固相血细胞吸附试验检测流行性出血热患者血清中IgM抗体

<正> 主要步骤: 取羊抗人μ链IgG抗体(5μg/ml)包被96孔聚氯乙烯U形软板,100μl/孔,4℃孵育过夜。在各孔内加入被检血清和对照血清(阳性、阴性血清均经IFAT、RPHI证实)100μl/孔,37℃孵育2小时。每孔加入32u/50μl的EHFV血凝素25μl,37℃孵育2小时。上述每次孵育后,均用0.05M、pH7.4的PBS(含0.5‰吐温20)洗涤三次,每次5分钟。     

用豚鼠组织沉淀物的混合凝集试验检测异嗜性抗体

<正> 根据用豚鼠肾(GPK)匀浆吸收人血清中异嗜性抗体的结果,可将人异嗜性抗体分成GPK阳性和GPK阴性两类。在许多传染病和一些不明病因的疾病,如Chediak—Higashi综合症(C—H综合症),Kawasaki病和一些恶性肿瘤病人中,都存在着GPK阳性的异嗜性抗体。为了直接证明GPK匀浆与这些抗体的相互作用,本文作者采用混合凝集(MA)试验,即取100微升GPK悬液包被塑料板孔,然后加入100微升血清稀释液,20℃保温2小时后用磷酸缓冲液洗三次,再于每孔中加入100微升经胰酶消化的0.1％(v/v)羊或牛红细胞,20℃保     

Western Blotting测定血清抗组蛋白亚成份抗体

近10年来,国外发现抗组蛋白抗体(AHA)与系统性红斑狼疮及药物狼疮等疾病有关。本文报告Western Blotting技术从分子水平测定抗组蛋白抗体亚成份的方法。一、材料和方法: 1.组蛋白抗原购自美国。 2.ELISA测定血清IgM和IgG AHA:以组蛋白抗原5mg/L100ul包板,血清作1:100倍稀释,每孔加100ul,辣根过氧化酶(HRP)标记IgM(IgG)行     

特异性IgM抗体检测用于乙脑的早期诊断

<正> 我科在1988年乙脑流行季节,对128份住院的乙脑患者血清进行了检测,其中45例用两种方法检测特异性IgM抗体,现分析如下; 材料与方法一、抗原片制奋:用乙型脑炎京株(北京生物制品检定所惠赠)感染C_0/36细胞系,放28℃培育4天可观察到细胞病变,滴片,冷丙酮固定放-20℃备用。二、荧光标记血清:冰干羊抗人荧光标记血清1∶32,上海生物制品研究所生产(批号870501),特异性染色单位1∶8,用时稀释。三、方法:用0.01MpH7.4PBS作不同稀释度稀释,分别滴加到抗原片的每孔中,放37℃     

末稍血直接测定HBsAg

一般都用静脉血测定HBsAg,为减少患儿不必要的痛苦,我们试用末稍血直接测定HBsAg,结果较满意,介绍如下: 方法取140微升生理盐水于小试管中,加入耳垂血或手指血20微升混合,离心后再按常规反向间接血凝技术,于V型孔血凝反应板上操作,第一孔不加生理盐水,其余三孔各加生理盐水一滴(25微升),于第一、两孔各加上清液一滴(25微升),从第二孔起作连续双倍稀释,第四孔作对照,振荡后放27℃恒温箱1小时看结果。本法与常法对比,100份HBsAg阴性病人血清与末稍血标本试验的结果完全相符。30例HBsAg阳性病人两法测定结果,27例滴度完全一致,其中3例本法比原法高一个     

单克隆ELISA法检测麻疹IgM抗体

材料中麻疹病毒抗原、细胞对照抗原、标准血清,麻疹鼠单克隆抗体及酶结合物等均系中国预防医学中心病毒学研究所提供,邻苯二胺系北京化工厂产品,CP批号851125。洗涤液为0.05%吐温20盐水,待检血清为疑似麻疹患者7～13病日血清,接触者采自接触后1日血清,方法是应用克隆抗体ELISA法测定麻疹IgM抗体。以P/N≥(?)为阳性,≥1:200为保护水平。结果:包被IgM抗μ链抗体于37℃24小时取出。用洗涤液洗3次,每次3分钟,下称3×3洗.加待检血清37℃90′,取出3×3洗,加M,C抗原后于4℃24小时取出3×3洗.加鼠单克隆抗体37℃90′.取出3×3洗加酶结合物于37℃90′,取出3×3洗,加酶底物于37℃′,加ZN H_2SO_4。终止反应以GXM-201型酶标仪(重庆产)492nm滤光板测定OD值.16份疑是麻疹患者血清IgM Ab均阳性(P/N>2.1).3份接触者均阴性P/N<2.1),阳性对照P/N=15.6(0.78/0.05)阴性对照P/N<2.1(0.08/0.05)。单克隆抗体ELISA法测定麻疹IgM Ab帮助临床确诊区具有快速敏感,简单易行之优点,适于基层应用。     

耳血酶联法检测特异性IgM抗体快速诊断呼吸道合胞病毒感染的研究

本文应用ELISA间接法检测60例下呼吸道感染患儿的耳血呼吸道合胞病毒(RSV)IgM抗体;以病毒分离和/或补体结合试验作对照,其诊断符合率为88.3％,同步检测静脉血清RSV IgM抗体,其计数资料相关分析和定量相关回归分析均有高度显著性差异(P<0.01).现报道如下. 对象与方法 一、对象:1987～1988年冬、春,本院儿科住院的60例急性下呼吸道感染患儿,于入院时耳垂采血20μl.将血滴在新华定量滤纸上。采集耳血的同时取静脉血1.5ml。分离血清。 二、方法:滤纸干滴血于检测前一晚剪下,浸泡在0.5ml10％BSA—PBS—T20稀释液中4℃过夜。血清于检测当日用上述溶液按1:50稀释。操作步骤如下。用RSV纯化抗原包被反应板,设正常抗原     

呼和浩特地区急性病毒性肝炎病原谱及流行病学研究

本文用 EL1SA 法检查临床诊断为肝炎患者的抗—HAV IgM、抗—HBc IgM,用免疫萤光法检查抗—EBV IgM、抗—CMV、IgM 用杂交法检查 HBV—DNA。结果是呼市地区病毒性肝炎的病原谱为,甲型占26.8%,乙型占27.7%,非甲非乙占42.0%,甲乙混合型占2.7%,CMV 占0.9%,在 HA和 HB 中各有1例合并 EB 病毒感染。乙型与非甲非乙型肝炎在年龄与性别上无差异,HA 以学生及学龄前儿童占多数,HB 以工人占多数,NANB 工人干部为多数。HA 主要发生于8—10月,NANB 多发生在5—10月。发病前接受输血,及血液制品,手术及注射等 HB 组明显高于其它组。     

热休克蛋白70在人肝癌细胞SMMC-7721中的表达

1　材料和方法1.1　材料　人肝癌细胞 SMMC- 772 1由本室保存 ;鼠抗人HSP70单抗、FITC标记的羊抗鼠 Ig G购自 BOSTER公司 ;ENVISION HRP标记的羊抗鼠 Ig G(即用型 )为 DAKO公司产品 .1.2　方法　 1细胞的热休克处理 :接种 2× 10 4SMMC- 772 1于置有盖玻片的 2 4孔培养板中 ,37℃培养过夜 ;将培养板置42℃水浴 2 h,分别于休克后 4,8,12 ,16 ,2 4和 48h,收集细胞爬片 ,以甲醇∶丙酮 (V/ V=1/ 1) 4℃固定 15 min,PBS(p H7.4)洗涤后 ,室温干燥备用 .2免疫组化法检测 HSP70在肝癌细胞的表达 :采用 ENVISION(两步法 ) .细…     

新西兰小鼠血清抗DNA抗体水平的研究

目的::研究新西兰小鼠NZB、NZW、及其杂交子代(NZB×NZW)F1小鼠血清抗DNA抗体的水平差异.方法:酶联免疫吸附分析检测新西兰小鼠血清IgG及IgM型抗dsDNA及抗ssDNA抗体滴度.结果:与亲代NZB及NZW相比,其F1子代小鼠IgG型抗dsDNA及抗ssDNA抗体滴度明显增高(P＜0.01),IgM型抗dsDNA及抗ssDNA抗体滴度则比NZW增高(P＜0.01),比NZB反而降低.结论:致病性IgG型抗DNA抗体是促使新西兰小鼠狼疮发病的主要原因.     

应用微量血检测抗HAV—IgM的新技术

为了探索一种适用于防疫工作,采血简便,用血量较少,检测结果准确、可靠的方法,我们于1989年5月在株州铁路医院对194名门诊和住院病人进行了采用20微升微量血与静脉血进行对照检测抗HAV—IgM的试验,收到了满意的结果,介绍如下。方法器械与试剂DG—1酶联免疫检测仪。抗HAV—IgM(ELISA试剂盒),由上海市传染     

IgM 抗—HBc的研究进展及临床意义

<正> HBV 感染后,机体对HBcAg 发生特异性免疫反应的标志是早期出现IgM 抗—HBc,随后出现IgG 抗—HBc。近年来的研究表明IgG抗—HBc 仅仅反映了既往感染过HBV,而IgM抗—HBc 乃是病毒复制、传染性及反映患者免疫功能的主要标志.IgM 抗—HBc 产生于机体对HBV 感染发生原发性免疫反应的早期阶段。用密度梯度超速离心等方法可将乙肝患者血清中IgM 抗—HBc 分为两种:一种分子量为90万,由5个IgM单体通过J 链(连接链)连接而成,沉降系数约     

三用水箱代替电热恒温箱进行粪便培养

我们在开展防痢工作中对粪便培养的仪器做了改进,使用三用水箱代替电热恒温箱,效果相似,适于基层使用,现报道如下。一、材料:1.小型三用水箱:电压220V,功率1000W±10％,温度范围37°～100℃,温波1℃。电热恒温培养箱:标准号:WS_2—134—65,电压220V,功率400W,频率50～,温度范围20°～60℃,温波1℃。     

癌胚抗原时间分辨荧光免疫测定法

本文报告用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术定量检测癌胚抗原(CEA)方法。一、材料和方法: 1.E_u~(3+)标记抗体制备:方法同作者前文报告。 2.固相抗体制备:以聚苯乙烯微量滴定条为固相载体。取两株经纯化抗CEA McAb IgG C_6和C_7按3:7混合,用0.1ml/L PH9.6碳酸盐缓冲液配成25ug/ml。每孔加200ul,4℃包被24小时。 3.测定方法:固相抗体微量滴定条孔中加CEA标准或待测样品50ul/孔,补加50mmol/L PH     

抗入■链单克隆抗体(McAb)的研制及临床应用

抗μ链是临床诊断及实验研究的重要试剂之一,广泛应用于肾组织 IgM 定位及各种细菌、病毒性感染早期特异性 IgM 抗体的检测。提取及纯化μ链,并免疫动物,制备抗μ链多克隆抗体。生产过程繁杂,我们从巨球蛋白血症患者血清中提纯了 IgM、免疫BAIB/C 小鼠后,成功地建立了分泌抗μ链的杂交瘤细菌株。所获抗μ链 McAb 效价高(腹水 McAb 琼脂双扩散效价可达1:28)、稳定性好(液氮中保存1年以上效价不变)、     

分泌抗人IgMμ链单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本文采用杂交瘤技术建立了6株分泌抗人IgMμ链单克隆抗体的杂交瘤细胞株.经琼脂糖双扩散试验、双扩散和ELISA封闭试验,以及免疫电泳等方法证实,所分泌的抗体具有抗人IgMμ链特异性.其中4株分泌IgG_1亚类、2株分泌IgG_2a亚类抗体.经一年多的反复冻存和复苏,这6株细胞均能稳定分泌高效价抗体.     

抗人IgM抗体对鼻咽癌HNE-1细胞生物学特性的影响

目的 研究抗人免疫球蛋白M(IgM)抗体对鼻咽癌HNE-1细胞增殖、凋亡、细胞周期和成瘤的影响.方法 经抗人IgM抗体处理后,采用细胞增殖抑制实验观察HNE-1细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡及周期,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色检测细胞凋亡;构建裸鼠动物模型,腹腔注射抗人IgM抗体,观察移植瘤的生长,免疫组织化学SP法检测移植瘤中IgM和糖蛋白96(gp96)的蛋白表达.结果 抗人IgM抗体可呈浓度和时间依赖性抑制HNE-1细胞的增殖(P＜0.05);流式细胞术检测表明抗人IgM抗体可促进HNE-1细胞G1期细胞百分比明显降低,S期细胞百分比明显增加,细胞凋亡率明显增高(P＜0.05);TUNEL检测提示抗人IgM抗体可促进HNE-1细胞凋亡(P＜0.01);移植瘤实验显示抗人IgM抗体可明显抑制移植瘤的体积和质量(P＜0.05);移植瘤免疫组织化学显示裸鼠腹腔注射抗人IgM抗体后,移植瘤内IgM和gp96蛋白的表达水平明显低于对照组(P＜0.05).结论 抗人IgM抗体可有效抑制HNE-1细胞的增殖、促进细胞凋亡、阻滞细胞周期,并且能抑制裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与抑制IgM和gp96蛋白表达有关.     

不同一抗孵育方法对免疫组化染色效果的对比研究

目的:探讨不同的一抗孵育方法对CD20、S-100、C-erbB2、P53抗体免疫组化染色效果的影响。方法:120张免疫组化阳性对照片,采用EliVision二步法分别滴加对应的抗体CD20、S-100、C-erbB2、P53,采用37℃烤箱孵育1h,室温孵育3h,4℃冰箱过夜三种方法进行一抗孵育,免疫组化染色完成后分别由两位病理医师行独立看片,并进行染色效果对比。结果:一抗37℃烤箱孵育1h,阳性细胞染色强度最强,但阳性细胞数量少,背景着色重;一抗室温孵育3h,阳性细胞染色强度及数量好,背景清晰;一抗4℃冰箱孵育过夜,阳性细胞染色强度及数量好,有少量背景着色。结论:不同的一抗孵育方法对CD20、S-100、C-erbB2、P53抗体表达的阳性数量强度及免疫组化染色背景存在影响,一抗室温孵育3h染色效果最佳,孵育时间较短,有利于临床病理报告的发出,值得推广。     

O型悬浮红细胞ABO抗体效价研究

目的:测定O型悬浮红细胞ABO抗体效价,探讨未交叉配合O型悬浮红细胞紧急输注的安全性和可行性. 方法:采集100份O型全血,分离制备成悬浮红细胞和血浆制品,测定全血、悬浮红细胞储存第1、7、14 d时的IgM、IgG抗A、抗B抗体效价,并进行比较. 结果:全血IgM抗体效价主要分布于4～128,IgG抗体效价主要分布于16～256;悬浮红细胞IgM抗体效价主要分布于4～32,IgG抗体效价主要分布于8～128,与全血相比均明显下降(P<0.01).悬浮红细胞储存第1、7、14 d间抗体效价虽有所下降,但差异无显著性意义(P＞0.05). 结论:O型悬浮红细胞的ABO抗体效价较低,推断其未经交叉配合的紧急输注也是安全的.     

SLE患者机体免疫缺陷与CMV抗体水平的关系

目的 :检测SLE患者机体免疫缺陷与血清CMV抗体浓度的关系。方法 :用ELISA法检测了 5 0例SLE患者及 5 0例正常人血清中的抗人类巨细胞病毒 (HCMV)IgM类IgG抗体。结果 :SLE组抗CMV -IgM抗体水平显著高于对照组 (P <0 .0 1) ,而抗CMV -IgG抗体水平无明显差别 (P >0 .0 5 )。结论 :SLE患者机体免疫缺陷状态可能是导致血清中抗CMV -IgM抗体水平升高的因素