ABI 7500与TL 988实时荧光PCR仪的性能评价

目的探讨ABI 7500与TL 988荧光定量PCR仪之间的性能差异。方法参照EP9-A2文件中的评价标准,两台仪器分别对5种不同浓度的甲型流感病毒阳性质控品进行检测,每个浓度测量20次,比对两种仪器的精密度、灵敏度,并评价两台仪器结果一致性。结果精密度:TL 988的变异系数(CV)从0.68%到1.52%,ABI7500的CV从1.93%到2.69%。两台仪器在检测高浓度的甲型流感病毒DNA时(107、106、105 copies/m L)差异无统计学意义(P>0.05),检测低浓度的病毒DNA时(104、103copies/m L)差异有统计学意义(P<0.05)。灵敏度:两种仪器检测浓度103copies/m L时,TL 988阳性检出率为100%,ABI 7500检出率为0。两种仪器检测数据相关性良好(r=0.998)。结论荧光定量TL 988 PCR仪器的性能(精密度和灵敏度)比ABI 7500好。     

含内标的荧光PCR—荧光定量PCR

1.前言 PCR技术应用于体外基因检测是临床诊断学上的一项重大突破,但由于传统的PCR检测易污染、假阳性率高等原因,被国家明令禁止使用于临床检验。为了克服传统PCR的上述缺点,发挥它早期、快速诊断的优点,近年来,发展了多种将传统PCR技术与其它技术结合起来的新型PCR技术,最成功的有PCR与ELISA结合的PCR-ELISA技术和PCR与荧光检测结合的荧光PCR技     

HBVDNA荧光定量PCR检测及临床意义

血清HBV-DNA浓度与乙型肝炎病毒感染的严重程度和传染性有关,可用于判断病情和预后,以及观察抗病毒药物的治疗效果.通常血清 HBV-DNA持续阳性超过6个月会转为慢性肝 炎.抗-HBc阳性患者血清HBV-DNA持续阳性常提示肝受损严重,50%以上抗-HBc阳性慢性活动性肝炎患者,经平均4.5年发展为肝硬化,常与HBV-DNA持续阳性有关.     

荧光定量PCR在乙肝检测中的应用

目的 :探讨 5‘ -核酸酶法荧光定量技术在乙肝检测中应用状况。方法 :采用荧光定量PCR方法 ,检测2 0份阳性对照考核批内及批间变异 ;采用 5 0份HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAg(+)的血清 ,结合肝功能及HBeAg滴度考核阳性率、病毒含量范围以反映病毒复制状况 ;对 5份本法检测阳性的标本 ,4℃保存 ,并隔日检测 ,确定最佳检测时间。结果 :批内CV为 4 1 % ,批间CV为 4 0 %。阳性标本为 4 6份 (92 % ) ,其中 4份肝功能正常 ;阴性标本为 4份 (8% ) ,其中 1份肝功能异常。病毒量有较大的变化范围 ,从 0 .1 1× 1 0 4～ 5 .1× 1 0 4CID/ml。阳性标本所测病毒量与HBeAg滴度相关系数为 0 .77。在 1 5d内隔日所测病毒量相近。结论 :本法应用于乙肝检测 ,有较好的特异性 ;定量结果能够反映病毒在体内的复制状况 ;病毒含量因患者而异 ;在严格操作条件下 ,本法有一定的重复性 ;正确保存标本时 ,在半月内均可以检测病毒     

荧光探针定量PCR技术

PCR技术是通过对基因的选择性片段进行体外高效扩增,实现目的基因的检测。荧光探针定量PCR(FQ-PCR)是一种新的基因定量检测技术,国外文献多用“实时定量PCR(real time quantitative PCR)”或“TaqMan PCR(以美国PE公司商标命名)”。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针,巧妙地把核酸扩增(PCR)、杂交及光谱技术结合在一起,从而实现了对目的基因的准确定量检测,正发展成为临床实验诊断的常规技术。     

定量PCR分析仪的临床应用前景——AG-9900 Robo Master全自动荧光定量PCR分析仪

荧光探针杂交定量PCR技术和全自动定量PCR分析仪的出现,使PCR扩增和产物分析整个过程完全在同一个封闭系统下完成,并在分析软件支持下实现对PCR扩增产物进行实时动态监测和自动得出定量结果。彻底解决了PCR技术中扩增产物污染和不能定量的问题,为PCR技术作为常规检测技术应用于临床开辟了广阔的前景。     

荧光定量PCR检测 HBV-DNA的临床意义

目的了解荧光定量PCR法检测的HBV-DNA与乙型肝炎,标志物的关系,探讨荧光定量PCR在HBV-DNA检测方面的临床价值。方法采用荧光定量PCR技术对乙肝标志物阳性血清进行HBV-DNA定量测定,对26例HBV-DNA( )(拷贝数105～109/ml)、HBeAg( )(≥10.86NCU/ml)患者贺普丁治疗前后血清HBV-DNA、HBeAg进行定量监测。结果①108例HBsAg( )/HBeAg( )/HBcAb( )者有106例HBV-DNA阳性,阳性率98%,含量为(7.65±1.06)拷贝/ml;112例HBsAg( )/HBeAb( )/HBcAb( )者有58例阳性,阳性率为51%,含量为(5.38±1.55)拷贝/ml;46例HBsAg( )/HBcAb( )者有17例阳性,阳性率36%,含量为(4.09±1.79)拷贝/ml。②HBV-DNA基因拷贝数与HBeAg水平呈正相关。③26例HBeAg( )、HBV-DNA( )患者经12个月治疗,HBeAg阴转率为42%,HBV-DNA( )阴转率为80%,明显高于HBeAg阴转率(P<0.01)。结论荧光定量PCR检测HBV-DNA,能直接反映HBV-DNA含量,在判断体内HBV是否复制,复制程度,是否被清除等方面明显优于HBV血清标志物检测,对抗病毒治疗过程监测、愈否监控以及疗效评价具有一定的实用价值。     

荧光实时定量PCR的研究进展

生物机体的生长、发育、衰老和病变通常由基因在不同阶段和部位的差异表达来决定。基因表达差异最终表现为蛋白质合成量上的差异,并在一定程度上决定细胞的激活、增殖、分化、病变和凋亡。定量mRNA表达是了解机体生长发育调控和病理病变机理的一个重要方面,因此准确定量mRNA表达成为了生物医学研究中的一个重要内容。     

荧光定量PCR检测血清HBVDNA 910例临床分析

聚合酶链反应 (PCR)是一种敏感的微量DNA检测技术 ,但定性PCR不能定量且会污染造成假阳性 ,尤其是在电泳和紫外检测过程中易出现扩增产物的污染。针对这些问题 ,本单位引进了一台美国PE公司生产的 5 70 0型荧光定量PCR仪 ,进行了一部分肝炎病人血清HBVDNA的检测 ,现报告如下。1　材料与方法1.1　病人来源910例病人中男性 76 8例 ,平均年龄 35 .5岁 ,女性 14 2例 ,平均年龄 36 .9岁 ;所有病例均未使用过抗病毒或免疫调节药物。1.2　肝炎病毒标志物检测方法抗HAV -IgM、HBVM、抗HCV -IgG、抗HEV-IgG检测采用ELiSA法 ;HBVD…     

荧光定量PCR在医学诊断中的应用

实时荧光定量PCR(Real time fluorescent quantitative PCR)是在PCR技术基础上发展起来的一种高度灵敏的核酸定量技术。该技术通过荧光信号的积累来实时监测整个PCR进程,使PCR扩增和终产物检测全部处在封闭的条件下进行,从而具有实时监测、无污染、快速、灵敏、精确、特异等特点,极大地克服了原有PCR技术的不足。目前该技术已经广泛应用于肿瘤学、遗传学、免疫学、微生物学、寄生虫学和基因治疗等领域。     

HBV-DNA荧光定量PCR检测的临床意义

目的 探讨荧光定量PCR检测HBV-DNA在乙型肝炎的诊断、治疗及判断病情、预防 等方面的临床应用价值。方法 运用荧光定量PCR和ELISA法同时检测了180例乙型肝炎患者和56 例正常献血员血清中HBV-DNA的含量及其免疫标志物,并对结果进行了对比分析。结果 乙肝大 三阳患者HBV-DNA阳性率达100％(95／95),显著高于其他各组(P<0．01),HBV-DNA含量平均 为4．8×10~7copy／ml;小三阳患者HBV-DNA阳性率低于大三阳组(P<0．01),但平均病毒含量与大 三阳组无差异(P>0．05),高达2．1×10~7copy／ml;单独HBsAg阳性和单独HBsAb阳性组HBV- DNA阳性率分别为54％、33％,平均病毒含量分别为5．6×10~5copy／ml、3．8×10~4copy／ml;56例献血员 血清仍有3例HBV-DNA阳性,其病毒含量低于其他组。结论 荧光定量PCR检测HBV-DNA含 量比ELISA法具有更好的灵敏度和特异性,能准确反映HBV在体内的复制情况,这对临床上抗病毒药 物的选择和判断疾病的预后意义重大。     

荧光定量PCR在医学诊断中的应用

实时荧光定量PCR(Real time fluorescent quantitative PCR)是在PCR技术基础上发展起来的一种高度灵敏的核酸定量技术。该技术通过荧光信号的积累来实时监测整个PCR进程,使PCR扩增和终产物检测全部处在封闭的条件下进行,从而具有实时监测、无污染、快速、灵敏、精确、特异等特点,极大地克服了原有PCR技术的不足。目前该技术已经广泛应用于肿瘤学、遗传学、免疫学、微生物学、寄生虫学和基因治疗等领域。     

应用荧光定量PCR技术快速检测淋球菌

目的：应用荧光定量PCR(FQ-PCR)快速、准确地测定淋球菌，探讨该法的淋球菌阳性检出率及其敏感性和特异性。方法：对190例疑诊为淋病者，取尿道或宫颈内分泌物，同时进行FQ-PCR和培养法检测。结果：以FQ-PCR和培养法检测结果为“扩大金标准”，FQ-PCR检测显示特异性为100％(16／16)，敏感性为100％(174／174)，培养法显示其特异性为100％(16／16)、敏感性为85．05％(148／174)。70例确诊患者经正规治疗后24周随访检测显示：FQ-PCR阴转率为74．28％(52／70)，而培养法阴转率为100％(70／70)。结论：FQ-PCR检测淋球菌具有快速、准确、敏感、特异等优点，但不能作为淋病治愈的判断标准。     

应用于PCR及实时荧光定量PCR的细菌DNA提取方法

目的建立特异灵敏的适应于PCR及实时荧光定量PCR的细菌DNA提取方法.方法于细菌样本离心所得沉淀中加入提取液(25% Chelex-100,0.5%NP40,TE配制,pH=9.0);56℃孵育30 min;100℃水浴10 min;离心后所得上清即为DNA.电泳、PCR及Real-time PCR扩增评价该方法的特异性及灵敏度.结果本方法所提细菌DNA电泳条带清晰,未见假阳性,D(260)/D(280)=(1.79±0.03);PCR及Real-time PCR扩增未见假阳性及假阴性,灵敏度达101/ml细菌浓度.结论本研究细菌DNA提取方法特异灵敏,适应于PCR及Real-time PCR.     

实时荧光定量PCR的研究进展及其应用

随着PCR(聚合酶链反应)技术的飞速发展,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)技术以其特异性强、灵敏度高、自动化和重复性好、定量准确、污染少等优点,成为分子生物学和其它领域的重要技术工具,并广泛应用于遗传病、病原体和肿瘤等方面的检测和诊断.本文就实时荧光定量PCR技术的主要原理、定量方法及目前在研究领域中主要的应用进行了概述.     

荧光定量PCR用于献血者筛查的意义

目的:探讨高灵敏度荧光定量PCR用于筛查献血者HBV的意义。方法:对400例HBsAgELISA法阴性的献血者标本用荧光定量PCR测定HBV-DNA进行对比。结果:400例标本中有5例HBV-DNA阳性,占1.25%。结论:荧光定量PCR用于献血者的HBV筛查,与ELISA法相比可有效地减少漏检,显著提高血液质量,降低经输血传播HBV的可能性。     

荧光定量PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义

目的：分析386例以荧光定量PCR法检测的HBV-DNA结果,以探讨其临床价值。方法：血清标本同时以酶免法检测乙肝两对半,以荧光定量PCR法检测HBV-DNA。结果：大三阳模式中HBV-DNA定量阳性率为95.5%,拷贝数为（4.32±1.63）×10^6/ml;小三阳模式中HBV-DNA定量阳性率为55.5%,拷贝数为（2.45±2.23）×10^5/ml;HBsAg、HBcAb阳性模式中HBV-DNA定量阳性率为35.7%,拷贝数为（6.74±1.18）×10^4/ml;HBsAg、HBeAg阴性模式中HBV-DNA定量阳性率为3.84%,拷贝数为（2.14±1.11）×10^4/ml。结论：荧光定量PCR法检测HBV-DNA可以直接反映体内乙肝病毒（HBV）感染状态及病毒载量情况,有利于判断疾病的严重程度和传染性,更有利于临床治疗的药物选择和疗效观察。     

乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测及其意义

目的 探讨荧光定量PCR法检测的乙型病毒DNA与乙肝病毒标志物之间的关系。方法 362例血清标本同时进行乙肝病毒标志物和HBV DNA的检测,按照不同的乙肝病毒标志阳性情况分级后,进行乙肝病毒DNA与乙肝病毒标志物的分析研究。结果 乙肝病毒标志物HBsAg HBeAg HBcAb阳性组HBV DNA阳性率97.7%,拷贝数在10^4-10^8之间;HBsAg HBeAb HBcAb阳性组阳性率56％,拷贝数在10^2－10^7之间;HBsAg HBcAb阳性组阳性率54％,拷贝数在10^2－10^7之间;HBsAg HBeAg组阳性率100％,拷贝数在10^7之间;HBeAb HBcAb组3例,有1例阳性,拷贝数10^2;HBsAb组阳性率14.3%,拷贝数在10^3－10^7之间;189例全阴性有2例阳性（1.06%）,拷贝数在10^4－10^5之间。结论 HBV DNA在各种模式的HBV标志阳性血清甚至全阴性的血清中均可检出,但检出率相差甚大,从1.06%－100％;HBV DNA乙肝病毒标志中HBeAg阳性者其HBV DNA阳性率及拷贝数较高;HBsAg及其抗体阳性者仍可检出HBV DNA,说明仅仅依靠乙肝病毒标志进行早期诊断以及判断病人是否具有传染性是不够的。     

利用荧光定量PCR技术对人肠道乳酸杆菌进行定量检测

目的应用荧光定量PCR技术对人粪便内乳酸杆菌进行定量检测,建立乳酸杆菌的荧光定量PCR检测体系。方法依据人肠道乳酸杆菌16S rDNA序列设计属特异性引物,应用荧光定量PCR技术检测乳酸杆菌的16S rDNA,对粪便中的乳酸杆菌进行定量检测和分析,并与用传统方法所获得的结果进行比较。结果荧光定量PCR检测乳酸杆菌和传统方法检测乳酸杆菌获得的结果接近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论荧光定量PCR技术比传统方法省时、省力,且敏感性和特异性更高。