生长抑素类似物8肽对肝癌细胞增殖的影响

目的：探讨生长抑素类似物8肽对从原发性肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响。方法：运用MTT比色法分析生长抑素类似物8肽对肝癌细胞生长的影响。结果：生长抑素类似物8肽可抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖，存在量效和时效关系。结论：生长抑素类似物8肽可抑制肘癌细胞SMMC-7721增殖。     

肝细胞癌差异表达基因P-02反义寡核苷酸抑瘤作用的体外实验研究

目的 :通过全硫代修饰的肝细胞癌差异表达基因P 0 2反义寡核苷酸对人肝癌细胞系SMMC 772 1增殖活性的影响 ,探讨P 0 2基因的功能。方法 :以脂质体为载体 ,采用MTT法、RT PCR、流式细胞术检测P 0 2AS ODN(antisenseoligonucleotide)对SMMC 772 1细胞生长、增殖、细胞周期的作用。结果 :脂质体介导的P 0 2基因反义寡核苷酸可抑制SMMC 772 1增殖 ,RT PCR结果显示P 0 2基因的扩增条带明显减弱 ,流式细胞术显示G1期细胞增多 ,M期及S期细胞数减少。结论 :脂质体介导的AS ODN可抑制SMMC 772 1的恶性表型 ,证实P 0 2基因在肝细胞癌的发生发展中可能有重要作用     

反义端粒酶RNA对SMMC7721肝癌细胞系的作用

目的　观察反义端粒酶RNA对SMMC 772 1肝癌细胞系的作用 ,探讨抗端粒酶治疗在原发性肝癌治疗中的意义。方法　采用脂质体介导的方式将潮霉素抗性的反义端粒酶RNA真核表达载体PBBS2 12 /hTR转入SMMC772 1肝癌细胞中 ,经潮霉素筛选 ,克隆细胞株扩增鉴定后 ,采用TRAP PCR ELISA及FCM、电镜检测反义端粒酶RNA对SMMC 772 1细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响。结果　TRAP PCR ELISA法检细胞端粒酶活性的检测结果为 :实验组吸光度值为 0 .482 ,对照组吸光度值为 2 .86 1;FCM检测细胞凋亡结果为 :实验组 13 .8% ,对照组未见有凋亡峰形成 ,电镜观察发现转染反义端粒酶RNA的SMMC772 1细胞具有典型的凋亡细胞形态 ,细胞发生较多的凋亡。结果表明反义端粒酶RNA显著抑制SMMC772 1肝癌细胞的端粒酶活性 ,并且对其有显著的促凋亡作用。结论　反义端粒酶RNA能有效地抑制肝癌细胞端粒酶活性 ,同时显著促进癌细胞凋亡。借助抑制细胞端粒酶活性的手段来达到阻止肿瘤生长的目的 ,为肝癌的治疗提供了新的途径。     

家蝇免疫血淋巴对SMMC-7721肝癌细胞超微结构和增殖周期的影响

目的　研究家蝇幼虫免疫血淋巴对SMMC 772 1细胞的作用机制。方法　提取家蝇幼虫免疫血淋巴 ,电镜观察对SMMC 772 1细胞超微结构的影响 ,流式细胞仪测定增殖周期的变化。结果　免疫血淋巴作用SMMC 772 1细胞后 ,细胞膜上出现小孔洞、线粒体水肿、粗面内质网轻度扩张、游离的核糖体减少 ;细胞的增殖指数下降 (P <0 .0 1)。结论　家蝇免疫血淋巴作用SMMC 772 1细胞后 ,引起细胞膜通透性增高 ,抑制能量代谢 ,抑制分裂增殖。     

p53p21双基因转染对肝癌细胞生长的抑制作用研究

 目的　研究 p5 3和 p2 1双基因对肝癌细胞的联合基因治疗效果。 方法　通过磷酸钙 -DNA共沉淀法将p5 3和 p2 1双基因真核共表达载体及单基因表达载体引入肝癌细胞SMMC 772 1,用直接镜检 ,DNAladder检测法和四甲基偶氮唑 (MTT)法等研究细胞生长情况。结果　转染外源 p5 3p2 1双基因的肝癌细胞SMMC 772 1与未转染及单基因转染的肝癌细胞SMMC 772 1相比 ,其增殖速度显著下降。结论　p5 3和p2 1双基因对肝癌细胞的联合基因治疗效果比较明显 ,对肝癌基因治疗的进一步研究具有指导意义。     

Stathmin基因反义核酸对人肝癌细胞系的生长抑制作用

目的 :探讨Stathmin基因反义核酸 (AS ODN)对人肝癌细胞系的生长抑制作用。方法 :以高表达Stathmin基因的人肝癌细胞系SMMC 772 1为靶细胞、反义Stathmin (AS ODN)为阻断剂 ,通过RT PCR观察AS ODN对肝癌细胞Stathmin基因表达的抑制 ,MTT试验观察AS ODN对肝癌细胞的生长抑制作用 ,流式细胞仪分析细胞增殖周期的影响。结果 :AS ODN明显抑制了肝癌细胞SMMC 772 1的生长及Stathmin基因的表达 ,P <0 0 5。SMMC 772 1在AS ODN作用下 ,细胞分裂阻滞在分裂期的中期 ,并诱导细胞发生凋亡。结论 :Stathmin基因的反义核酸 (AS ODN)对肝癌细胞的生长可能起十分重要的作用 ,它有望成为肝癌治疗的新靶点     

Cyclin D1和NF-κB在5-Fu诱导肝癌细胞凋亡过程中的表达

目的　探讨周期蛋白基因D1(CyclinD1)和核转录因子-κB(NF -κB)在5 氟脲嘧啶(5 - Fu)诱导肝癌细胞凋亡过程中的表达及其对细胞周期的影响。方法　体外培养人肝癌细胞株SMMC- 772 1,应用流式细胞术检测5 Fu对SMMC -772 1细胞周期和凋亡的影响;免疫印迹分析cyclinD1表达差异;用TransAM核转录因子活性检测试剂盒检测NF κB活性;细胞免疫组织化学检测NF κBp65入核情况。结果　5 Fu可诱导SMMC -772 1细胞凋亡,5 0、10 0、2 0 0 μg/ml 5 Fu分别作用2 4h后,其诱导细胞凋亡率分别为13 .2 % ,2 1.7%和3 5 .9% ,与对照组相比有显著性差异(P <0 .0 5 )。随着5- Fu浓度的增加,S期细胞比例和细胞增殖指数增加,CyclinD1蛋白的表达逐渐增强,NF -κBp65被激活并入核。结论　5 -Fu可诱导肝癌SMMC 772 1细胞凋亡;NF- κB在5 - Fu诱导肝癌细胞凋亡同时被激活;其下调基因CyclinD1过度表达可能是促进细胞增殖、对抗细胞凋亡的重要因素之一。     

反义DNA甲基转移酶1改变肝癌SMMC-7721细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的敏感性及其机理的研究

目的　观察转入反义DNA甲基转移酶 1(DNMT1)基因片段后的肝癌SMMC 772 1细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)的敏感性改变 ,初步阐明其机理。方法　台盼蓝排斥实验检测活细胞率 ;TUNEL法检测细胞凋亡率 ;流式细胞仪检测bcl 2、bax和bad蛋白的表达。结果　转入反义DNMT1基因片段的肝癌SMMC 772 1细胞与转入正义DNMT1基因片段和空载体的细胞相比 ,活细胞率显著降低 (P <0 .0 5,P <0 .0 1) ,凋亡率显著增高 (P <0 .0 5,P <0 .0 1)。流式细胞仪结果显示 ,转入反义DNMT1基因片段的SMMC 772 1细胞 ,其bax和bad表达 ,尤其是bax的表达 ,明显高于转入正义DNMT1基因片段和空载体的细胞 ,但对bcl 2的表达无影响。结论　转入反义DNMT1基因片段的肝癌SMMC 772 1细胞对TRAIL的敏感性明显增强 ,可能与bax和bad的表达增强有关     

Decorin对肝癌细胞株凋亡作用的研究

目的 :探讨decorin对肝癌细胞株增殖及细胞凋亡的作用。方法 :用不同浓度的decorin和正常肝细胞株 (L 0 2细胞 )、肝癌细胞株 (SMMC 772 1、MM4 5 )共同孵育一定时间后 ,观察细胞的存活情况、形态学改变 ,用流式细胞仪分析DNA的分布。结果 :Decorin在体外能抑制肝癌细胞的增殖 ,诱导肝癌细胞出现典型的凋亡细胞特征 :细胞核浓缩、细胞膜皱摺、凋亡小体形成 ,而且其诱导凋亡作用呈剂量效应。结论 :Decorin作为一种生物制剂可诱导肝癌细胞凋亡。     

奥曲肽致裸鼠肝癌原位移植瘤坏死的实验研究

背景与目的：生长抑素类似物奥曲肽可抑制肝癌的生长,但能否使其坏死、获得更好的抗肿瘤效果呢？本研究旨在观察奥曲肽在体内、外对肝癌细胞株HepG2的作用,探讨其致肿瘤坏死的机制。方法：采用四甲基偶氮唑蓝法检测体外HepG2细胞的增殖,建立裸鼠肝癌HepG2细胞原位移植瘤模型．奥曲肽组裸鼠皮下注射奥曲肽100μg／（kg·d）;对照组皮下注射相同体积的生理盐水,连续用药8周。组织学评估肿瘤坏死程度,免疫组化检测移植瘤中血管内皮生长因子（VEGF）的表达,Western blot和免疫组化检测生长抑素受体2（SSTR2）的表达。结果：奥曲肽（0．1—1000nmol/L）作用24h,不影响HepG2细胞增殖。奥曲肽组裸鼠肝癌移植瘤重[（7．15±2．96）g]高于对照组[（4．21±3．11）g],移植瘤坏死体积[（81．86％±0．05）％]大于对照组[（43．75±0．06）％],两组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。与对照组明显不同的是．奥曲肽组移植瘤中未见VEGF表达。两组移植瘤组织血窦中SSTR2表达无显著性差异（P〉0．05）。结论：在肝癌细胞活跃增殖条件下,奥曲肽通过移植瘤血窦中SSTR2介导,仅仅抑制肿瘤血管生成,可致裸鼠肝癌显著坏死的良好效应。     

Lupeol及其衍生/修饰物对肝癌细胞增殖影响的研究

目的:探讨lupeol及其结构改造后衍生/修饰物对肝癌细胞HepG2和SMMC7721细胞增殖的作用。方法:对lupeol进行化学结构修饰,然后应用MTT方法检测lupeol及其衍生/修饰物对HepG2和SMMC7721细胞增殖的作用。结果:MTT数据显示,lupeol及其衍生/修饰物均能抑制HepG2和SMMC7721细胞增殖,并且具有浓度依赖性。Lupeol、H1、T1和T2的IC50分别为40μmol/L-50μmol/L、约120μmol/L、约50μmol/L和70μmol/L-80μmol/L。结论:lupeol结构改造后,并没有提高其对肝细胞肝癌细胞增殖的抑制作用。     

Lupeol及其衍生/修饰物对肝癌细胞增殖影响的研究

目的：探讨lupeol及其结构改造后衍生/修饰物对肝癌细胞HepG2和SMMC7721细胞增殖的作用。方法：对lupeol进行化学结构修饰,然后应用MTT方法检测lupeol及其衍生/修饰物对HepG2和SMMC7721细胞增殖的作用。结果：MTT数据显示,lupeol及其衍生/修饰物均能抑制HepG2和SMMC7721细胞增殖,并且具有浓度依赖性。Lupeol、H1、T1和T2的IC50分别为40μmol/L-50μmol/L、约120μmol/L、约50μmol/L和70μmol/L-80μmol/L。结论：lupeol结构改造后,并没有提高其对肝细胞肝癌细胞增殖的抑制作用。     

PTEN在三氧化二砷诱导肝癌细胞(SMMC-7721)凋亡中的作用

目的 研究PTEN在三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)诱导肝癌细胞凋亡中的作用.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测As2O3对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪定量检测各组细胞的凋亡率;Western blot方法检测各组细胞中PTEN蛋白的表达情况;用PTEN siRNA转染SMMC-7721细胞,观察其对As2O3诱导细胞凋亡作用的影响.结果 As2O3能显著抑制SMMC-7721细胞存活率,其抑制率呈剂量依赖关系;As2O3剂量依赖性诱导肝癌细胞凋亡;Western blot检测显示As2O3明显增加细胞中PTEN蛋白的表达;PTEN siRNA转染可减弱As2O3对SMMC-7721细胞凋亡的诱导作用.结论 As2O3诱导SMMC-7721细胞凋亡可能与其诱导PTEN表达有关.     

siRNA 靶向沉默 KIF20A 基因对人肝癌 SMMC -7721细胞体外增殖和侵袭迁移的影响

目的：研究 KIF20A 对肝癌 SMMC -7721细胞系增殖和侵袭迁移能力的影响。方法：利用 RNA 干扰技术下调肝癌细胞系 SMCC -7721中 KIF20A 的表达。qRT - PCR 和 Western blot 分别检测细胞 KIF20A 在mRNA 和蛋白水平表达中的变化。CCK -8实验检测增殖能力的改变。Transwell 实验检测迁移、侵袭能力的改变。结果：qRT - PCR 和 Western blot 结果显示 KIF20A - siRNA 能够成功下调 KIF20A 的表达,CCK -8和Transwell 实验分别证实肝癌 SMMC -7721细胞增殖和侵袭迁移能力下降。结论：抑制 KIF20A 的表达能够降低肝癌细胞的增殖和侵袭迁移能力。     

奥曲肽联合阿司匹林增强对肝癌细胞生长的抑制作用

背景与目的:奥曲肽和阿司匹林均能抑制肝癌细胞生长,但两种非细胞毒性药物的抗肿瘤机制不同。从多环节发挥抗癌作用的角度考虑,联合治疗可使多种药物获得协同作用,产生最大的抑瘤效应,减少用药量,降低不良反应。本文旨在探讨奥曲肽联合阿司匹林对人肝癌细胞生长的作用。方法:采用3H-胸腺嘧啶核苷掺入法观察单独或联合应用奥曲肽和阿司匹林对体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721生长的影响,根据中效原理判断两者之间相互作用的关系。建立人肝癌裸鼠原位移植瘤模型,观察奥曲肽和阿司匹林单独或联合作用对体内肝癌生长的影响。结果:奥曲肽与阿司匹林在体外联合作用能显著抑制SMMC-7721生长,其合用浓度与3H-胸腺嘧啶核苷掺入量呈显著负相关,r=-0.9594,P<0.01。奥曲肽与阿司匹林的大多数效应范围尤其是高水平效应时合用指数小于1,具有明显的协同作用。奥曲肽联合阿司匹林能显著抑制人肝癌裸鼠原位移植瘤的生长,抑瘤率高达89.47%,较单用阿司匹林组(69.92%)明显升高,且联合组肿瘤内的纤维组织增生较对照组明显增多。在各组裸鼠的体内实验中未见明显不良反应。结论:奥曲肽联合阿司匹林不仅显著增加单用其中一种药物对人肝癌细胞株生长的抑制作用,也明显提高对裸鼠肝癌原位移植瘤的抑瘤率,提示两者联合应用对抑制肝癌     

玻连蛋白促进肝癌细胞株增殖及迁移的初步研究

目的： 了解玻连蛋白(VTN)对肝肿瘤细胞株SMMC7721增殖和迁移能力的影响。方法： 采用不同浓度VTN包被培养皿后接种、培养细胞,采用激光共聚焦显微镜观察VTN包被后细胞骨架成分微管蛋白形态的变化,用细胞增殖试剂分析VTN对细胞增殖率的影响及分析VTN对凋亡诱导剂抑制增殖作用的影响,采用Transwell侵袭实验检测VTN对细胞迁移能力的影响。结果：激光共聚焦观察结果显示VTN包被有助于促进细胞贴壁及细胞骨架蛋白形态结构的维持;VTN可促进肿瘤细胞的生长且呈剂量效应,并可减弱凋亡诱导剂对细胞增殖的抑制;Transwell侵袭实验结果显示VTN包被可促进细胞迁移。结论：体外实验条件下,VTN有助于肝癌细胞株SMMC7721的增殖及迁移,提示VTN在肝癌发生过程中可能具有促进肿瘤细胞增殖和迁移的生物学作用。     

RNA干扰抑制BMP-2基因表达对人肝癌SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响

目的：设计并化学合成针对骨形态发生蛋白2（BMP-2）的siRNA分子片段,转染人肝癌SMMC7721细胞,观察其对SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响。方法：阳离子脂质体法瞬间转染SMMC7721细胞,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western印迹法检测转染BMP-2-siRNA后细胞BMP-2 mRNA水平和蛋白水平的变化,MTT法和流式细胞术检测转染BMP-2-siRNA后SMMC7721细胞增殖、细胞周期和凋亡的变化。结果：3对特异性BMP-2-siRNA均有效地抑制了BMP-2基因的表达,以siRNA-B抑制效果最好。转染BMP-2-siRNA后SMMC7721细胞的增殖能力明显受到抑制( P <0.05)且明显促进了SMMC7721细胞的凋亡。结论：靶向BMP-2基因的siRNA分子片段可以有效地抑制人肝癌SMMC7721细胞的增殖并促进其凋亡     

艰难梭菌A毒素诱导SMMC7721细胞和Vero细胞凋亡的比较研究

背景与目的:艰难梭菌是假膜性大肠炎及抗生素诱发性腹泻的主要致病菌之一,它产生的毒素具有不同的生物学活性.本实验拟研究艰难梭菌 A毒素诱导人肝癌细胞株( SMMC7721)和非洲绿猴肾细胞( Vero细胞)凋亡的作用. 方法:由脑心浸液对艰难梭菌 VPI 10463菌株培养产毒 , 经甲状腺球蛋白亲合层析和 Q Sephrose层析提纯得到精制 A毒素.对 SMMC7721细胞的研究以 Vero细胞为对照.抑制细胞增殖的检测采用 MTT法;用荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞仪观察细胞形态和细胞周期的改变;采用琼脂糖凝胶电泳法观测 DNA碎片.结果:不同浓度 A毒素 (0.293～ 4.690 mg@ L- 1)明显抑制了 SMMC7721及 Vero细胞的增殖,并且呈时间和浓度依赖性;两种细胞与 A毒素共同培养 48 h,荧光显微镜和透射电镜都观察到典型的凋亡形态变化; SMMC7721细胞与 A毒素共同培养 48 h后,琼脂糖凝胶电泳显示梯形条带.结论: A毒素明显诱导了两种细胞的凋亡 ; A毒素对 SMMC7721细胞具有更强的诱导凋亡作用.     

索拉非尼及PI3K、mTOR抑制剂对肝胆肿瘤细胞增殖及Ghrelin基因表达的影响

目的 探讨索拉非尼及磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）抑制剂对肝胆肿瘤细胞增殖及Ghrelin（GHRL）基因表达的影响。方法 收集体外常规培养的肝癌SMMC7721细胞和胆管癌QBC939细胞,经不同浓度（0、50、100、200 μmol/L）索拉非尼、LY294002（PI3K抑制剂）及Rapamycin（mTOR抑制剂）处理48 h后,采用MTS细胞活性检测试剂盒检测SMMC7721、QBC939细胞的增殖率,实时定量PCR（qPCR）检测SMMC7721、QBC939细胞中GHRL 基因的mRNA水平。结果与对照组相比,LY294002、索拉非尼和Rapamycin处理后的SMMC7721、QBC939细胞的增殖率均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,且随着药物浓度的增加,两种细胞的增殖率均降低（P＜0.05）。qPCR结果显示,经LY294002和索拉非尼处理48 h后的SMMC7721细胞中GHRL mRNA水平与对照组的差异无统计学意义（P＞0.05）;与对照组相比,随着Rapamycin作用浓度的升高,实验组SMMC7721细胞的GHRL mRNA水平升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;经LY294002、索拉非尼和Rapamycin处理的QBC939细胞中GHRL mRNA水平高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 三种药物均可以抑制肝癌和胆管癌细胞的增殖并促进QBC939细胞的GHRL表达,但仅Rapamycin能上调SMMC7721肝癌细胞的GHRL基因表达。GHRL基因表达与肝癌和胆管癌的发生可能有密切关系。     

ICE基因转染联合化疗药物杀伤肝癌细胞的研究

目的：研究人ICE基因转染联合化疗药物诱导体外杀伤肝癌细胞的作用。方法：应用电穿孔法将构建成功含有目的基因的逆转录病毒载体pLXSN-hICE导入包装细胞系PA317，筛选G418抗性克隆，并将其病毒上清转入肝癌细胞株HepG2，DNA提取、电泳观察；采用^3H-TDR掺入法观察、分析化疗药物卡铂对肝癌细胞株SMMC7721及转入相应目的基因后的SMMC7721-ICE，SMMC7721-反义hICE，SMMC7721-neo细胞株体外增殖的影响。结果：ICE基因转染可诱导HepG2形成具有凋亡特征的梯状DNA；在卡铂低浓度诱导下，与对照细胞相比SMMC7721-hICE细胞株体外增殖明显受抑。结论：人ICE基因转染可直接诱导肝癌细胞株HepG2凋亡，明显提高肝癌细胞SMMC7721对化疗药物卡铂杀伤的敏感性，ICE基因转染联合化疗药物诱导极大增强了对肝癌细胞的杀伤作用，可能是治疗肝癌一个有前途的方案。