铜绿假单胞菌诱导气道上皮细胞产生MUC5AC的分子机制

目的探讨铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa,Pa）诱导气道上皮细胞表达产生粘蛋白MUCSAC的影响,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养NCI—H292细胞,用Pa感染后,采用ELISA检测MUC5AC的产生情况;并用商品化的MMP-9活性检测试剂盒检测其产生以及酶活性情况。同时,采用EGFR,P13K,NADPH,ROS和MMP特异性抑制剂AG1478,LY294002,DPI,NAC和GM6001预处理NCI—H292细胞,观察MUC5AC以及MMP-9的产生情况。结果Pa能以时间依赖性方式诱导NCI—H292细胞产生MMP-9．并增加其活性。EGFR活化后,经P13K途径激活Racl并诱导MMP-9的表达,最终诱导MUC5AC产生。结论Pa经EGFR／P13K／Racl／NADPH／ROS／MMP-9通路诱导NCI—H292细胞产生MUC5AC。     

铜绿假单胞菌生物被膜诱导肺泡上皮细胞分泌炎性细胞因子的研究

目的：通过研究经铜绿假单胞菌生物被膜作用后,肺泡上皮细胞分泌炎性细胞因子水平的变化,探讨铜绿假单胞菌生物被膜在感染性肺纤维化中的作用。方法：采用体外诱导铜绿假单胞菌形成生物被膜,应用乙醇沉淀法提取细菌被膜并纯化;选用人肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549,采用ELISA法定量检测在铜绿假单胞生物被膜藻酸盐作用后上皮细胞上清液中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的水平。结果：铜绿假单胞菌生物被膜藻酸盐作用后,A549细胞分泌IL-1β和TNF-α能力在48 h内持续升高,但IL-6和IL-8则在24 h达到高峰,此后下降。结论：铜绿假单胞菌生物被膜能诱导A549细胞分泌IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α能力增强或一过性增强,可能与其诱导肺泡炎症,进而促进成纤维细胞活化、增殖及转化有关。     

湘南地区铜绿假单胞菌检测及其耐药性

目的 了解本地区产金属β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌阳性率及其耐药性。方法 2007年7月～2009 年10月本地区住院患者送检标本4247份分离铜绿假单胞菌。采用 VITEK 2 Compact 自动微生物分析仪进 行细菌鉴定和药敏测定,同时测定MIC。并对其标本来源和病区分布进行了分析。结果 产金属β-内酰胺 酶的铜绿假单胞菌的分离率为9.77%（415/4247）,其中检出率较高的科室为ICU、呼吸内科、普外科、脑 外科、骨科。产金属β-内酰胺酶株对其他16种抗生素的耐药性具有特殊性。结论 本地区产金属β-内酰 胺酶的铜绿假单胞菌检出率较高,分布科室有特殊性,产金属β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌对抗生素的耐 药性具有特殊性。     

医源性铜绿假单胞菌对头孢类抗菌药物的耐药性及其耐药机制研究

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa.Pa)是一种常见的医院内获得性感染条件致病菌,在医源性感染中检出率越来越高。我院老年病区长期住院患者下呼吸道标本中检出率达71.36%,耐药性较强,且对某些抗菌药物(尤其是三、四代头孢类抗菌药物)耐药性时有变化[1]。本研究分析Pa菌对临     

穿心莲内酯对临床铜绿假单胞菌感染人支气管上皮细胞的干预研究

目的：用铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa,PA）感染人支气管上皮细胞BEAS-2B,观察穿心莲内酯对细菌感染性肺炎及其诱发的宿主细胞炎性反应的影响。方法：PA标准株PAO1和临床分离株Cq1（exoU-）及Cq40（exoU+）感染上皮细胞BEAS-2B;体外肉汤培养观察穿心莲内酯（浓度300 μmol/L）对细菌生长的影响。侵袭实验、乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase,LDH）释放实验、菌落计数法检测PA对BEAS-2B细胞的侵袭力;ELISA法检测BEAS-2B细胞炎症因子白细胞介素（interleukin,IL）-6、IL-8的表达水平。穿心莲内酯（3.0 μmol/L和4.5 μmol/L）用于对PA感染人BEAS-2B的干预实验。结果：同PAO1相似,PACq1及Cq40在LB培养基中的生长均不受高浓度（300 μmol/L）穿心莲内酯影响。但穿心莲内酯（3.0 μmol/L和4.5 μmol/L）降低侵入胞内的PA数,减少细菌感染所致的上皮细胞LDH释放,也降低了细菌刺激上皮细胞IL-6及IL-8的表达水平。结论：穿心莲内酯可降低PA临床分离株对人支气管上皮细胞的侵袭力,并可降低细胞损伤及抑制细胞炎症反应。     

铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶耐药机制的研究进展

铜绿假单胞菌是重要的条件致病菌之一,其耐药机制较为复杂,主要包括外膜通透性降低,外膜蛋白D2缺失,外膜存在独特的药物主动泵出系统、β-内酰胺酶的产生、氨基糖苷类钝化酶的产生、药物作用靶位的改变以及细菌生物被膜形成,本文就其产β-内酰胺酶耐药机制方面的国内外近期研究进展进行综述。     

吐鲁番地区铜绿假单胞菌检测及其耐药性

目的:分析本地区产金属β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌阳性率及其耐药性。方法:2012年01月~2013年01月间本地区住院患者送检标本2247份分离铜绿假单胞菌。采用VITEK2 Compact自动微生物分析仪进行细菌鉴定和药敏测定,同时测定MIC。并对其标本来源和病区分布进行了分析。结果:产金属β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌的分离率为9.57%(215/2247),其中检出率较高的科室为ICU、呼吸内科、普外科、脑外科、骨科。产金属β-内酰胺酶株对其他16种抗生素的耐药性具有特殊性。结论:本地区产金属β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌检出率较高,分布科室有特殊性,产金属β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌对抗生素的耐药性具有特殊性。     

铜绿假单胞菌耐药机制及其耐药现状

铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa,PA)属于非发酵菌类假单胞菌属,它广泛存在于自然界和人体皮肤中,同时也是近年来引起院内感染的重要条件致病菌之一.但随着抗生素的大量使用,已经有越来越多的菌株产生了耐药性.这给临床治疗带来了极大的难度.     

铜绿假单胞菌的常见耐药机制

铜绿假单胞菌(PA)是目前临床上常见的致病菌,耐药发生率高.耐药的机制涉及外膜的低通透性、外排泵的过度表达、产生灭活酶、靶位的改变或增加等.PA的耐药往往是多方面的,常导敛多耐药,给临床治疗带来严峻挑战.     

铜绿假单胞菌的耐药性及多重耐药机制

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruglnosa,PA)是一种常见的医院内获得性感染条件致病菌,广泛分布于自然界和健康人体的皮肤,呼吸道和消化道等部位,在医院感染病原菌中检出率最高.     

重组高迁移率族蛋白B1对肺上皮细胞细胞因子释放的影响及其机制

目的:观察重组高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)对肺上皮细胞致炎细胞因子释放的影响,并初步探讨其机制?方法:采用BEAS-2B人正常肺上皮细胞,观察1?10?100?1 000 μg/L重组HMGB1蛋白对细胞培养上清液中致炎细胞因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)?白介素(interleukin,IL)-1β?IL-6含量的影响,及10 mg/L Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)抗体处理对HMGB1诱导致炎细胞因子释放的抑制作用?TNF-α?IL-1β和IL-6含量均采用酶联免疫吸附试验检测?结果:不同剂量重组HMGB1诱导肺上皮细胞12 h后,培养上清液中TNF-α?IL-1β?IL-6含量均呈HMGB1剂量依赖性升高;100 μg/L HMGB1分别诱导肺上皮细胞3?6?12和24 h后,培养上清液中TNF-α?IL-1β?IL-6含量均呈显著性升高(P < 0.05或P < 0.01),IL-1β?IL-6含量随诱导时间延长而升高,而TNF-α含量于诱导后6 h 达峰值;TLR4抗体处理后TNF-α?IL-1β?IL-6释放均受到部分抑制(P < 0.05或P < 0.01)?结论:HMGB1对肺上皮细胞释放TNF-α?IL-1β和IL-6具有诱导作用,其机制可能与胞膜TLR4有关?     

血红素加氧酶-1在人肺癌细胞中的表达及其对血管生成因子的影响

目的 探讨血红素加氧酶-1( HO-1)在人肺癌细胞中的表达及其对肺癌血管内皮生长因子(VEGF)的影响和可能的作用机制.方法 选用肺腺癌细胞株A549和肺鳞癌细胞株SK-MES-1为研究对象,以永生化支气管上皮细胞株HBE为对照,采用qRT-PCR法同时检测三个细胞株中HO-1和VEGF基因的表达;采用Western Blotting法检测三个细胞株中HO-1蛋白的表达;用四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞增殖.结果 与HBE比较,A549和SK-MES-1中的HO-1不管在mRNA水平(P＜0.05)还是在蛋白水平上都明显表达增高,A549较SK-MES-1中HO-1 mRNA表达增高(P＜0.05);qRT-PCR结果显示,VEGF在两个肺癌细胞株中的表达均显著增高(P＜0.05),两个肺癌细胞株中HO-1和VEGF的表达增高具有相关性(相关系数分别为1.35和9.80).结论 HO-1在肺癌细胞中表达增高,且对VEGF生成产生影响,由此推测,HO-1通过促进VEGF表达促进血管生成,从而影响肺癌生长及转移,这可能是HO-1作用于肺癌的机制之一.     

姜黄素对机械通气相关性肺损伤的保护作用及其机制研究

目的 研究姜黄素对机械通气相关性肺损伤的保护作用及其分子机制.方法 将30只健康的日本大耳白兔分为对照组、损伤组和姜黄素组.其中对照组采用正常潮气量8 mL/kg通气;损伤组采用20 mL/kg大潮气量机械通气诱导肺损伤;姜黄素组在损伤组基础上给予姜黄素鼻饲,并分别予以血红素氧合酶1(HO-1)激动剂钴原卟啉(CoPP)和抑制剂锌原卟啉(Zn-PP)干预.实验过程中检测氧合指数,48 h后处死动物获取肺组织标本检测肺组织湿干比(W/D)、丙二醛(MDA)水平及髓过氧化物酶(MPO)活性;用实时荧光定量-聚合酶链反应(RTQ-PCR)法检测HO-1 mRNA表达水平,比色法检测其活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素6(IL-6)水平.结果 与对照组比较,损伤组氧合指数明显降低,W/D、MDA水平及MPO活性、肺损伤总积分增加(P＜0.05).姜黄素干预后,姜黄素组氧合指数较损伤组明显增加,W/D、MDA水平、MPO活性及肺损伤总积分明显降低;BALF中TNF-α及IL-6水平明显降低,HO-1活性及mRNA表达水平明显增加(P＜0.05).姜黄素组经HO-1激动剂CoPP处理后TNF-α、IL-6、肺损伤积分明显降低;经HO-1抑制剂ZnPP处理后TNF-α、IL-6、肺损伤积分明显增加.结论 姜黄素可能通过上调HO-1表达,从而改善机械通气相关性肺损伤兔肺部气体交换功能,减轻炎性反应.     

小鼠铜绿假单胞菌慢性肺部感染树突状细胞的功能变化

目的：探讨树突状细胞（DCs）在小鼠铜绿假单胞菌慢性肺部感染中的功能变化。方法：选取54只小鼠,将含有铜绿假单胞菌（PA）的琼脂糖珠经气管灌注小鼠,建立PA慢性感染的动物模型为PA组（30只）。将给予无菌琼脂糖珠灌注气管的小鼠设为对照组（24只）。检测两组小鼠肺泡灌洗液中自介素23（IL-23）的浓度,观察肺组织病理切片及免疫组化CD11c的表达情况,对部分肺匀浆行细菌培养。结果：PA组出现病理改变,肺匀浆培养出PA。对照组病理改变不明显,细菌培养阴性。PA组肺泡灌洗液IL－23的浓度、树突状细胞标志物CD11c的表达均较对照组增多（P〈0．05）,它们在3d达到峰值,7d后仍维持在较高的水平。结论：在小鼠的PA慢性肺部感染中,突树状细胞对宿主的免疫系统起了重要的调节作用,与其分泌的免疫调节因子IL－23有很大的关系。IL－23可能是阻止慢性炎症反廊的一个有效靶标．     

姜黄素对急性肺损伤大鼠的保护作用及分子机制研究

目的探讨血红素加氧酶（HO-1）在姜黄素减轻脂多糖（LPS）所致急性肺损伤（ALI）中的作用。方法将大鼠随机分为5组：正常组、ALI模型、LPS＋姜黄素组、LPS＋姜黄素＋氯血红素（Hm）组以及LPS＋姜黄素＋锌原卟啉（ZnPP）组。给药后进行肺组织的形态学观察,并测定丙二醛（MDA）的含量以及HO-1的活性;RT-PCR和Western blot检测HO-1 mRNA和蛋白的表达情况。结果用LPS成功复制出ALI模型,同时,肺组织中MDA含量、HO-1蛋白活性、HO-1 mRNA以及蛋白水平均高于阴性对照组（P均〈0.05）;姜黄素＋LPS组、姜黄素＋LPS＋Hm组肺组织损伤程度、MDA含量低于LPS模型组,但HO-1活性、mRNA和蛋白水平高于相应LPS组（P均〈0.05）。LPS＋姜黄素＋ZnPP组肺损伤程度、MDA含量高于LPS组,而HO-1活性、mRNA和蛋白水平低于LPS组（P〈0.05）。结论姜黄素对ALI的保护作用可能通过增强HO-1活性、上调mRNA和蛋白表达水平而实现的。     

铜绿假单胞菌体外粘附肠上皮细胞对其细胞膜生物特性的影响

目的 探索铜绿假单孢菌粘附肠上皮细胞后细胞膜生物特性的变化规律及可能的机制。方法 采用体外肠上皮细胞培养模型，研究绿脓杆菌粘附后对肠上皮细胞活力、细胞膜磷脂酶A2、细胞内钙、细胞膜磷脂成分、膜流动性的影响。结果 细菌粘附后3h肠上皮细胞活力明显下降，PLA2活性增高，细胞内钙离子浓度增加，肠上皮细胞膜荧光偏振度、微粘度和分子排列有序性系数即出现增加，膜流动性降低，细胞膜磷脂含量降低，磷脂酶肌醇（PI）、磷脂酰胆碱（PC）含量逐渐降低。结论 绿脓杆菌粘附后肠上皮细胞胞内钙超载所导致的膜PLA2活化以及肠上皮细胞膜磷脂降解是导致膜流动性降低的根本原因。     

血红素加氧酶-1在肺疾病中的作用研究新进展

HO-1是一种应激蛋白,除了它本身固有的促进血红素代谢的作用外,还具有抗炎、抗凋亡、抗增生和抗氧化应激等许多重要生物学作用.HO-1及其代谢产物作用的研究将为肺疾病的临床治疗开辟新的途径.     

探讨游离脂肪酸对近曲肾小管上皮细胞HK-2的影响及作用机制

目的探讨游离脂肪酸（Free Fatty Acids,FFAs）对人近曲肾小管上皮细胞（HK-2）的影响及作用机制。方法用含有不同浓度（0、125、250、500μmol/L）软脂酸的DMEM-F12培养人近曲肾小管上皮细胞（HK-2）,在0h、24h、48h三个时段：MTT法检测不同环境下FFAs对HK-2细胞增殖的影响,流式细胞术检测FFAs对细胞凋亡和细胞周期的影响,免疫细胞化学法检测处理前后HK-2细胞中白细胞介素-β（IL-β）、白细胞介素-8（IL-8）表达的变化。结果 FFAs呈剂量和时间依赖性抑制HK-2细胞的增殖（P〈0.05）,并可能通过阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡（P〈0.05）。经FFAs作用后,IL-β、IL-8的表达增加。结论游离脂肪酸有抑制HK-2细胞增殖,促进其凋亡的作用,同时炎性细胞因子IL-β、IL-8表达增多,参与了其发生和发展的过程。     

姜黄素对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及对血红素加氧酶表达的影响

目的:探讨姜黄素对糖尿病大鼠肾脏病变的作用及对肾脏血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响。方法:诱导大鼠糖尿病后,随机分为对照组(n=10)及治疗组(n=10),比较各组的血生化、尿微量白蛋白排泄量。采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测HO-1 mRNA。用免疫组化检测HO-1蛋白的定位和表达水平。结果:糖尿病大鼠内生肌酐清除率(Ccr)、尿微量白蛋白(mAlb)排泄量较正常鼠增多,HO-1 mRNA和蛋白表达无明显上调。HO-1蛋白主要分布于肾小管、髓质的集合管及髓袢的上皮细胞中,肾小球表达极少。姜黄素治疗能明显降低Ccr,减少mAlb排泄量,诱导HO-1 mRNA和蛋白的表达。结论:姜黄素对糖尿病大鼠肾脏病变具有明显的防治作用,其机制可能是通过诱导HO-1的表达。