阻断ICOS抑制兔高危角膜移植排斥反应的实验研究

目的 建立兔角膜移植高危模型,通过阻断ICOS,探讨ICOSmAb对角膜移植排斥反应的影响.方法 将新西兰白兔50只随机分成空白对照组、实验组(植片为浸入含有不同浓度ICOSmAb的中期保存液中)A组(1 mg·L-1 ICOSmAb),B组(10 mg·L-1ICOSmAb),C组(25 mg·L-1 ICOSmAb),D组(250 mg·L-1 ICOSmAb),每组10只兔.观察术后受体植片角膜混浊情况和植片病理改变,应用流式细胞仪检测植片CD4 、CD8 T淋巴细胞表达情况.结果 实验A、B组的植片有较长的生存时间,各实验组及对照组植片平均存活时间(69±34) d、(75±31) d、(45±18) d、(10±3)d、(26±4) d.CD4 、CD8 T淋巴细胞表达明显降低(P＜0.05);A组植片组织病理学检查淋巴细胞浸润较对照组及其他实验组明显减少.结论 应用ICOSmAb阻断ICOS,可以明显抑制高危角膜移植排斥反应.     

CTLA4-Ig抑制兔角膜移植排斥反应的作用

目的:建立兔角膜移植高危及非高危模型,通过阻断CD28,探讨CTLA4-Ig对高危角膜移植排斥反应的影响。方法:实验分为新生血管化模型组及非新生血管化组,每组随机分成:空白对照组(空白保存液)、实验组(浸入含有CTLA4-Ig10mg/L保存液4℃孵育18h),每组10只兔。观察术后受体植片角膜混浊情况和植片病理改变,原位杂交方法检测角膜植片TNF mRNA的表达情况,比较植片生存时间。结果:非新生血管化角膜移植组:对照组和实验各组的植片排斥时间或平均植片存活时间上无统计学意义,超过半数植片(16/30,53%)存活时间超过100d。新生血管化角膜移植组:实验组生存时间较长69±34d,对照组26±4d,原位杂交检测移植术后4wk或排斥反应发生时对照组角膜植片上皮下基质层浸润细胞有明显的TNF mRNA的表达,实验组未见TNF mRNA表达。结论:在兔角膜移植排斥反应中应用CTLA4-Ig阻断CD28,可以明显抑制兔高危角膜移植排斥反应,提高移植的存活率。     

重组腺病毒载体RNA干扰阻断ICOS共刺激通路抑制大鼠角膜移植免疫排斥反应的研究

目的观察携带有报告基因绿色荧光蛋白且表达ICOS-siRNA的重组腺病毒载体Ad-siICOS-EGFP阻断ICOS共刺激通路对角膜移植急性免疫排斥反应的抑制作用。方法取Wistar大鼠(供体)及SD大鼠(受体),建立大鼠同种异体穿透性角膜移植模型,将SD大鼠随机分为A、B、C、D4组,每组各20只:A组为单纯角膜移植对照组;B组为Ad-siICOS-EGFP注射组,术后即刻于球结膜下注射Ad-siICOS-EGFP;C组为Ad-EGFP注射组,术后即刻于球结膜下注射Ad-EGFP;D组为生理盐水注射组,术后即刻于球结膜下注射生理盐水;每眼选择角膜缘1200位、600位两个注射点,每个注射点注射剂量为15μL。术后每天在裂隙灯显微镜下观察排斥反应指数的变化并记录植片的存活时间。各组分别于术后5d随机取10只大鼠,麻醉后取角膜,部分植片行RT-PCR检测,部分角膜冰冻切片行共聚焦显微镜观察。各组其余大鼠进行角膜植片存活时间统计。结果 A组、B组、C组、D组角膜植片平均存活时间分别为(9.800±0.632)d、(14.700±1.418)d、(10.000±1.054)d、(10.100±0.876)d,其中B组存活时间最长,与其余各组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);A组、C组、D组各组间差异均无统计学意义(均为P>0.05)。B组及C组角膜植片共聚焦显微镜下可见GFP绿色荧光表达,表达位于角膜植片上皮层及整个角膜基质层;A组、D组角膜植片未见绿色荧光表达。A组、B组、C组、D组植片组织ICOS的PCR产物凝胶电泳条带灰度值比值分别为1.004±0.164、0.621±0.096、0.929±0.134、0.918±0.120,其中B组最低,与其余各组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);A组、C组、D组各组间差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论 Ad-siICOS-EGFP可以有效地抑制大鼠植片组织ICOSmRNA及蛋白的表达,从而阻断ICOS共刺激通路;移植术后即刻受体鼠球结膜下注射Ad-siICOS-EGFP,可以抑制大鼠角膜移植急性免疫排斥反应,延长角膜植片存活时间。     

Ad-siICOS阻断ICOS共刺激通路抑制大鼠角膜移植排斥反应的实验研究

目的 观察携带报告基因GFP且表达ICOS-siRNA的重组腺病毒(Ad-siICOS-EGFP)阻断可诱导共刺激分子(inducible costimulator,ICOS)共刺激通路对角膜移植急性免疫排斥的抑制作用.设计实验性研究.研究对象Wistar大鼠(供体)及SD(受体)大鼠.方法 取Wistar大鼠(供体)...     

联合阻断共刺激信号对兔新生血管化角膜移植术后免疫排斥反应的影响

目的　通过阻断新生血管化角膜兔模型穿透性角膜移植术后共刺激信号配体和受体的结合,探讨联合阻断共刺激信号对兔高风险角膜移植术后免疫排斥反应的影响。方法　缝线法制作新生血管化角膜兔动物模型,随机数字表法将其分组:对照组、ＭＲ１组、抗Ｂ７-１组、联合处理组,每组１２只。术后裂隙灯显微镜下观察角膜排斥反应排斥情况,并记录各组角膜植片存活时间、制作植片生存曲线,比较其差异;术后４周或免疫排斥反应发生时各组随机选取５只兔模型摘取术眼角膜,对植片行组织病理学检查角膜组织结构改变及炎性细胞浸润情况,通过免疫组织化学方法检测肿瘤坏死因子-α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ-α,ＴＮＦ-α）在角膜植片中的表达。结果　与对照组比较,ＭＲ１组、抗Ｂ７-１组和联合处理组角膜植片均获得了较长的存活时间,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。联合处理组分别与ＭＲ１组和抗Ｂ７-１组比较,生存时间更长,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;ＭＲ１组和抗Ｂ７-１组角膜植片生存时间比较,差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。联合处理组兔角膜植片炎性细胞浸润较其他三组明显减少,ＴＮＦ-α表达平均光密度值显著降低,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）;而ＭＲ１组与抗Ｂ７-１组比较,差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论　联合应用ＣＤ４０Ｌ和抗Ｂ７-１单克隆抗体阻断共刺激通路受体和配体的结合,比单独应用其中一种抗体能更有效地降低新生血管化角膜兔模型穿透性角膜移植术后植片排斥反应的发生率,延长植片的生存时间,提高植片的存活率。     

细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白抑制鼠高危角膜移植免疫排斥反应的实验研究

目的　探讨细胞毒T淋巴细胞相关抗原 4免疫球蛋白 (CTLA4 Ig)对小鼠高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用及局部抗免疫排斥反应机制。方法　建立 5 0只BALB/c小鼠穿透性角膜移植动物模型。治疗组 (2 5只 ) :取C5 7BL/ 6小鼠角膜片 ,放置于 10 μg/mlCTLA4 Ig保存液中浸泡 2 4h后 ,移植到BALB/c小鼠。对照组 (2 5只 ) :植片不行任何处理。术后每 3d用裂隙灯显微镜检查植片情况 ,每周应用组织学和免疫组织化学方法检测植片中各种炎性细胞和淋巴细胞的变化。对出现排斥反应的角膜植片应用逆转录PCR(RT PCR)方法检测部分细胞因子的表达。另外 ,选择经CTLA4 Ig治疗、植片保持透明 6周以上的小鼠作为受体 ,接受来自C5 7BL/ 6小鼠皮肤的移植 ,当移植皮肤发生排斥时 ,进行迟发性超敏反应 (DTH)分析。结果　CTLA4 Ig治疗组角膜植片保持透明 >10 0d。对照组小鼠术后 14d内均发生免疫排斥反应。组织病理学检查显示 ,角膜移植术后 2周 ,CTLA4 Ig治疗组植片保持正常细胞结构 ,无明显炎性细胞和T淋巴细胞浸润 ;对照组的排斥植片有大量炎性细胞和T淋巴细胞浸润 (包括CD 4 ,CD 8及CD 11细胞 )。术后 2周发生免疫排斥的角膜植片中检测到白细胞介素 10 (IL 10 ) ,肿瘤坏死因子α(TNF α) ,γ干扰素 (IFN γ) ,B7及C     

高危角膜移植排斥反应的预防和治疗进展

高危角膜移植术后免疫排斥反应是影响角膜移植成败的首要因素,因此,免疫抑制剂在高危角膜移植排斥反应中的应用占有不可替代的地位。然而,在应用过程中出现许多局部和全身不良反应,为了提高角膜移植成功率,国内外专家、学者在剂型、用药途径以及联合用药方面都做了卓著的研究; 同时在基因工程方面也有可观的进步。本文就高危角膜移植排斥反应的预防和治疗方面做一综述。     

雷帕霉素纳米粒滴眼液治疗兔高危角膜移植排斥反应

目的探讨雷帕霉素(RAPA)纳米粒滴眼液抑制高危角膜移植术后免疫排斥反应的疗效和机制。方法应用不同处理因素干预角膜移植术后免疫排斥反应,观察相关指标的变化。结果RAPA纳米粒滴眼液能明显延长角膜植片存活时间,并能使植片CD4 和CD8 T淋巴细胞表达时间延后。RAPA纳米粒滴眼液组植片中IL-2始终表达,而VEGF表达在14d开始被抑制。结论RAPA纳米粒滴眼液能延长高危角膜移植植片存活时间。     

ICOS共刺激通路参与角膜移植免疫排斥反应的研究

目的研究可诱导共刺激分子（ICOS）共刺激通路与角膜移植急性免疫排斥反应的关系。方法建立大鼠同种异体穿透角膜移植模型,分别于术后7d、14d取植片进行病理学观察,采用RT-PCR法检测植片组织ICOS mRNA的表达情况,免疫组织化学法检测植片组织淋巴细胞ICOS蛋白水平;同时采用流式细胞术检测外周血CD3^＋ICOS^＋T／CD3^＋T的表达情况。均以正常大鼠作为正常对照。结果正常大鼠角膜组织未检测到ICOS蛋白及ICOS mRNA的表达,移植术后植片组织可以检测到ICOS蛋白及ICOS mRNA的表达,且术后14d高于术后7d（P=0．000）;与正常大鼠外周血CD3^＋ICOS^＋T／CD3^＋T的表达相比术后表达皆升高（方差齐性,P=0．156）,且术后14d外周血CD3^＋ICOS^＋T／CD3^＋T的表达高于术后7d的表达（P=0．000）。结论共刺激分子ICOS与角膜移植急性免疫排斥反应密切相关。     

角膜共焦显微镜早期诊断兔高危角膜移植排斥反应的价值

目的:角膜共焦显微镜检查对兔碱烧伤角膜移植排斥反应进行研究,找寻排斥反应早期诊断的客观指标。方法:制作兔角膜碱烧伤模型,36d后行穿透性角膜移植,于角膜移植术后4,9,14,21~28d诊断排斥反应时,角膜共焦显微镜检查角膜。结果:排斥反应时角膜共焦显微镜检查见角膜植片炎性细胞浸润,角膜细胞丢失,新生血管生长。结论:角膜共焦检查有助于早期诊断排斥反应。     

角膜上皮在大鼠穿透角膜移植排斥反应中的作用

目的研究角膜上皮在大鼠穿透角膜移植排斥反应中的作用。方法近交系F344和Wistar大鼠为研究对象，建立穿透角膜移植模型。实验动物随机分为6组，分别为保留供体上皮、去除供体上皮和保留受体上皮的同基因及异基因组。术后观察排斥发生时间，并行苏木精-伊红染色及VEGF、CD4、CD8、RT1B的免疫组织化学染色。结果同基因移植组均未发生排斥反应，去除供体上皮组VEGF表达较保留供受体上皮组增多（P〈0．01）。异基因组均发生排斥反应，保留受体上皮组植片存活时间较其他两组延长（P〈0．01）；植片中CD4、CD8和RT1B抗原的表达亦较其他两组少（P〈0．01）。结论上皮在诱导排斥反应发生中具有重要作用，保留受体上皮可以明显延长穿透角膜移植植片的存活时间。     

全角膜移植术后免疫排斥反应的探讨

目的：评价对严重全角膜病变行带环形板层巩膜瓣全角膜移植术（CST）后免疫排斥反应的临床疗效。方法：对用药无法控制的严重全角膜病变患者10例进行回顾性研究，其中化脓性角膜溃疡9例，大泡性角膜病变伴全角膜白斑1例，全部病人均行CST。结果：随访1-23个月，平均10.2个月，10例视力均有不同程度提高；8例植片透明，2例植片半透明；5例术后3-4个月出现角膜新生血管（其中2例植片半透明）；2例术后半年出现免疫排斥反应。结论：CST是治疗严重角膜病变的有效方法，不但挽救眼球且能恢复一定的视力。     

Local or short-term systemic costimulatory molecule blockade prolongs rat corneal allograft survival

BACKGROUND: Costimulatory molecule blockade with antibody-based immunosuppressive agents has been shown to prolong the survival of many types of allograft. The effects were evaluated of local costimulatory molecule blockade with different CTLA4-Ig constructs and of systemic, short-term treatment with an anti-CD28 monoclonal antibody on orthotopic corneal allograft survival in the rat. METHODS: Adult Fischer-344 rats underwent Wistar-Furth orthotopic corneal grafts. The rats were treated with two different CTLA4-fusion proteins administered intraocularly in the perioperative period, or systemically with anti-CD28 monoclonal antibody JJ319. Corneal graft survival was determined by daily slit-lamp examination. The day of rejection was defined as the first postoperative day on which the iris margin was no longer clearly visible through the corneal graft. RESULTS: Local administration of CTLA4-fusion protein with mutated immunoglobulin constant region domains via a single perioperative intraocular injection prolonged corneal graft survival modestly but significantly (P < 0.05), in contrast to a CTLA4-fusion protein with wild-type immunoglobulin domains, which had no effect on graft survival (P > 0.5). Systemic short-term administration of 400 microg total of an anti-CD28 monoclonal antibody also prolonged corneal graft survival significantly (P < 0.05) and was more effective than systemic administration of 2 mg total of CTLA4-fusion protein (P < 0.05). CONCLUSIONS: Local administration of CTLA4-fusion protein with mutated (non-functional) immunoglobulin domains or systemic administration of anti-CD28 monoclonal antibody can prolong corneal allograft survival in the rat.     

CD40-CD154共刺激信号及其在角膜移植排斥中的研究进展

角膜移植手术失败的主要原因是T细胞介导的免疫排斥反应，T细胞的充分活化需要共刺激信号的协同作用。研究表明CD40-CD154信号在角膜移植排斥中具有重要意义，阻断该信号可延长移植物的存活、本文就其分子特性、免疫学功能进行了综述，重点探讨了阻断该信号抑制角膜移植排斥反应的效应和机制。     

角膜移植患者外周血中T细胞CD28分子的表达及其意义

目的　探讨角膜移植患者外周血T细胞及亚群CD2 8分子表达的变化及其意义。方法　于术前1d、术后第1、2、3、4周,应用流式细胞仪检测2 5例角膜移植患者外周血中CD2 8分子表达水平的变化。结果　角膜高血管化植床组患者术后外周血T细胞CD2 8分子表达比角膜无血管化植床组患者明显增高,也比术前明显增高(P <0 .0 1) ;6例发生排斥反应的患者均出于高血管化植床组;术后早期外周血T细胞中以CD4 + 细胞为主。结论　外周血T细胞CD2 8分子表达与角膜移植排斥反应关系密切,检测角膜移植患者外周血中的CD2 8分子表达可更早监测免疫排斥反应的发生     

沙利度胺对鸵鸟-兔异种角膜板层移植术后免疫排斥反应的影响

目的探讨沙利度胺(THD)对鸵鸟-兔异种角膜板层移植免疫排斥反应的治疗作用。方法选择新西兰白兔眼作为受体,新鲜的鸵鸟角膜为供体,将其分为4组,每组8只:A组(兔移兔对照组)、B组(鸵鸟移兔非处理组)、C组(鸵鸟移兔组,THD每日200mg/kg灌服,早晚各1次,持续4周)、D组(鸵鸟移兔组,结膜下注射地塞米松2mg,每日1次,持续4周)。于术后2、3、4周各组取角膜植片做病理组织学检查。分别于术前、术后1、2、3、4周各组取相同兔的外周血,采用流式细胞仪技术检测T淋巴细胞亚群CD4 、CD8 的动态变化。结果C组T淋巴细胞亚群CD4 /CD8 的比例在术后1周增高,之后随时间推移逐渐减低,而其余各组随时间推移逐渐增高。C组植片一直保持透明,无新生血管生长,仅见个别炎细胞。其余各组炎症均比C组重。结论THD能抑制异种角膜板层移植术后免疫排斥反应,延长异种移植物的存活。但有轻微的不良反应。     

Inhibition of murine corneal allograft rejection by treatment with antibodies to CD80 and CD86

The purpose of this study was to investigate the role of CD80 and CD86 costimulatory molecules in corneal allograft rejection. Anti-CD80 and anti-CD86 monoclonal antibodies (mAbs) were administered after orthotopic corneal allograft transplantation. Graft rejection was observed by biomicroscopy. Population and localization of CD80(+)and CD86(+)cells in the cornea, cervical lymph nodes, and spleen were examined by flow cytometry and immunohistochemistry. The combined use of anti-CD80 and anti-CD86 mAbs was effective in prolonging corneal allograft survival. In the untreated mice bearing rejected graft, many CD86(+)and CD80(+)cells were found around the host-graft junctional area in the cornea, and CD86(high)cells were found in the cervical lymph node and spleen. In contrast, few CD86(+)or CD80(+)cells were observed in the cornea, cervical lymph node, and spleen from the mice treated with anti-CD80/CD86 mAbs. These results demonstrated a significant role of CD80 and CD86 costimulatory molecules in corneal allograft rejection.     

黑睛排斥汤对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的防治研究

背景高危角膜移植患者虽然常规应用免疫抑制性药物,但角膜移植片的排斥率仍很高。近年来传统中药在角膜移植中的作用逐渐引起关注,黑睛排斥汤对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的防治作用需要进一步研究。目的探讨黑睛排斥汤对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用。方法16只正常雌性SD大鼠角膜作为供体,32只雌性Wistar大鼠作为受体,用角膜缝线法诱导角膜新生血管（CNV）,建立大鼠高危角膜移植模型,然后行封闭群大鼠SD．Wistar组间同种异体全板层角膜移植。采用随机数字表法将大鼠随机分为4个组,包括模型对照组（生理盐水灌服）、CsA组[10mg／（kg·d）CsA灌服]、黑睛排斥汤组[4g／（kg·d）黑睛排斥汤灌服]和联合用药组[10mg／（kg·d）CsA＋4g／（kg·d）黑睛排斥汤灌服],各组大鼠均于同种异体角膜移植后4d开始灌服相应药物,于术后第4天起裂隙灯显微镜下观察眼前节反应,每隔2天观察1次,连续观察30d。参考Larkin等的标准对角膜}昆浊程度、水肿程度及新生血管程度进行评分,记录移植排斥指数（RI）并观察植片的存活状况,对角膜进行常规组织病理学检查,采用流式细胞分析法对受体角膜局部和全身免疫状态进行检测,对4个组大鼠的各种检测指标进行比较。结果模型对照组大鼠角膜移植术后10d左右发生排斥反应,CsA组和黑睛排斥汤组大鼠均于术后12～13d发生排斥反应,而联合用药组大鼠于术后22d发生排斥反应。与模型对照组比较,CsA组、黑睛排斥汤组和联合用药组大鼠角膜移植后角膜混浊程度评分、角膜水肿评分和新生血管评分均明显下降,差异均有统计学意义（P〈0．05）,且联合用药组上述各指标的评分均明显低于CsA组和黑睛排斥汤组,差异均有统计学意义（P〈0．05）,而CsA组与黑睛排斥汤组的各种评分差异均无统计学意义（P〉0．05）。模型对照组角膜移植片存活时间平均为（10．38±1．69）d,联合用药组平均为（22．50±3．07）d,差异有统计学意义（t=-9．790,P=0．000）。组织病理学检查表明,术后15d联合用药组大鼠角膜基质中淋巴细胞浸润及新生血管评分少于CsA组和黑睛排斥汤组。流式细胞学检查证实,黑睛排斥汤组、CsA组和联合用药组大鼠角膜移植术后外周血中CD4＋淋巴细胞计数及CD4＋／CD8＋比值均低于模型对照组,联合用药组CD4＋淋巴细胞计数及CD4＋／CD8＋比值均低于CsA组和黑睛排斥汤组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论黑睛排斥汤对高危角膜移植模型大鼠术后角膜排斥反应有抑制作用,其疗效与0．1％CsA接近,二者联合用药有协同作用。