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1.
为进一步开展人白细胞介素Ⅱ(IL-2)基因修饰的肿瘤疫苗的研究,在已构建的人白细胞介素ⅡcDNA表达载体(pcDNA1/IL)的基础上,利用脂 本,将其引入人肝癌细胞檄7721,通过G418抗性筛选获得阳性克隆,用活细胞计数法检测阳性克隆的细胞培养上清中的L1-2活性,结果表明pcDNA3/IL-2转染的7721细胞氛发泌的IL-2水平明显高于阳性对照pBc12/HIV/IL-2转染的7721细胞 相似文献
2.
利用杆状病毒载体在昆虫细胞中表达人白细胞介素2 总被引:2,自引:0,他引:2
利用杆状病毒载体在昆虫细胞中表达人白细胞介素2金立杰刘东升薛伟钢将人白细胞介素2(IL-2)cDNA在BamHⅠ-PstⅠ位点插入到苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)的转移载体pVL1392中。经BamHⅠ、PstⅠ、XbaⅠ、EcoRⅤ等限制... 相似文献
3.
应用重组PCR技术克建人单链白细胞介素12融合基因 总被引:9,自引:0,他引:9
目的 构建人单链白细胞介素12(hscIL-12)融合基因并在真核细胞中进行表达,为进一步研究hscIL-12融合蛋白的生物学活性奠定基础。方法 应用重组PCR技术将hIL-12p40和p35亚单位两段编码序列的cDNA通过一疏水性多肽接头(Gly4Ser)3碱基序列进行前后拼拼(IL-12p40-多肽接头-p35),构建hscIL-12融合基因,并进行核苷酸序列测定,进一步将hscIL-12融合基因插入pcDNA3.1真核表达载体中,转染COS-7细胞表达hscIL-12融合蛋白,并行Western blot分析。结果 该融合基因经DNA序列分析表明:p40、p35、linker的连接顺序、方向及序列完全正确,融合基因可在COS-7细胞中表达hscIL-12融合蛋白。Western blot显示该融合蛋白分子 相似文献
4.
实验以pBluescriptllks质粒为载体,构建了人白细胞介素6次级克隆pBIL-6。用限制性内切BamHI和EcoRV消化pBIL-6,分离并回收了IL-6cDNA片段,并在其平未端加入了BamHI接头。实验将带有BamHI粘性末端的IL-6全基因片段插入到了逆转录病毒载体pZLPNeoSV(X)1的BamHI位点上,构建了重组质粒pZLPIL-6。经对重组予DNA的琼脂糖凝胶电泳、限制住内切酶分析和核酸杂交鉴定,筛选出了含有IL-6cDNA片段及插入方向正确的pZLPIL-6。 相似文献
5.
用限制性内切酶EcoRI和SalI将恶性疟原虫复合抗原基因PfCMR从质粒pWR450-1/PfCMR中切下,插入质粒pBV220/IL-2中人白细胞介素-2(IL-2)基因的EcoRI位点。重组质粒转化大肠杆菌DH5a,通过PCR扩增和酶切鉴定,筛选出正向插入的重组载体pBV220/PfCMR-IL-2。为表达PfCMR-IL-2融合蛋白打下基础。 相似文献
6.
人IL-12的克隆、表达及生物活性的鉴定 总被引:7,自引:1,他引:6
目的:克隆中国人IL-2p40基因,构建IL-12的真核基因表达载体。方法:采用RT-PCR从北京地区人脐血树突状细胞(DC)中克隆IL-12p40cDNA基因,并进行序列分析。利用pcDNA3.1和pLXPXSN构建IL-12表达载体,转染人肝癌细胞后对其进行生物学和免疫学分析。结果:北京地区人DC中IL-12p40cDNA基因210位密码子有独特的结构,为GCC(Ala)。并且239和291位 相似文献
7.
HL-60细胞中IL6基因的克隆及鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:为探索性构建重组人白细胞介素6-绿脓杆菌外毒素融合蛋白(IL6-PE40)以选择性杀伤高表达IL6受体(IL6R)的白血病细胞,本研究试图从人急性早幼粒细胞白血病细胞株(HL-60)中克隆N-末端缺失24个氨基酸的人IL6基因(IL6cDNA)并构建含此基因的重组质粒。方法:根据IL6基因序列设计合成可扩增IL6cDNA的特异性引物;利用基因重组技术,构建含IL6基因的重组质粒pUC-IL6。结果与结论:本文首次从HL-60中扩增出预期480bp的IL6cDNA,将其克隆至pUC18质粒中,命名为pUC-IL6,并经EcoRI/BamHI双酶切电泳及序列分析鉴定加以确证,为进一步构建重组人IL6-PE40奠定了坚实基础。 相似文献
8.
IL—11 cDNA—逆转录病毒载体的构建及亲本细胞系的转染 总被引:1,自引:0,他引:1
本文采用Lipofectin介导法,将构建的带有白细胞介素11(IL-11)cDNA的逆转录病毒载体导入制备人B细胞杂交瘤的亲本细胞系HF2、Ag8.653和Sp2/0中,G418筛选稳定表达的抗性细胞,经克隆化后获得稳定分泌IL-11的新型亲本细胞系。 相似文献
9.
人重组IL—1受体拮抗剂在大肠杆菌的高效表达 总被引:6,自引:3,他引:6
利用PCR技术从分裂素刺激的人外周血细胞cDNA文库扩增出人白细胞介素-1受体拮抗剂(hIL-1ra)的成熟分子编码区cDNA,将其克隆化插进高效表达的质粒载体pKpL-3α后,在大肠杆菌中高效表达出rhIL-1ra,其N端序列与预期结果一致。经SDS-PAGE分析,rhIL-1ra的表达量占菌体蛋白的30%以上。体外试验证明,该表达产物对单核细胞衍生的IL-1活性有明显抑制作用。 相似文献
10.
本文采用RT-PCR技术从LPS刺激后的小鼠腹腔巨噬细胞,扩增小鼠IL-6cDNA,并克隆构建pGEM-3Zf(+)IL-6质粒,继将小鼠所得cDNA克隆到pVL1392载体上,利用杆状病毒AcNPV表达系统在Sf9中进行瞬间表达,用IL-6依赖细胞株MH60·BSF2检测其表达活性,结果表明,感染后48h后就具有明显IL-6表达,由此可见,利用该系统可成功地表达小鼠IL-6基因。 相似文献
11.
分别将含免疫刺激DNA序列(ISS)的质粒pUC19、pcDNA3及编码IL 2的真核表达质粒pcDNA3 IL 2,与乙肝病毒DNA疫苗共同注射于小鼠胫前肌内。定量检测免疫小鼠体内HBsAg的表达及血清中抗HBs的水平。结果显示:pUC19、pcDNA3及pcDNA3 IL 2对乙肝病毒DNA疫苗在肌肉内表达HBsAg无影响或有抑制,但它们均能显著促进疫苗诱导抗体的产生(P<001),抗体水平的增加与ISS的数量呈剂量反应关系。 相似文献
12.
复制缺陷型人IL-2重组腺病毒的制备与鉴定 总被引:5,自引:0,他引:5
目的将人IL-2的重组腺病毒载体与Ad5腺病毒DNA末端肽复合物同源重组,高效制备人IL-2的复制缺陷型重组腺病毒,并进行体外表达和活性检测。方法将含全部编码序列的人IL-2cDNA置于真核表达载体pCIcc的CMV启动子下游,切出含CMV启动子、人IL-2cDNA和SV40polyA信号肽序列的ClaI片段,插入E1区替代的腺病毒载体pAxlow,选择左向转录的人IL-2重组腺病毒载体pAxlcw.CIhIL-2与经EcoT22Ⅰ酶切的Ad5腺病毒DNA-末端肽复合物共转染293细胞;通过同源重组获得人IL-2的复制缺陷型重组腺病毒;体外转染人宫颈癌HeLa细胞、人T细胞淋巴瘤Hut78细胞和原代人皮肤成纤维细胞。结果扩增到的病毒滴度达2.1×109PFU/ml;体外转染的人肿瘤细胞均检测到IL-2的表达(400~2600U/106细胞/24小时)。结论所制备的复制缺陷型重组腺病毒能有效介导人IL-2的基因转移,可望用于肿瘤基因治疗的临床研究。 相似文献
13.
人PBMC中IL—18基因的克隆及在E.coli中的高效表达与纯化 总被引:3,自引:0,他引:3
从一名丙型肝炎病人的外周血单个核细胞分别克隆了前体和成熟人白细胞介素-18的基因,并应用大肠杆菌表达系统,成功地表达了重组hIL-18的前体和成熟蛋白,从人PBMC中提取总RNA,用ply(T)8-12反转录成cDNA,再以PCR扩增出特异DNA片段。利用E.coli表达载体pQE-30,构建分别表达hIL-18前体和成熟蛋白的重组质粒pQEIL18p和pQEIL18m,转化E.coliM15后, 相似文献
14.
人白细胞介素6受体(IL6R)由胞外区、跨膜区和胞浆区三部分组成,其介导信号传导的功能主要由胞外区执行,通常将这一区域称为可溶性IL6R(sIL6R),其全长358个氨基酸,相对分子质量约为5×104。将天然人sIL6R基因克隆到真核表达载体pcDNA3的HindⅢ和BamHⅠ位点之间,得到重组质粒pCD6R,经酶切鉴定插入基因的大小为1kb。将重组质粒与空载体分别转染CHO细胞,收集48小时之后的瞬时表达上清,作作者单位:100850北京,军事医学科学院基础医学研究所ELISA检测… 相似文献
15.
目的 构建登革2型病毒E基因的真核表达载体,实现登革病毒E蛋白的真核表达。方法 采用逆录-多聚酶链反应(RT-PCR)扩增登革2型病毒(NGC株)包膜糖蛋白E基因全长片段,克隆人真核表达载体pcDNA3的Pcmv启动子下游,构建重组真核表达质粒pcDNA3-E,用脂质体转染法转染NIH3T3细胞,表达产物以免疫荧光、SDS-PAGE和蛋白质印迹进行分析检测。结果 成功构建了重组真核表达质粒pcDN 相似文献
16.
小鼠白细胞介素18的基因克隆及其融合蛋白的表达 总被引:6,自引:0,他引:6
白细胞介素18(Interleukin 18,IL-18)是一种能诱导IFN-γ产生的新型细胞因子,在调节Th1型细胞免疫应答中起重要作用。采用逆转录PCR从活化的小鼠腹腔巨噬细胞中获得了小鼠IL-18(mIL-18)cDNA,测序鉴定正确的片段经EcoRI酶切后克隆入GST融合表达载体pGEX-2T,再转化至大肠杆菌DH5a高效表达,经纯化获得了有活性的mIL-18融合蛋白。 相似文献
17.
以痘苗病毒复制非必需区血凝素基因为侧翼,将编码人白细胞介素2的基因片段克隆到真核表达质粒pJ38env的下游,构建成吸HIV-1 env和hIL-2两种外源基因的重组表达质粒pJ38E-IL-2,经同源重组和血凝素阴性空斑筛选,获得了重组痘苗病毒vJ38E-IL2。 相似文献
18.
含有丙型肝炎病毒核心基因表达质粒的构建及其基因免疫 总被引:7,自引:0,他引:7
目的:研究丙型肝炎病毒(HCV)核心(C)基因免疫诱生特异性免疫应答的可行性。方法:将HCV C基因片段插入真核表达载体pcDNA3质粒CMV启动子的下游,构建真核表达载体pcDNAHCV-C,分别转染小鼠骨髓瘤细胞SP2/0和人肝癌细胞7721进行瞬时表达,用免疫荧光法和Western-blot检测表达产物,将重组质粒注射,BALB/c(H-2^d)小鼠股四头肌,ELISA法检测血清中抗体产生水 相似文献
19.
利用聚合酶链式反应技术(PCR),从人肺巨细胞癌PLA-801母系细胞系统克隆化高转移细胞株D中特异性扩增P2 cDNA(Human ribosomal phosphoprotein P2 gene cDNA),并将扩增产物克隆入pGEM-3Z载体,获得了重组质粒pMP2,对其中两个克隆pMP2-1、pMP2-2的P2 cDNA进行了序列分析。结果表明:pMP2-1的P2cDNA序列与文献报道基本 相似文献
20.
将人白细胞介素2(hIL-2)cDNA克隆到逆转录病毒载体MNSM的PL位点 ,分别构建了转录受SV40早期启动子和人甲胎蛋白增强子调控的重组逆转录病毒载体MNSI和MNSIA。用脂质体转染法将MNSI和MNSIA分别转导PA317包装细胞,测质粒转染率为(5~20)×10~(-3)克隆/μgDNA·10~6细胞,病毒感染率为(5.4~450)×10~4CFU/ml。重组病毒在4μg/ml polybrene存在条件下感染人肝癌细胞、肾癌细胞和黑色素瘤细胞,Neo~R克隆经Southernblot分析证明hIL-2cDNA转入人肿瘤细胞并整合, R NA斑点杂交及IL-2活性表达分析证明,人甲胎蛋白增强子可促进异源启动子启动hIL-2cD-NA在合成甲胎蛋白的人肝癌细胞中高效特异转录和表达。该研究对肝癌特异性免疫增强基因治疗有重要意义。 相似文献