乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞INHB、FSHR mRNA及分泌功能的影响

[目的]运用血清药理学方法观察乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞抑制素(INHB)、促卵泡激素受体(FSHR)mRNA的表达及其分泌功能的影响。[方法]在大鼠卵巢颗粒细胞培养体系中加入乌萸汤、尿促卵泡激素(FSH)及正常大鼠含药血清,培养48h后,分别用酶联免疫吸附法(ELISA),逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及放免法测定颗粒细胞INHB、FSHR、mRNA及培养液中雌二醇(E2)含量。[结果]各用药血清组E2含量较对照组均明显升高;颗粒细胞INHB、FSHRmRNA表达量明显增多,其中乌萸汤中剂量血清组效果优于西药组。[结论]乌萸汤含药血清能明显促进卵巢颗粒细胞INHB、FSHRmRNA的表达以及E2分泌,说明乌萸汤可以通过调控卵巢局部因子、增强FSHRmRNA的表达从而提高卵巢对促性腺激素的反应性,改善下丘脑-垂体-卵巢轴,促进E2的分泌,以促进卵泡发育成熟及排出。     

乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞ERK1／2 MAPK信号转导途径的影响

目的运用血清药理学方法观察乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞（Gc）细胞外调节蛋白激酶（ERKl／2MAPK）信号转导途径的影响。方法在大鼠（GC）细胞培养体系中分别加入乌萸汤大鼠含药血清、卵泡刺激素（FsH）大鼠含药血清及正常大鼠血清,培养48h后,用蛋白质印迹法（Westernblot）测定各组大鼠Gc的ERK1／2磷酸化蛋白的相对表达量。结果各用药组GCERK1／2磷酸化蛋白相对表达量均明显升高,其中乌萸汤低剂量、中剂量血清组升高多于西药组,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论乌萸汤含药血清能通过提高ERK1／2蛋白磷酸化水平促进Gc增殖,可以通过使用乌萸汤调控ERK1／2促进卯泡发育、成熟及排出。     

宁心红杞含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞超微结构及雌激素分泌的影响

目的:探讨宁心红杞含药血清对离体大鼠卵巢颗粒细胞超微结构及雌激素分泌的影响.方法:体外培养的卵巢颗粒细胞用氯化镉造模,加入宁心红杞舍药血清作用24h后,在电镜下观察颗粒细胞超微结构的变化,放射免疫法测定培养液中雌激素的浓度.结果:宁心红杞舍药血清可明显增加雌二醇(B)的分泌,能明显改善离体大鼠卵巢颗粒细胞超微结构,电镜下表现为分泌颗粒增多,滑面内质网增多等.结论:宁心红杞胶囊可通过增加雌二醇的分泌及超微结构的改变来改善卵巢功能,延缓卵巢衰老.     

班氏促卵助孕汤含药血清对体外培养人卵巢颗粒细胞凋亡的影响

目的:运用血清药理学方法观察班氏促卵助孕汤对人卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法:向预培养24 h的人卵巢颗粒细胞中分别加入10%空白血清(对照组)、班氏促卵助孕汤含药血清(高、中、低剂量组),48 h后应用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:空白对照组的人卵巢颗粒细胞的凋亡率高于低、中、高3组班氏促卵助孕汤含药血清,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:班氏促卵助孕汤含药血清能明显抑制卵巢颗粒细胞的凋亡,可能是班氏促卵助孕汤调节卵巢功能的机制之一。     

乌萸汤改善小鼠卵巢储备功能及卵巢反应性的实验研究

目的通过观察卵巢储备功能下降(diminished ovarian reserve,DOR)小鼠促排卵情况及卵巢储备功能,探讨乌萸汤对DOR小鼠的治疗作用。方法以动情周期异常为DOR造模成功标准,将12只造模成功的24周龄C57BL/6J雌性小鼠随机分为高龄组和治疗组,6周龄C57BL/6J雌性小鼠为青年组。治疗组予乌萸汤灌胃8周,青年组和高龄组予等量蒸馏水灌胃。用药第56天起,小鼠腹腔序贯注射妊马雌酮及绒促性素,取卵进行体外受精实验观察其卵母细胞数、成熟卵数及受精卵数,血清抗苗勒管激素检测,卵巢HE染色观察卵巢内各级卵母细胞数量和质量、免疫荧光染色检测α-tubulin及Ki67表达。结果 (1)治疗组小鼠血清抗苗勒管激素较高龄组有明显好转(P<0.05),且与青年组相比无统计学差异(P>0.05);(2)促排后,高龄组卵母细胞数、成熟率、受精率较青年组明显减少(P<0.05),治疗组与高龄组相比均有所升高(P<0.05);(3)高龄组卵巢略萎缩、髓质组织多,其内各级卵母细胞数量减少形态不佳,闭锁卵泡较多;治疗组髓质有所减少,生长卵泡细胞完整,形态有所好转;(...     

补肾促排方对大鼠卵巢颗粒细胞黄体生成素受体和卵泡刺激素受体的影响

目的通过体外实验阐述补肾促排方治疗多囊卵巢综合征的药理学作用机制。方法提取与鉴定大鼠卵巢颗粒细胞,提取补肾促排方水溶液。实验分为补肾促排方低、中、高剂量组和空白对照组,分别相应处理分离与鉴定的大鼠卵巢颗粒细胞24 h后提取mRNA,48 h后提取蛋白。通过RT-PCR和Wester-blot法分别检测各组黄体生成素受体(LHR)和卵泡刺激素受体(FSHR)mRNA和蛋白表达水平。结果补肾促排方水溶液能够显著上调大鼠卵巢颗粒细胞LHR和FSHR mRNA和蛋白表达水平(P均<0.05),且呈现显著的浓度梯度依赖效应。结论补肾促排方通过上调卵巢颗粒细胞LHR和FSHR的表达,促进卵泡的发育与排出,从而起到治疗多囊卵巢综合征的作用。     

益肾疏肝汤含药血清对雷公藤多苷干预的大鼠颗粒细胞凋亡的影响

目的：探讨益肾疏肝汤含药血清对雷公藤多苷干预的大鼠颗粒细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法：分离大鼠卵巢颗粒细胞,使用不同含量的肾疏肝汤含药血清以及不同浓度的雷公藤多苷含药血清处理细胞48 h后,使用CCK-8法检测细胞存活率,筛选益肾疏肝汤含药血清和雷公藤多苷含药血清剂量。并将细胞分为正常组（正常培养的细胞）、损伤组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、阳性对照组（雌二醇）。分别采用CCK-8法、TUNEL法、蛋白质印迹法检测细胞增殖、细胞凋亡、凋亡及磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白表达。结果：与正常组比较,损伤组细胞增殖、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达均显著受到抑制（P<0.05）,而细胞凋亡率、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）、裂解胱天蛋白酶-3（cl-caspase-3）蛋白水平均显著增加（P<0.05）;与损伤组比较,阳性对照组及中药低、中药中剂量组、中药高剂量组细胞增殖、Bcl-2、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平均显著增加（P<0.05）,而细胞凋亡率、Bax、cl-caspase-3蛋白水平均显著抑制（P<0.05）;且中药组呈剂量依赖。结论：益肾疏肝汤含药血清可能通过激活PI3K/AKT/mTOR通路,抑制卵巢颗粒细胞凋亡。     

二仙汤含药血清通过AKT途径介导顺铂所致卵巢颗粒细胞凋亡的作用机制

目的：探讨二仙汤含药血清通过AKT途径介导顺铂所致卵巢颗粒细胞凋亡的防护作用及分子机制。方法本实验采用大鼠原代卵巢颗粒细胞体外培养及顺铂造模的方法。通过选取22-24 d的SD大鼠提取 原代卵巢颗粒细胞,进行细胞培养并建立顺铂致卵巢颗粒细胞凋亡模型,将成模卵巢颗粒细胞随机分为：模型组、阳性对照组、二仙汤组,加入相应药理血清连续培养48 h后,用TUNEL法检测各组颗粒细胞凋亡情况;蛋白印迹法检测各组akt、p-akt蛋白的表达情况;RT-PCR检测各组akt基因表达情况。结果：通过TUNEL法对各实验组卵巢颗粒细胞凋亡形态学观察发现：与正常组相比,模型组凋亡情况十分明显。阳性对照组与模型组相比凋亡情况改善;二仙汤组与模型组相比较凋亡情况也得到了缓解。蛋白印迹分析显示：akt、p-akt蛋白表达量总体趋势走向、强度、结果相似。顺铂造模后的各实验组中的akt、p-akt蛋白表达量均减少,模型组akt、p-akt蛋 白表达量最少;和模型组比较,各治疗组均akt、p-akt蛋白表达量表达增多,其中二仙汤组akt、p-akt蛋白表达量 略低于补佳乐组akt、p-akt蛋白表达量。RT-PCR检测akt基因表达情况,与蛋白表达大体一致。结论二仙汤 能明显减轻顺铂引起的卵巢颗粒细胞凋亡,其作用机制与激活AKT信号通路有关。     

宁心红杞含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及机制

目的探讨宁心红杞含药血清对离体大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及其机制。方法体外培养的卵巢颗粒细胞中用氯化镉造模,加入宁心红杞含药血清共同作用24 h后收集颗粒细胞,通过流式细胞仪观察其凋亡现象和用酶标法检测caspases-3蛋白的表达。结果流式细胞仪结果显示宁心红杞含药血清可明显改善氯化镉导致的颗粒细胞凋亡,凋亡峰较模型组明显降低;含药血清组明显降低caspases-3的表达,与模型组相比有显著性差异（P〈0.01）。结论宁心红杞可通过降低caspases-3蛋白的表达来改善颗粒细胞的凋亡,延缓卵巢衰老。     

二仙汤及其拆方对大鼠卵泡颗粒细胞分泌功能的影响

目的观察二仙汤及其温肾、滋阴、调理冲任3个拆方组对原代培养的雌性大鼠卵泡颗粒细胞分泌功能的作用。方法运用直接加药法观察二仙汤及其温肾、滋阴、调理冲任3个拆方组、6个单味药以及温肾药淫羊藿、仙茅的主要成分淫羊藿苷和仙茅苷对原代培养卵泡颗粒细胞分泌雌二醇(E_2)的作用。结果二仙汤及其拆方能一定程度促进颗粒细胞分泌E_2,作用以温肾组为好(P＜0．05)；各单味中药均有促进颗粒细胞分泌E_2的作用,其中以温肾药仙茅、巴戟天、淫羊藿和当归作用强(P＜0．01)。结论二仙汤调节下丘脑-垂体-性腺轴的作用可能与其促进卵泡颗粒细胞分泌E_2有关,温肾组拆方对促进卵泡颗粒细胞分泌E_2的作用较好。     

五苓散对腹泻模型大鼠结肠AQP4及AQP4mRNA表达的影响

目的:观察五苓散对腹泻模型大鼠结肠AQP4及AQP4mRNA表达的作用,揭示五苓散止泻作用的机理。方法:将SD大鼠随机分为正常对照组、腹泻模型组、氢氯噻嗪组、口服盐液组、五苓散低、中、高剂量组7组,观察大鼠腹泻状态并测体重等。分别于第4天上午、第7天上午取大鼠结肠,免疫组化法检测AQP4蛋白的表达,原位杂交方法检测AQP4 mRNA的表达。结果:腹泻模型组、口服盐液组、五苓散低剂量组结肠AQP4及AQP4mRNA表达明显下调,氢氯噻嗪组、五苓散中剂量组AQP4及AQP4mRNA表达下调但明显高于模型组,五苓散高剂量组结肠AQP4及AQP4mRNA表达下调不明显。结论:AQP4及AQP4mRNA表达下调是番泻叶致大鼠腹泻的机制之一,上调腹泻模型大鼠结肠AQP4及AQP4mRNA表达是五苓散的止泻机理之一,但与剂量相关,5.4g/kg灌胃效果较好。     

消岩汤含药血清介导下Survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

[目的]分析消岩汤含药血清介导下Survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响,探究其抑瘤机制。[方法]在Invitrogen公司的网上设计系统中设计靶向Survivin基因的siRNA序列,并将其转染A549细胞,应用噻唑蓝(MTT)法检测消岩汤以及转染组对A549细胞生长抑制的情况,免疫组化法观察A549细胞Survivin蛋白的表达情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。[结果]MTT法显示消岩汤具有抑制A549细胞生长的作用,其作用具有一定的时间依赖性,转染中药组的抑制率显著高于转染对照组及非转染中药组。经免疫组化法检测,转染对照组对Survivin蛋白表达的抑制率明显高于非转染中药组,但显著低于转染中药组。流式细胞术检测结果显示消岩汤及重组质粒以诱导细胞晚期凋亡为主,转染中药组A549细胞凋亡率显著高于其他各组。[结论]消岩汤可诱导A549细胞的凋亡,联合应用转染靶向Survivin基因的重组质粒可增强其体外诱导A549细胞凋亡的作用。     

固本消渴汤对2型糖尿病大鼠骨骼肌GLUT-4和ABCA1mRNA表达的影响

目的：观察固本消渴汤对2型糖尿病大鼠骨骼肌葡萄糖转运蛋白-4（GLUT-4）及脂肪组织三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）表达的影响。方法：雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组和造模组。造模组成功后再分为模型对照组、阳性药对照组和中药治疗组,分别给予生理盐水和固本消渴汤药液灌胃。定期定时监测空腹血糖、OGTT、FBG、FINS。第12周末,取后肢骨骼肌,检测GLUT-4和ABCA1的基因与蛋白的表达。结果：固本消渴汤组能降低BG、TC、TG的水平,增强糖耐量能力,明显增加糖尿病大鼠骨骼肌 GLUT-4和 ABCA1基因与蛋白的表达。结论：固本消渴汤能调节糖尿病大鼠糖脂代谢,增加糖尿病大鼠骨骼肌组织GLUT-4和ABCA1的表达。     

熟地黄水提物含药血清对HUVECs-1细胞增殖及EPO表达的影响

目的：探讨熟地黄水提物含药血清对人脐静脉内皮细胞-1(HUVECs-1)增殖的影响及其机制。方法：熟地黄水提物3，6，10 g·kg^-1分别给SD大鼠灌胃1周，取血制备含药血清，加入血管内皮细胞培养液。采用MTT法观察血清对HUVECs-1增殖的影响，免疫细胞化学染色和Western blot检测血清对HUVECs-1表达红细胞生成素(EPO)的影响。结果：与相同浓度的NS血清组比较，3，6 g·kg^-1地黄水提液含药血清组HUVEC-1吸光度显著升高(P＜0.05)。免疫组化结果显示，3，6 g·kg^-1熟地黄水提物5%含药血清组与相同浓度NS血清组比较，3，6，10 g·kg^-1熟地黄水提物10%，20%含药血清组与相同浓度NS血清组比较，EPO免疫反应阳性细胞平均吸光度均显著增加(P＜0.05)。Western blot分析显示：与NS血清组比较，6 g·kg^-1熟地黄水提物相同浓度含药血清各组EPO相对条带吸光度值(IOD)均显著增高(P＜0.05)。结论：中药熟地黄水提物含药血清可上调血管内皮细胞EPO表达，对血管内皮细胞有显著的促增殖作用。     

中药何首乌饮对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白bcl-2,bax表达的影响

目的通过测定不同剂量的中药何首乌饮含药血清作用后的大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达及caspase-3活性,探讨何首乌饮对卵巢自身功能的影响。方法制备排卵前卵巢模型,收集颗粒细胞分别与雌性SD幼鼠空白血清及含不同剂量何首乌饮的药物血清在体外共同培养,Western blotting检测GC内凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达情况;分光光度法检测颗粒细胞内caspase-3活性。结果何首乌饮含药血清可上调颗粒细胞bcl-2蛋白表达,下调bax蛋白表达,中、高剂量组何首乌饮含药血清与对照组比较,可明显上调bcl-2蛋白表达(P均<0.01),中、高剂量组何首乌饮含药血清与对照组比较,明显下调bax蛋白表达(P均<0.01)。何首乌饮含药血清可下调颗粒细胞caspase-3活性,中、高剂量何首乌饮含药血清组与对照组比较有显著性差异(P均<0.01)。结论何首乌饮增加GC内凋亡抑制蛋白bcl-2表达及减少凋亡促进蛋白bax表达的作用,可能是其抑制GC凋亡,防止卵泡闭锁的作用途径之一;同时何首乌饮可能是在凋亡的较早阶段,通过阻断caspase-3的级联裂解即可开始起效,而发挥凋亡抑制作用。     

补肾助孕汤对肾阳虚型多囊卵巢综合征不孕症患者中医症候评分、血清性激素水平和卵细胞质量的影响

目的:探究补肾助孕汤对肾阳虚型多囊卵巢综合征(PCOS)不孕症患者中医症候评分、血清性激素水平和卵细胞质量的影响。方法:将104例育龄期肾阳虚型PCOS不孕症患者采用简单随机化分组法分为两组,即观察组和对照组,每组患者均为52例。对照组患者予以枸橼酸氯米芬片进行治疗。观察组在对照组用药方案基础上加用补肾助孕汤。记录治疗3个月后,两组患者治疗效果及卵细胞质量[获卵数、第二次分裂中期(MⅡ)卵数、2PN受精卵数];比较治疗前及治疗3个月后,两组患者血清性激素水平[促卵泡激素(FSH)、睾酮(T)、雌二醇(E₂)、促黄体激素(LH)]、中医症候积分。结果:治疗3个月后,观察组患者治疗有效率、获卵数、MⅡ卵数均高于对照组(P<0.05),两组患者2PN受精卵数比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗3个月后较治疗前,两组患者部分血清性激素水平(LH、T)水平、中医症候积分均降低,且观察组低于对照组(P<0.05)。治疗3个月后较治疗前,两组患者血清FSH、E₂水平均上升,且观察组高于对照组(P<0.05)。结论:补肾助孕汤用...     

四物汤对Caco-2细胞P-糖蛋白功能和表达的影响

研究四物汤对Caco-2细胞P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响。采用实时定量聚合酶链式反应(Q-PCR)分析Caco-2细胞上MDR1基因mRNA的表达量;采用流式细胞仪检测经四物汤水煎液处理后Caco-2细胞对罗丹明123摄取量的影响,以评价P-gp的外排功能;采用Western blotting法检测四物汤水煎液对Caco-2细胞P-gp蛋白表达量的影响。与空白对照组比较,四物汤水煎液3.3,5.0,10.0 g·L^-1孵育Caco-2细胞24,48,72 h对MDR1基因mRNA的表达量具有上调作用,表明四物汤水煎液对MDR1具有诱导作用;四物汤水煎液作用于Caco-2细胞48 h后,细胞内罗丹明123的摄取量分别减弱了16.6%,22.1%(P<0.05),45.4%(P<0.01),提示长期应用四物汤水煎液,可增强Caco-2细胞P-gp的外排功能;四物汤水煎液孵育Caco-2细胞48 h后,上调了Caco-2细胞膜上P-gp蛋白表达量,表明四物汤水煎液对P-gp的蛋白表达量具有诱导作用。     

健脾益气清幽汤对慢性浅表性胃炎大鼠胃组织淋巴细胞亚群及IL-2mRNA的影响

目的:探讨健脾益气清幽汤对慢性浅表性胃炎大鼠胃组织淋巴细胞亚群及IL-2 mRNA的影响.方法:将66只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、健脾益气清幽汤低、中、高剂量组及兰索拉唑组,用0.02%氨水给大鼠自由饮用,连续90 d,制备大鼠试验性浅表性胃炎动物模型.用HE染色检测动物造模成功,免疫组化检测胃组织CD3+,CD4+,CDH+T细胞.RT-PCR检测胃组织IL-2 mRNA表达.结果:健脾益气清幽汤高剂量组大鼠胃组织CD3+,CD4+T细胞数量明显升高,CD8+T细胞数量明显下降,与模型组比较有显著性差异(P<0.01).高、中剂量组大鼠胃组织IL-2 mRNA表达明显增多,与模型组比较有显著性差异(P<0.01).结论:健脾益气清幽汤能明显提高胃组织淋巴细胞CD3+,CD4+T细胞数量及IL-2mRNA表达,降低CD8+T细胞数量,提高大鼠免疫功能,为慢性浅表性胃炎的致病机制及治疗提供了依据.     

内异消癥汤含药血清对子宫内膜异位症在位和异位内膜间质细胞增殖及分泌Ang-2的影响

目的:观察内异消癥汤含药血清对子宫内膜异位症在位和异位内膜间质细胞增殖及分泌Ang-2的影响。方法:对在位和异位内膜间质细胞进行体外分离原代培养,免疫细胞化学法鉴定。制备大鼠含药血清,分为内异消癥汤组、米非司酮组、空白血清组,用MTT法检测含药血清对间质细胞的生长抑制率,并用Elisa法检测对间质细胞分泌的Ang-2水平。结果:体外原代细胞培养方法可培养出纯度较高的间质细胞,与空白血清组相比内异消癥汤含药血清可以抑制间质细胞的增殖(P0.01),同时可以显著减少Ang-2的分泌水平(P0.01)。结论:内异消癥汤含药血清可以抑制间质细胞的增殖,显著减少Ang-2的分泌水平。