高强度聚焦超声联合赛来昔布治疗胰腺癌裸鼠移植瘤的实验研究

目的研究高强度聚焦超声（HIFU）联合选择性环氧合酶-2抑制剂赛来昔布对胰腺癌裸鼠移植瘤生长的影响。方法40只裸鼠建立胰腺癌裸鼠移植瘤模型，随机分对照组、HIFU组、赛来昔布组及联合组共观察40d，研究各处理因素对移植瘤生长的影响。观察4组移植瘤组织病理学变化，RT-PCR检测bcl-2、bax及HSP70的表达，免疫组化检测HSP70的表达。结果联合组移植瘤平均体积最小，赛来昔布组、HIFU组、联合组抑瘤率分别为81．3％、93％、99．7％。病理示HIFU组和联合组中见大片凝固性坏死，HIFU组可见残留癌细胞小岛而联合组未见。FT-PCR示bcl-2在各组中均表达极弱；bax在HIFU组、赛来昔布组及联合组中表达均上调；HSP70以联合组表达上调最明显。免疫组化示HIFU组、联合组HSP70呈强阳性表达。结论HIFU与赛来昔布联合对胰腺癌裸鼠移植瘤的治疗可起到协同作用。HIFU不仅可以直接杀灭肿瘤细胞，而且可以通过上调bax的表达诱导肿瘤细胞凋亡；通过上调HSP70的表达激发机体的免疫反应进一步抑制肿瘤生长。     

乳香胶联合吉西他滨对人胰腺癌BxPc-3细胞的作用及机制初探

目的 研究乳香胶联合吉西他滨对体内、外培养的人胰腺癌BxPc-3细胞的作用及相关机制.方法 四唑氮蓝还原法检测BxPc-3细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡(PI单染色法).Western blot检测不同浓度的乳香胶联合吉西他滨(两药联合组)用药后BxPc-3细胞内测核转录因子-κB(NF-κB) p65亚基以及NF-κB抑制蛋白IkB、凋亡调节蛋白Bcl 2和Bax的表达水平的变化.建立人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,监测移植瘤体积变化.结果 两药联合组选择乳香胶(40 mg/L)和吉西他滨(10 mg/L)处理72 h后,抑制人胰腺癌细胞株BxPc-3细胞的作用显著优于单独使用(P＜0.01);凋亡比例(45.13±4.01)明显高于乳香胶组或吉西他滨组(P＜0.01)和对照组(5.07±1.37,P＜0.01);乳香胶或两药联合可抑制NF-κB的活性;对人胰腺癌BxPc-3细胞作用48 h后,Bcl-2的蛋白表达明显低于吉西他滨组和对照组(P＜0.01).而IkB和Bax蛋白的表达显著高于吉西他滨组和对照组(P＜0.01).与对照组比较,乳香胶或两药联合组可显著抑制裸鼠胰腺癌皮下移植瘤生长(P＜0.05).结论 乳香胶可通过抑制NF-κB的活性,增加IkB和Bax蛋白表达、抑制Bcl-2的蛋白表达,发挥抗肿瘤作用,并增强吉西他滨的药效.     

吉西他滨诱导胰腺癌细胞ABCG2表达其化疗耐药的关系研究

目的：探讨吉西他滨诱导胰腺癌细胞ABCG2的表达及与其化疗耐药的关系。 方法：吉西他滨不同浓度、不同时间作用胰腺癌SW1990细胞后,用CCK-8法检测细胞的增殖抑制率,并计算吉西他滨不同作用时间的半数抑制浓度（IC50）;根据IC50值选择合适浓度的吉西他滨,作用SW1990细胞24、48、72 h后,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,并用Western blot和RT-PCR法检测ABCG2蛋白与mRNA的表达。 结果：吉西他滨作用后,SW1990细胞增殖明显抑制,并呈浓度与时间依赖性,但IC50值呈时间依赖性增加（均P<0.05）;3.9 mg/mL吉西他滨作用24、48、72 h后,SW1990细胞总凋亡率逐渐增加,但晚期凋亡率呈降低趋势,ABCG2蛋白与mRNA的表达明显升高,并呈时间依赖性（均P<0.05）。 结论：吉西他滨能抑制胰腺癌细胞SW1990的增殖,但作用呈时间依赖性减弱,这可能与其诱导ABCG2上调表达有关。     

生长抑素受体基因对胰腺癌细胞侵袭转移影响的研究

目的探讨腺病毒介导的生长抑素受体2（SSTR2）基因对胰腺癌BXPC-3细胞浸润、转移的抑制作用及其机制.方法利用腺病毒载体Adv-GFP-SSTR2将人类SSTR2全长cDNA转染导入胰腺癌细胞株BXPC-3,用RT-PCR及Westen-blot检测SSTR2在mRNA水平及蛋白水平上的表达.利用Transwell小室测定转染SSTR2前、后及转染空载体后细胞的穿膜侵袭运动能力;RT-PCR检测转染SSTR2前后及转染空载体细胞的MMP-2和TIMP-2的表达.结果Adv-GFP-SSTR2腺病毒转染胰腺癌BXPC-3后,可以稳定表达SSTR2;细胞计数示转染后胰腺癌细胞穿透基底膜的数量较转染前明显减少（P＜0.01）,细胞侵袭力明显减弱;MMP-2转染后较转染前表达明显上调（P＜0.01）、TIMP-2表达明显下调（P＜0.01）,MMP-2/TIMP-2比例下降.结论转染SSTR2可明显抑制胰腺癌细胞的侵袭转移,其可能的机制是通过改变MMP-2/TIMP-2的比例而抑制肿瘤细胞对细胞外基质的降解.     

胰腺癌肿瘤干细胞对抗肿瘤药物敏感性的实验研究

目的 探讨胰腺癌肿瘤干细胞对抗肿瘤药物的敏感性.方法 FACS技术分选人胰腺癌PANC-1细胞;RT-PCR技术检测分选PANC-1细胞中CD133、ABCG2、Notch1的表达情况;MTT法检测分选细胞对抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶和吉西他滨的耐药性.建立分选细胞的移植瘤模型,随机分为吉西他滨治疗组(n=3)和对照组(n=3),观察肿瘤生长情况,作CD133免疫组化染色.结果PANC-1细胞中含有SP亚群.SP细胞CD133、ABCG2、Notch1的mRNA的表达明显上调,non-SP细胞的表达量显著低于前者.在吉西他滨的干预下,SP细胞和non-SP细胞的OD值差异有统计学意义.而5-氟尿嘧啶的干预(10 μg/ml和100 μg/ml)则没有显著差异.移植肿瘤治疗组中CD133阳性细胞明显多于对照组(P=0.001).结论胰腺癌中存在SP亚群细胞.胰腺癌PANC-1的成瘤能力是由其中的SP亚群细胞决定的,而并非所有胰腺癌PANC-1细胞.胰腺癌肿瘤干细胞对抗肿瘤药吉西他滨具有较高耐药性.     

DPC4基因转染对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响

目的 运用基因转染技术,观察DPC4基因转染对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响.方法 构建表达DPC4基因的逆转录病毒载体,转染胰腺癌细胞BxPC-3,获取稳定表达DPC4的子代胰腺癌的细胞株BxPC-3/DPC4.观察5-Fu、吉西他滨(作用72 h)对胰腺癌细胞的抑制作用.同时应用半定量RT-PCR检测胰腺癌细胞内Mdr-1、Chk1基因的表达情况.结果 DPC4基因转染并稳定表达后,BxPC-3细胞对5-Fu、吉西他滨的IC50浓度(72 h)分别降低了1倍左右.同一浓度下,5-Fu、吉西他滨联合DPC4基因转染对BxPC-3细胞的体外抑制作用也明显增强,癌细胞内的Mdr-1、Chk1基因的mRNA表达明显下调.显示单独使用pLXSN/DPC4、5-Fu、吉西他滨,均能在体外抑制胰腺癌细胞的生长,但pLXSN/DPC4联合化疗药物,对癌细胞生长的抑制作用更为明显.结论 DPC4基因转染能够提高胰腺癌细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能是通过下调Mdr-1、Chkl的表达来实现的.     

DPC4基因转染对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响

目的 运用基因转染技术,观察DPC4基因转染对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响.方法 构建表达DPC4基因的逆转录病毒载体,转染胰腺癌细胞BxPC-3,获取稳定表达DPC4的子代胰腺癌的细胞株BxPC-3/DPC4.观察5-Fu、吉西他滨(作用72 h)对胰腺癌细胞的抑制作用.同时应用半定量RT-PCR检测胰腺癌细胞内Mdr-1、Chk1基因的表达情况.结果 DPC4基因转染并稳定表达后,BxPC-3细胞对5-Fu、吉西他滨的IC50浓度(72 h)分别降低了1倍左右.同一浓度下,5-Fu、吉西他滨联合DPC4基因转染对BxPC-3细胞的体外抑制作用也明显增强,癌细胞内的Mdr-1、Chk1基因的mRNA表达明显下调.显示单独使用pLXSN/DPC4、5-Fu、吉西他滨,均能在体外抑制胰腺癌细胞的生长,但pLXSN/DPC4联合化疗药物,对癌细胞生长的抑制作用更为明显.结论 DPC4基因转染能够提高胰腺癌细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能是通过下调Mdr-1、Chkl的表达来实现的.     

DPC4基因转染对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响

目的 运用基因转染技术,观察DPC4基因转染对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响.方法 构建表达DPC4基因的逆转录病毒载体,转染胰腺癌细胞BxPC-3,获取稳定表达DPC4的子代胰腺癌的细胞株BxPC-3/DPC4.观察5-Fu、吉西他滨(作用72 h)对胰腺癌细胞的抑制作用.同时应用半定量RT-PCR检测胰腺癌细胞内Mdr-1、Chk1基因的表达情况.结果 DPC4基因转染并稳定表达后,BxPC-3细胞对5-Fu、吉西他滨的IC50浓度(72 h)分别降低了1倍左右.同一浓度下,5-Fu、吉西他滨联合DPC4基因转染对BxPC-3细胞的体外抑制作用也明显增强,癌细胞内的Mdr-1、Chk1基因的mRNA表达明显下调.显示单独使用pLXSN/DPC4、5-Fu、吉西他滨,均能在体外抑制胰腺癌细胞的生长,但pLXSN/DPC4联合化疗药物,对癌细胞生长的抑制作用更为明显.结论 DPC4基因转染能够提高胰腺癌细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能是通过下调Mdr-1、Chkl的表达来实现的.     

汉防己甲素和吉西他滨协同使用对化疗耐药胰腺癌细胞的凋亡诱导作用

目的：研究汉防己甲素对胰腺癌化疗耐药产生与凋亡的影响。方法：分对照组（只加培养基）、吉西他滨组（Gemcitabine组）和汉防己甲素联合吉西他滨组（Tet/Gem组）,后2组采用不同浓度汉防己甲素和吉西他滨作用于人胰腺癌敏感株BxPC-3和吉西他滨耐药株BxPC-3/Gem细胞,通过MTT法检测抗肿瘤药物的细胞毒作用,碘化丙啶（PI）染色检测细胞凋亡。结果：BxPC-3/Gem耐药胰腺癌细胞株耐药指数（RF）为4.70,汉防己甲素作用耐药胰腺癌细胞后其RF降至1.69,证明汉防己甲素可逆转BxPC-3/Gem耐药胰腺癌细胞对吉西他滨的耐药。化疗耐药胰腺癌细胞凋亡在12h、18h、24h,Tet/GEM组与GEM组、对照组比较,差异有非常显著性意义（P〈0.01）。结论：汉防己甲素可以逆转BxPC-3/Gem耐药胰腺癌细胞对吉西他滨的耐药,协同吉西他滨促进对化疗耐药胰腺癌细胞凋亡作用。     

下调G蛋白信号调控因子2表达对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响

目的:探讨下调G蛋白信号调控因子2(GPSM2)表达对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响。方法:构建GPSM2低表达的胰腺癌MIA-PaCa-2细胞并鉴定;将16只裸鼠随机均分为两组,分别皮下接种GPSM2低表达与自然表达的MIA-PaCa-2细胞构建荷瘤模型,两组中分别一半注射吉西他滨(100 mg/kg),一半注射等体积生理盐水(腹腔注射,3次/周,共注射4周),绘制瘤体生长曲线,并于末次注射后第3天处死裸鼠,测量肿瘤体积。结果:成功构建GPSM2表达下调的MIA-PaCa-2细胞。移植瘤的生长速度与体积大小的趋势均表现为GPSM2自然表达+生理盐水组GPSM2自然表达+吉西他滨组GPSM2低表达+生理盐水组GPSM2低表达+吉西他滨组。析因设计分析结果显示,单独吉西他滨或单独下调GPSM2基因表达对于抑制裸鼠瘤体生长的主效应均具有统计学意义(均P=0.000);吉西他滨联合下调GPSM2基因表达对于抑制裸鼠瘤体生长的交互效应尚未达到统计学意义(P=0.073);但吉西他滨联合下调GPSM2基因表达对于肿瘤生长的抑制作用相对于单独吉西他滨或单独下调GPSM2基因表达的单独效应均有统计学意义(P=0.000、0.003)。结论:下调GPSM2基因表达是否有增强胰腺癌细胞化疗敏感性的作用尚不确定,但下调GPSM2基因表达的同时予以化疗对胰腺癌生长的抑制效果明显强于两者单独作用。     

An inverse relationship between KAI1 expression,invasive ability,and MMP-2 expression and activity in bladder cancer cell lines

ObjectiveTo investigate the relationship between the expression of the cancer metastasis suppressor gene KAI1 and MMP-2 and MMP-9 in human bladder cancer cell lines that express variable levels of KAI1.Materials and methodsFive bladder cancer cell lines (BL-28/0, BL-13/0, BL-17/0/×1, B10, and D2) were grown in standard culture conditions. Gelatinase activities in serum-free conditioned medium were assessed using gelatin zymography. Whole cell lysates were prepared and Western blotting used to detect the protein expression of MMP-9, MMP-2, TIMP-1, TIMP-2, and KAI1. Semiquantitative RT-PCR was performed to analyze the mRNA expression level of MMP-2, MMP-9, TIMP-1, TIMP-2, and KAI1.ResultsWestern blotting analysis confirmed that KAI1 was expressed in BL-28/0 and Bl-13/0 but not in D2, B10 and BL-17/0/×1 cell lines. This was consistent with in vitro invasion assays reported previously which showed that cell lines lacking KAI1 expression were 2× to 10× more invasive than cell lines that expressed KAI1. MMP-2 protein was detected in BL-28/0, BL-13/0. and BL-17/0/×1 only. Very low levels of MMP-9 were present in BL-28/0, BL-13/0, B10, and BL-17/0/×1 but not D2, whilst very low levels of TIMP-1 were present in all cell lines. No TIMP-2 was detected. Gelatin zymography showed detectable MMP-2 expression in conditioned medium from BL-28/0 and BL-13/0. Very weak MMP-9 was detected in BL-28/0 conditioned medium only. mRNA expression of MMP-2 was only detectable in BL-28/0 and BL-13/0 cell lines. MMP-9 mRNA levels were extremely low in all lines and not detectable in D2 cells. TIMP-1 and TIMP-2 mRNA were detected in all lines.ConclusionWe found that KAI1 expression in bladder cancer cell lines is related to a poor invasive potential and expression of latent MMP-2 but not MMP-9. These results are unexpected given other studies showing high levels of MMP-2 and MMP-9 protein expression in patients with invasive bladder cancer. This may reflect differences in the regulation and secretion of MMP-2 and MMP-9 in vitro compared with the in vivo situation, where tumor cells interact with the surrounding environment.     

AMD3100抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭的体外实验

目的 探讨CXCR4 特异性受体阻滞剂AMD3100 对胰腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其可能的作用机制.方法 用CCK-8 检测经不同浓度AMD3100 处理后人胰腺癌细胞株SW1990 的增殖.Matrigel 胶铺设的transwell 小室检测经AMD3100 处理后SW1990 的侵袭能力.RT-PCR 法检...     

白细胞介素6促进人胰腺癌细胞的侵袭及机制探讨

目的 应用白细胞介素6(IL-6)作用于人胰腺癌细胞株SW1990和Capan-2,观察侵袭能力的变化并探讨其机制.方法 使用IL-6处理人胰腺癌细胞株SW1990和Capan-2,MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学和Western印迹检测P-STAT3的表达,荧光定量PCR、Western印迹检测VEGF、MMP-2 mRNA和蛋白表达,体外侵袭检测细胞的侵袭能力.结果 IL-6 100 μg/L作用人胰腺癌细胞株后,细胞增殖能力增强(P＜0.05);Western印迹和免疫细胞化学显示P-STAT3的表达增加;荧光定量PCR、Western印迹显示VEGF、MMP-2的mRNA和蛋白表达明显升高(P＜0.05);细胞侵袭能力增强.结论 IL-6通过激活STAT3信号转导通路,上调MMP-2和VEGF表达,增强胰腺癌细胞侵袭能力.

Abstract：

Objective To investigate the effects and mechanism of IL-6 on invasion and metastasis of human pancreatic cancer cells. Methods IL-6 was added into the culture media of human pancreatic cancer cells Capan-2 and SW1990. Cell growth was measured by MTT assay. Western blot and immunocytochemistry were performed to detect Phosphorylated STAT3 (P-STAT3) protein. VEGF and MMP-2 mRNA and protein expression were examined using fluorescence quantitative polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western blot, respectively. The invasion ability of SW1990 and Capan2 cells was determined by cell invasion assay in vitro. Results 100 ng/mL IL-6 significantly promoted growth and invasion ability of Capan-2 and SW1990 cells (P＜0.05). The use of IL-6 not only markedly increased the protein expression of P-STAT3, VEGF and MMP-2, but also greatly increased the mRNA expression of MMP-2 and VEGF. Conclusions STAT3 signal transducer pathway activation with IL-6 can promote the invasion ability of pancreatic cancer cells in vitro through up-regulation of MMP-2 and VEGF expression. STAT3 signal transducer may provide a novel therapeutic target for the treatment of pancreatic cancer.     

TIMP-1 antisense gene transfection attenuates the invasive potential of pancreatic cancer cells in vitro and inhibits tumor growth in vivo

BACKGROUND: TIMP-1 overexpression decreases the invasive potential of pancreatic cancer cells. By tissue inhibitors of metalloproteinase (TIMP)-1 antisense gene transfection, we expected to produce aggressive pancreatic cancer cells with increased in vitro and in vivo invasive potential. METHODS: PANC-1 cells were transfected with either TIMP-1 gene (CD-1), antisense TIMP-1 gene (AS-3), or empty vector (MB-3). The in vitro cell growth kinetics and invasive potential of each cell line were compared. Total and active matrix metalloproteinase (MMP)-2 levels were determined. Each cell line was then implanted in athymic mice and the resultant tumors were compared for size, weight, MMP activity, and TIMP-1 expression. RESULTS: TIMP-1 modulation did not affect cell proliferation in vitro, but its underexpression and, to a lesser extent, overexpression resulted in attenuated tumor growth in vivo. AS-3 cells showed marked decreases in cell invasion and MMP-2 activity in vitro and in vivo. CONCLUSION: TIMP-1 manipulation, particularly underexpression, greatly reduces the invasive potential of pancreatic cancer by limiting MMP-2 activity without affecting in vitro cell growth. TIMP-1 is a reasonable molecular target in pancreatic cancer therapy.     

αVβ6-ERK直接通路在乌司他丁抑制结肠癌侵袭转移中的作用机制

目的：探讨αVβ6-ERK直接通路在乌司他丁（UTI）抑制结肠癌侵袭转移中的作用。方法：100例结肠癌患者随机分为对照组和治疗组,ELISA检测血清MMP-9／2水平,免疫组织化学检测结肠癌组织αVβ6表达;HT-29细胞按UTI不同浓度分组,TransweⅡ小室检测细胞侵袭能力,明胶酶谱检测MMP-9／2水平,WestemBlot检测细胞αVβ6和ERK变化。结果：UTI可降低结肠癌患者血清MMP-9／2水平及肿瘤组织aV136表达强度;UTI可抑制HT-29细胞侵袭能力及MMP-9／2分泌水平,并显著下调αVβ6表达和ERK磷酸化水平。结论：UTI可显著抑制结肠癌的侵袭浸润,αVβ6-ERK直接通路介导的MMP-9／2分泌可能在其中发挥重要作用。     

RNA干扰抑制胰腺癌细胞XIAP表达对化疗敏感性的影响

目的 ：探讨运用载体介导的RNA干扰技术对X-连锁的凋亡抑制蛋白的抑制效率，以及观察抑制XIAP后胰腺癌细胞对化疗药物敏感性的变化。方法 ：应用PBSHHI质粒构建针对XIAP的RNA干扰载体，转染胰腺癌细胞系SW1990;用RT-PCR和Western blot检测XIAP的抑制效率，以gemcitabine处理细胞，流式细胞仪和荧光显微镜观察细胞凋亡的变化;分析XIAP的表达与细胞凋亡之间的关系。结果 ：成功构建4个XIAP的RNA干扰载体，其中2个载体对XIAP的瞬时抑制效率达50％以上。XIAP被抑制后，细胞对化疗药物诱导的凋亡敏感性增强 ( P <0.05),XIAP的表达水平与细胞的凋亡指数之间呈负相关性( r =-0.809, P <0.05)。结论 ：运用针对XIAP的RNA干扰载体可以有效地抑制XIAP的表达，提高胰腺癌细胞对化疗药物的敏感性。     

基质金属蛋白酶－9、细胞金属蛋白酶抑制因子－1在胃癌中的表达

目的：探讨基质金属蛋白酶－9（MMP－9）,组织金属蛋白酶抑制因子－1（TIMP－1）在胃癌中表达的意义。方法：采用免疫组化S－P法对47例胃癌组织进行MMP－9及TIMP－1的检测。结果：MMP－9,TIMP－1主要表达于癌周基质细胞,癌细胞少量表达,MMP－9,TIMP－1表达与胃癌患淋巴结转移（P＜0．01）,浆膜浸润相关（P＜0．01）;TIMP－1的表达与胃癌TNM分期相关（P＜0．05）,而MMP－9的表达与胃癌TNM分期无相关性（P＞0．05）。结论：MMP－9及TIMP－1可作为判断胃癌恶性行为的重要生物学标记物。     

Matrix metalloproteinase-9 secretion by human pituitary adenomas detected by cell immunoblot analysis

Summary Twenty-two pituitary adenomas were examined on the secretion of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 (TIMP-1) using a cell immunoblot assay, and discussed regarding an association between cavernous sinus invasion and the secretion of these proteins. The cell immunoblot assay, a kind of immunoblot procedure, is able to detect proteins at the single cell level and to detect the incidence of tumour cells secreting the target proteins in the total tumour cell population. The incidence of tumour cells secreting MMP-9 was significantly higher in invasive adenomas than in noninvasive ones. On the other hand, TIMP-1 secretion was not detected in any adenomas in this study. This result suggested that MMP-9 secretion, and especially the number of MMP-9-secreting cells, may be associated with cavernous sinus invasion of pituitary adenomas.