血管生成素1和血栓调节蛋白1在STZ鼠肾脏中的表达及其意义

目的：探讨血管生成素1（angiopoietin-1,Ang-1）和血栓调节蛋白1（thrombomodulin-1,TM-1）在糖尿病鼠肾脏中的表达变化及其与肾脏微血管病变的关系. 方法：STZ诱导的糖尿病大鼠肾病模型,设正常对照和模型组,于2、4、8、12、16、20、24周,采用免疫组化观察肾脏Ang-1和TM-1表达变化以及RT-PCR观察肾脏Ang-1mRNA表达,并行相关性分析. 结果：糖尿病组4和8周时肾脏Ang-1mRNA表达显著上调, 24周时明显低于对照组;糖尿病组4～24周免疫组化显示肾小球Ang-1着染均显著高于对照组,峰值在4～8周,12周后逐渐下调;糖尿病组2～20周肾小球TM-1明显增强;Ang-1和TM-1呈正相关. 结论：糖尿病肾脏存在Ang-1和TM-1的异常改变,表现为早中期表达上调,后期表达下调,并且这种改变可能与糖尿病肾脏新生血管的生成有关.     

大鼠脉络膜新生血管色素上皮衍生因子、血管内皮生长因子、血管生成素-2的表达

目的探讨大鼠脉络膜新生血管(DNV)组织色素上皮衍生因子(PEDF)和血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成素-2(Ang-2)表达,探讨它们在CNV中的作用机制。方法应用氪激光光凝视网膜制备BN大鼠脉络膜新生血管(CNV)模型,随机分为6组,分别在光凝后1,3,7,14,21,28 d行荧光素眼底血管造影(FFA)后摘除眼球。应用实时荧光定量反转录PCR及免疫组化(SP)法检测各组大鼠光凝区和正常视网膜中PEDF、VEGF和Ang-2 mRNA和蛋白的表达,并对结果进行分析。结果光凝后3 d激光损伤区PEDF mRNA和蛋白表达程度最高,与其他各组比较差异显著(均P<0.05),其后表达逐渐下降;光凝后14 d CNV增殖区VEGF表达程度最高,与其他各组比较差异显著(均P<0.05);7 d时Ang-2表达程度最高,与其他各组比较差异显著(均P<0.05)。结论 PEDF表达不足可能是CNV形成和增殖一个主要原因,VEGF与PEDF表达失衡可能在CNV形成过程中起重要调控作用。     

人脐血干细胞移植促进心肌梗死大鼠血管新生的机制研究

目的:观察人脐血干细胞(hUCBSC)经静脉移植对心肌梗死(MI)大鼠血管新生和血管内皮生长因子(VEGF)、促血管生成素(Ang-1)表达的影响.方法:雄性SD大鼠40只,随机分为3组:①假手术组(10只);②对照组(15只)制备MI模型成功后,经尾静脉注射0.9%氯化钠溶液0.5 ml;③移植组(15只)尾静脉注射hUCBSC 0.5 ml(含干细胞2×107/ml).术后4周行超声心动图和血流动力学检查,并取心脏组织行苏木精-伊红染色、抗Ⅶ因子免疫组化染色,观察心肌病理改变、心肌毛细血管密度(MCD)的变化.同时用免疫组化和RT-PCT的方法检测VEGF、Ang-1及其mRNA的表达.结果:与对照组相比,术后4周时移植组心功能明显改善(P＜0.01),左室舒张末压显著降低[(20.13±5.63)mmHg,(10.56±4.69)mmHg,P＜0.01],而左室压力最大变化率明显增加[(4.25±2.01)mmHg/ms:(6.53±2.38)mmHg/ms,P＜0.053;和[(3.83±2.69)mmHg/ms:(6.25±2.92)mmHg/ms,P＜0.05];移植组MCD明显高于对照组[(4.2±0.5)个/HP:(2.1±0.3)个/HP,P＜0.01];移植组VEGF和Ang-1及其mRNA表达明显高于对照组和假手术组.结论:hUCBSC经静脉移植通过促进VEGF和Ang-1表达而促进MI大鼠血管新生,从而改善MI大鼠心功能.     

人脐血干细胞移植对心肌梗死大鼠血管新生和血管内皮生长因子、促血管生成素-1表达的影响

目的观察人脐血干细胞(hUCBSC)经静脉移植对心肌梗死(MI)大鼠血管新生和血管内皮生长因子(VEGF)、促血管生成素(Ang-1)表达的影响。方法雄性Sprague-Dawley大鼠40只,随机分为3组:(1)假手术组(10只):大鼠麻醉后开胸,将结扎线通过前降支动脉(LAD),不结扎,然后关胸;(2)对照组(15只):大鼠麻醉后开胸,结扎LAD,制备MI模型成功(经肉眼观察和心电图证实)后,经尾静脉注射0.9%生理盐水0.5 mL;(3)移植组(15只),大鼠麻醉后开胸,结扎LAD,制备MI模型后,经尾静脉注射hUCBSC 0.5 mL(含干细胞2×107/mL,由北京市脐血干细胞库提供)。术后4周行超声心动图检查和心导管检查,并取心脏组织行HE染色、抗Ⅷ因子免疫组化染色,观察心肌病理改变、肌毛细血管密度(MCD)的变化。同时用免疫组化和RT-PCT的方法检测VEGF、Ang-1及其mRNA的表达。结果与对照组相比,术后4周时移植组左室射血分数较对照组明显改善(55.35%±11.23%比40.23%±10.87%,P<0.01),左室舒张末压显著降低(10.56±4.69 mmHg比20.13±5.63 mmHg,P<0.01),而左室压力最大变化率明显增加(4.25±2.01 mmHg比6.53±2.38mmHg,P<0.05;3.83±2.69 mmHg比6.25±2.92 mmHg,P<0.05);移植组MCD明显高于对照组(每高倍视野4.2±0.5个比2.1±0.3个,P<0.01);移植组VEGF和Ang-1及其mRNA表达明显高于对照组和假手术组。结论经静脉移植hUCBSC促进MI大鼠VEGF和Ang-1表达,促进血管新生,改善心功能。     

VEGF和Ang-2与甲状腺乳头状癌血管生成和转移的相关性探讨

采用免疫组化S-P法检测20例甲状腺乳头状癌（PTC,A组）、15例结节性甲状腺肿（B组）、15例甲状腺腺瘤（C组）和15例正常甲状腺组织（D组）中血管内皮生长因子（VEGF）、促血管生成素-2（Ang-2）蛋白的表达和微血管密度（MVD）。结果A组VEGF和Ang-2表达均显著高于其他组（P均〈0．05）;A组VEGF、Ang-2与MVD呈正相关（P均〈0．05）,而Ang-2与MVD无相关性;A组有淋巴结转移者VEGF表达和MVD均显著高于无转移者（P均〈0．05）,但Ang-2无显著差异。提示VEGF和Ang-2在PTC血管生成中起重要作用;VEGF与PTC转移密切相关。     

辛伐他汀对心肌梗死后血管新生及血管生成素-1的影响

目的:观察辛伐他汀对大鼠急性心肌梗死(AMI)后血管新生的影响,以及血管生成素-1(Ang-1)在这一过程中的表达变化.方法:SD大鼠60只,随机分为假手术组、对照组、小剂量辛伐他汀(1 mg·kg-1·d-1)组、中剂量辛伐他汀(10 mg·kg-1·d-1)组、大剂量辛伐他汀(40 mg·kg-1·d-1)组.结扎大鼠冠状动脉左前降支建立AMI动物模型.术后次日起分别灌胃给予相应剂量辛伐他汀4周.检测缺血区心肌新生血管密度、左室重量指数(LVMI)、及Ang-1蛋白及mRNA表达.结果:小剂量及中剂量辛伐他汀组缺血区心肌新生血管密度较对照组显著增加(P<0.05);各剂量辛伐他汀组Ang-1蛋白及mRNA表达较对照组均显著增强(P<0.05);小、中剂量辛伐他汀组LVMI较对照组显著减小(P<0.05),大剂量组LVMI则进一步减小(P<0.01).结论:小、中剂量辛伐他汀可促进AMI后心肌血管新生;辛伐他汀这一作用可能与其上调Ang-1的表达有关.     

血管内皮生长因子165及血管生成素-1减小大鼠心肌梗死面积的研究

目的 在体条件下探讨血管内皮生长因子165(VEGF165)和血管生成素-1(angiopoietin-1，Ang1)对心脏缺血损伤的保护作用及其机制。方法 构建编码人VEGF165和Ang-全长基因的复制缺陷型腺病毒载体Ad—VEGF165和Ad—Ang1。结扎SD大鼠冠状动脉前降支，在缺血区周围心肌内注射Ad—VEGF165和(或)Ad—Angl，术后72h检测心脏组织中三磷酸肌醇激酶活性和抗凋亡因子Bcl-2表达水平；术后1周收取心脏，分析结扎区内梗死心肌的面积变化。结果 Ang-1和VEGF165单用组及两者联用组心肌梗死面积显著减小。其中，Ang-1单用组和两者联用组效果要好于VEGF165单用组。VEGF165和(或)Ang-1转染后，心肌内三磷酸肌醇激酶活性和Bcl-2表达水平均显著增高。结论 VEGF165和(或)Ang-1可激活心脏中三磷酸肌醇激酶并促进Bcl-2表达，减小心肌梗死面积，有明确的心脏保护作用。     

VEGF、Ang-2形成中的作用在Graves病血管形成中的作用

采用S—P免疫组织化学法检测35例Graves病患者甲状腺组织切除标本（观察组）和11例甲状腺良性腺瘤患者的正常甲状腺组织（对照组）中血管内皮生长因子（VEGF）、促血管生成素-2（Ang-2）蛋白的表达和CD34标记的微血管密度（MVD），并分析其相关性。结果 观察组VEGF、Ang-2的表达程度明显高于对照组（P均〈0．05）;观察组VEGF蛋白表达与Ang-2蛋白表达呈显著正相关（r=0.351，P〈0．05）．二者的表达程度与MVD亦均呈显著正相关（r分别为0．723、0．675，P均〈0．01）。提示VEGF、Ang-2表达在Graves病甲状腺血管形成中起重要作用。     

糖尿病肾病患者血清血管内皮生长因子和血管生成素-2的测定及临床意义

目的探讨糖尿病肾病患者血清血管内皮生长因子(VEGF)及血管生成素(Ang)-2的水平变化及其临床意义。方法选取糖尿病患者68例,其中糖尿病非肾病(DM1)26例,糖尿病肾病42例,按照尿微量白蛋白排泄率(UAER)将其分为微量蛋白尿组(DM2)24例及大量蛋白尿组(DM3)18例,对照组20例,分别测定患者VEGF、Ang-2及糖化皿红蛋白(HbA1c)水平。结果各DM组之间HbA1c水平无明显差异,各组患者之间血清VEGF及Ang-2水平有显著性差异,均高于对照组(P<0.05);DM2较DM1组及DM3较DM2组患者血清VEGF及Ang-2明显升高(P<0.05)。结论血清VEGF及Ang-2参与了糖尿病肾病的发生及发展,其水平与糖尿病肾病严重程度呈正相关,血清VEGF与Ang-2水平呈正相关。     

人血管内皮细胞生长因子-165和人血管生成素-1促进大鼠缺血下肢血管新生

目的　观察肌肉转染腺病毒(adenovirus ,Ad )携带的人血管内皮细胞生长因子- 1 6 5(ves cularendothelialgrowfactor ,Ad5 VEGF1 65)和人血管形成素- 1 (angiopoietin- 1 ,Ad5 Ang -1 )基因对大鼠缺血下肢的生血管效应。方法　制作大鼠下肢血管闭塞模型,肌肉内注射Ad5 VEGF1 65 或 和Ad5 Ang -1 ,以Westernblot法检测生长因子蛋白表达,免疫组化检测基因导入后在缺血肌肉引起的效应。结果　肌肉经注射Ad5 VEGF1 65和Ad5 Ang- 1后高表达人VEGF1 65 蛋白和人Ang- 1蛋白。术后7d处理组与对照组新生毛细血管数目无明显差别。但术后1 4d和2 1dAng- 1和VEGF1 65 组的新生毛细血管 肌肉数目比明显高于对照组(P <0 . 0 1 ) ,VEGF1 65 Ang 1两因子合用组明显高于单用组(P <0. 0 1 )。Ad -VEGF1 65组及Ad VEGF1 65 Ad Ang 1合用组出现大量包围着一厚层αSMA阳性平滑肌细胞的血管,其数量与肌肉数比值明显高于对照组(P <0 . 0 1 )。因子单用组和合用组肌肉内出现大量溴化脱氧尿嘧啶阳性细胞浸润,部分细胞表面呈现C- Kit阳性,新生血管内皮细胞中也有C Kit阳性标记。结论　Ad5- VEGF1 65和Ad5 -Ang -1能促进缺血肢体血管新生,二者合用的生血管效应更为显著;VEGF1 65能促进包被平滑肌细胞的形似微小动脉的血管数量增多     

血管内皮生长因子和内抑素在大鼠糖尿病肾病发病中的作用

目的研究血管内皮细胞生长因子（VEGF）作为促血管生长因子和内抑素（ENS）作为血管生成抑制因子,在糖尿病肾病（DN）血管生成中的作用。方法以正常大鼠为对照,30只雄性Wistar大鼠建成糖尿病模型,分别于糖尿病模型建立2、4、8周观察24小时尿白蛋白排泄率（UAER）,用免疫组织化学染色显示大鼠肾组织VEGF和ENS的表达及半定量分析;用酶联免疫法测定血中VEGF和ENS的浓度,根据DN病理学改变确定DN的血管增生严重性,分析内皮细胞增生、肾小球中弥漫或结节病变及肾小球硬化与VEGF和ENS的关系;采用RT-PCR的方法观察大鼠肾脏VEGF和ENSmRNA的表达。结果DN大鼠肾组织VEGF和ENS的mRNA和蛋白表达水平明显高于对照组（P〈0．05）;DN大鼠血清VEGF和ENS水平也明显高于对照组（P〈0．05）。DN大鼠UAER与血浆VEGF和ENS相关（r=0．468,P〈0．01;r=0．395,P〈0．05）,DN大鼠无论在血中还是肾组织免疫组化和RT-PCR都有VEGF和ENS的表达,VEGF的表达与DN血管增生程度密切相关（r=0．404～0．476,P〈0．01～0．05）,ENS的表达也与DN严重程度密切相关（r=0．409~0．617,P〈0．05～0．01）,血浆VEGF和ENS二者具有正相关性（r=0．484,P〈0．01）。结论VEGF和ENS与DN血管增生密切相关。     

促血管生成素-1对糖尿病大鼠肾脏色素上皮衍生因子和血小板反应蛋白-1基因表达的影响

目的 观察色素上皮衍生因子（PEDF）、血小板反应蛋白-1（TSP-1）在糖尿病大鼠肾脏的表达变化,探讨促血管生成素-1（Ang-1）对上述因子的影响. 方法 将雄性SD大鼠分正常对照（NC）组、DN组、空载处理（BV）组、Ang-1处理（AV）组.采用STZ腹腔注射诱导大鼠DN模型.成模8周后尾静脉注射Ang-1腺病毒载体.多时点检测24 hUAlb和肾组织PEDF、TSP-1蛋白及mRNA表达水平.结果 DN、BV、AV组24 hUAlb均升高,其中AV组于20周后降低（P＜0.05）.DN、BV、AV组肾组织PEDF蛋白及mRNA表达下调,TSP-1表达上调（P＜0.05）,其中AV组12周后肾组织PEDF和TSP-1mRNA及蛋白表达变化较DN、BV组改善明显（P＜0.05）. 结论 糖尿病大鼠肾脏PEDF、TSP-1异常表达参与DN发生发展,给予Ang-1可改善糖尿病大鼠肾脏PEDF、TSP-1异常表达.     

Angiopoietins and Tie-2 expression in angiogenesis and proliferation of human hepatocellular carcinoma

Human hepatocellular carcinoma (HCC) is a hypervascular tumor but the mechanisms underlying the process of angiogenesis are not fully understood. Angiopoietins (Ang) have been recently identified as ligands for Tie-2 receptor and are thought to be important factors in vascular maturation and stability during angiogenesis. In this study, we investigated the expression of Ang-1, Ang-2, Tie-2, and vascular endothelial growth factor (VEGF) in surgically resected specimens from 46 patients with HCC to determine their potential role in tumor angiogenesis and its progression. VEGF messenger RNA (mRNA) was significantly up-regulated in HCC compared to normal liver tissue from patients with hepatic metastases. No differences were found between HCC and adjacent liver tissue. Meanwhile, Ang-2 mRNA expression in HCC was significantly increased when compared to adjacent liver tissue. On the other hand, Ang-1 and Tie-2 mRNA expression in HCC was not different from that in adjacent liver tissue. Immunohistochemical staining also showed increased Ang-2 protein in HCC. Furthermore, a high Ang-2/1 mRNA ratio in HCC was closely associated with tumor portal vein invasion, tumor diameter, and the microvessel density level as assessed by CD34 immunostaining. With regard to prognosis, the survival time for patients in the high Ang-2/1 mRNA ratio group was significantly poorer when compared with the low Ang-2/1 mRNA ratio group. In conclusion, an increased expression of Ang-2/1 in the presence of VEGF may play a critical role in promoting tumor angiogenesis and progression in human HCC.     

整合酶相互作用分子1基因对糖尿病下肢缺血性疾病的影响

目的检测整合酶相互作用分子1（INII）基因在糖尿病大鼠下肢缺血性疾病血管中的表达,探讨其对血管内皮细胞影响的分子机制。方法以8周龄的雄性SD大鼠为研究对象,通过尾静脉注射链脲佐菌素（STZ）的方法获得16只糖尿病大鼠模型,以完全随机分组方法将大鼠分为2组（每组8只）：实验组部分结扎双侧股外动脉制作下肢缺血模型,对照组仅进行糖尿病造模,不作其他处理。以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blotting技术检测2组下肢动脉壁INII的mRNA和蛋白表达情况。合成针对删门的小干扰RNA（siRNA．INll）,并转染入人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC-12,对照组分别为无关序列转染及脂质体对照;应用噻唑蓝（MTT）比色法、Transwell侵袭小室实验、RT—PCR、Western blotting等技术检测转染INII—siRNA前后HUVEC．12细胞迁移及血管生成能力的变化,进一步检测迁移相关基因细胞间黏附分子1（ICAM-1）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶抑制物1（TIMP-1）和血管生成相关基因血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、血管紧张素2（Ang-2）的变化情况。以t检验与方差分析做组问数据对比。结果糖尿病下肢缺血大鼠的动脉壁内删7mRNA和蛋白表达均较对照组明显增加（分别为0．83±0．07、0．21±0．03和0．92±0．08、0．31±0．03,t=23．03、20．19,均P〈0．01）;转染后与脂质体及无关序列对照组相比,INII-siRNA组HUVEC-12细胞INII mRNA及蛋白表达均显著降低（INII mRNA分别为0．26±0．01、0．75±0．08、0．80±0．07,INII 蛋白分别为0．11±0．02、0．79±0．12、0．82±0．14,F=36．49、24．17,均P〈0．01）;INII-siRNA组迁移能力明显增强（分别为66±5、35±3、37±5,F=19．39,P〈0．01）。与两对照组相比,MJ-siRNA组HUVEC-12中ICAM-1、MMP-2、VEGF、bFGF和Ang-2的mRNA和蛋白表达明显增强（均P〈0．05）,TIMP-1的mRNA和蛋白表达显著降低（F：36．48、237．91,P〈0．05）。结论 INII 可抑制血管内皮细胞的迁移和血管生成能力,该效应可能是通过调控细胞中ICAM-1、MMP-2、TIMP-1、VEGF、bFGF和Ang-2的表达实现的。     

糖尿病大鼠肾脏一氧化氮系统基因表达的研究

目的 研究糖尿病大鼠肾脏一氧化氮系统基因的表达。方法 观察了１２周ＳＴＺ－糖尿病大鼠肾脏皮质一氧化氮（ＮＯ）含量及一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）活力,并应用ＲＴ－ＰＣＲ技术检测了肾脏皮质诱生型一氧化氮合成酶ｍＲＮＡ水平的改变。结果 糖尿病大鼠肾脏皮质ＮＯＳ活性及ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ水平明显高于正常对照组（Ｐ〈０．０５）,然而ＮＯ含量却反而下降（Ｐ〈０．０５）。结论 糖尿病大鼠肾脏一氧化氮合成障碍,灭活加速     

伊贝沙坦对2型糖尿病大鼠肾皮质fractalkine表达的影响

目的研究血管紧张素受体Ⅱ（ATⅡ）的AT1受体阻滞剂伊贝沙坦对2型糖尿病（T2DM）大鼠肾皮质趋化因子fractalkine表达的影响。方法制备T2DM大鼠模型,随机分为正常对照组、糖尿病组及伊贝沙坦治疗组。分别用半定量RT-PCR和免疫组化法检测肾皮质fractalkine mRNA和蛋白表达。结果糖尿病组血清糖基化终产物-肽、尿素氮（BUN）、24h尿总蛋白（24hUPro）、肾皮质fractalkine mRNA和蛋白表达均明显高于对照组;伊贝沙坦治疗组血清BUN、24hUPro、肾皮质fractalkine mRNA和蛋白表达则明显低于糖尿病组。结论伊贝沙坦可能通过抑制肾皮质fractalkine表达发挥其肾保护作用。     

白藜芦醇对链脲佐菌素诱导糖尿病小鼠肾脏损伤的保护作用

目的观察白藜芦醇对链脲佐菌素诱导的Ⅰ型糖尿病小鼠肾脏损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法2018年6月—2019年11月期间取6~8周龄C57BL/6小鼠60只,其中正常小鼠20只,腹腔注射链脲霉素(STZ)诱导的糖尿病小鼠40只。实验所用C57BL/6小鼠分为3组:正常对照组(20只)、糖尿病组(20只)和糖尿病白芦藜醇治疗组(20只)。于糖尿病小鼠建模后5个月检测各组小鼠24 h蛋白尿、血液尿素氮(BUN)及血肌酐(Cr)等肾功能相关指标。评估各组小鼠肾脏肥大指数(肾重/体重)水平。利用试剂盒法检测各组小鼠肾脏皮质超氧化物歧化酶(SOD)活性、脂质过氧化代谢产物丙二醛(MDA)含量。取各组小鼠肾脏组织病理切片观察肾脏病理改变。采用TUNEL凋亡试剂盒检测各组小鼠肾脏组织细胞凋亡情况。Western blot及Real time-PCR法检测各组小鼠肾脏皮质血管内皮生长因子(VEGF),和核因子κB(NF-κB)等关键因子表达水平。利用免疫荧光组织化学染色技术观察各组小鼠肾脏组织VEGF表达情况。结果糖尿病白藜芦醇治疗组小鼠24 h尿蛋白、尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)和脂质过氧化代谢产物丙二醛(MDA)含量水平较糖尿病组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);糖尿病白藜芦醇治疗组小鼠肾脏皮质超氧化物歧化酶(SOD)活性较糖尿病组小鼠明显升高;HE病理染色显示白芦藜醇治疗组小鼠肾脏损害较糖尿病组小鼠减轻;TUNEL凋亡染色显示糖尿病白芦藜醇治疗组肾脏细胞凋亡水平较糖尿病组明显减轻;Western blot和RT-PCR结果显示,糖尿病白藜芦醇治疗组VEGF与NF-κB mRNA和蛋白表达水平较糖尿病组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);免疫荧光染色结果显示,糖尿病白藜芦醇治疗组VEGF荧光强度较糖尿病组明显降低。结论白藜芦醇能够明显改善糖尿病小鼠肾脏损伤,其作用机制可能是通过减少肾脏组织细胞凋亡、抗VEGF表达及抗炎作用。