血管紧张素Ⅱ诱导肾小球系膜细胞纤维连接蛋白产生？…

目的：观察不同浓度的血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）刺激后系膜细胞ＡｎｇⅡ受体基因表达和分泌纤维连接蛋白（ＦＮ）的情况，方法：从６日龄人胎肾培养系膜细胞，经ＡｎｇⅡ刺激后用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测胎肾系膜细胞ＡＴ１和ＡＴ２受体ｍＲＮＡ的表达情况，分别用ＥＬＩＳＡ和ＲＴ－ＰＣＲ方法检测系膜细胞产生的ＦＮ和基因表达。结果：（１）经１０＾－８，１０＾－７，１０＾－６和１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ的Ａ     

血管紧张素Ⅱ体外诱导人肾小球系膜细胞衰老

目的观察不同浓度血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用不同时间后对人系膜细胞(GMC)衰老指标的影响。方法应用10-8、10-7、10-6、10-5、10-4mol/L AngⅡ刺激人GMC,刺激时间为24、48、72、96 h,通过检测细胞增殖情况、衰老相关β半乳糖苷酶(SAβ-gal)染色阳性细胞百分率、细胞周期变化及细胞形态改变确定AngⅡ诱导人GMC衰老的最佳浓度和时间。结果 10-6mol/L AngⅡ刺激GMC 72 h,可抑制GMC增殖,且80%以上的GMC SAβ-gal染色阳性,82%以上的GMC进入G0^G1期;10-6mol/L AngⅡ刺激GMC 72 h诱导的衰老GMC,光镜下表现为体积增大,胞体扁平,胞质内颗粒增多,细胞排列不规则,多型核及双核细胞增多;电镜下显示核膜内陷,染色质凝集、边集,细胞质空泡形成,出现髓样溶酶体,粗面内质网扩张。结论 10-6mol/L AngⅡ刺激GMC 72 h可作为诱导GMC发生衰老的最佳刺激因素。     

高糖及血管紧张素Ⅱ对大鼠肾小球系膜细胞结缔组织生长因子表达的影响

糖尿病肾病 (ＤＮ)是糖尿病常见而且严重的慢性并发症 ,高血糖和血管紧张素Ⅱ (ＡｎｇⅡ )是导致ＤＮ肾纤维化最主要的两种物质 ,它们通过共同的信号传导途径参与了肾纤维化的发生发展〔1,2〕。近年来 ,国外研究发现结缔组织生长因子 (ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅｔｉｓｓｕｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＣＴＧＦ)对肾细胞增殖、表型改变及细胞外基质 (ＥＣＭ )具有较强调控作用 ,其异常表达在ＤＮ肾纤维化进程中起了重要作用。本研究拟用高糖和ＡｎｇⅡ刺激体外培养的系膜细胞 ,测定其ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达情况 ,以探讨高糖和ＡｎｇⅡ对系膜细胞…     

血管紧张素Ⅱ对肾小球系膜细胞增殖的影响及细胞因子信号转导抑制蛋白-1的干预作用

目的探讨血管紧张素(Ang)Ⅱ对肾小球系膜细胞(HMC)增殖的影响及细胞因子信号转导抑制蛋白(SOCS)-1的干预作用。方法体外培养HMC细胞,MTT法检测AngⅡ有效作用浓度,ELISA法检测白细胞介素(IL)-6、IL-1β的含量,Western印迹法测定肾组织SOCS-1表达,确定SOCS-1的干预作用。结果 AngⅡ作用于HMC细胞后,吸光度值(OD值)明显增加(P0.05),10~(-6)mol/ml AngⅡ在48 h作用最明显(P0.01)。SOCS-1可以抑制HMC细胞增殖,降低IL-6和IL-1β水平,与AngⅡ组比较有显著性差异(P0.01)。结论 AngⅡ可诱导HMC细胞增殖,10-6mol/ml在48 h作用最明显;SOCS-1可以降低HMC细胞分泌IL-6和IL-1β的含量,抑制HMC细胞增殖,从而延缓与减轻肾小球硬化,减缓疾病进展。     

抑制NF-κB活性下调高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞血管紧张素原表达水平

在体外原代培养的SD大鼠肾小球系膜细胞中,观察高糖培养条件下血管紧张素原(AGT)表达和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平变化,以及吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)的干预作用.结果 显示高糖上调ACT mRNA(0.29±0.07对0.20±0.05,P<0.05)和蛋白(0.66±0.23对0.37±0.15,P<0.05)表达以及AngⅡ分泌[(9.85+2.08对7.50±1.51)ps/ml,P<0.05]水平,PDTC通过抑制NF-κB活性下调其水平.     

高胰岛素对人类肾小球系膜细胞的影响

有报道胰岛素可以导致大鼠肾小球系膜中纤维连接蛋白 (Ｆｎ)堆积[1] ,提示高胰岛素血症可能在糖尿病肾病 (ＤＮ)发生发展中有其作用。本研究拟建立人类肾小球系膜细胞 (ＧＭＣ)培养 ,观察高胰岛素对人类ＧＭＣ增生及Ｆｎ生成 ,ＧＭＣ内游离Ｃａ2 ([Ｃａ2 ]ｉ)水平的影响 ,以探讨ＤＮ发病机制及其防治的实验依据。1　材料和方法[2 ]1.1　ＧＭＣ培养及鉴定　取人类肾移植废弃肾的肾皮质 ,筛网法分离肾小球 ;含 10 %灭活小牛血清的ＲＰＭＩ 16 4 0培养 ,消化传代及细胞鉴定。实验中使用第 4～ 8代细胞。1.2　实验分组　按培养液中胰岛素浓度…     

血管紧张素Ⅱ和血小板衍生生长因子BB:引起系膜细胞内游离钙浓度变化的异同

目的：研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和血小板衍生生长因子BB(platelet-derived growth factor-BB，PDGF-BB)引起的肾小球系膜细胞(MC)内游离钙浓度变化的异同。方法：以体外培养的MC为研究对象，激光共聚焦显微术结合Fura-3染色法动态测定细胞内游离钙浓度。结果：AngⅡ和PDGF-BB均可浓度依赖性地引起MC内游离钙浓度的升高，但二者的动态变化曲线存在显著不同。无钙缓冲液和钙通道阻滞剂均可抑制AngⅡ和PDGF-BB引起的细胞内钙浓度变化，但其抑制的方式和程度均有所不同。结论：AngⅡ和PDGF-BB通过不同的激发途径引起MC内游离钙浓度的升高。     

血管紧张素转换酶抑制剂及血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂阻断肾素-血管紧张素系统对肾脏的保护作用

目的本文探讨血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)-苯那普利(benazeprilat)与血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)氯沙坦(losartan)对肾脏血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体的作用.观察benazeprilat及ARB缬沙坦(valsartan)能否抑制由AngⅡ、血小板衍生生长因子(PDGF)引起的自发性高血压大鼠(SHR)肾小球系膜细胞的增殖与肥大.同时观察benazeprilat对负鼠肾小管OK细胞(OK细胞)增殖的影响.方法(1) SHR和正常血压大鼠(WKY)服用benazeprilat及losartan后,用RT-PCR方法测定大鼠肾皮质AT1 mRNA表达,并用同位素125Ⅰ-AngⅡ测定AT1受体密度.(2)采用经典SHR系膜细胞以及OK细胞培养技术,细胞中加入各种因子和(或)药物,以3H-leucine或3H-thymidine掺入后的cpm值反映蛋白或DNA合成.结果(1)SHR喂服benazeprilat后肾脏AT1mRNA和AT1受体密度无明显变化,而喂服losartan后肾脏AT1mRNA和AT1受体密度则明显降低.(2)系膜细胞在AngⅡ刺激后引起的增殖与肥大,均可被valsartan及benazeprilat抑制.在同一浓度下,valsartan的作用较benazeprilat强.同时benazeprilat能够抑制OK细胞的增殖.结论(1)ARB能够下调AngⅡ受体密度而ACEI则无此作用.(2)ARB在抗系膜细胞增殖与肥大作用稍强于ACEI.而ACEI同时能够抑制负鼠肾小管OK细胞的增殖.ACEI与ARB均对肾脏有保护作用.     

胰淀素诱导人肾小球系膜细胞凋亡

目的:研究胰淀素（amylin) 对人系膜细胞的毒性作用。方法：采用电镜、TUNEL、DNA凝胶电泳和碘化丙啶染色（PI）流式细胞仪分析技术及免疫组化技术，观察amylin对人系膜细胞的作用。结果：光镜和电镜下见细胞体积缩小、梁色质浓梁、致密、边移和凋亡小体形成；TUNEL细胞染色阳性，DNA凝胶电泳出现DNA“梯形”片断；amylin处理48h后，均可见亚二倍体细胞凋亡峰。定量分析示：系膜细胞的凋亡数量与amylin浓度呈剂量依赖性（P＜0．01）。amylin治疗组和对照组乳酸脱氢酶活性细胞释放率无显著性差异（P＞0．05）。结论：amylin对人系膜细胞具有细胞毒性作用，并可诱导系膜细胞的凋亡。amylin诱导人肾小球系膜细胞的凋亡可能是糖尿病肾病患者进行性肾小球硬化和系膜细胞逐渐消失的机制之一。     

血管紧张素Ⅱ及氯沙坦对肾系膜细胞蛋白激酶C亚型表达及转位的影响

血管紧张素Ⅱ (ＡｎｇⅡ )是肾素 血管紧张素 醛固酮系统(ＲＡＳ)中最重要的生物活性肽 ,可经ＡｎｇⅡ受体激活细胞内信号传递的关键酶———蛋白激酶Ｃ (ＰＫＣ)介导各种细胞效应 ,在肾脏疾病的发生发展中起重要作用[1] 。目前已知ＰＫＣ共有 12种亚型 ,不同ＰＫＣ亚型在ＡｎｇⅡ信号传递中的作用尚不十分清楚。为此 ,我们将肾系膜细胞进行体外培养 ,采用多光子共聚焦显微镜观察ＡｎｇⅡ、ＡｎｇⅡ受体 1(ＡＴ1)拮抗剂———氯沙坦对三种ＰＫＣ亚型α、β、ε表达和转位的影响 ,探讨这三种ＰＫＣ亚型在肾脏疾病中的作用。一、材料和方法1 …     

血管紧张素Ⅰ抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖

目的探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响。方法采用组织贴块法培养VSMCs,取生长良好的第3～5代细胞用于实验。随机分为对照组、AngⅡ组、Ang-(1-7)组、AngⅡ Ang-(1-7)组、AngⅡ Ang-(1-7) (A-779)组,通过3H胸腺嘧啶(3H-TdR)掺入法测定VSMCs的DNA合成,用结晶染色的方法检测细胞数目,观察VSMCs的增殖情况。结果①与对照组比,AngⅡ(100nmol/L)孵育细胞24h后可明显诱导VSMCs3H-TdR掺入量增加;Ang-(1-7)(1000nmol/L)可减少3H-TdR掺入量。②与AngⅡ组比较,Ang-(1-7)(10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L)呈浓度依赖性的抑制AngⅡ诱导的VSMCs3H-TdR掺入量。加入Ang-(1-7)特异性受体阻断剂A-779后,Ang-(1-7)此作用消失。③结晶染色结果显示,AngⅡ可诱导VSMCs数目明显增加(P<0.05)。Ang-(1-7)可抑制AngⅡ诱导的VSMCs增加,亦呈浓度依赖性(P<0.05)。结论Ang-(1-7)能抑制基础和AngⅡ诱导的VSMCs增殖,通过其特异性受体发挥作用。     

血管紧张素Ⅱ与细胞凋亡

本文就血管紧张素Ⅱ对细胞凋亡的作用及其机制的研究进展作一综述,并简要介绍ＡｎｇⅡ对细胞凋亡作用的病理生理学意义。     

血管紧张素转换酶抑制剂和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂联合应用治疗肾小球疾病

高血压是促使肾小球疾病进展的重要因素之一 ,阻断肾素 血管紧张素系统 (ＲＡＳ)能降低全身血压及肾小球毛细血管内压力 ,保护肾脏 ,延缓肾衰进展。多种药物能在不同环节阻断ＲＡＳ ,其中血管紧张素转换酶抑制剂 (ＡＣＥＩ)能抑制血管紧张素转换酶 (ＡＣＥ)而减少血管紧张素Ⅱ (ＡＴⅡ )的产生 ,ＡＴⅡ受体拮抗剂 (ＡＲＡ)则通过阻断ＡＴⅡ与其特异性受体结合 ,而发挥降压作用。由于ＡＣＥＩ和ＡＲＡ阻断ＲＡＳ的机制不同 ,这二类药物在降低血压、减少蛋白尿、保护肾功能方面是否存在差异[1] ,二者联合应用是否更为合理 ?本文从ＡＣＥＩ、…     

高糖环境中血管紧张素Ⅱ影响肾小球系膜细胞促纤维化因子的表达及机制

目的:在高糖环境中,用不同浓度血管紧张素II(Ang II)刺激肾小球系膜细胞(GMC),观察不同时点细胞内磷酸化信号转导子与转录激活子3(p-STAT 3)、转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、纤维连接蛋白(FN)的表达变化及AG-A90对上述指标表达的影响,探讨高糖和Ang II共同作用对GMC分泌促纤维化因子及细胞外基质的影响. 方法:(1)GMC在高糖环境中培养48h后,加入Ang II(0.1 μmol/L)孵育不同时间,用免疫细胞化学及Western Blot方法检测p-STAT 3的表达,RT-PCR检测GMC TGF-β1、CTGF、FN mRNA的表达.(2)用JAK 2/STAT 3通路特异性阻断剂AG-490(10 μmol/L)对GMC进行预处理后再加入Ang II,RT-PCR方法检测大鼠GMC TGF-β1、CTGF、FN mRNA的表达变化. 结果:(1)外源性Ang II显著增加了GMC p-STAT 3表达,刺激5 min后p-STAT 3表达即开始增多,并向细胞核积聚,30 min达高峰,90 min后逐渐恢复到刺激前水平.(2)Ang II刺激后GMC的 TGF-β1、CTGF、FN mRNA表达明显上调,而AG-490预处理显著降低了TGF-β1、CTGF、FN mRNA的高表达. 结论:Ang II可一过性激活大鼠GMC JAK 2/STAT 3信号转导通路,并上调TGF-β1、CTGF及FN mRNA表达,而阻断JAK 2/STAT 3信号转导通路可明显降低Ang II诱导的大鼠GMC TGF-β1、CTGF、FN mRNA的高表达.     

骨桥蛋白参与血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞迁移

目的检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对骨桥蛋白(OPN)表达的影响及其涉及的信号传导途径,并探讨OPN在AngⅡ诱导中膜平滑肌细胞(VSMCs)迁移中的作用.方法采用贴壁法培养SD大鼠胸主动脉的VSMCs.以免疫印迹(Western blot)法检测OPN表达.运用Transwell观察反义OPN在AngⅡ诱导的VSMCs迁移中的作用.结果 (1)体外培养的大鼠VSMCs在基础状态下表达一定水平的OPN蛋白,经10-7mol/L AngⅡ诱导24 h后,OPN蛋白水平与对照组相比增加1.3倍(P＜0.05);(2)预先给予AngⅡ1型(AT1)受体拮抗剂氯沙坦(losartan)、胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059和P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB202190后,AngⅡ诱导的OPN的表达分别下降44.2%、23.6%及72.5%(P＜0.05),而其2型(AT2)受体拮抗剂PD123319对OPN的表达没有影响.(3)反义OPN可以明显抑制AngⅡ诱导的VSMCs迁移(每个视野平均迁移细胞数目26.34±5.47 vs 50.23±6.12,P＜0.05),而OPN正义、错配义组无此变化.结论 (1)AngⅡ上调VSMCs中OPN的表达;(2)AT1受体、ERK和P38MAPK信号系统参与AngⅡ诱导的OPN表达.(3)OPN参与AngⅡ诱导的VSMCs迁移.     

血管紧张素Ⅱ对胰岛细胞的作用

肾素-血管紧张素系统(RAS)包括循环RAS和局部RAS,其核心活性物质均为血管紧张素Ⅱ(AngⅡ).已证实胰岛局部存在RAS,并可不依赖于循环RAS独立合成AngⅡ.现在认为,胰岛局部RAS对胰岛细胞的内分泌功能调节起重要作用.AngⅡ和相应胞膜、胞浆内的不同AngⅡ受体结合后,通过改变血管收缩性而改变胰岛供血和局部氧张力,通过蛋白激酶通路等机制,影响胰岛素和生长抑素的分泌.但局部RAS的过度激活会使胰腺局部的活性氧簇牛成增多,导致胰岛细胞功能异常.促进胰岛细胞凋亡进程,参与胰岛局部炎性反应过程和胰腺的纤维化,同时在外周组织中介导胰岛素抵抗的产生,从而间接影响胰岛细胞功能.     

骨桥蛋白参与血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞迁移

目的检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对骨桥蛋白(OPN)表达的影响及其涉及的信号传导途径,并探讨OPN在AngⅡ诱导中膜平滑肌细胞(VSMCs)迁移中的作用。方法采用贴壁法培养SD大鼠胸主动脉的VSMCs。以免疫印迹(Western blot)法检测OPN表达。运用Transwell观察反义OPN在AngⅡ诱导的VSMCs迁移中的作用。结果(1)体外培养的大鼠VSMCs在基础状态下表达一定水平的OPN蛋白,经10-7mol/L AngⅡ诱导24 h后,OPN蛋白水平与对照组相比增加1.3倍(P<0.05);(2)预先给予AngⅡ1型(AT1)受体拮抗剂氯沙坦(losartan)、胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059和P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB202190后,AngⅡ诱导的OPN的表达分别下降44.2%、23.6%及72.5%(P<0.05),而其2型(AT2)受体拮抗剂PD123319对OPN的表达没有影响。(3)反义OPN可以明显抑制AngⅡ诱导的VSMCs迁移(每个视野平均迁移细胞数目26.34±5.47 vs 50.23±6.12,P<0.05),而OPN正义、错配义组无此变化。结论(1)AngⅡ上调VSMCs中OPN的表达;(2)AT1受体、ERK和P38MAPK信号系统参与AngⅡ诱导的OPN表达。(3)OPN参与AngⅡ诱导的VSMCs迁移。     

大黄素对培养人系膜细胞纤维连接蛋白产生的抑制作用

本文以纤维连接蛋白（ＦＮ）为指标，观察了大黄组份之一大黄素素，对培养人系膜细胞细胞外基质产生的影响、结果用ＥＬＩＳＡ检测、免疫荧光染色以及系膜细胞小丘形成的大小、多寡等多种指标证明了大黄素能够浓度依赖性地抑制系膜细胞分泌的和细胞膜相关的ＦＮ水平，并能拮抗ＴＧＦβ对系膜细胞ＦＮ产生的刺激作用。大黄素的这一药理作用可能与大黄治疗多种慢性肾脏疾病的机理有关。     

氨氯地平对SHR肾小球系膜细胞的保护作用

目的 观察氨氯地平是否能抑制SHR肾小球系膜细胞的肥大与增殖。将氨氯地平与苯那普利拉及氯潲坦比较其单用或合用时的不同效应。方法 采用SHR系膜细胞培养技术，以^3H-亮氨酸或^3H-胸苷的cpm值反映蛋白或DNA合成。结果 （1）SHR系膜细胞在AngⅡ，PDGF刺激后引起的肥大与增殖，均可被氨氯地平所抑制；（2）在AngⅡ组，对于肥大与增殖三种药物单用时抑制作用无差异。PDGF引发的肥大，氯沙坦，普那普利拉明显优于氨氯地平，且普那普利拉比氨氯地平强；PDGF引发的增殖，仅氯沙坦比氨氯地平强。（3）氨氯地平与普那普利拉或氯沙坦联合后均有协同的抗肥大作用。抗增殖方面，氨氯地平与普那普利联合在AngⅡ组无协同作用，在PDGF组有协同作用。氨氯地平与氯沙坦配伍后对增殖有协同拮抗作用。结论 （1）氨氯地平能抑制SHR系膜细胞的肥大与增殖。（2）在AngⅡ组，抗系膜细胞的肥大与增殖，氨氯地平与普那普利拉，氯沙坦互相之间无差异；由PDGF引发的肥大与增殖，氯沙坦明显优于氨氯地平；（3）氨氯地平与普那普拉或氯水坦联合后有协同抗系膜细胞肥大作用；在抑制增殖方面，氨氯地平＋氯沙坦可能优于氨氯地平＋普那普利拉。     

血管紧张素Ⅱ在高糖诱导大鼠系膜细胞MMP-9和TIMP-1 mRNA表达中的作用

高糖刺激大鼠系膜细胞血管紧张素Ⅱ（ATⅡ）的产生，高糖组和ATⅡ组系膜细胞基质金属蛋白酶9（MMP-9）mRNA表达降低，基质金属蛋白酶组织抑制物1（TIMP-1）mRNA表达增加，MMP-9／TIMP-1 mRNA比值下降，ATⅡ受体阻断剂Saralasin能逆转上述改变。