0.5M磷酸盐缓冲液(pH     

HPLC法测定氟康唑泡腾粘附片的含量

报道了氟康唑泡腾粘附片的高效液相色谱测定法。固定相为Spherisorb-C18。流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液(50:50v/v),检测波长为211nm,内标物为非那西丁。线性范围:2.5～25μg/ml(r=0.9998),回收率98.5％(n=5),辅料无干扰。     

高效液相色谱法测定血浆中阿司匹林和水杨酸

应用0072％磷酸-甲醇(45:55,v/v)为流动相,在μ-Bondapark C18柱上,以苯甲酸为内标,建立了家兔血浆中阿司匹林(1)和水杨酸(2)的高效液相色谱测定法。1和2平均绝对回收率分别为100.7和104.8％,变异系数分别为5.6和7.3％。1.2的血浆浓度分别在2～10μg/ml、20～100μg/ml范围内呈良好线性关系。     

反相离子对HPLC测定人血浆中的氟喹诺酮类药物

氟喹诺酮类为广谱抗菌剂。采用HPLC的ODS Hypersil C_(18)柱(5μm,100mm×2mm),荧光检测器。流动相为25%乙腈磷酸盐缓冲液(pH2.0),以十二烷基硫酸钠(SLS)作离子对,嗅化四丁基铵(TBA)作反离子,吡哌酸为内标,可分离和测定人血浆中的氟哌酸、Amifloxacin。氟啶酸和吡哌酸。也可用于其它氟喹诺酮类的测定。样品制备取血浆1ml置于1.5ml离心管中,加入内标液50μl(吡哌酸50μgml~(-1)),涡流振荡几秒,再加入高氯酸50μ1,再振荡     

反相液相色谱法测定人血清中的几种常用青霉素

本文建立了一种快速灵敏的HPLC法,可用于同时测定人血清中青霉素(Ⅰ)、氨苄青霉素(Ⅱ)、青霉素Ⅴ(Ⅲ)、邻氯青霉素(Ⅳ)、双氯青霉素(Ⅴ)和乙氧萘青霉素(Ⅵ)的浓度。标准溶液取上述各青霉素标准品配成1mg/ml的水溶液作贮备液,4℃贮存。内标物贮备液为1mg/mlβ—羟乙基茶碱的乙腈溶液,于测定当日以水稀释至20μg/ml作为内     

高效液相色谱法快速测定氯羟安定

氯羟安定是一种苯二氮(艹卓)类抗焦虑药物,本品主要与肝脏的葡糖醛酸结合而代谢。本文报道一种采用固相提取程序测定血浆中氯羟安定的反相HPLC方法。材料氯羟安定、内标temazepam。以甲醇制备1mg/ml的标准贮备液,4℃保存。在分析的当天,用水稀释成1μg/ml的溶液,加入血浆中得到系列标准浓度。     

HPLC法测定人血清中头孢呋肟浓度

本文建立了快速、简便测定人血清中头孢呋肟反相HPLC法,采用5×20mn不锈钢柱内填10um YWG-C_(18)H_(37)17定相,流动相甲醇:水:冰醋酸(28:71:1v/v),流速1.2ml/min,以头孢噻肟为内标物,紫外检测波长290nm,用10％三氯醋酸作蛋白沉淀剂,与血清之比为1:2(v/v)。头孢呋肟的日内回收率为100.34±6.60％,日间回收率为99.69±6.33％。头孢呋肟最低检测限为2ng,最低检测浓度为0.2μg/ml。在0.25～10μg/ml浓度范围内线性良好,相关系数r=0.9999。     

高效液相色谱法测定血浆中氟卡胺浓度及其在人体内的药代动力学

本文报告了氟卡胺血药浓度的高效液相色谱测定法。以氟基安定为内标,以含有离子对试剂的甲醇—水溶液为流动相,建立了测定条件。绘制标准曲线得回归方程为Y=0.0017X+0.0131,r=0.9975。氟卡胺及内标的回收率均大于94%,日内及日间变异系数均小于5%。正常人口服氟卡胺后的药代动力学参数,Ka=0.908h^-1,T_1/2K=8.131h,TPK=3.487h,AUC=441.8ng.h/ml。病人口服氟卡胺的有效血浓度为423.64±227.4ng/ml。     

食品中亚硝酸盐测定方法的改进

目前我国食品中亚硝酸盐标准检验方法主要采用格里斯试剂比色法,但该法实验步骤较多,试剂用量大,操作时间长,不适宜大批样品的测定。本文提出的改进方法简便实用、灵敏度高、精密度、准确度及线性关系良好。1 材料与方法1.1 试剂与仪器:①硫酸锌溶液(120g/L):同 GB/T5009.33-2003。②氢氧化钠溶液(20g/L):同 GB/T5009.33-2003。③显色剂:称取4g 对氨基苯磺酰胺和0.2g 盐酸萘乙二胺,共溶于70ml 盐酸(1:6)中,用水稀至于100ml。置棕色瓶内冰箱保存可稳定1个月。④亚硝酸钠标准贮备液(500.0μg/ml)同 GB/T5009.33-2003。⑤亚硝酸钠标准使用液(5.0μg/ml)同 GB/T5009.33-2003。⑥分光光度计和小型绞碎机。