抗日本血吸虫抗独特型抗体的制备及初步鉴定和应用

本研究用1株针对日本血吸虫尾蚴和童虫表膜抗原的单克隆抗体(N15D9)免疫新西兰兔制备多克隆抗N15D9独特型抗体。结果表明,多克隆抗N15D9独特型抗体具有较高的抗体滴度,经用间接免疫荧光法和ELISA分析,该抗体显示较高的结合特异性,与具有相同靶抗原结合特异性的单克隆抗体有中度的交叉反应。当用抗N15D9独特型抗体作为诊断抗原检测日本血吸虫感染的病人血清时,其阳性检出率为39％。本研究结果初步揭示,抗N15D9独特型抗体具有一定的分子模拟作帮和诊断应用的潜能。     

单克隆抗独特型抗体NP30检测78例慢血血清的效果观察

研究证明,无论是在感染血吸虫的小鼠还是人体中,都存在自然产生的抗独特型抗体(anti-id),单克隆抗独特型抗体NP 30即是用生物技术制备抗原-抗独特型抗体NP30作为探针,用双“抗原”夹心酶标法检测血吸虫病人血清中的短程抗体。近来,我们用     

单克隆抗独特型抗体NP30用于日本血吸虫病血清学诊断的研究

本研究用单克隆抗独特型抗体NP30与日本血吸虫肠相关抗原(GAA)和可溶性虫卵抗原(SEA)检测了702份不同病期及正常人群中的血清抗体,结果显示,在急性感染时,NP30抗体的检出率为98％,与GAA(94％)和SEA(98％)的无差别。在慢性感染时NP30抗体的检出率为87％,与GAA(86％)的无差别,但低于SEA(98％)的。在正常人群中,上述3种的抗体假阳性率均为3％左右,无差别。NP30的抗体滴度几何均数在急性血吸虫感染时高于GAA的,低于SEA的,在慢性感染时低于后两者,提示NP30的抗体在血吸虫感染期间出现比较早,消退较快。上述结果提示,NP30可以替代虫源性抗原,用于日本血吸虫病诊断。     

一组抗日本血吸虫卵抗原并表达株间交叉反应独特型的单克隆抗体的特性

为检测抗日本血吸虫卵可溶性抗原(SEA)并表达株间交叉反应独特型的单克隆抗体的特性,作者采用菲律宾株日本血吸虫尾蚴感染的C57BL/6鼠及纯化的日本血吸虫卵可溶性抗原免疫的BALB/c鼠的脾细胞与P_(?)NSI脊髓瘤细胞融合杂交生产单克隆抗体,并用免疫吸附和印渍技术进行鉴     

检测日本血吸虫病家兔尿中循环抗原的实验研究

本研究首次用单克隆抗体证实了日本血吸虫病家兔尿液中存在日本血吸虫肠相关趋阴极抗原。用McAb-RIHA和McAb-Dot-ELISA平行对比检测浓缩5倍的重感染家兔尿样61份和正常空兔尿样30份。两法的阳性率分别为81.97％和78.69％;假阳性率分别为13.33％和O％。认为可进一步用于检测日本血吸虫病患者尿排泄抗原的研究。     

日本血吸虫单克隆独特型抗体的筛选及初步鉴定

目的 从本实验室已建立的IgG类抗日本血吸虫抗原不同表位的单抗中筛选抗独特型抗体NP30的独特型抗体（id,Ab1)。方法 应用间接DLISA经典法,NP30作为抗原包板。加IgG各亚类杂交瘤细胞培养上清孵育,用辣根过氧化物酶（HRP）标记抗鼠IgG捕捉。结果 单抗NP56与NP30呈阳性反应,NP56的Ig同型为IgG2b。免疫组织化学显示NP56与虫卵内毛蚴头腺及毛蚴膜呈阳性反应。结论 NP56是NP30的特异性id,可用于NP30模拟抗原的鉴定。     

日本血吸虫单克隆抗抗独特型抗体NP41的建株及初步鉴定

目的 制备日本血吸虫单克隆抗独特型抗体（anti-id,Anb2)NP30的抗抗独特型抗体（anti-anti-id,Ab3)。方法 IRS－NP30主动免疫BALB／c小鼠,取其脾细胞与SP2／0细胞融合,制备anti-anti-id杂交瘤细胞株。结果 获得1株稳定分泌单克隆抗体的细胞株,定名为NP41。NP41的Ig同型为IgM。免疫组化显示NP41与成虫的体膜、消化管上皮、子宫内膜上皮及虫卵内皮的毛蚴头腺,毛蚴膜呈阳性反应。结论 NP41为NP30的anti-anti-id,其识别的抗原即NP30的模拟抗原。     

间接免疫酶染法检测日本血吸虫与湖北钉螺相同抗原的研究

用日本血吸虫成虫及湖北钉螺冰冻切片作抗原,采用间接免疫酶染法分别检测兔抗钉螺免疫血清和感染血清。结果表明日本血吸虫雌雄成虫、钉螺头足部、肝脏分别出现阳性反应。提示:日本血吸虫与其中间宿主湖北钉螺之间确实存在相同的抗原成分,     

日本血吸虫不同发育阶段抗原与抗LSA兔血清的交叉反应分析

目的　为进一步阐明水蛭与日本血吸虫抗原交叉性机理提供依据。　方法　制备日本血吸虫子胞蚴抗原、尾蚴抗原、肝期童虫抗原、雌 (雄 )成虫抗原、虫卵抗原 ,采用Westernblot方法对制备的日本血吸虫不同发育阶段抗原与水蛭可溶性抗原 (LSA)免疫兔血清分别进行免疫印迹反应 ,分析其交叉性。　结果　LSA免疫兔血清能识别日本血吸虫不同发育阶段抗原 ,且所识别的抗原成分有明显差异 ,雌性成虫抗原和雄性成虫抗原分别有 3条和 2条蛋白组分可被LSA免疫血清识别 ,而不含抗虫卵和抗尾蚴抗体。　结论　在LSA成分中与血吸虫的共同成分主要存在于成虫中 ,LSA免疫血清中含有较多的抗雌性成虫抗体 ,而雄虫次之。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30轻链可变区基因的克隆及序列分析

[目的]分离日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30轻链可变区 (VL)基因并测定其序列。 [方法 ]根据鼠免疫球蛋白轻链可变区基因FR1和FR4序列的保守性 ,化学合成用于体外扩增Ig轻链可变区基因的数对引物。以日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30的杂交瘤细胞株基因组DNA为模板 ,扩增VL 基因 ,将其克隆入 pUC19载体 ,重组子用Sanger的双脱氧链终止法测定序列 ,将序列与GenBank中已发表的抗体序列比较。 [结果 ]VL 基因全长 318bp ,属鼠免疫球蛋白κ轻链第IV亚类 ,由种系基因V与Jκ4 重排而来。该VL 基因序列已被GenBank收录 (accessionNo AF2 0 6 72 0 )。 [结论 ]该VL 基因为日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30轻链可变区基因。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30的建株...

A hybridoma cell line secreting an IgM monoclonal antibody designated NP30 was obtained from a fusion of SP2/o and spleen cells of a BALB/c mouse chronically infected with schistosoma japonicum for one and a half year and identified by screening with immunized rabbit sera against gut-associated antigen (GAA) and soluble egg antigen (SEA) of S. japonicum, indicating that the NP30 was an anti-anti-antigen or anti-antibody. NP30 was further determined to be an anti-idiotypic antibody (anti-id) which was serologically and functionally identical to GAA, so that it could be portrayed as the internal image of GAA, which might have the potential to be used as an antigenic reagent in immunodiagnostic assays of schistosomiasis japonica.     

抗独特型抗体作为日本血吸虫病诊断抗原的研究

本研究用单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０作为抗原，进行ＥＬＩＳＡ检测日本血吸虫血清抗体，与用肠相关抗原ＧＡＡ和可溶性虫卵抗原ＳＥＡ对照，检测１００份急性病人血清，ＮＰ３０检出率为９５％；ＧＡＡ为９２％；ＳＥＡ为９７％，三埂无显著差别，５２例慢性病人中ＮＰ３０与ＧＡＡ检出率均为７３．１％，但与ＳＥＡ９４．２％有显著差别，在４０例已治愈病人中，ＮＰ３０转阴率为４２．５％与ＧＡＡ的４５％无差别。但ＳＥＡ仅为１     

日本血吸虫单克隆anti—anti—id的建株及初步鉴定

日本 制备日本血吸虫抗独特型抗体（anti-id,Ab2)NP30的单克隆抗独型抗体（anti-anti-id,Ab3)。方法 应用辣根过氧化物酶标记的NP30（HRP－NP30）免疫BALB／c小鼠的脾细胞与SP2／0融合,制备单克隆anti-anti-id。结果 获得1株稳定分泌抗NP30的单克隆抗体的细胞株,定名为NP48。NP48的Ig同型为IgG2b。NP48与SWAP和SEA ELISA反应均阳性。免疫组织化学显示NP48可定位于虫卵内毛蚴头腺及毛蚴膜。结论 NP48是NP30的特异性anti-anti-id,可用于NP30模拟抗原的分离和鉴定。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单链抗体基因的构建和表达

目的　构建日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单链抗体 (scFv)基因。　方法　通过PCR方法体外扩增并经测序验证的重链、轻链可变区 (VH、VL)基因先后重组入原核表达质粒 pTHA90相应的位点上 ,中间通过一连接肽 (Gly4 Ser) 3基因连接构建成单链抗体基因 (scFv) ,连接产物转化相应受体菌Top1 0 ,提取质粒 ,酶切鉴定重组克隆。表达产物经ELISA方法测定活性。　结果　重组克隆经酶切鉴定可见预期大小的片段 ,表明重组成功。表达产物经ELISA检测 ,OD4 92 值为 1 .0 6 ,高于阴性对照 3倍以上 ,证实具有与相应抗原结合的能力。　结论　成功地构建了scFv基因 ,且其表达产物保留了抗体的亲和性和特异性     

日本血吸虫单克隆抗抗独特型抗体NP48单特异性双链抗体的构建表达与初步鉴定

目的构建和表达日本血吸虫单克隆抗抗独特型抗体NP48单特异性双链抗体，并初步鉴定表达产物活性。方法应用SOE法扩增双链抗体基因VH-linker—VL（Diabody，简称D）。将D重组入原核表达载体pBAD／g Ⅲ。表达质粒转化E、coli TOP10，左旋阿拉伯糖诱导表达。对D的表达产物进行分离纯化，采用Dot—ELISA法检测纯化蛋白与NP30、可溶性虫卵抗原（SEA）、可溶性成虫抗原（SWAP）的结合活性。结果测序证实双链抗体基因D构建成功；构建了D的原核表达系统，诱导表达产物主要以包涵体形式存在，分子量约为27kD；经纯化、变性复性后用Dot—ELISA法鉴定结果表明，D表达的纯化蛋白可与NP30特异性结合。结论所构建、表达的NP48单特异性双链抗体具有亲本单抗的部分特性。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30诱导抗卵免疫的研究

目的观察日本血吸虫单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０对日本血吸虫雌虫生殖产卵及卵胚发育的影响。方法腹腔注射ＮＰ３０主动免疫Ｃ５７ＢＬ／６小鼠,连续３次,对照组腹腔注射ＳＰ２／０腹水。结果尾蚴攻击感染后第２７天,ＮＰ３０免疫组肝组织内虫卵数下降了３０．９１％,雌虫子宫内虫卵数减少了３８．５５％。尾蚴攻击感染后第３９天,ＮＰ３０免疫组肝组织内的成熟虫卵下降了６６．６３％,死亡虫卵增加了６０．６６％。结论ＮＰ３０主动免疫小鼠具有抗雌虫生殖产卵和抗卵胚发育的双重功效,为一很有希望的血吸虫病抗病疫苗候选分子     

用抗日本血吸虫虫卵单克隆抗体NP28-5B检测循环抗原的研究

本研究使用杂交瘤技术制备鼠抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)单克隆抗体NP28-5B,其同型鉴定为IgGl,针对的靶抗原分子量为140kD。将酶标记单抗NP28-5B进行Dot-ELISA直接法检测急性患者血清100份和慢性血吸虫病患者血清200份中循环抗原,阳性率分别为96％和98％,检测正常人血清200份,仅3例假阳性(1.5％)。用双盲法检测血吸虫病流行区江西矶山岛居民血清339份,其中粪检阳性血清114份,阳性率为89.47％,粪检阴性血清225份,阳性率为69.33％,研究证明NP28-5B具有高度诊断潜能。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单特异性双链抗体的构建表达与初步鉴定

目的构建和表达日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单特异性双链抗体,初步鉴定表达产物的活性。方法用overlap PCR法扩增双链抗体基因VH-GGGGS—VL将双链抗体基因重组入原核表达载体pBAD／gⅢ。表达质粒转化E．coli TOP10F’,左旋阿拉伯糖诱导表达。对表达产物进行分离纯化,ELISA检测纯化蛋白与血吸虫病人血清抗体的结合活性。结果测序证实双链抗体基因正确,构建了双链抗体的原核表达系统,双链抗体在细菌超声上清和沉淀内均有表达,分子量约为34kD。纯化产物经ELISA鉴定,结果表明NP30单特异性双链抗体可与血吸虫病人血清抗体特异性结合。结论构建和表达的日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单特异性双链抗体具有与亲本单抗相同的结合活性。